检索结果-内蒙古大学图书馆

神经解剖学杂志 2005年第3期21卷 247-251页

作者：张京钟余爽段德义赵春礼徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

为探讨Nurr1基因治疗Parkinson病的可行性,本研究克隆了中国人核相关受体1(nuclearrelatedreceptor1,Nurr1)基因,并重组携带Nurr1基因的真核表达载体,为该研究提供分子生物学基础。实验采用反转录聚合酶链式反应(RTPCR)方法从人胎儿脑... 详细信息

为探讨Nurr1基因治疗Parkinson病的可行性,本研究克隆了中国人核相关受体1(nuclearrelatedreceptor1,Nurr1)基因,并重组携带Nurr1基因的真核表达载体,为该研究提供分子生物学基础。实验采用反转录聚合酶链式反应(RTPCR)方法从人胎儿脑中获取Nurr1cDNA,将其克隆至pGEMTEasy载体中;测序鉴定后,重组携带Nurr1基因的逆转录病毒载体pLNCX2Nurr1;通过脂质体将重组载体转染PT67包装细胞系,用病毒上清感染NIH3T3细胞系以检测病毒滴度。结果发现,RTPCR扩增得到人Nurr1cDNA片段,序列与GenBank登录的序列一致;将Nurr1基因亚克隆至逆转录病毒载体得到插入方向正确的重组载体pLNCX2Nurr1,病毒上清滴度为2×105CFU/ml。结果表明本实验获得人Nurr1基因cDNA序列,检测到Nurr1基因在真核细胞中表达,并得到较高滴度的病毒上清。

关键词：人Nurr1基因基因克隆基因表达帕金森病基因治疗

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Akt/mTOR信号通路在海人酸损伤大鼠海马组织中的激活

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基础医学与临床 2010年第6期30卷 630-634页

作者：方金林吴春春孙晓红徐群渊段德义首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

目的研究Akt/mTOR信号通路在海人酸(KA)诱导的大鼠海马神经元损伤中的激活和HIF1α的表达情况。方法成年SD大鼠随机分为3组,其中2组接受脑室注射,1组为假手术组。大鼠麻醉后颅骨钻孔但侧脑室注射KA1.0μg(KA组)或等体积生理盐水(NS组)... 详细信息

目的研究Akt/mTOR信号通路在海人酸(KA)诱导的大鼠海马神经元损伤中的激活和HIF1α的表达情况。方法成年SD大鼠随机分为3组,其中2组接受脑室注射,1组为假手术组。大鼠麻醉后颅骨钻孔但侧脑室注射KA1.0μg(KA组)或等体积生理盐水(NS组)或相应位置颅骨钻孔但不予注射(假手术组)。8和16 h及1、3和5 d后,用Western blot观察Akt和mTOR的表达及其磷酸化水平,用免疫组化观察HIF1α的表达情况。结果尼氏染色显示,KA组大鼠海马CA3区1 d时即开始有死亡,5 d时累及CA1区。Akt在KA损伤16 h后就开始激活并持续至第5天;mTOR于第1天开始激活,第3天时达峰值。CA3区的HIF1α于第1天明显升高,CA1区的HIF1α表达则于3 d时明显升高。NS组和假手术组上述各指标变化均不明显。结论 KA诱导激活大鼠海马中Akt/mTOR通路,可能调节神经元的存活。

关键词：海人酸 Akt/mTOR通路 HIF1α 大鼠

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α-synuclein对小剂量鱼藤酮导致的线粒体损伤的调控作用研究

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中国生物工程杂志 2007年第12期27卷 6-10页

作者：鲁玲玲梁源段春礼赵春礼赵焕英杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生与修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

建立稳定表达α-synuclein基因的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞,鱼藤酮作用1、2、4周后分别提取各组细胞线粒体,检测其complexⅠ功能、线粒体膜肿胀度和超氧阴离子的含量。结果显示在1、2周时过表达α-synuclein基因的细胞与对照组... 详细信息

