检索结果-内蒙古大学图书馆

制备人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因表达的变化

中国临床康复 2005年第25期9卷 25-27,i0001页

作者：赵焕英李良刘延英刘静孙晓红杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室北京市100054

目的:获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针,检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法:实验于2002-10/2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2,6,12周帕金森病大鼠模型60只,每... 详细信息

目的:获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针,检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法:实验于2002-10/2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2,6,12周帕金森病大鼠模型60只,每组各20只,用来做原位杂交的组织处理;将已制备的pGEM-T-Easy-D2R质粒载体分别经ClaI、XbaⅠ限制性酶切反应得到线形质粒,再分别以T7和SP6聚合酶制备了人Ⅱ型多巴胺受体基因的反义和正义探针,通过斑点杂交检测探针的浓度;将反义和正义探针分别作等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,观察使对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底的最适宜浓度,从而降低内缘性其他多巴胺受体亚型的干扰作用;用制备的最适宜浓度探针分别杂交帕金森病大鼠模型2,6,12周的组织切片,杂交后冲洗,免疫检测及呈色,观察帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体表达。结果:①实验标记的人Ⅱ型多巴胺受体探针属cRNA探针,其特点为单链探针,杂交过程不需变性,可合成最可靠的反义链探针,杂交结果稳定,体外转录合成的cRNA探针长度也比较一致,其浓度分别为150,120mg/L。②将反义和正义探针分别等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,结果证明25mg/L浓度最适宜,对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底。③原位杂交证实,反义探针能够与帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体mRNA杂交。用反义探针标记的细胞中可见蓝色颗粒沉积,左右半球纹状体中标记细胞数在2周时没有变化,帕金森病大鼠损伤侧和健侧Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达没有明显变化;6周时,损伤侧较健侧表达明显上调,12周时,损伤侧与健侧表达都下降且没有明显差别。结论:实验获得了人Ⅱ型多巴胺受体基因反义和正义cRNA探针,并得出无本底的最适宜浓度;制备的人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针可以检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因变化情况,并说明了帕金森病大鼠纹状体Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达水平随模型日期增长而发生相应变化。

关键词：帕金森病受体多巴胺/遗传学原位杂交基因 RNA 信使/生物合成

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

反义HLA-A2和GDNF共表达逆转录病毒载体的构建和鉴定

引用

神经解剖学杂志 2005年第2期21卷 103-107页

作者：段德义张海燕徐群渊李颖杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

为构建GDNF和反义HLA -A2共表达的逆转录病毒载体,将人GDNF酶切片段(XhoI/SalI)克隆于逆转录病毒载体pLNCX2 的XhoI位点,再将HLA A2cDNA片段反向克隆于上述重组载体的HindIII/SalI位点,对其作酶切鉴定和测序后转染PA317包装细胞系进行... 详细信息

为构建GDNF和反义HLA -A2共表达的逆转录病毒载体,将人GDNF酶切片段(XhoI/SalI)克隆于逆转录病毒载体pLNCX2 的XhoI位点,再将HLA A2cDNA片段反向克隆于上述重组载体的HindIII/SalI位点,对其作酶切鉴定和测序后转染PA317包装细胞系进行病毒的包装。收获重组病毒感染的NIH3T3并进行病毒滴度的测定,GDNF及HLA- A2表达的RT -PCR检测,进一步感染人胚肺成纤维细胞,观察GDNF分泌情况。结果表明:GDNF和反义HLA -A2两片段的序列和插入方向完全正确,包装后获得的重组病毒的平均滴度为5×105 CFU/ml。RT PCR显示:在小鼠源性的PA317细胞中有人GDNF和HLA A2的表达,ELISA法测得病毒感染人胚肺成纤维细胞上清液中GDNF含量为450pg/ml。通过本实验,我们获得能共表达GDNF和反义HLA -A2的重组逆转录病毒,其转染的人成纤维细胞具有合成GDNF的能力。

关键词：反义HLA-A2 GDNF 基因表达逆转录病毒载体 Parkinson病神经退行性疾病人成纤维细胞基因治疗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

大鼠骨髓基质细胞在脑内的迁移和分化

引用

基础医学与临床 2008年第5期28卷 432-435页

作者：段春礼姬曼孙晓红赵春礼杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

目的研究骨髓基质细胞（bMSCs）在大鼠脑内的迁移和分化情况。方法体外分离培养大鼠四肢骨的bMSCs，原代培养8～10d后，同时用含增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的反转录病毒上清转导bMSCs并进行抗性筛选，7～10d可得到稳定表达EGFP的bMSCs... 详细信息

