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中国现代医生 2010年第21期48卷 9-13页

作者：刘静祎王可史瑞红秦华平高峰王晔赵欣刘慧荣张策山西医科大学细胞生理学省部共建教育部重点实验室山西太原030001 首都医科大学基础医学院病理生理学教研室北京100069

目的探讨年龄因素影响下大鼠大脑皮质细胞中Omi/HtrA2的表达差异及其与神经细胞凋亡的关系。方法采用正常成年及正常老年大鼠大脑皮质组织,经过Caspase-3、8、9、12活性检测和TUNEL法检测凋亡细胞;Western blot法检测Omi/HtrA2蛋白含量... 详细信息

目的探讨年龄因素影响下大鼠大脑皮质细胞中Omi/HtrA2的表达差异及其与神经细胞凋亡的关系。方法采用正常成年及正常老年大鼠大脑皮质组织,经过Caspase-3、8、9、12活性检测和TUNEL法检测凋亡细胞;Western blot法检测Omi/HtrA2蛋白含量变化;Real-timePCR法检测Omi/HtrA2 mRNA含量变化。结果衰老大鼠大脑皮质细胞凋亡明显高于成年大鼠,具体表现为:前者Caspase-3的比活性显著升高,阳性细胞凋亡数显著增高,与后者相比均有统计学差异(P<0.05)。与成年大鼠相比,衰老大鼠大脑皮质Caspase-9的比活性显著升高,二者相比差异有统计学意义(P<0.05);与成年大鼠相比,衰老大鼠大脑皮质Omi/HtrA2蛋白表达水平显著升高,二者相比差异有统计学意义(P<0.01);与成年大鼠相比,衰老大鼠大脑皮质Omi/HtrA2的mRNA水平也显著升高,二者相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论衰老大鼠大脑皮质凋亡水平增高,可能与Caspase-9途径活性增高以及Omi/HtrA2的基因和蛋白质表达水平增加有关。

关键词： Omi/HtrA2 衰老神经细胞凋亡

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大鼠大脑皮质中Omi/HtrA2的年龄分布差异性及其可能的意义

大鼠大脑皮质中Omi/HtrA2的年龄分布差异性及其可能的意义

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中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会

作者：刘静祎王可史瑞红秦华平高峰王晔赵欣刘慧荣张策山西医科大学细胞生理学省部共建教育部重点实验室首都医科大学基础医学院病理生理学教研室

目的:探讨年龄因素影响下大鼠大脑皮质细胞中Omi/HtrA2的表达差异及其与神经细胞凋亡的关系。方法:采用正常成年及正常老年大鼠大脑皮质组织,经过Caspase-3、-8、-9和-12活性检测和TUNEL法检测凋亡细胞;Western Blot法检测Omi/HtrA2蛋... 详细信息

目的:探讨年龄因素影响下大鼠大脑皮质细胞中Omi/HtrA2的表达差异及其与神经细胞凋亡的关系。方法:采用正常成年及正常老年大鼠大脑皮质组织,经过Caspase-3、-8、-9和-12活性检测和TUNEL法检测凋亡细胞;Western Blot法检测Omi/HtrA2蛋白含量变化;Real-Time PCR法检测Omi/HtrA2 mRNA含量变化。结果:衰老大鼠大脑皮质细胞凋亡明显高于成年大鼠,具体表现为:前者Caspase-3的比活性显著升高,阳性细胞凋亡数显著增高,与后者相比均有统计学差异(P<0.05)。与成年大鼠相比,衰老大鼠大脑皮质Caspase-9的比活性显著升高,二者相比有统计学差异(P<0.05);与成年大鼠相比,衰老大脑皮质Omi/HtrA2蛋白表达水平显著升高,二者相比有统计学差异(P<0.01);与成年大鼠相比,衰老大鼠大脑皮质Omi/HtrA2的mRNA水平也显著升高,二者相比有统计学差异(P<0.01)。结论:衰老大鼠大脑皮质凋亡水平增高,可能与caspase-9途径活性增高以及Omi/HtrA2的基因和蛋白质说平表达增加有关。