建立稳定表达α-synuclein基因的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞,鱼藤酮作用1、2、4周后分别提取各组细胞线粒体,检测其complexⅠ功能、线粒体膜肿胀度和超氧阴离子的含量。结果显示在1、2周时过表达α-synuclein基因的细胞与对照组细胞相比,前者的complexⅠ的活性高,线粒体膜肿胀度轻,线粒体超氧阴离子的含量少,但4周后,前者的complexⅠ活性明显低于后者,线粒体膜肿胀度及线粒体内超氧阴离子的含量均显示前者高于后者。由此可见过表达α-synuclein基因的细胞在早期对鱼藤酮的损伤有一定的抵抗作用,但长期作用后可能有加重损伤的作用。提示PD患者多巴胺能神经元内α-synuclein的增高可能对小剂量鱼藤酮导致的线粒体损伤存在双重调节作用。

关键词： α-synuclein 线粒体功能障碍帕金森病

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大鼠骨髓基质细胞在脑内的迁移和分化

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基础医学与临床 2008年第5期28卷 432-435页

作者：段春礼姬曼孙晓红赵春礼杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

目的研究骨髓基质细胞（bMSCs）在大鼠脑内的迁移和分化情况。方法体外分离培养大鼠四肢骨的bMSCs，原代培养8～10d后，同时用含增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的反转录病毒上清转导bMSCs并进行抗性筛选，7～10d可得到稳定表达EGFP的bMSCs... 详细信息

目的研究骨髓基质细胞（bMSCs）在大鼠脑内的迁移和分化情况。方法体外分离培养大鼠四肢骨的bMSCs，原代培养8～10d后，同时用含增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的反转录病毒上清转导bMSCs并进行抗性筛选，7～10d可得到稳定表达EGFP的bMSCs，然后将EGFP标记的bMSCs通过侧脑室和尾静脉2种注射方式分别注入纹状体损伤的大鼠体内，进而观察bMSCs向脑内迁移和分化的情况。结果在移植后的大鼠脑内均观察到2种方式植入大鼠体内的bMSCs，这些EGFP阳性的细胞呈现出一些神经元和神经胶质细胞的形态并能表达一些神经元和神经胶质细胞的特异性标志物。结论骨髓基质细胞中确实含有能够向神经元方向分化的干细胞。

关键词：绿色荧光蛋白骨髓间充质干细胞迁移分化

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使用Y染色体特异性探针追踪检测大鼠脑内移植细胞

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基础医学与临床 2007年第9期27卷 1043-1047页

作者：李娜赵焕英杨慧首都医科大学北京市神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的探讨准确高效追踪检测脑内移植来源细胞的方法。方法克隆雄性大鼠Y染色体SRY基因的一个片段,并且将该片段标记成DNA探针,对大鼠的脑切片进行原位杂交。结果使用大鼠Y染色体SRY基因片段标记的探针后,可以特异性检测雌性大鼠脑内来源... 详细信息

目的探讨准确高效追踪检测脑内移植来源细胞的方法。方法克隆雄性大鼠Y染色体SRY基因的一个片段,并且将该片段标记成DNA探针,对大鼠的脑切片进行原位杂交。结果使用大鼠Y染色体SRY基因片段标记的探针后,可以特异性检测雌性大鼠脑内来源于雄性大鼠的移植细胞。结论使用原位杂交方法可以有效、准确地追踪检测移植细胞。

关键词：原位杂交 Y染色体细胞移植

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帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白相互作用研究

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中国生物工程杂志 2008年第12期28卷 7-11页

作者：范春香崔韬谷利张韬刘琦赵焕英赵春礼杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室神经变性病教育部重点实验室北京100069 首都医科大学附属北京天坛医院北京100050

目的:利用蛋白质组学方法和激光扫描共聚焦显微镜来鉴定帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白(α-synuclein)之间的相互作用关系及两种蛋白在MN9D细胞中的分布。方法:将α-synuclein基因插入pGEX-4T-1载体,经DNA测序证明形成GST融合蛋... 详细信息

目的:利用蛋白质组学方法和激光扫描共聚焦显微镜来鉴定帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白(α-synuclein)之间的相互作用关系及两种蛋白在MN9D细胞中的分布。方法:将α-synuclein基因插入pGEX-4T-1载体,经DNA测序证明形成GST融合蛋白,经大肠杆菌BL-2l表达纯化后,与MN9D细胞裂解液共孵育,检测PINK1与α-synuclein蛋白间的相互作用。并应用MN9D细胞的内源性PINK1与α-synuclein进行免疫共沉淀实验,进一步验证两蛋白之间的相互作用。MN9D细胞经免疫细胞化学染色,利用激光扫描共聚焦显微镜观察两种蛋白的细胞内分布及共定位状态。结果:利用GST-α-synuclein融合蛋白捕获及免疫共沉淀技术,检测到特异的PINK1条带。激光扫描共聚焦显微镜检测到两者存在部分共定位。结论PINK1和α-synuclein在体外和细胞内均可发生相互作用并在MN9D细胞中存在共定位关系。

