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解剖学报 2011年第2期42卷 145-150页

作者：陈芸鞠莉莉王蓓蓓曾辉徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

目的确定脑内小胶质细胞是否表达甘露糖受体,以及在不同脑区甘露糖受体的表达是否存在差异,以进一步明确小胶质细胞的功能。方法 C57小鼠26只,分为侧脑室炎症模型组(10只)、全身炎症模型组(6只)和正常对照组(10只)。通过注射细菌脂多糖(... 详细信息

目的确定脑内小胶质细胞是否表达甘露糖受体,以及在不同脑区甘露糖受体的表达是否存在差异,以进一步明确小胶质细胞的功能。方法 C57小鼠26只,分为侧脑室炎症模型组(10只)、全身炎症模型组(6只)和正常对照组(10只)。通过注射细菌脂多糖(LPS)建立全脑急性炎症模型,用免疫荧光双标技术对小鼠脑组织冷冻切片进行染色,激光共焦显微镜下观察小胶质细胞(Iba-1阳性)或激活小胶质细胞(OX-6阳性)与甘露糖受体(CD206)的共定位,比较皮层、海马、纹状体、黑质和小脑5个脑区小胶质细胞和CD206共定位比例的差异。结果正常小鼠和急性侧脑室炎症小鼠皮层内的部分小胶质细胞(包括Iba-1阳性细胞与OX-6阳性细胞)有CD206表达,CD206阳性小胶质细胞的比例分别是83%和94%;激活小胶质细胞(表达OX-6)与CD206有共定位,CD206阳性细胞中的激活小胶质细胞在皮层、海马、纹状体、黑质和小脑的比例分别是79%、81%、74%、53%和66%,而激活小胶质细胞中的CD206阳性细胞的比例则是63%、48%、49%、53%和52%。结论脑内静息和激活的小胶质细胞都能够表达甘露糖受体,表达量受炎症因素的影响并在不同脑区存在差异,其中黑质内CD206阳性细胞中的激活小胶质细胞的比例明显低于其他脑区;激活小胶质细胞中CD206阳性细胞的比例则在海马偏低。

关键词：小胶质细胞炎症甘露糖受体免疫荧光小鼠

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脂多糖注入黑质对恒河猴运动行为和多巴胺能神经元的影响

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解剖学报 2008年第4期39卷 481-487页

作者：陈庆友刘玉军鲁强户乃丽徐群渊张进禄首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的观察恒河猴黑质内注射脂多糖后运动行为和黑质多巴胺能神经元的变化,探讨脑内炎症反应在黑质多巴胺能神经元慢性变性过程中的作用。方法成年恒河猴5只,分别定位注射生理盐水(对照,编号M5)和脂多糖(存活24周:编号M1和M2,存活48周:编... 详细信息

目的观察恒河猴黑质内注射脂多糖后运动行为和黑质多巴胺能神经元的变化,探讨脑内炎症反应在黑质多巴胺能神经元慢性变性过程中的作用。方法成年恒河猴5只,分别定位注射生理盐水(对照,编号M5)和脂多糖(存活24周:编号M1和M2,存活48周:编号M3和M4)。上述注射均在存活前0周、8周、16周,向右侧黑质部位注射3次,每次40μl(2.5g/L)。术后观察猴行为改变(包括随意运动和上肢活动),免疫组织化学染色观察黑质部位酪氨酸羟化酶阳性神经元的变化及小胶质细胞的激活情况。结果1.猴全身运动:注射脂多糖24周和48周后,各个动物运动距离和平均速度与术前自身相比随观察时间呈减少趋势,对照组动物两个指标与术前比较无变化。2.猴上肢活动:猴M1和M2,注射对侧前臂取食时间术后24周较术前分别延长了36.1%、27.1%,手爪抓取食物时间分别延长了41.2%、28.6%。猴M3和M4,注射对侧前臂取食时间术后48周较术前分别延长了76.5%(P<0.01)、50%(P<0.01),手爪抓取食物时间分别延长了81.8%(P<0.01)、55.6%(P<0.01),4只实验动物同侧上肢未见影响。3.注射脂多糖各个动物注射侧黑质阳性神经元数量与对侧相比较,有不同程度的减少,存活48周动物神经元减少更加明显;对照动物两侧黑质部位神经元数量无变化。4.注射脂多糖各个动物注射侧黑质部位小胶质细胞出现不同程度的激活,在24周组较明显。结论脂多糖诱导的炎症反应能引起猴黑质部位多巴胺能神经元的变性损伤和行为学的改变,这些改变呈慢性进展的特点,行为改变与多巴胺能神经元损伤程度相关。