关键词： Omi/HtrA2 衰老神经细胞凋亡

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抗血管紧张素Ⅱ1型受体抗体阳性孕鼠模型的制备

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中国心血管病研究 2010年第4期8卷 290-293页

作者：郑荣华王澎张苏丽卫小红杨丽红燕子张熙刘慧荣山西医科大学生理教研室山西医科大学细胞生理学省部共建教育部重点实验室太原市030001 山西医科病理教研室山西医科大学细胞生理学省部共建教育部重点实验室太原市030001 首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系山西临汾职业技术学院基础教研室

目的制备抗血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）抗体阳性的孕鼠模型，为先兆子痫疾病的自身免疫机制研究提供重要工具。方法以合成的人AT1R细胞外第二环肽段（AT1R—ECⅡ）为抗原主动免疫雌性Wistar大鼠，待雌鼠体内抗AT1R抗体达高峰后，将其... 详细信息

目的制备抗血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）抗体阳性的孕鼠模型，为先兆子痫疾病的自身免疫机制研究提供重要工具。方法以合成的人AT1R细胞外第二环肽段（AT1R—ECⅡ）为抗原主动免疫雌性Wistar大鼠，待雌鼠体内抗AT1R抗体达高峰后，将其与正常雄鼠（未免疫）交配，从而建立抗AT1R抗体阳性的孕鼠模型。用SA—ELISA法检测孕鼠妊娠中期血清中抗AT1R抗体的水平、免疫球蛋白类型及亚类。结果免疫雌鼠体内抗AT，R抗体滴度在4周时明显升高，8周时达高峰（A值为2．89±0．21，同期对照组A值为0．44±0．06，P〈0．01）；与正常雄鼠交配怀孕后14d时，免疫孕鼠血清中的抗AT1R抗体仍维持高滴度。该抗体属于IgG类免疫球蛋白，而非IgM及IgA类，在大鼠IgC的4个亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c）中，该血清抗体主要属于IgG2b亚型（A值为0．32±0．04，同期对照组A值为0．08±0．01，P〈0．01），尚有极少部分属于IgG2a亚型（A值为0．10±0．01，同期对照组A值为0．07＋0．01，P〈0．05）。结论用主动免疫法可使孕鼠体内产生高滴度的抗AT，R抗体，且该抗体的亚型与先兆子痫患者体内的AT1受体自身抗体（AT1-AA）具有良好一致性，所以该造模方法可以作为从免疫学角度研究先兆子痫的一种工具。

关键词：血管紧张素Ⅱ1型受体抗体亚型

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免疫大鼠血清中抗β1、β3肾上腺素受体及M2乙酰胆碱受体抗体IgG亚类的分布

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中国心血管病研究 2010年第3期8卷 218-221页

作者：马秀瑞王瑾燕子郭永强韩蓉晖李苏芬刘慧荣山西医科大学生理教研室、山西医科大学细胞生理学省部共建教育部重点实验室太原市030001 山西医科大学机能实验室山西省活血化瘀研究所首都医科大学基础医学院病理生理教研室首都医科大学心脏病学系

目的明确免疫大鼠血清中抗β1、β3肾上腺素受体及M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类，为进一步研究此类抗体的作用机制提供实验依据。方法以合成的大鼠β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体细胞外第二环肽段为抗原分别主动免疫Wistar大鼠... 详细信息

目的明确免疫大鼠血清中抗β1、β3肾上腺素受体及M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类，为进一步研究此类抗体的作用机制提供实验依据。方法以合成的大鼠β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体细胞外第二环肽段为抗原分别主动免疫Wistar大鼠，应用免疫球蛋白纯化技术特异性提纯其血清中IgG类抗体，应用BCA进行蛋白定量，调整血清中蛋白量一致，用SA—ELISA法检测抗β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类。结果免疫组中属于IgG2a亚类的抗β1肾上腺素受体抗体的A值为（0．45±0．01），明显高于对照组（0．08±0．003，P〈0．05）；免疫组中属于IgG2b亚类的抗艮肾上腺素受体抗体的A值为（0．59±0．02），显著高于对照组（0．2±0．02，P〈0．05）；免疫组中属于IgG2a亚类的抗M2乙酰胆碱受体抗体的A值为（0．56±0．04），显著高于对照组（0．12±0．01，P〈0．05）。结论免疫大鼠血清中抗β1肾上腺素受体抗体和抗M2乙酰胆碱受体抗体主要属于IgG2a亚类，抗β3肾上腺素受体抗体主要属于IgG2b亚类。