关键词： PINK1 α-synuclein 蛋白质相互作用共定位

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应用载体介导的RNA干扰技术抑制Nurr1基因在PT67细胞中的表达

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神经解剖学杂志 2007年第2期23卷 121-126页

作者：赵焕英包金风赵春礼杨慧徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

本研究应用载体介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异地干扰孤儿核受体1(nuclear related factor1,Nurr1)基因的表达,以建立稳定的RNAi技术及用于下一步的Nurr1基因治疗研究。我们筛选了四对Nurr1基因的特异性序列shRNA(short ... 详细信息

本研究应用载体介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异地干扰孤儿核受体1(nuclear related factor1,Nurr1)基因的表达,以建立稳定的RNAi技术及用于下一步的Nurr1基因治疗研究。我们筛选了四对Nurr1基因的特异性序列shRNA(short hairpin RNA),构建相应的载体(psilencerTM3.1-H1neo shRNA1,2,3,4)。分别将这4种质粒瞬时转染入已转染了逆转录病毒质粒pLNCX2-Nurr1并稳定表达Nurr1基因的PT67细胞中。在转染后24、48和72h分别采用免疫荧光、免疫组化、免疫印迹以及Real-time PCR的方法检测细胞中Nurrl蛋白及基因的表达水平。结果显示,转染psilencerTM3.1-H1neo shRNA2、3号24h和48h后,经免疫荧光和免疫组化检测,Nurr1在PT67细胞中表达显著降低;免疫印迹结果也显示,Nurr1蛋白量明显低于阴性对照组。psilencerTM3.1-H1neo shRNA1、4对Nurr1蛋白表达没有明显影响。Real-time PCR相对定量结果也同样证实2、3号转染后Nurr1基因表达的干扰效果明显,而1、4号结果相对较弱。通过本实验,我们筛选出了两段Nurr1特异性siRNA序列,且干扰效果在转染后24h至48h时效果最为明显。

关键词： Nurr1基因 RNA干扰载体介导 PT67细胞

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制备人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因表达的变化

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中国临床康复 2005年第25期9卷 25-27,i0001页

作者：赵焕英李良刘延英刘静孙晓红杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室北京市100054

目的:获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针,检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法:实验于2002-10/2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2,6,12周帕金森病大鼠模型60只,每... 详细信息

目的:获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针,检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法:实验于2002-10/2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2,6,12周帕金森病大鼠模型60只,每组各20只,用来做原位杂交的组织处理;将已制备的pGEM-T-Easy-D2R质粒载体分别经ClaI、XbaⅠ限制性酶切反应得到线形质粒,再分别以T7和SP6聚合酶制备了人Ⅱ型多巴胺受体基因的反义和正义探针,通过斑点杂交检测探针的浓度;将反义和正义探针分别作等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,观察使对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底的最适宜浓度,从而降低内缘性其他多巴胺受体亚型的干扰作用;用制备的最适宜浓度探针分别杂交帕金森病大鼠模型2,6,12周的组织切片,杂交后冲洗,免疫检测及呈色,观察帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体表达。结果:①实验标记的人Ⅱ型多巴胺受体探针属cRNA探针,其特点为单链探针,杂交过程不需变性,可合成最可靠的反义链探针,杂交结果稳定,体外转录合成的cRNA探针长度也比较一致,其浓度分别为150,120mg/L。②将反义和正义探针分别等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,结果证明25mg/L浓度最适宜,对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底。③原位杂交证实,反义探针能够与帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体mRNA杂交。用反义探针标记的细胞中可见蓝色颗粒沉积,左右半球纹状体中标记细胞数在2周时没有变化,帕金森病大鼠损伤侧和健侧Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达没有明显变化;6周时,损伤侧较健侧表达明显上调,12周时,损伤侧与健侧表达都下降且没有明显差别。结论:实验获得了人Ⅱ型多巴胺受体基因反义和正义cRNA探针,并得出无本底的最适宜浓度;制备的人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针可以检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因变化情况,并说明了帕金森病大鼠纹状体Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达水平随模型日期增长而发生相应变化。