关键词：脂多糖黑质行为酪氨酸羟化酶免疫组织化学恒河猴

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帕金森病小鼠模型黑质纹状体通路的形态学改变

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解剖学报 2012年第3期43卷 293-298页

作者：贾妍徐长磊徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

目的观察帕金森病小鼠模型黑质纹状体通路随病程进展而发生的形态学变化,从新的视角探讨帕金森病的病理生理机制。方法正常C57小鼠36只,随机分为生理盐水组和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)组,每组18只,于注射后第7、14、21、25... 详细信息

目的观察帕金森病小鼠模型黑质纹状体通路随病程进展而发生的形态学变化,从新的视角探讨帕金森病的病理生理机制。方法正常C57小鼠36只,随机分为生理盐水组和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)组,每组18只,于注射后第7、14、21、25、28、35天取材,利用免疫组织化学、免疫荧光技术和激光扫描共焦显微镜观察黑质多巴胺能神经元的数量、在纹状体内投射的神经纤维密度及其在纹状体直接通路和间接通路神经元(D1R/D2R阳性神经元)上的分布比例。结果注射MPTP后,黑质多巴胺能神经元减少40%～50%;纹状体内多巴胺能神经纤维数量呈现先减少后增加的过程:第21天最少,仅为正常的20%;第35天最高,达到正常的45%;多巴胺能神经纤维在纹状体D1R/D2R阳性神经元上的分布比例也有先低后高的表现:第21天最低,第35天最高,与生理盐水组相比差异有显著性。结论 MPTP帕金森病模型小鼠的黑质纹状体通路呈现多巴胺能神经纤维再生现象,再生的多巴胺能神经纤维更多地分布于其直接通路的神经元上。

关键词：帕金森病多巴胺能神经元神经纤维多巴胺受体免疫组织化学免疫荧光小鼠

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Ⅱ型囊泡单胺转运体基因过表达对多巴胺含量影响的体外研究

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解剖学报 2004年第4期35卷 344-349页

作者：张京钟余爽赵春礼段春礼徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

目的　获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体 (VMAT2 )基因 ,转染至MN9D细胞 ,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2 基因促进单胺类递质循环利用的效应。　方法　从人胎脑中提取总RNA ,RT PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM Eas... 详细信息

目的　获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体 (VMAT2 )基因 ,转染至MN9D细胞 ,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2 基因促进单胺类递质循环利用的效应。　方法　从人胎脑中提取总RNA ,RT PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM Easy T载体中 ,进行全序列测定。重组真核表达载体pBK RSV VMAT2 ,转染MN9D细胞 ,免疫细胞化学检测VMAT2 的表达 ,HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化。　结果　RT PCR扩增到 16 37bp的带有Kozak序列的cDNA片段。原位杂交证实pAAV VMAT2 能在COS7细胞表达 ;免疫组织化学证实转基因的MN9D细胞 (实验组 )VMAT2 免疫着色明显高于对照组。高效液相色谱结果表明 ,实验组中细胞内外的多巴胺含量均升高 (P <0 0 1) ,细胞外HVA、DOPAC降低 (P <0 0 5 ) ,而胞内升高 (P <0 0 1)。　结论　克隆的VMAT2cDNA片段可在真核细胞中表达 ,该基因的过表达可促进多巴胺的循环利用 ,有望用于帕金森病的基因治疗。

关键词： Ⅱ型囊泡单胺转运体基因表达 MN9D细胞帕金森病人胎脑

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线粒体、α-突触核蛋白在帕金森病发病机制中的作用

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中国临床康复 2005年第9期9卷 148-150页

作者：梁源杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室北京市100054

目的:帕金森病是临床上最常见的神经退行性疾病之一,其确切的病因和发病机制目前尚不清楚。目前一般认为该病主要是由于环境和/或遗传所导致的线粒体功能受损及α-突触核蛋白异常聚集所致。线粒体功能受损尤其表现在complexⅠ功能下降,... 详细信息

