检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2008年第12期28卷 7-11页

作者：范春香崔韬谷利张韬刘琦赵焕英赵春礼杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室神经变性病教育部重点实验室北京100069 首都医科大学附属北京天坛医院北京100050

目的:利用蛋白质组学方法和激光扫描共聚焦显微镜来鉴定帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白(α-synuclein)之间的相互作用关系及两种蛋白在MN9D细胞中的分布。方法:将α-synuclein基因插入pGEX-4T-1载体,经DNA测序证明形成GST融合蛋... 详细信息

目的:利用蛋白质组学方法和激光扫描共聚焦显微镜来鉴定帕金森病相关蛋白PINK1和α-突触核蛋白(α-synuclein)之间的相互作用关系及两种蛋白在MN9D细胞中的分布。方法:将α-synuclein基因插入pGEX-4T-1载体,经DNA测序证明形成GST融合蛋白,经大肠杆菌BL-2l表达纯化后,与MN9D细胞裂解液共孵育,检测PINK1与α-synuclein蛋白间的相互作用。并应用MN9D细胞的内源性PINK1与α-synuclein进行免疫共沉淀实验,进一步验证两蛋白之间的相互作用。MN9D细胞经免疫细胞化学染色,利用激光扫描共聚焦显微镜观察两种蛋白的细胞内分布及共定位状态。结果:利用GST-α-synuclein融合蛋白捕获及免疫共沉淀技术,检测到特异的PINK1条带。激光扫描共聚焦显微镜检测到两者存在部分共定位。结论PINK1和α-synuclein在体外和细胞内均可发生相互作用并在MN9D细胞中存在共定位关系。

关键词： PINK1 α-synuclein 蛋白质相互作用共定位

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人PINK1抗血清的制备及其免疫活性物质在大鼠脑组织中的表达

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首都医科大学学报 2010年第3期31卷 343-347页

作者：李继胜李尧华李昕于顺王年强高华孙晓红杨慧首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室首都医科大学宣武医院老年病研究所神经生物学研究室教育部神经变性病重点实验室

目的制备帕金森病相关蛋白PINK1抗血清并检测其在大鼠脑组织中的表达特征。方法制备人PINK1基因重组蛋白,免疫新西兰大耳白兔获得抗PINK1抗血清;通过盐析法初步纯化、Western blotting法鉴定抗血清的敏感性和特异性、免疫组化法检测PINK... 详细信息

目的制备帕金森病相关蛋白PINK1抗血清并检测其在大鼠脑组织中的表达特征。方法制备人PINK1基因重组蛋白,免疫新西兰大耳白兔获得抗PINK1抗血清;通过盐析法初步纯化、Western blotting法鉴定抗血清的敏感性和特异性、免疫组化法检测PINK1在大鼠脑中的分布。结果人PINK1基因重组蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达;纯化蛋白制备兔抗血清经盐析纯化后,兔抗人PINK1抗血清特异性识别人PINK1基因重组蛋白及大鼠脑匀浆中40000和66000的蛋白质,与预期结果一致;免疫组化染色显示PINK1广泛分布在嗅球、皮质、海马、纹状体、小脑、黑质和红核。结论制备了一种兔抗人PINK1多克隆抗血清;PINK1广泛分布于大鼠中枢神经系统;为以后深入研究PINK1表达的组织分布、细胞内定位及其生物学功能提供了有效地实验工具。

关键词： PINK1 抗血清大鼠重组蛋白

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移植壳聚糖导管修复大鼠坐骨神经缺损

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神经解剖学杂志 2010年第5期26卷 507-512页

作者：张皑峰苏增艳杨朝阳李晓光首都医科大学附属北京友谊医院口腔科北京100050 首都医科大学神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的:研究移植结合了碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的壳聚糖导管促进周围神经损伤再生的情况。方法:成年Wistar大鼠造成10mm坐骨神经缺损后,以壳聚糖导管(移植组,10只)作桥梁桥接神经两断端,以假手术组和单纯损伤组(造成10mm坐骨神经缺... 详细信息

