检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术 2011年第5期21卷 30-34页

作者：李晓晓徐舒李慧宫夏霓徐志卿首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室北京100069 Departments of Neuroscience Karolinska Institutet

目的:克隆小鼠甘丙肽1型受体(mGalR1)基因,构建其真核表达载体,并观察该基因在HEK293A细胞中的表达和内化。方法:应用RT-PCR方法,以小鼠下丘脑RNA为模板,扩增获得甘丙肽I型受体(mGalR1)基因并定向克隆到pEGFP-N1真核表达载体;mGalR1-pE... 详细信息

目的:克隆小鼠甘丙肽1型受体(mGalR1)基因,构建其真核表达载体,并观察该基因在HEK293A细胞中的表达和内化。方法:应用RT-PCR方法,以小鼠下丘脑RNA为模板,扩增获得甘丙肽I型受体(mGalR1)基因并定向克隆到pEGFP-N1真核表达载体;mGalR1-pEGFP表达载体瞬时转染HEK293A细胞,利用激光共聚焦显微技术观察mGalR1在给予甘丙肽(10-7mol/L)0、5、10、15min刺激时的内化情况。结果:克隆得到正确的mGalR1基因全长序列,其cDNA为1 047bp,共编码348个氨基酸;共聚焦显微镜结果表明mGalR1主要在膜上表达,经甘丙肽刺激5～15min后受体下膜进入胞浆。结论:成功构建真核表达载体mGalR1-pEGFP并在HEK293A中表达;在甘丙肽刺激下小鼠甘丙肽1型受体存在内化现象。

关键词：小鼠甘丙肽1型受体(mGalR1) 基因克隆真核表达载体 HEK293A细胞内在化

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自分化法培养大鼠骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠帕金森病的研究

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中国输血杂志 2014年第10期27卷 1000-1005页

作者：李美霖杨慧北京市通州区中心血站北京101100 首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室

目的观察自分化法培养的大鼠骨髓间充质干细胞(SDrBMSCs)向大鼠纹状体内移植大鼠帕金森病(PD)模型的治疗作用。方法 SDrBMSCs以不换液、不外加任何诱导物质培养,用免疫细胞化学染色鉴定SDrBMSCs及用普通法培养大鼠骨髓间充质干细胞(rBMS... 详细信息

目的观察自分化法培养的大鼠骨髓间充质干细胞(SDrBMSCs)向大鼠纹状体内移植大鼠帕金森病(PD)模型的治疗作用。方法 SDrBMSCs以不换液、不外加任何诱导物质培养,用免疫细胞化学染色鉴定SDrBMSCs及用普通法培养大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)的分化情况,制作大鼠PD模型,设SDrBMSCs移植组、rBMSCs移植组(PD大鼠12只/组),向PD大鼠纹状体内植入SDrBMSCs或rBMSCs(1×106个/只),以免疫荧光组织化学染色鉴定其在纹状体部细胞体内存活迁移能力,高效液相色谱电化学方法(HPLC)检测纹状体内多巴胺(DA)含量,同时设PBS模型对照组(PD大鼠12只/组)做比较。结果 SDrBMSCs培养至第4代21 d移植入PD大鼠纹状体内,在无外源干预的情况下,表达nestin、β-tublinⅢ、DCX和MAP2,而同样条件移植入rBMSCs的PD大鼠仅表达少量的nestin;SDrBMSCs或rBMSCs移植入大鼠纹状体内后均可在体内存活、迁移并与周围组织整合。SDrBMSCs移植组PD大鼠在移植后28 d能表达GFAP,并有分化为TH阳性神经元的现象,使纹状体内DA含量提高,但与移植后14 d比较无明显变化(P>0.05);PD大鼠的旋转行为以移植后56 d时改善最为明显(P<0.05),旋转降至移植前的55.02%。rBMSCs移植组PD大鼠在移植后28 d可表达GFAP,也有改善PD大鼠旋转行为的效果(P<0.05),但纹状体内DA含量明显低于植入SDrBMSCs的效果(P<0.05)。结论 SDrBMSCs脑内移植后主要分化为星形胶质细胞,极少分化为TH阳性神经元,与rBMSCs相比对PD大鼠模型有明显治疗作用。