目的:帕金森病是临床上最常见的神经退行性疾病之一,其确切的病因和发病机制目前尚不清楚。目前一般认为该病主要是由于环境和/或遗传所导致的线粒体功能受损及α-突触核蛋白异常聚集所致。线粒体功能受损尤其表现在complexⅠ功能下降,线粒体DNA的变化,氧应激和凋亡的发生,文章将重点阐述以上内容的研究新进展,以期寻找线粒体损伤和α-突触核蛋白在帕金森病中的确切作用。资料来源:应用计算机检索Medline数据库1980-01/2004-06期间的相关文章,检索词为“pakinson'sdisease和“α-synuclein,mitochondria,complexⅠ,oxidativestress,mtDNA,apoptosis,分别地组合进行检索,限定文章语言种类为英文。同时计算机检索中国期刊全文数据库1999-01/2004-06期间的相关文章,检索词“α-突触核蛋白,线粒体,复合酶Ⅰ,氧应激,线粒体DNA,凋亡,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,从查到的资料中选取与α-突触核蛋白,线粒体在帕金森病发病机制中的作用有关的文章。资料提炼:共收集到62篇符合上述要求的文章,查找全文,有48篇文章找到了全文。将观点非常相似的文章进行对比,筛出阐述详尽,近期发表的文章共26篇,其余排除。资料综合:将所选文章按其所述机制与α-突触核蛋白,复合酶Ⅰ,氧应激,线粒体DNA,凋亡的?

关键词：帕金森病线粒体神经组织蛋白质类

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胚胎皮层神经元的迁移及其相关分子机制

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基础医学与临床 2005年第8期25卷 684-691页

作者：余爽徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100054

在中枢神经系统发育中,皮层神经元的迁移是一个复杂而又被精确调控的过程.胚胎皮层神经元主要有两种迁移方式:来源于背侧端脑的锥体神经元主要采用放射状迁移;而来源于腹侧端脑的中间神经元则采用切线方向迁移进入皮层.其中,在皮层发育... 详细信息

在中枢神经系统发育中,皮层神经元的迁移是一个复杂而又被精确调控的过程.胚胎皮层神经元主要有两种迁移方式:来源于背侧端脑的锥体神经元主要采用放射状迁移;而来源于腹侧端脑的中间神经元则采用切线方向迁移进入皮层.其中,在皮层发育早期,锥体神经元直接以胞体位移运动向表面迁移;而在发育晚期,皮层相对较厚时,锥体神经元需借助放射状胶质细胞突起的导向作用迁移到目的部位.

关键词：皮层神经元放射状迁移切线方向迁移

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α-突触核蛋白在正常大鼠脑神经元中的亚细胞定位

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解剖学报 2006年第3期37卷 251-254页

作者：张春岩蔡青于顺徐群渊陈彪杨慧首都医科大学神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室北京100069 首都医科大学宣武医院北京老年病研究所北京100053

目的研究α_突触核蛋白(α_synuclein)在正常大鼠脑神经元中的亚细胞定位,为阐明其正常的生理功能提供线索。方法超小金标记结合银增强免疫电镜技术。结果α_突触核蛋白不仅存在于神经细胞的突触前终末,也见于神经细胞的轴突、胞浆与核... 详细信息

目的研究α_突触核蛋白(α_synuclein)在正常大鼠脑神经元中的亚细胞定位,为阐明其正常的生理功能提供线索。方法超小金标记结合银增强免疫电镜技术。结果α_突触核蛋白不仅存在于神经细胞的突触前终末,也见于神经细胞的轴突、胞浆与核中。在突触前终末,α_突触核蛋白的分布与突触小泡无明显的关系。在神经细胞核内,靠近核膜部分α_突触核蛋白的分布较为密集,细胞核中心部位α_突触核蛋白则较为稀疏。在胞浆和轴突中,α_突触核蛋白散在分布。另外,在线粒体中也有该蛋白表达。结论α_突触核蛋白广泛分布于神经元的各个部位,可能参与神经元的多种生理功能。

关键词： α-突触核蛋白超小金亚细胞定位免疫电镜大鼠

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Nurr1及其在帕金森病诊断与基因治疗中的应用

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生理科学进展 2010年第3期41卷 205-208页

作者：杨爽鲁玲玲杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069 首都医科大学

Nurr1是属于核受体超家族的一种转录因子,对多巴胺能神经元的分化、存活和功能维持起重要作用,其功能异常与帕金森病密切相关。本文将从Nurr1在中枢神经系统的分布、Nurr1与多巴胺能神经元发育、Nurr1与帕金森病发病的关系及其在帕金森... 详细信息