目的:研究移植结合了碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的壳聚糖导管促进周围神经损伤再生的情况。方法:成年Wistar大鼠造成10mm坐骨神经缺损后,以壳聚糖导管(移植组,10只)作桥梁桥接神经两断端,以假手术组和单纯损伤组(造成10mm坐骨神经缺损后,不加以任何干预措施)各10只分别为阳性和阴性对照,术后通过肉眼观察和神经微丝(NF)、乙酰胆碱酯酶(AChE)免疫组织化学染色方法对损伤神经局部及远端靶肌肉运动终板的再生情况进行观察。结果:移植组大鼠术后3个月,新生的神经纤维已越过缺损部位并到达损伤远端。免疫组织化学染色显示:术后3个月,移植组大鼠坐骨神经缺损处再生组织内可观察到均匀、密集分布的NF免疫阳性纤维,且在腓肠肌终板区内可见AChE免疫阳性终末,至5个月时阳性染色明显增强。在术后3个月时可见新生的运动终板,但轮廓不规则、边界不清晰;而在5个月时,新生的运动终板的形态与密度均接近假手术组水平。结论:结合了bFGF的壳聚糖导管对缺损的坐骨神经修复具有良好的桥梁作用和促进神经生长及终板再生的作用。

关键词：壳聚糖导管碱性成纤维细胞生长因子坐骨神经神经再生运动终板乙酰胆碱酯酶大鼠

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AAV-GDNF/TH双基因载体的构建及表达

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基础医学与临床 2008年第6期28卷 543-548页

作者：张敏杨慧首都医科大学附属北京口腔医院口腔医学院北京口腔医学研究所北京100050 首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

目的探讨构建于同一个重组腺相关病毒(rAAV)载体上的酪氨酸羟化酶(TH)基因和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因是否能够同时表达。方法应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测双基因在HEK293包装细胞中的转录;通过免疫细胞化学荧光染色... 详细信息

目的探讨构建于同一个重组腺相关病毒(rAAV)载体上的酪氨酸羟化酶(TH)基因和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因是否能够同时表达。方法应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测双基因在HEK293包装细胞中的转录;通过免疫细胞化学荧光染色和免疫组织化学染色技术分别检测双基因在体外培养大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)和大鼠脑中的表达。结果在HEK293包装细胞和BMSCs中分别同时检测到了GDNF和TH基因RNA和蛋白的表达。对照LacZ在HEK293包装细胞和骨髓基质细胞中的表达率分别为50%和15%。大鼠脑组织切片中注射AAV-GDNF/TH病毒的部位与注射PBS的对侧相比无论是GDNF还是TH的表达均显著增加(P<0.01)。结论构建于同一个rAAV载体上的TH基因和GDNF基因体内体外都能够同时表达,此结果为PD的基因治疗提供了新的依据。

关键词：腺相关病毒帕金森病酪氨酸羟化酶(TH) 胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)

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大鼠创伤性脑损伤后认知行为的变化

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山东医药 2008年第37期48卷 6-8页

作者：苏月伟仲苏玉莫林宏刘玉军张皑峰杨朝阳李晓光首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069 北京航空航天大学首都医科大学附属北京友谊医院

目的建立直接手术损伤大鼠部分脑皮质及海马CA1区的创伤性脑损伤模型，并观察损伤后动物认知行为的改变情况。方法将大鼠进行脑损伤建模后，于术后11—15d和26—30d采用Morris水迷宫的方法评价动物的认知行为变化后，灌杀动物取脑切片... 详细信息