关键词：骨髓间充质干细胞自分化移植帕金森病动物模型大鼠

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移植壳聚糖导管修复大鼠坐骨神经缺损

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神经解剖学杂志 2010年第5期26卷 507-512页

作者：张皑峰苏增艳杨朝阳李晓光首都医科大学附属北京友谊医院口腔科北京100050 首都医科大学神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的:研究移植结合了碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的壳聚糖导管促进周围神经损伤再生的情况。方法:成年Wistar大鼠造成10mm坐骨神经缺损后,以壳聚糖导管(移植组,10只)作桥梁桥接神经两断端,以假手术组和单纯损伤组(造成10mm坐骨神经缺... 详细信息

目的:研究移植结合了碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的壳聚糖导管促进周围神经损伤再生的情况。方法:成年Wistar大鼠造成10mm坐骨神经缺损后,以壳聚糖导管(移植组,10只)作桥梁桥接神经两断端,以假手术组和单纯损伤组(造成10mm坐骨神经缺损后,不加以任何干预措施)各10只分别为阳性和阴性对照,术后通过肉眼观察和神经微丝(NF)、乙酰胆碱酯酶(AChE)免疫组织化学染色方法对损伤神经局部及远端靶肌肉运动终板的再生情况进行观察。结果:移植组大鼠术后3个月,新生的神经纤维已越过缺损部位并到达损伤远端。免疫组织化学染色显示:术后3个月,移植组大鼠坐骨神经缺损处再生组织内可观察到均匀、密集分布的NF免疫阳性纤维,且在腓肠肌终板区内可见AChE免疫阳性终末,至5个月时阳性染色明显增强。在术后3个月时可见新生的运动终板,但轮廓不规则、边界不清晰;而在5个月时,新生的运动终板的形态与密度均接近假手术组水平。结论:结合了bFGF的壳聚糖导管对缺损的坐骨神经修复具有良好的桥梁作用和促进神经生长及终板再生的作用。

关键词：壳聚糖导管碱性成纤维细胞生长因子坐骨神经神经再生运动终板乙酰胆碱酯酶大鼠

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人DAT基因的克隆及其对MN9D细胞多巴胺代谢的影响

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神经解剖学杂志 2010年第6期26卷 573-577页

作者：周岩张京钟赵春礼赵焕英徐群渊首都医科大学神经科学研究所北京市神经损伤修复重点实验室北京100069

目的:探讨人多巴胺(DA)转运体(dopamine transporter,DAT)基因过表达对单胺类递质代谢的效应。方法:从人胎脑中提取总RNA,RT-PCR方法扩增DAT cDNA片段,重组于pGEM-T-EASY载体中并进行全序列测定。重组真核表达载体pLNCX2-DAT转染MN9D细... 详细信息

目的:探讨人多巴胺(DA)转运体(dopamine transporter,DAT)基因过表达对单胺类递质代谢的效应。方法:从人胎脑中提取总RNA,RT-PCR方法扩增DAT cDNA片段,重组于pGEM-T-EASY载体中并进行全序列测定。重组真核表达载体pLNCX2-DAT转染MN9D细胞,Western Blot检测DAT的表达,高压液相(high-performance liquid chromatography,HPLC)法检测细胞内外DA含量的变化。结果:RT-PCR方法扩增得到1981bp的cDNA片段,测序结果表明所得到的片段与DAT序列完全一致;Westein Blot证实转染后的MN9D细胞(实验组)内DAT基因表达明显高于对照组(P<0.05);HPLC结果表明实验组中细胞内外的DA含量明显高于对照组(P<0.05)。结论:DAT高表达明显促进DA的循环和利用,为帕金森病的基因治疗提供了理论依据。

关键词：帕金森病多巴胺转运体基因表达 MN9D细胞

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大鼠创伤性脑损伤后认知行为的变化

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山东医药 2008年第37期48卷 6-8页

作者：苏月伟仲苏玉莫林宏刘玉军张皑峰杨朝阳李晓光首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069 北京航空航天大学首都医科大学附属北京友谊医院