目的研究骨髓基质细胞（bMSCs）在大鼠脑内的迁移和分化情况。方法体外分离培养大鼠四肢骨的bMSCs，原代培养8～10d后，同时用含增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的反转录病毒上清转导bMSCs并进行抗性筛选，7～10d可得到稳定表达EGFP的bMSCs，然后将EGFP标记的bMSCs通过侧脑室和尾静脉2种注射方式分别注入纹状体损伤的大鼠体内，进而观察bMSCs向脑内迁移和分化的情况。结果在移植后的大鼠脑内均观察到2种方式植入大鼠体内的bMSCs，这些EGFP阳性的细胞呈现出一些神经元和神经胶质细胞的形态并能表达一些神经元和神经胶质细胞的特异性标志物。结论骨髓基质细胞中确实含有能够向神经元方向分化的干细胞。

关键词：绿色荧光蛋白骨髓间充质干细胞迁移分化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人Nurr1基因克隆及其在真核细胞中的表达

引用

神经解剖学杂志 2005年第3期21卷 247-251页

作者：张京钟余爽段德义赵春礼徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

为探讨Nurr1基因治疗Parkinson病的可行性,本研究克隆了中国人核相关受体1(nuclearrelatedreceptor1,Nurr1)基因,并重组携带Nurr1基因的真核表达载体,为该研究提供分子生物学基础。实验采用反转录聚合酶链式反应(RTPCR)方法从人胎儿脑... 详细信息

为探讨Nurr1基因治疗Parkinson病的可行性,本研究克隆了中国人核相关受体1(nuclearrelatedreceptor1,Nurr1)基因,并重组携带Nurr1基因的真核表达载体,为该研究提供分子生物学基础。实验采用反转录聚合酶链式反应(RTPCR)方法从人胎儿脑中获取Nurr1cDNA,将其克隆至pGEMTEasy载体中;测序鉴定后,重组携带Nurr1基因的逆转录病毒载体pLNCX2Nurr1;通过脂质体将重组载体转染PT67包装细胞系,用病毒上清感染NIH3T3细胞系以检测病毒滴度。结果发现,RTPCR扩增得到人Nurr1cDNA片段,序列与GenBank登录的序列一致;将Nurr1基因亚克隆至逆转录病毒载体得到插入方向正确的重组载体pLNCX2Nurr1,病毒上清滴度为2×105CFU/ml。结果表明本实验获得人Nurr1基因cDNA序列,检测到Nurr1基因在真核细胞中表达,并得到较高滴度的病毒上清。

关键词：人Nurr1基因基因克隆基因表达帕金森病基因治疗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

骨髓基质干细胞多向分化的可能机制

引用

中国生物工程杂志 2004年第7期24卷 17-22页

作者：李娜杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

近年来 ,围绕骨髓基质细胞分化机制的问题 ,大致有两种假说。有人认为骨髓基质细胞在其细胞的基因组内有几套“程序” ,在不同的外界环境下 ,会有相应的一套基因开启 ,从而分化成某种终末细胞。而另外一些人则认为骨髓基质细胞是通过与... 详细信息

近年来 ,围绕骨髓基质细胞分化机制的问题 ,大致有两种假说。有人认为骨髓基质细胞在其细胞的基因组内有几套“程序” ,在不同的外界环境下 ,会有相应的一套基因开启 ,从而分化成某种终末细胞。而另外一些人则认为骨髓基质细胞是通过与不同组织的细胞发生融合而实现向该组织分化的。在前人分化实验机理研究的基础上 ,认为骨髓基质细胞在分化成一些中胚层来源的细胞 ,如脂肪细胞 ,血细胞等时 ,可以直接通过靶基因的开启或关闭分化。而在跨胚层向外胚层或内胚层分化时 ,则需要通过细胞融合这一过程来最终分化成这些组织器官的特定细胞。

关键词：骨髓基质细胞干细胞分化机制融合

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

骨髓基质干细胞移植治疗帕金森病的研究与进展

引用

中国组织工程研究与临床康复 2007年第3期11卷 546-550页

作者：李美霖杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京市100069

目的:探讨骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞的潜能和在治疗帕金森病方面的应用及其作用机制。资料来源:应用计算机检索PUBMED 1997-01/2006-03期间与骨髓基质干细胞和帕金森病有关的文章,检索词为“bone marrow stromal cells”,以及“... 详细信息