关键词：帕金森病受体多巴胺/遗传学原位杂交基因 RNA 信使/生物合成

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内源性Nurr1对胚胎中脑及前脑前体细胞体外分化的诱导作用

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中国临床康复 2005年第9期9卷 52-54页

作者：李良赵焕英徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京市100054

目的:多巴胺神经元的发育是人们较为关注的问题,目前发现的蛋白可能在其发育机制中起着重要作用,研究内源性Nurr1基因表达变化对体外培养大鼠胚胎神经前体细胞分化的诱导作用。方法:实验于2003-05/2004-08在首都医科大学北京神经科学研... 详细信息

目的:多巴胺神经元的发育是人们较为关注的问题,目前发现的蛋白可能在其发育机制中起着重要作用,研究内源性Nurr1基因表达变化对体外培养大鼠胚胎神经前体细胞分化的诱导作用。方法:实验于2003-05/2004-08在首都医科大学北京神经科学研究所完成。分离13.5d大鼠胚胎中脑及前脑神经前体细胞并进行体外培养,培养基中加入视黄酸及毛喉素诱导3d,采用RT-PCR,WesternBlot及免疫荧光染色的方法观察Nurr1表达的变化及细胞分化;同时,用反义寡核苷酸转染技术阻断细胞Nurr1表达后再进行诱导,并进行同样观察。结果:视黄酸及毛喉素可诱导前体细胞的Nurr1表达,增加约60%,中脑来源神经前体细胞中(tyrosinehydroxylase,TH)阳性细胞占β-tublin-III阳性细胞的比例由原来的(5.32±1.20)%增至(9.01±3.20)%。前脑来源神经前体细胞中TH阳性细胞占β-tublin-III阳性细胞的比例由原来的(1.27±1.20)%增至(5.01±1.50)%。Nurr1反义寡核苷酸作用12h后前体细胞的Nurr1表达被阻断,至72h后重新表达。Nurr1被阻断后,只有少量的前体细胞被诱导为TH阳性细胞。结论:内源性Nurr1的过表达可促进胚胎神经前体细胞向多巴胺能神经元分化。

关键词：细胞分化 Nurrl 多巴胺神经元酪氨酸羟化酶

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人AADC基因在cos-7细胞中的表达和活性检测

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中国组织化学与细胞化学杂志 2002年第4期11卷 365-369页

作者：杨慧赵焕英张智段德义蔡青徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室 100054

目的　研究人芳香族左旋氨基酸脱羧酶 (AADC)基因在多巴胺代谢过程中的作用。方法　从人胎儿黑质组织中提取总RNA ,以RT PCR法扩增AADCcDNA片段 ,克隆于 pGEM T载体中。测序正确后再构建真核表达载体 ,转染猴肾成纤维细胞COS 7,原位杂... 详细信息

目的　研究人芳香族左旋氨基酸脱羧酶 (AADC)基因在多巴胺代谢过程中的作用。方法　从人胎儿黑质组织中提取总RNA ,以RT PCR法扩增AADCcDNA片段 ,克隆于 pGEM T载体中。测序正确后再构建真核表达载体 ,转染猴肾成纤维细胞COS 7,原位杂交检测AADC表达 ,加入L DOPA后 ,用高效液湘色谱测定转AADC细胞的多巴胺(DA)生成量 ,以了解转基因细胞AADC基因的功能活性。结果　RT PCR扩增出 144 2bp的cDNA片段与Genbank[NM 0 0 0 790 ]登录的序列相同 ,构建真核表达载体 pBK RSV AADC ,原位杂交证实其在COS 7表达阳性率为 70 % - 80 % ,在AADC活性作用下实验组的DA生成量是对照组的 4倍以上 (P <0 0 1)。结论　所克隆的AADC基因可在真核细胞中表达并具有生物活性。可望用于帕金森病的基因治疗。

关键词：人AADC基因 cos-7细胞表达活性检测芳香族左旋氨基酸脱羧酶帕金森病基因治疗原位杂交多巴胺

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