目的建立直接手术损伤大鼠部分脑皮质及海马CA1区的创伤性脑损伤模型，并观察损伤后动物认知行为的改变情况。方法将大鼠进行脑损伤建模后，于术后11—15d和26—30d采用Morris水迷宫的方法评价动物的认知行为变化后，灌杀动物取脑切片... 详细信息

目的建立直接手术损伤大鼠部分脑皮质及海马CA1区的创伤性脑损伤模型，并观察损伤后动物认知行为的改变情况。方法将大鼠进行脑损伤建模后，于术后11—15d和26—30d采用Morris水迷宫的方法评价动物的认知行为变化后，灌杀动物取脑切片，HE染色及尼氏染色观察损伤范围；胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组织化学染色观察星型胶质细胞（AST）的活化及胶质瘢痕形成情况；术后5d行Nestin及GFAP双重免疫荧光染色显示海马内干细胞的激活，并观察损伤边缘的干细胞迁移情况。结果直接手术损伤部分脑皮质及海马CA1区后，造成了动物认知功能障碍，并且1个月时有自发的认知功能恢复；5d时星型胶质细胞活化，1个月时胶质瘢痕的形成。结论本实验采用的模型可成功造成动物认知行为的改变，为组织工程材料的移植治疗脑损伤提供了比较适用的研究模型。

关键词：创伤性脑损伤海马CA1区认知大鼠

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植入PHPMA水凝胶对脑损伤后胶质瘢痕形成的抑制性影响

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神经解剖学杂志 2003年第4期19卷 383-387页

作者：侯少平姬曼范昱玮孙晓红崔福斋徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054 清华大学材料科学与工程系北京100084

人工合成 PHPMA水凝胶材料。利用此材料修补急性损伤的大鼠脑皮质缺损区 ,评价其对创伤后胶质瘢痕形成的影响以及在神经组织再生中的作用。合成的水凝胶材料经检测分析性状后植入预先造成的大脑皮质空腔内 ,4周以后灌注取脑 ,观察植入... 详细信息

人工合成 PHPMA水凝胶材料。利用此材料修补急性损伤的大鼠脑皮质缺损区 ,评价其对创伤后胶质瘢痕形成的影响以及在神经组织再生中的作用。合成的水凝胶材料经检测分析性状后植入预先造成的大脑皮质空腔内 ,4周以后灌注取脑 ,观察植入材料和周围组织整合结果以及星形胶质细胞在材料周围和内部的浸润状况 ,确定有无胶质瘢痕的形成 ,并进行超微结构分析。结果表明 ,植入材料可和周围组织良好整合 ,二者交界处细胞分布弥散 ,星形胶质细胞无过度聚集现象 ;植入材料内部有轴突样结构生长和血管发生。本研究结果提示 ,利用 PHPMA水凝胶填补脑损伤后的空洞可抑制胶质瘢痕的形成 ,有利于损伤部位神经组织的再生。

关键词： PHPMA水凝胶胶质瘢痕神经再生大鼠脑损伤

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喹啉酸所致亨廷顿病动物模型

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中国实验动物学报 2011年第1期19卷 84-88页

作者：邢秋云李峰首都医科大学基础医学院北京100069 首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生及修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

亨廷顿病(Huntington's disease,HD)是以不自主舞蹈样动作、进行性认知障碍,痴呆为特征的一种常见染色体显性遗传病。兴奋性毒性作用是目前公认的HD发病机制之一,其中喹啉酸(quinolinic acid,QA)作为神经兴奋性毒素,可以损伤相应神... 详细信息

亨廷顿病(Huntington's disease,HD)是以不自主舞蹈样动作、进行性认知障碍,痴呆为特征的一种常见染色体显性遗传病。兴奋性毒性作用是目前公认的HD发病机制之一,其中喹啉酸(quinolinic acid,QA)作为神经兴奋性毒素,可以损伤相应神经元,导致大脑功能障碍,从而可有效模拟HD的相关改变。本文将就QA动物模型在模拟HD时的优缺点和目前QA在药物研究、疾病治疗等不同方面的应用进行综述。

关键词：亨廷顿病喹啉酸模型,动物应用

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雷帕霉素抗神经退行性病研究进展

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基础医学与临床 2008年第12期28卷 1336-1338页