关键词： β1肾上腺素受体 β3肾上腺素受体 M2乙酰胆碱受体抗体亚类

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显示肠肌间神经丛的全层铺片技术

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首都医科大学学报 2009年第2期30卷 256-258页

作者：纪托薛红朱进霞首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系生理学教研室

自1921年Langley提出“肠道神经系统”(entericnervous system,ENS)的概念以来,ENS对肠道运动的控制和功能调节的重要性日益引起人们的注意[1]。本实验室长期从事胃肠功能调节等方面的研究[2-3],深感消化道全层铺片技术[4-5]是研究肠道... 详细信息

自1921年Langley提出“肠道神经系统”(entericnervous system,ENS)的概念以来,ENS对肠道运动的控制和功能调节的重要性日益引起人们的注意[1]。本实验室长期从事胃肠功能调节等方面的研究[2-3],深感消化道全层铺片技术[4-5]是研究肠道神经系统必需的方法之一。虽然利用该技术显示肌间神经丛的方法已被众多学者广泛接受和使用,但文献中却很少提及此方法的详细操作过程。本研究室在传统铺片制作技术的方法上进行了不断的摸索和改进,本文就制作铺片的细节进行了较为详尽的阐述,谨供同行分享。1材料和方法1.1动物实验动物为成年SD大鼠,体质量200~300g;成年豚鼠,体质量250~350g;成年ICR小鼠,体质量15~25g。动物均来源于首都医科大学实验动物科学部。实验动物编号:SD大鼠:SCXK-(军)2007-004,ICR小鼠:SGXK(京)2007-0001。1.2方法1)取材:大鼠、豚鼠和小鼠均以颈椎脱臼法急性处死。腹部正中切口打开腹腔,取结肠,置4℃、4%多聚甲醛溶液固定2h,用0.1mol/L磷酸缓冲液(PBS)冲洗后再置于4℃、300g/L蔗糖溶液中过夜,次日行全层铺片。2)...

关键词：铺片网络结构小鼠豚鼠大鼠小家鼠荷兰猪肌间神经丛奥尔巴克丛免疫荧光组织化学

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11,12-环氧二十碳三烯酸对缺氧/复氧诱导的内皮细胞损伤及细胞间黏附因子-1表达的影响

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首都医科大学学报 2009年第6期30卷 805-808页

作者：邱笑违王珏王红霞王雯蒋东桥芦玲巧唐朝枢张立克首都医科大学基础医学院病理生理学教研室

目的观察11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-epoxyeicosatrienoic acids,11,12-EET)对缺氧/复氧诱导的内皮细胞损伤以及黏附分子表达的影响,了解环氧二十碳三烯酸发挥血管保护作用的可能途径,初步探讨其作用机制。方法采用原代培养人脐静脉... 详细信息