目的:探讨骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞的潜能和在治疗帕金森病方面的应用及其作用机制。资料来源:应用计算机检索PUBMED 1997-01/2006-03期间与骨髓基质干细胞和帕金森病有关的文章,检索词为“bone marrow stromal cells”,以及“neuron,Parkinson’s disease,transplantation,in brain”组合检索,并限定文章语言种类为“English”。同时计算机检索中国期刊全文数据库2003-01/2006-03相关的文章,检索词为“骨髓基质干细胞,神经元,帕金森病,移植,脑内”,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞及其应用于治疗帕金森病等中枢神经系统疾病的研究相关;以近5年且发表在较权威杂志者优先。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到330篇相关文献,排除277篇内容陈旧或重复的文献,53篇符合纳入标准,有33篇检索到全文,选用其中的30篇作为本文参考文献:16篇涉及骨髓基质干细胞多向分化潜能;8篇涉及骨髓基质干细胞移植治疗中枢神经系统疾病;6篇涉及骨髓基质干细胞应用于治疗帕金森病的基础研究。资料综合:骨髓基质干细胞具有多向分化潜能,在特定条件下可分化为具有神经元形态并表达神经元标记物的细胞,在脑内可与损伤的细胞融合,能分泌营养因子或者刺激损伤部位产生内源性因子,促进损伤组织的修复并减少细胞凋亡,已成为细胞移植治疗各种疾病的理想种子细胞。结论:在适宜的条件下,骨髓基质干细胞经过诱导在体内、外均可分化为神经元样细胞,将其注入帕金森病模型大鼠纹状体内能形成表达神经标志性蛋白的神经元样细胞或星形胶质细胞,产生的细胞可在受损部位周围存活甚至移行至全脑,并明显恢复运动功能。

关键词：骨髓细胞造血干细胞帕金森病移植综述文献

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

内源性Nurr1对胚胎中脑及前脑前体细胞体外分化的诱导作用

引用

中国临床康复 2005年第9期9卷 52-54页

作者：李良赵焕英徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京市100054

目的:多巴胺神经元的发育是人们较为关注的问题,目前发现的蛋白可能在其发育机制中起着重要作用,研究内源性Nurr1基因表达变化对体外培养大鼠胚胎神经前体细胞分化的诱导作用。方法:实验于2003-05/2004-08在首都医科大学北京神经科学研... 详细信息

目的:多巴胺神经元的发育是人们较为关注的问题,目前发现的蛋白可能在其发育机制中起着重要作用,研究内源性Nurr1基因表达变化对体外培养大鼠胚胎神经前体细胞分化的诱导作用。方法:实验于2003-05/2004-08在首都医科大学北京神经科学研究所完成。分离13.5d大鼠胚胎中脑及前脑神经前体细胞并进行体外培养,培养基中加入视黄酸及毛喉素诱导3d,采用RT-PCR,WesternBlot及免疫荧光染色的方法观察Nurr1表达的变化及细胞分化;同时,用反义寡核苷酸转染技术阻断细胞Nurr1表达后再进行诱导,并进行同样观察。结果:视黄酸及毛喉素可诱导前体细胞的Nurr1表达,增加约60%,中脑来源神经前体细胞中(tyrosinehydroxylase,TH)阳性细胞占β-tublin-III阳性细胞的比例由原来的(5.32±1.20)%增至(9.01±3.20)%。前脑来源神经前体细胞中TH阳性细胞占β-tublin-III阳性细胞的比例由原来的(1.27±1.20)%增至(5.01±1.50)%。Nurr1反义寡核苷酸作用12h后前体细胞的Nurr1表达被阻断,至72h后重新表达。Nurr1被阻断后,只有少量的前体细胞被诱导为TH阳性细胞。结论:内源性Nurr1的过表达可促进胚胎神经前体细胞向多巴胺能神经元分化。

关键词：细胞分化 Nurrl 多巴胺神经元酪氨酸羟化酶

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白相互作用研究

引用

中国生物工程杂志 2008年第12期28卷 7-11页

作者：范春香崔韬谷利张韬刘琦赵焕英赵春礼杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室神经变性病教育部重点实验室北京100069 首都医科大学附属北京天坛医院北京100050

目的:利用蛋白质组学方法和激光扫描共聚焦显微镜来鉴定帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白(α-synuclein)之间的相互作用关系及两种蛋白在MN9D细胞中的分布。方法:将α-synuclein基因插入pGEX-4T-1载体,经DNA测序证明形成GST融合蛋... 详细信息

