检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2007年第12期27卷 6-10页

作者：鲁玲玲梁源段春礼赵春礼赵焕英杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生与修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

建立稳定表达α-synuclein基因的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞,鱼藤酮作用1、2、4周后分别提取各组细胞线粒体,检测其complexⅠ功能、线粒体膜肿胀度和超氧阴离子的含量。结果显示在1、2周时过表达α-synuclein基因的细胞与对照组... 详细信息

建立稳定表达α-synuclein基因的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞,鱼藤酮作用1、2、4周后分别提取各组细胞线粒体,检测其complexⅠ功能、线粒体膜肿胀度和超氧阴离子的含量。结果显示在1、2周时过表达α-synuclein基因的细胞与对照组细胞相比,前者的complexⅠ的活性高,线粒体膜肿胀度轻,线粒体超氧阴离子的含量少,但4周后,前者的complexⅠ活性明显低于后者,线粒体膜肿胀度及线粒体内超氧阴离子的含量均显示前者高于后者。由此可见过表达α-synuclein基因的细胞在早期对鱼藤酮的损伤有一定的抵抗作用,但长期作用后可能有加重损伤的作用。提示PD患者多巴胺能神经元内α-synuclein的增高可能对小剂量鱼藤酮导致的线粒体损伤存在双重调节作用。

关键词： α-synuclein 线粒体功能障碍帕金森病

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骨髓基质干细胞移植治疗帕金森病的研究与进展

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第3期11卷 546-550页

作者：李美霖杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京市100069

目的:探讨骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞的潜能和在治疗帕金森病方面的应用及其作用机制。资料来源:应用计算机检索PUBMED 1997-01/2006-03期间与骨髓基质干细胞和帕金森病有关的文章,检索词为“bone marrow stromal cells”,以及“... 详细信息

目的:探讨骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞的潜能和在治疗帕金森病方面的应用及其作用机制。资料来源:应用计算机检索PUBMED 1997-01/2006-03期间与骨髓基质干细胞和帕金森病有关的文章,检索词为“bone marrow stromal cells”,以及“neuron,Parkinson’s disease,transplantation,in brain”组合检索,并限定文章语言种类为“English”。同时计算机检索中国期刊全文数据库2003-01/2006-03相关的文章,检索词为“骨髓基质干细胞,神经元,帕金森病,移植,脑内”,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞及其应用于治疗帕金森病等中枢神经系统疾病的研究相关;以近5年且发表在较权威杂志者优先。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到330篇相关文献,排除277篇内容陈旧或重复的文献,53篇符合纳入标准,有33篇检索到全文,选用其中的30篇作为本文参考文献:16篇涉及骨髓基质干细胞多向分化潜能;8篇涉及骨髓基质干细胞移植治疗中枢神经系统疾病;6篇涉及骨髓基质干细胞应用于治疗帕金森病的基础研究。资料综合:骨髓基质干细胞具有多向分化潜能,在特定条件下可分化为具有神经元形态并表达神经元标记物的细胞,在脑内可与损伤的细胞融合,能分泌营养因子或者刺激损伤部位产生内源性因子,促进损伤组织的修复并减少细胞凋亡,已成为细胞移植治疗各种疾病的理想种子细胞。结论:在适宜的条件下,骨髓基质干细胞经过诱导在体内、外均可分化为神经元样细胞,将其注入帕金森病模型大鼠纹状体内能形成表达神经标志性蛋白的神经元样细胞或星形胶质细胞,产生的细胞可在受损部位周围存活甚至移行至全脑,并明显恢复运动功能。

关键词：骨髓细胞造血干细胞帕金森病移植综述文献

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应用载体介导的RNA干扰技术抑制Nurr1基因在PT67细胞中的表达

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神经解剖学杂志 2007年第2期23卷 121-126页

作者：赵焕英包金风赵春礼杨慧徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

本研究应用载体介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异地干扰孤儿核受体1(nuclear related factor1,Nurr1)基因的表达,以建立稳定的RNAi技术及用于下一步的Nurr1基因治疗研究。我们筛选了四对Nurr1基因的特异性序列shRNA(short ... 详细信息