目的建立直接手术损伤大鼠部分脑皮质及海马CA1区的创伤性脑损伤模型，并观察损伤后动物认知行为的改变情况。方法将大鼠进行脑损伤建模后，于术后11—15d和26—30d采用Morris水迷宫的方法评价动物的认知行为变化后，灌杀动物取脑切片，HE染色及尼氏染色观察损伤范围；胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组织化学染色观察星型胶质细胞（AST）的活化及胶质瘢痕形成情况；术后5d行Nestin及GFAP双重免疫荧光染色显示海马内干细胞的激活，并观察损伤边缘的干细胞迁移情况。结果直接手术损伤部分脑皮质及海马CA1区后，造成了动物认知功能障碍，并且1个月时有自发的认知功能恢复；5d时星型胶质细胞活化，1个月时胶质瘢痕的形成。结论本实验采用的模型可成功造成动物认知行为的改变，为组织工程材料的移植治疗脑损伤提供了比较适用的研究模型。

关键词：创伤性脑损伤海马CA1区认知大鼠

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骨髓干细胞来源的星形胶质细胞参与脑损伤后胶质界膜的形成

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南方医科大学学报 2009年第12期29卷 2391-2393页

作者：邹西峰朱军李建民张海燕赵春礼徐群渊华北煤炭医学院附属医院神经外科河北唐山063000 首都医科大学北京神经科学研究所/北京市神经再生修复研究重点实验室/教育部神经变性疾病学重点实验室北京100069 首都医科大学细胞生物学系北京100069

目的探讨骨髓干细胞来源的星形胶质细胞是否参与脑损伤后胶质界膜的形成。方法将制作好的雌性Sprague-Dawley大鼠脑损伤模型24h后经尾静脉植入GFP标记的雄性Sprague-Dawley大鼠的骨髓源干细胞。在植入后2、4和8周取脑,用GFAP荧光免疫组... 详细信息

目的探讨骨髓干细胞来源的星形胶质细胞是否参与脑损伤后胶质界膜的形成。方法将制作好的雌性Sprague-Dawley大鼠脑损伤模型24h后经尾静脉植入GFP标记的雄性Sprague-Dawley大鼠的骨髓源干细胞。在植入后2、4和8周取脑,用GFAP荧光免疫组织化学方法显示星形胶质细胞,GFP显示骨髓来源细胞,观察损伤组织边缘的胶质界膜中是否存在GFP/GFAP双阳性细胞。结果在损伤组织边缘可见骨髓干细胞来源的星形胶质细胞。结论骨髓干细胞来源星形胶质细胞参与脑损伤后胶质界膜的形成。这对脑外伤的恢复和组织工程材料的植入有重要的意义。

关键词：骨髓源干细胞星形胶质细胞胶质界膜脑损伤绿色荧光蛋白

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基因重组型人SORL1蛋白质片段的原核表达和纯化

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首都医科大学学报 2011年第6期32卷 798-801页

作者：李爽李尧华叶懿文李昕于顺杨慧陈彪首都医科大学宣武医院老年病研究所神经生物学研究室教育部神经变性病重点实验室北京100053 首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

目的制备基因重组型人SORL1蛋白质片段,为探讨阿尔茨海默病的发病机制提供实验基础。方法采用PCR方法扩增人sorl1 cDNA编码区5 923～6 260 bp片段,克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。用大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达重组质粒,用液相色谱法... 详细信息

目的制备基因重组型人SORL1蛋白质片段,为探讨阿尔茨海默病的发病机制提供实验基础。方法采用PCR方法扩增人sorl1 cDNA编码区5 923～6 260 bp片段,克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。用大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达重组质粒,用液相色谱法纯化基因重组蛋白。结果 PCR扩增产物为358 bp,其ATG和TGA之间的结构与人sorl1 cDNA的5 923～6 260 bp区完全一致。基因重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中高效表达,其表达产物存在于包涵体组分中。纯化的基因重组蛋白在SDS-PAGE中表现为单一条带,表观分子量约为13 000。结论人sorl1 cDNA的5 923～6 260 bp片段在原核细胞中大量表达,纯化后的基因重组蛋白可尝试用于抗体的制备。

关键词：含L(DLR类)A重复分拣蛋白相关受体基因重组蛋白阿尔茨海默病

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应用人工神经修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究

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中国康复理论与实践 2012年第6期18卷 535-538页