作者：杨光祝元刚杨慧吉林省吉林市第二中心医院吉林吉林132001 首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生与修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

雷帕霉素作为一种传统的抗真菌药物,具有免疫抑制剂和抗肿瘤的作用。值得注意的是,它通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶标蛋白mTOR、受体FKBP、VMP1,促进自噬,抑制了帕金森病、亨廷顿病等神经退行性变的病理过程,从而有望成为一种新的抗神经... 详细信息

雷帕霉素作为一种传统的抗真菌药物,具有免疫抑制剂和抗肿瘤的作用。值得注意的是,它通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶标蛋白mTOR、受体FKBP、VMP1,促进自噬,抑制了帕金森病、亨廷顿病等神经退行性变的病理过程,从而有望成为一种新的抗神经退行病药物。本文对其新的研究进展予以综述。

关键词：自噬雷帕霉素神经退行病帕金森病

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人PINK1抗血清的制备及其免疫活性物质在大鼠脑组织中的表达

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首都医科大学学报 2010年第3期31卷 343-347页

作者：李继胜李尧华李昕于顺王年强高华孙晓红杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室首都医科大学宣武医院老年病研究所神经生物学研究室教育部神经变性病重点实验室

目的制备帕金森病相关蛋白PINK1抗血清并检测其在大鼠脑组织中的表达特征。方法制备人PINK1基因重组蛋白,免疫新西兰大耳白兔获得抗PINK1抗血清;通过盐析法初步纯化、Western blotting法鉴定抗血清的敏感性和特异性、免疫组化法检测PINK... 详细信息

目的制备帕金森病相关蛋白PINK1抗血清并检测其在大鼠脑组织中的表达特征。方法制备人PINK1基因重组蛋白,免疫新西兰大耳白兔获得抗PINK1抗血清;通过盐析法初步纯化、Western blotting法鉴定抗血清的敏感性和特异性、免疫组化法检测PINK1在大鼠脑中的分布。结果人PINK1基因重组蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达;纯化蛋白制备兔抗血清经盐析纯化后,兔抗人PINK1抗血清特异性识别人PINK1基因重组蛋白及大鼠脑匀浆中40000和66000的蛋白质,与预期结果一致;免疫组化染色显示PINK1广泛分布在嗅球、皮质、海马、纹状体、小脑、黑质和红核。结论制备了一种兔抗人PINK1多克隆抗血清;PINK1广泛分布于大鼠中枢神经系统;为以后深入研究PINK1表达的组织分布、细胞内定位及其生物学功能提供了有效地实验工具。

关键词： PINK1 抗血清大鼠重组蛋白

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基因重组型人SORL1蛋白质片段的原核表达和纯化

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首都医科大学学报 2011年第6期32卷 798-801页

作者：李爽李尧华叶懿文李昕于顺杨慧陈彪首都医科大学宣武医院老年病研究所神经生物学研究室教育部神经变性病重点实验室北京100053 首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

目的制备基因重组型人SORL1蛋白质片段,为探讨阿尔茨海默病的发病机制提供实验基础。方法采用PCR方法扩增人sorl1 cDNA编码区5 923～6 260 bp片段,克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。用大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达重组质粒,用液相色谱法... 详细信息

目的制备基因重组型人SORL1蛋白质片段,为探讨阿尔茨海默病的发病机制提供实验基础。方法采用PCR方法扩增人sorl1 cDNA编码区5 923～6 260 bp片段,克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。用大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达重组质粒,用液相色谱法纯化基因重组蛋白。结果 PCR扩增产物为358 bp,其ATG和TGA之间的结构与人sorl1 cDNA的5 923～6 260 bp区完全一致。基因重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中高效表达,其表达产物存在于包涵体组分中。纯化的基因重组蛋白在SDS-PAGE中表现为单一条带,表观分子量约为13 000。结论人sorl1 cDNA的5 923～6 260 bp片段在原核细胞中大量表达,纯化后的基因重组蛋白可尝试用于抗体的制备。

关键词：含L(DLR类)A重复分拣蛋白相关受体基因重组蛋白阿尔茨海默病

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