本研究应用载体介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异地干扰孤儿核受体1(nuclear related factor1,Nurr1)基因的表达,以建立稳定的RNAi技术及用于下一步的Nurr1基因治疗研究。我们筛选了四对Nurr1基因的特异性序列shRNA(short hairpin RNA),构建相应的载体(psilencerTM3.1-H1neo shRNA1,2,3,4)。分别将这4种质粒瞬时转染入已转染了逆转录病毒质粒pLNCX2-Nurr1并稳定表达Nurr1基因的PT67细胞中。在转染后24、48和72h分别采用免疫荧光、免疫组化、免疫印迹以及Real-time PCR的方法检测细胞中Nurrl蛋白及基因的表达水平。结果显示,转染psilencerTM3.1-H1neo shRNA2、3号24h和48h后,经免疫荧光和免疫组化检测,Nurr1在PT67细胞中表达显著降低;免疫印迹结果也显示,Nurr1蛋白量明显低于阴性对照组。psilencerTM3.1-H1neo shRNA1、4对Nurr1蛋白表达没有明显影响。Real-time PCR相对定量结果也同样证实2、3号转染后Nurr1基因表达的干扰效果明显,而1、4号结果相对较弱。通过本实验,我们筛选出了两段Nurr1特异性siRNA序列,且干扰效果在转染后24h至48h时效果最为明显。

关键词： Nurr1基因 RNA干扰载体介导 PT67细胞

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一氧化碳对脂多糖诱导大鼠纹状体炎性反应后的多巴胺能神经元的影响

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中华老年医学杂志 2007年第6期26卷 463-467页

作者：周春来张进禄李继梅霍洁薛启蓂徐群渊首都医科大学北京友谊医院神经内科神经生化室 100050 首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室

目的观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导大鼠纹状体炎性反应2周后，急性一氧化碳（carbonmonoxide，CO）中毒对黑质多巴胺（dopamine，DA）能神经元的影响。方法160只SD雄性大鼠随机分为CO组、LPS组、CO＋LPS组和对照组，观察... 详细信息

目的观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导大鼠纹状体炎性反应2周后，急性一氧化碳（carbonmonoxide，CO）中毒对黑质多巴胺（dopamine，DA）能神经元的影响。方法160只SD雄性大鼠随机分为CO组、LPS组、CO＋LPS组和对照组，观察大鼠在染毒后不同时间点的尾静脉血24h内碳氧血红蛋白（HbCO）浓度变化、行为学改变、酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）及OX-42（小胶质细胞标志物）的表达，高效液相色谱（HPLC）分析纹状体DA含量变化。结果染毒鼠均达到持续24hCO重度中毒（HbCO〉50％）。CO＋LPS组大鼠染毒后14、21、28d的30min内平均运动速度和运动距离下降（P〈0．05），小胶质细胞明显增生并异常激活，TH阳性神经元数量分别减少43．2％（P〈0．05）、46．5％（P〈0．05）和63．7％（P〈0．01）；DA分别降低33．0％、39．0％（P〈0．05）和53．6％（P〈0．01）。结论大鼠多巴胺能神经系统发生炎性反应后，将加重急性CO中毒对多巴胺能神经元的损害，增加CO中毒后患帕金森综合征的风险。

关键词：一氧化碳脂多糖类帕金森障碍多巴胺

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实时荧光定量PCR技术的原理及其应用研究进展

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中国组织化学与细胞化学杂志 2007年第4期16卷 492-497页

作者：赵焕英包金风首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

自从1983年Mullis发明聚合酶链式反应(polymerase chain reaction , PCR)以来,PCR技术很快成为科研、临床诊断的热点技术.但是传统PCR技术在应用中一是不能准确定量,二是容易交叉污染,产生假阳性。[第一段]

关键词：实时荧光定量PCR 荧光标记探针 DNA 结合染料

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抑制多巴胺能细胞α -Synuclein基因表达增加酪氨酸羟化酶的活力

抑制多巴胺能细胞α -Synuclein基因表达增加酪氨酸羟化酶的活力

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议

作者：刘冬梅杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经损伤与修复重点实验室

α-Synuclein基因是一种重要的帕金森病（Parkinson’s disease,PD）相关蛋白,其异常表达和聚集会造成DA能神经元的毒性。酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）是DA合成过程中的限速酶,TH活力的短期调节依赖于其丝氨酸残基的磷酸化... 详细信息