作者：王晓亮杨朝阳李晓光张皑峰首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京市100069 北京市友谊医院口腔科北京市100050

目的观察应用复合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)-壳聚糖导管修复大鼠周围神经损伤的效果。方法成年Wistar大鼠25只分为假手术组(n=10)、单纯损伤组(n=5)和人工神经修复组(n=10)。假手术组仅暴露坐骨神经5 mm,单纯损伤组暴露坐骨神经并切... 详细信息

目的观察应用复合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)-壳聚糖导管修复大鼠周围神经损伤的效果。方法成年Wistar大鼠25只分为假手术组(n=10)、单纯损伤组(n=5)和人工神经修复组(n=10)。假手术组仅暴露坐骨神经5 mm,单纯损伤组暴露坐骨神经并切断,人工神经修复组以复合bFGF-壳聚糖导管桥接缺损。术后对实验动物的坐骨神经进行大体观察,对运动进行行为观察,以及组织化学和免疫组织化学方法评价神经再生情况和靶肌肉恢复情况。结果术后5周,与单纯损伤组相比,人工神经修复组运动功能有一定程度恢复。人工神经修复组再生的坐骨神经已经通过bFGF-壳聚糖导管越过缺损并与远端相连接。免疫组织化学方法显示,坐骨神经再生段可观察到神经微丝(NF)阳性和S-100阳性纤维。应用Masson染色方法,可观察到人工神经修复组腓肠肌去纤维化程度相对于单纯损伤组有明显改善。结论应用bFGF-壳聚糖导管能有效修复周围神经损伤并使大鼠运动功能得到改善。

关键词：周围神经损伤人工神经移植神经再生碱性成纤维细胞生长因子壳聚糖功能恢复

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喹啉酸所致亨廷顿病动物模型

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中国实验动物学报 2011年第1期19卷 84-88页

作者：邢秋云李峰首都医科大学基础医学院北京100069 首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生及修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室北京100069

亨廷顿病(Huntington's disease,HD)是以不自主舞蹈样动作、进行性认知障碍,痴呆为特征的一种常见染色体显性遗传病。兴奋性毒性作用是目前公认的HD发病机制之一,其中喹啉酸(quinolinic acid,QA)作为神经兴奋性毒素,可以损伤相应神... 详细信息

亨廷顿病(Huntington's disease,HD)是以不自主舞蹈样动作、进行性认知障碍,痴呆为特征的一种常见染色体显性遗传病。兴奋性毒性作用是目前公认的HD发病机制之一,其中喹啉酸(quinolinic acid,QA)作为神经兴奋性毒素,可以损伤相应神经元,导致大脑功能障碍,从而可有效模拟HD的相关改变。本文将就QA动物模型在模拟HD时的优缺点和目前QA在药物研究、疾病治疗等不同方面的应用进行综述。

关键词：亨廷顿病喹啉酸模型,动物应用

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雷帕霉素抗神经退行性病研究进展

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基础医学与临床 2008年第12期28卷 1336-1338页

作者：杨光祝元刚杨慧吉林省吉林市第二中心医院吉林吉林132001 首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再生与修复研究重点实验室教育部神经变性病重点实验室北京100069

雷帕霉素作为一种传统的抗真菌药物,具有免疫抑制剂和抗肿瘤的作用。值得注意的是,它通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶标蛋白mTOR、受体FKBP、VMP1,促进自噬,抑制了帕金森病、亨廷顿病等神经退行性变的病理过程,从而有望成为一种新的抗神经... 详细信息

雷帕霉素作为一种传统的抗真菌药物,具有免疫抑制剂和抗肿瘤的作用。值得注意的是,它通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶标蛋白mTOR、受体FKBP、VMP1,促进自噬,抑制了帕金森病、亨廷顿病等神经退行性变的病理过程,从而有望成为一种新的抗神经退行病药物。本文对其新的研究进展予以综述。

关键词：自噬雷帕霉素神经退行病帕金森病

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