目的观察11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-epoxyeicosatrienoic acids,11,12-EET)对缺氧/复氧诱导的内皮细胞损伤以及黏附分子表达的影响,了解环氧二十碳三烯酸发挥血管保护作用的可能途径,初步探讨其作用机制。方法采用原代培养人脐静脉内皮细胞,用数字表法将其随机分为对照组、11,12-EET对照组、缺氧/复氧组和11,12-EET缺氧/复氧组。通过向培养瓶内通入混合气体(2%O2,5%CO2,93%N2)3h,复氧1h,复制缺氧/复氧损伤模型。采用MTT法检测细胞活力,用比色法检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的变化,用RT-PCR法检测细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)mRNA表达,用酶联免疫吸附实验测定细胞间黏附分子-1蛋白表达,用Western blotting方法检测蛋白激酶B(Akt)。结果11,12-EET在常氧条件下可对细胞造成轻度损伤,在缺氧/复氧条件下能显著提高内皮细胞的存活率,提高SOD的活性,降低MDA的含量,抑制细胞间黏附分子-1 mRNA和蛋白的表达,提高Akt的表达。结论11,12-EET具有减轻内皮细胞缺氧/复氧损伤作用,这可能与其能提高缺氧/复氧条件下内皮细胞SOD活性、清除氧自由基、抑制细胞间黏附分子-1 mRNA和蛋白的表达和促进Akt的表达有关。

关键词： 11 12-环二十碳三烯酸内皮细胞缺氧/复氧损伤

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窦神经压力感受器聚类分析

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首都医科大学学报 2009年第5期30卷 658-663页

作者：赵海燕魏华刘萍刘廷会王伟黄海霞钮伟真首都医科大学燕京医学院生理学教研室首都医科大学医学实验与测试中心首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系

目的探讨应用Spike2软件从颈动脉窦压力感受器多重纤维放电记录中提取单纤维放电信息的可能性和具体方法。方法对离体条件下同步记录的家兔颈动脉窦压力和窦神经少纤维放电数据,应用Spike2软件的聚类分析功能对所有动作电位进行分类。... 详细信息

目的探讨应用Spike2软件从颈动脉窦压力感受器多重纤维放电记录中提取单纤维放电信息的可能性和具体方法。方法对离体条件下同步记录的家兔颈动脉窦压力和窦神经少纤维放电数据,应用Spike2软件的聚类分析功能对所有动作电位进行分类。结果①分析过程中,设定模板参数必须紧密结合压力感受器的自身特点;②对于具有较高信噪比的、简单(含2-3个单位)或稍复杂的窦神经放电(含5个单位),应用Spike2进行分析可获得可靠的单位放电结果;③对于包含更多单位的压力感受器放电,应用Spike2分析时,对所得结果需持审慎的态度。结论Spike2软件适用于窦神经压力感受器少纤维(<5个单位)放电的聚类分析;正确分析结果取决于原始记录良好的信噪比和对模版参数有针对性的设置。

关键词：颈动脉窦压力感受器动作电位单纤维放电聚类分析主成分分析

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槲寄生碱和多糖对肝癌细胞增生和凋亡的影响

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首都医科大学学报 2009年第1期30卷 80-84页

作者：董坤丰平江瑛樊星李向利薛晓伟王学江首都医科大学基础医学院病理生理学教研室北京166中学

目的研究槲寄生碱和多糖对异型增生肝细胞DNA含量的影响。方法采用MTT比色法测定槲寄生碱(mistletoe alkali,MA)和多糖(mistletoe polysaccharose,MP)对SMMC-7721,HepG2细胞增生的影响。用流式细胞仪分析细胞周期、细胞凋亡,观察肝癌细... 详细信息

目的研究槲寄生碱和多糖对异型增生肝细胞DNA含量的影响。方法采用MTT比色法测定槲寄生碱(mistletoe alkali,MA)和多糖(mistletoe polysaccharose,MP)对SMMC-7721,HepG2细胞增生的影响。用流式细胞仪分析细胞周期、细胞凋亡,观察肝癌细胞的DNA相对含量,分析各时期细胞增生周期的移行变化。结果MA和MP有较好的抑制肝癌细胞增生的作用,呈现出时间-剂量依赖性;MP组及MA组SMMC-7721和HepG2细胞G1期比例增加(P<0.01),G2期和S期细胞比例降低(P<0.01),并使2种肿瘤细胞凋亡率增加(P<0.01),差异有统计学意义。结论MP和MA均能抑制人肝癌细胞SMMC-7721,Hep G2增生,促进其凋亡。