α-Synuclein基因是一种重要的帕金森病（Parkinson’s disease,PD）相关蛋白,其异常表达和聚集会造成DA能神经元的毒性。酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）是DA合成过程中的限速酶,TH活力的短期调节依赖于其丝氨酸残基的磷酸化,其中Ser40的磷酸化起到最主要调节作用。PKA是Ser40最主要的磷酸化酶,而Ser40的去磷酸化几乎完全依赖于PP2A。目前α-synuclein的生理功能及其在PD发病机制中的作用尚未完全阐明,α-synuclein与TH之间的关系仍不明确。在本研究中,我们利用稳定转染了小鼠α-synuclein基因干扰序列的MN9D多巴胺能细胞,探讨α-synuclein与TH的关系。实时定量RT-PCR、Western blot发现MN9D/α-SYN-细胞α-synuclein mRNA及蛋白表达量比正常MN9D细胞分别下降88%和70%,但MN9D/α-SYN-、MN9D/CON、MN9D/plasmid、MN9D/α-SYN+和MN9D细胞TH mRNA及蛋白表达量没有明显差异,这表明抑制α-synuclein并不会影响TH的基因表达。Western blot也发现,MN9D/α-SYN-细胞p-Ser40-TH蛋白表达量比正常MN9D细胞明显增加。HPLC对细胞内DA、L-DOPA测定发现,MN9D/α-SYN-细胞DA、L-DOPA含量均显著增高。以上结果提示抑制α-synuclein基因表达会使细胞内p-Ser40反映的TH活力增高。此外,Western blot也发现各组细胞PKA、磷酸化PKA蛋白表达量没有显著差异,这表明抑制α-synuclein基因表达不会影响PKA的基因表达和活力,提示TH活力的增高不是由于PKA使其磷酸化增加所导致的。而我们也发现,MN9D/α-SYN-细胞PP2A蛋白表达量显著减少,这表明抑制α-synuclein表达会增加PP2A的基因表达水平,从而使得TH去磷酸化减少、活力增高。综上所述,在正常MN9D细胞中,α-synuclein参与调控DA合成代谢的体内平衡;当α-synuclein功能缺失时,细胞内的去磷酸化酶PP2A表达增加,进而显著增高TH活力,使得DA合成增加,氧化应激增强,最终导致细胞损伤甚至死亡。本研究为探讨α-synuclein的生理功能及其在PD发病中的作用提供了新的证据。

关键词： α-synuclein 酪氨酸羟化酶帕金森病

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具有中医“热毒血瘀证”表征的大鼠血液成分和流变学变化

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中国比较医学杂志 2007年第10期17卷 607-612页

作者：杨超周岩孙晓红姬曼徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的研究具有中医"热毒血瘀证"证候的大鼠血液成分和流变学变化,以阐释"热毒血瘀证"的生物学基础。方法大鼠腹腔注射内毒素即脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),连续8周,从中西医学不同视角,观察注射期间和注射后不... 详细信息

目的研究具有中医"热毒血瘀证"证候的大鼠血液成分和流变学变化,以阐释"热毒血瘀证"的生物学基础。方法大鼠腹腔注射内毒素即脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),连续8周,从中西医学不同视角,观察注射期间和注射后不同时间点大鼠症状表现,包括采集舌像、检测白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-,αTNF-α)、血小板聚集、红细胞聚集和变形、血液粘度、血脂和凝血因子。结果注射毒素后大鼠活动减少,大便臭秽;尾部逐渐变得紫暗,舌质由红润变得暗、干涩、舌下静脉变长;给药第1周大鼠血液有凝血时间延长和血脂波动,随后有血液流变学异常和血细胞功能改变表现;4周至8周血小板聚集、血浆粘度和血脂升高。结论腹腔注射内毒素后,大鼠出现符合中医热毒血瘀证证候的舌像和体征,其生物学表现是一个动态过程首先是炎症反应并波及血液内成分变化和凝血变化,然后会引起微循环障碍和血流变的异常。这在一定程度反映中医"热毒血瘀证"的现代生物医学表现特征。

关键词：热毒血瘀证模型动物内毒素大鼠

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血清及脑组织中8种单胺类神经递质高效液相色谱电化学检测方法研究

血清及脑组织中8种单胺类神经递质高效液相色谱电化学检测方法研究

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议

作者：赵焕英隋雷鸣范春香刘琦张韬杨慧首都医科大学神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室

目的建立一种快速准确测定培养细胞上清、脐带血干细胞定向诱导后细胞及上清、大鼠血清及脑组织中单胺类神经递质左旋多巴(L-DOPA)、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴柯(DOPAC)、多巴胺(DA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)、... 详细信息

目的建立一种快速准确测定培养细胞上清、脐带血干细胞定向诱导后细胞及上清、大鼠血清及脑组织中单胺类神经递质左旋多巴(L-DOPA)、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴柯(DOPAC)、多巴胺(DA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)、及5-羟色胺(5-HT)含量的高效液相色谱-电化学检测方法。并且使8种物质在同一流动相、同一柱子、同一流速等情况下达到良好的分离效果。方法泵的型号为:ESA Model582 Pump,检测器为:ESA Model coulochemⅢ;石墨碳电极、参比电极为金属板。采用ESA C18柱,柱型150 mm×3.2 mm,柱颗粒3μm;经反复实验摸索,能达到较好的分离效果,且8种物质分离时间间隔较均匀,并总时间较短的流动相配方为:缓冲液(0.05M柠檬酸、0.05无水乙酸钠、0.0005M辛烷基磺酸钠、0.0005M乙二胺四乙酸二钠、1.325%三乙胺及适度甲醇),流动相流速0.4ml/min。结果以上8种物质平均保留时间分别为2.60分、3.83分、5.42分、7.81分、10.62分、14.62分、20.33分、29.05分。另外流动相中8辛烷基磺酸钠和甲醇的浓度对分离时间和效果影响较大,应严格控制。8种递质的精密度分析结果:保留时间RSD为0.24%-0.68%;峰面积RSD为0.08%-0.43%,重现性好。线性检测范围HIAA、5-HT、HVA为12.5 nM-1000 nM;DA、LDOPA、DOPAC、NE、E为50 nM-4000 nM。8种递质相关系数范围为0.993-0.999之间。结论该方法可用于检测干细胞诱导单氨能神经元过程中培养上清的检测,帕金森病大鼠模型制作及其实行基因治疗效果等检测,以及为单胺类递质的神经毒理学、药理学研究提供了一个简单灵敏、稳定可靠的检测方法。