目的:利用蛋白质组学方法和激光扫描共聚焦显微镜来鉴定帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白(α-synuclein)之间的相互作用关系及两种蛋白在MN9D细胞中的分布。方法:将α-synuclein基因插入pGEX-4T-1载体,经DNA测序证明形成GST融合蛋白,经大肠杆菌BL-2l表达纯化后,与MN9D细胞裂解液共孵育,检测PINK1与α-synuclein蛋白间的相互作用。并应用MN9D细胞的内源性PINK1与α-synuclein进行免疫共沉淀实验,进一步验证两蛋白之间的相互作用。MN9D细胞经免疫细胞化学染色,利用激光扫描共聚焦显微镜观察两种蛋白的细胞内分布及共定位状态。结果:利用GST-α-synuclein融合蛋白捕获及免疫共沉淀技术,检测到特异的PINK1条带。激光扫描共聚焦显微镜检测到两者存在部分共定位。结论PINK1和α-synuclein在体外和细胞内均可发生相互作用并在MN9D细胞中存在共定位关系。

关键词： PINK1 α-synuclein 蛋白质相互作用共定位

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

外源性Nurr1基因过表达促进6-羟基多巴胺诱导的SK-N-SH细胞凋亡

引用

中国老年学杂志 2006年第7期26卷 955-958页

作者：刘扬赵咏梅张海燕李卫红徐群渊首都医科大学宣武医院北京100053 首都医科大学细胞生物学教研室首都医科大学北京市神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室

目的研究Nurr1基因过表达在6-羟基多巴胺(6-OHDA)选择性诱导多巴胺(DA)能神经元特异性损伤中的作用。方法①不同浓度6-OHDA作用不同时间,比较细胞形态;②细胞经6-OHDA作用后,经流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布比例;③不同浓度6-OHDA作... 详细信息

目的研究Nurr1基因过表达在6-羟基多巴胺(6-OHDA)选择性诱导多巴胺(DA)能神经元特异性损伤中的作用。方法①不同浓度6-OHDA作用不同时间,比较细胞形态;②细胞经6-OHDA作用后,经流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布比例;③不同浓度6-OHDA作用不同时间,经AnnexinV/PI双染后,运用共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况,获得毒素诱导凋亡的最适剂量(75μmol/L)和时间(12 h),运用FCM检测两株细胞早期凋亡比例。结果①经6-OHDA处理后,倒置相差显微镜观察,结果显示SK-N-SH/Nurr1细胞形态损伤早于SK-N-SH细胞,且损伤程度明显;②细胞周期结果显示,6-OHDA诱导SK-N-SH细胞G2/M期细胞比例下降,而SK-N-SH/Nurr1细胞S期细胞比例下降;③经AnnexinV/PI双染联合FCM检测早期凋亡比例结果显示,SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡比例明显高于SK-N-SH细胞(P<0.05)。结论外源性Nurr1基因过表达促进了6-OHDA诱导的SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡,Nurr1可能与SK-N-SH/Nurr1细胞对6-OHDA损伤敏感性增强有关。

关键词： Nurr1 过表达 6-OHDA 凋亡 FCM

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

应用载体介导的RNA干扰技术抑制Nurr1基因在PT67细胞中的表达

引用

神经解剖学杂志 2007年第2期23卷 121-126页

作者：赵焕英包金风赵春礼杨慧徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

本研究应用载体介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异地干扰孤儿核受体1(nuclear related factor1,Nurr1)基因的表达,以建立稳定的RNAi技术及用于下一步的Nurr1基因治疗研究。我们筛选了四对Nurr1基因的特异性序列shRNA(short ... 详细信息

本研究应用载体介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异地干扰孤儿核受体1(nuclear related factor1,Nurr1)基因的表达,以建立稳定的RNAi技术及用于下一步的Nurr1基因治疗研究。我们筛选了四对Nurr1基因的特异性序列shRNA(short hairpin RNA),构建相应的载体(psilencerTM3.1-H1neo shRNA1,2,3,4)。分别将这4种质粒瞬时转染入已转染了逆转录病毒质粒pLNCX2-Nurr1并稳定表达Nurr1基因的PT67细胞中。在转染后24、48和72h分别采用免疫荧光、免疫组化、免疫印迹以及Real-time PCR的方法检测细胞中Nurrl蛋白及基因的表达水平。结果显示,转染psilencerTM3.1-H1neo shRNA2、3号24h和48h后,经免疫荧光和免疫组化检测,Nurr1在PT67细胞中表达显著降低;免疫印迹结果也显示,Nurr1蛋白量明显低于阴性对照组。psilencerTM3.1-H1neo shRNA1、4对Nurr1蛋白表达没有明显影响。Real-time PCR相对定量结果也同样证实2、3号转染后Nurr1基因表达的干扰效果明显,而1、4号结果相对较弱。通过本实验,我们筛选出了两段Nurr1特异性siRNA序列,且干扰效果在转染后24h至48h时效果最为明显。

关键词： Nurr1基因 RNA干扰载体介导 PT67细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：