关键词：肝癌细胞脱氧核糖核酸流式细胞术槲寄生碱(MA) 槲寄生多糖(MP) 细胞周期

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双抗体夹心法检测3-硝基酪氨酸方法的建立及应用

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中国应用生理学杂志 2009年第4期25卷 569-572页

作者：闫莉许言午王晓梁武烨田珏杨光照马秀瑞刘慧荣山西医科大学生理学教研室山西太原030001 上海中医药大学基础医学院生物化学教研室上海201203 首都医科大学病理生理学教研室北京100069

目的:建立一种准确、快速的双抗体夹心酶免疫吸附的方法,以定量检测组织中过氧亚硝基阴离子的水平。方法:分别以小鼠源性抗3-硝基酪氨酸单克隆IgG抗体和兔源性抗3-硝基酪氨酸IgG抗体为包被抗体和检测抗体,采用正交设计方法摸索以上各抗... 详细信息

目的:建立一种准确、快速的双抗体夹心酶免疫吸附的方法,以定量检测组织中过氧亚硝基阴离子的水平。方法:分别以小鼠源性抗3-硝基酪氨酸单克隆IgG抗体和兔源性抗3-硝基酪氨酸IgG抗体为包被抗体和检测抗体,采用正交设计方法摸索以上各抗体的浓度,建立定量检测3-硝基酪氨酸(3-NT)的双抗体夹心ELISA法。同时,测定心肌缺血再灌注大鼠心肌组织3-NT的含量。结果:本研究建立的双抗体夹心ELISA法检测3-NT的最低检测下限为0.10 ***-1,具有良好线性关系的检测范围是(0.15～7.50)***-1(r2=0.995);心肌缺血再灌注组大鼠的心肌组织中的3-NT水平为(1022.42±97.35)*** pro-1,明显高于假手术组(246.58±56.52 *** pro-1,P<0.01)。结论:本研究建立的定量检测3-NT的双抗体夹心ELISA法能够方便、准确、快速地检测组织中3-NT的含量,为定量检测组织中ONOO-的水平提供了新的方法。

关键词：过氧亚硝基阴离子硝基化酪氨酸酶联免疫吸附测定

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裸质粒与脂质体介导转染方法对大鼠平滑肌细胞CYP2J3基因表达的影响

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首都医科大学学报 2009年第4期30卷 481-485页

作者：常静曾翔俊王红霞穆晶刘琨王瑛李珊珊张立克首都医科大学基础医学院病理生理学教研室首都医科大学基础医学院生物化学教研室

目的比较脂质体介导法和裸质粒直接转染法导入CYP2J3基因表达的效率。方法将CYP2J3真核表达质粒导入原代培养大鼠平滑肌细胞,用半定量RT-PCR方法检测CYP2J3 mRNA表达,Western blotting方法测定CYP2J3蛋白表达,高效液相色谱法测定培养液1... 详细信息

目的比较脂质体介导法和裸质粒直接转染法导入CYP2J3基因表达的效率。方法将CYP2J3真核表达质粒导入原代培养大鼠平滑肌细胞,用半定量RT-PCR方法检测CYP2J3 mRNA表达,Western blotting方法测定CYP2J3蛋白表达,高效液相色谱法测定培养液11,12-EET含量。实验分为裸质粒转染组(2J3)、脂质体介导转染组(L2J3)和对照组,转染后24h和48h收集细胞。结果转染后24h,2个转染组CYP2J3 mRNA表达均较对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);L2J3组蛋白含量较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01),2J3组蛋白含量较L2J3组高,差异有统计学意义(P<0.05)。培养液11,12-EET含量在3组间差异无统计学意义。转染后48h2个转染组CYP2J3 mRNA表达较24h时弱,但仍较对照组高,脂质体转染组较裸质粒转染组CYP2J3 mRNA表达增强;2J3组及L2J3组蛋白含量均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01);2个转染组培养液中11,12-EET浓度较对照组高,脂质体转染组表达高于裸质粒转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论裸质粒直接转染能成功导入CYP2J3基因并表达产物。

关键词：细胞色素P450单氧化酶 CYP2J3 裸质粒基因转染环-二十碳三烯酸

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