Nurr1是属于核受体超家族的一种转录因子,对多巴胺能神经元的分化、存活和功能维持起重要作用,其功能异常与帕金森病密切相关。本文将从Nurr1在中枢神经系统的分布、Nurr1与多巴胺能神经元发育、Nurr1与帕金森病发病的关系及其在帕金森病的诊断与基因治疗中的应用等方面作一简要综述。

关键词：核受体相关因子1 多巴胺能神经元帕金森病

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黑质内炎症反应对恒河猴多巴胺能神经元的毒性作用

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解剖学报 2009年第5期40卷 732-736页

作者：户乃丽刘玉军徐群渊张进禄首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的观察恒河猴黑质内脂多糖注射对多巴胺能神经元的损伤和小胶质细胞的激活以及炎性因子的释放情况,探讨脑内炎症反应在黑质多巴胺能神经元变性过程中的作用。方法成年恒河猴8只,分为急性实验组(3只)与慢性实验组(5只)。急性组单侧黑... 详细信息

目的观察恒河猴黑质内脂多糖注射对多巴胺能神经元的损伤和小胶质细胞的激活以及炎性因子的释放情况,探讨脑内炎症反应在黑质多巴胺能神经元变性过程中的作用。方法成年恒河猴8只,分为急性实验组(3只)与慢性实验组(5只)。急性组单侧黑质脂多糖注射后存活1周。通过免疫印迹方法观察酪氨酸羟化酶(TH)表达量变化与炎性因子的释放情况。慢性组按注射后存活时间及注射药物的不同分为脂多糖注射后存活24周、48周和生理盐水注射后存活48周。上述5只动物于存活前0周、8周、16周,向右侧黑质分3次注射脂多糖或生理盐水。术后用免疫组织化学染色及高效液相色谱法观察黑质TH阳性神经元的变化和纹状体神经递质含量的改变。结果急性实验组注射侧与对照侧TH表达量无明显差异,但注射侧可见小胶质细胞活化,人类白细胞DR抗原表达量上调并有大量肿瘤坏死因子α、白介素1β、环氧化酶2(COX-2)生成。慢性实验组单侧黑质脂多糖注射24周和48周后,各个动物注射侧黑质阳性神经元数量以及纹状体神经递质含量有不同程度的减少,而生理盐水注射动物无变化。结论脂多糖注射后在1周内可引起黑质剧烈的炎症反应,但这种病理过程并不伴随大量多巴胺能神经元死亡。随病程的发展,炎症反应能引起恒河猴黑质多巴胺能神经元慢性进行性的损伤。该病理过程较好模拟了帕金森病的发病特点。

关键词：脂多糖黑质炎性因子神经递质免疫组织化学免疫印迹法高压液相色谱法恒河猴

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高效液相色谱同时检测生物样本中8种单胺类神经递质

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分析化学 2009年第3期37卷 330-334页

作者：赵焕英段春礼范春香刘琦张韬杨慧首都医科大学神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室教育部神经变性病重点实验室首都医科大学医学实验与测试中心

建立一种快速、准确测定生物样品中左旋多巴(L-DOPA)、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴柯(DOPAC)、多巴胺(DA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)及5-羟色胺(5-HT)8种递质含量的高效液相色谱-电化学检测方法。使8种物质在25mi... 详细信息

建立一种快速、准确测定生物样品中左旋多巴(L-DOPA)、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴柯(DOPAC)、多巴胺(DA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)及5-羟色胺(5-HT)8种递质含量的高效液相色谱-电化学检测方法。使8种物质在25min于单一流动相、单流速、单通道检测器情况下达到良好的分离效果。采用ESAMD-150色谱柱(150mm×3.2mm,3μm),流动相为50mmol/L柠檬酸、50mmol/L无水乙酸钠、0.5mmol/L1-庚烷磺酸钠、0.5mmol/L乙二胺四乙酸二钠、5mmol/L三乙胺,pH3.5,在甲醇浓度为5%～10%,流速0.3～0.5mL/min,柱温为30℃时,都能使8种物质很好分离,其中在甲醇浓度8%,流速0.4mL/min,检测到前5种物质线性范围为0.005～10nmol/L;后3种0.001～10nmol/L,8种物质相关系数在0.994～0.999之间,检出限在pmol/L水平;回收率在80.3%～102.1%之间,相对偏差在1.4%～4.8%之间。且对样本处理和保存方法进行了探讨。

关键词：单胺类神经递质高效液相色谱电化学检测

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