关键词：单胺类神经递质高效液相色谱

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行为检测软件在非人类灵长动物模型中的应用

行为检测软件在非人类灵长动物模型中的应用

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议

作者：陈庆友刘玉军户乃丽鲁强张进禄首都医科大学神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室

目的以往对非人类灵长动物神经系统疾病模型的行为观察中,大多采用主观的人为观察或行为评分量表。目前,我们采用自动影像追踪系统(Ethovision)和猴上肢运动评价仪(mMAP)两种行为检测软件,可以定量的检测动物的躯体运动情况(运动距离和... 详细信息

目的以往对非人类灵长动物神经系统疾病模型的行为观察中,大多采用主观的人为观察或行为评分量表。目前,我们采用自动影像追踪系统(Ethovision)和猴上肢运动评价仪(mMAP)两种行为检测软件,可以定量的检测动物的躯体运动情况(运动距离和运动时平均速度)及精细活动(手和上肢),从而更加客观的评价神经系统病变中动物的行为变化。方法实验用成年恒河猴4只,实验前,先预适应环境,并检测术前动物行为情况。用Ethovision测试猴在观察笼内30分钟运动的距离和平均速度,使用mMAP检测猴双侧上肢取食活动,每侧各为6次,记录每次所需时间,取均数为每时间点观察值。后经立体定位仪向右侧黑质部位注射脂多糖(LPS),术后在第2,4,6,8,10,12周,分别用Ethovision和mMAP对动物进行检测并与术前比较。结果术后动物在30分钟内运动的距离和速度较术前明显减少,分别减少为23%±6%和19%±9%并随观察时间呈递减变化,mMAP检测结果显示动物上肢取食时间延长,平均时间增加26%±7%,在抓取食物时,出现抓取困难,抖动,类似帕金森样症状。结论上述两种检测方法能够更加客观的对灵长类动物的行为变化进行评价,这将为今后对灵长类动物模型的评价提供一个有利的工具。

关键词：灵长类动物行为 Ethovision mMAP 脂多糖

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大鼠胚胎脑发育过程中血小板源性生长因子受体α 的时相表达

大鼠胚胎脑发育过程中血小板源性生长因子受体α 的时相表达

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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议

作者：江小华王蓓蓓赵焕英邹西峰徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室

目的研究胎鼠脑发育过程中血小板源性生长因子受体α（PDGFRα）的表达变化,来探究其在神经系统发育过程中可能发挥的作用。方法利用免疫组织化学方法对PDGFRα在SD胎鼠脑中的表达进行定位;利用Realtime PCR和Western Blot等方法检测E11... 详细信息

目的研究胎鼠脑发育过程中血小板源性生长因子受体α（PDGFRα）的表达变化,来探究其在神经系统发育过程中可能发挥的作用。方法利用免疫组织化学方法对PDGFRα在SD胎鼠脑中的表达进行定位;利用Realtime PCR和Western Blot等方法检测E11.5-E18.5天SD胎鼠脑中PDGFRα的mRNA水平和蛋白水平的变化规律。结果免疫组织化学显示PDGFRα普遍表达于胎脑的各个脑区。Realtime PCR结果显示PDGFRα的mRNA水平在胎脑的发育过程中呈规律性改变,在E11.5就检测到了PDGFRα的表达,以后其表达水平逐渐增高,E14.5达高峰（表达量约为E11.5的3.6倍）,从E15.5开始下降,E18.5时的表达量紧为E14.5的1/11。Western Blot的结果与Realtime PCR结果相一致,E11.5可以检测到蛋白的表达,其表达水平在E13.5和E14.5维持较高的水平,E15.5后逐渐下降。结论 PDGFRα可能在神经干细胞向神经元定向分化方面起着重要的调控作用。

关键词：血小板源性生长因子受体α 胎鼠脑

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