检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2023年第3期41卷 286-293页

作者：叶井明何威刘慧媛鱼潇罗波刘美辰周必英遵义医科大学寄生虫学教研室贵州遵义563000

目的探讨猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ESA)硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)对仔猪树突状细胞(DC)活化的影响。方法体外诱导培养健康仔猪髓源DC,培养7 d后,加入终浓度为100 ng/ml的脂多糖(LPS)刺激,继续孵育2 d,分别收集培养未成熟DC(imDC)和成熟DC(... 详细信息

目的探讨猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ESA)硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)对仔猪树突状细胞(DC)活化的影响。方法体外诱导培养健康仔猪髓源DC,培养7 d后,加入终浓度为100 ng/ml的脂多糖(LPS)刺激,继续孵育2 d,分别收集培养未成熟DC(imDC)和成熟DC(mDC),光学显微镜和扫描电镜下观察其培养1~9 d的形态学变化,流式细胞术检测其表面标志物CD1和主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC⁃Ⅱ)的表达情况。另收集培养后7 d的imDC,设阴性对照组、TPx组、排泄分泌抗原(ESA)组、LPS阳性对照组,分别加入RPMI 1640培养基、TPx(50μg/ml)、ESA(50μg/ml)、LPS(100 ng/ml)刺激48 h后,流式细胞术检测DC表面标志物MHC⁃Ⅱ、CD80、CD86的表达情况;ELISA检测DC细胞培养上清中肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白细胞介素6(IL⁃6)、IL⁃10、IL⁃12的分泌水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD⁃t检验。结果光学显微镜下可见,培养第1天,imDC呈卵圆形,形态单一;随着培养时间延长,DC体积逐渐增大,出现伪足和刺突等,并从卵圆形变为不规则状。扫描电镜下可见,与imDC相比,mDC形态不规则,大致呈长梭形,从胞体辐射出众多长短不一的突起,呈树枝状分布,为典型的树突状结构。流式细胞术检测结果显示,imDC中表达CD1、MHC⁃Ⅱ的DC占比分别为(0.113±0.005)%、(0.430±0.016)%,低于mDC的(21.400±0.327)%、(21.333±0.450)%(t=130.341、92.906,均P<0.05)。TPx组表达MHC⁃Ⅱ、CD80、CD86的DC占比分别为(15.300±0.245)%、(22.900±0.374)%、(13.033±0.249)%,均低于LPS阳性对照组的(19.000±0.374)%、(31.600±0.082)%、(21.300±0.245)%(t=11.53、46.32、43.84,均P<0.05)和ESA组的(18.365±0.618)%、(40.400±0.356)%、(30.300±0.283)%](t=9.55、93.17、91.57,均P<0.05);TPx组表达MHC⁃Ⅱ的DC占比高于阴性对照组的(12.133±0.492)%(t=9.87,P<0.05)。ELISA检测结果显示,培养上清中,TPx组DC分泌IL⁃6水平为15.682±0.660,低于阴性对照组的21.041±0.901(t=6.51,P<0.05);分泌TNF⁃α、IL⁃6、IL⁃10和IL⁃12水平均低于LPS阳性对照组的169.037±7.823、42.118±1.932、34.730±1.772、52.504±2.431(t=36.79、32.09、13.09、35.05,均P<0.05);分泌IL⁃12水平低于ESA组的23.854±1.020(t=6.93,P<0.05)。结论TPx通过诱导DC表面MHC⁃Ⅱ高表达、CD80和CD86低表达,以及降低IL⁃6的分泌水平来介导免疫耐受。

关键词：猪囊尾蚴排泄分泌抗原硫氧还蛋白过氧化物酶树突状细胞

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乳酸调控巨噬细胞功能促进登革病毒2型感染

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第5期44卷 396-405页

作者：胡欢覃燕春黄贞植周璐吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室安顺550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫教研室安顺550025

目的探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages,BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法培养和诱导BALB/c小鼠骨... 详细信息

目的探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages,BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法培养和诱导BALB/c小鼠骨髓中的BMDMs,流式细胞术检测F4/80+CD11b+细胞纯度。qRT-PCR检测不同时间点DENV-2感染BMDMs中葡萄糖转运体1(glucose transporter type 1,GLUT1)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、乳酸转运体4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)的mRNA表达水平,比色法检测细胞上清液中乳酸含量。使用CCK-8法评估不同浓度乳酸对Raw264.7细胞、BMDMs及THP-1细胞活力的影响,qRT-PCR检测不同浓度乳酸对不同MOI DENV-2感染细胞中病毒E基因、CD163、TGF-β、CD86、视黄酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ)、IFN-β、干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)及ISG56的mRNA表达水平,流式细胞术检测CD86和CD206蛋白的表达。结果BMDMs纯度为(87.53±1.66)%。DENV-2(MOI=3)感染BMDMs后,GLUT1 mRNA转录水平在12 h一过性增高,在24 h降低(P<0.05),而HK2 mRNA转录水平在12、24和36 h均高于空白对照组和灭活DENV-2组(P<0.01);DENV-2(MOI=1.5)感染后24 h,MCT4 mRNA转录水平及上清液中乳酸含量均上升(P<0.05)。CCK-8结果显示当乳酸浓度为31.25 mmol/L时,上述3种细胞的活力均大于80%。qRT-PCR结果显示,在MOI=1和2时,35 mmol/L乳酸可增加BMDMs中DENV E基因mRNA的表达水平(P<0.05);在MOI=1.5时,35 mmol/L乳酸上调Raw264.7和THP-1细胞中的DENV E基因mRNA表达水平(P<0.001),以及BMDMs中CD163、TGF-β、RIG-Ⅰ、IFN-β、ISG15和ISG56的mRNA表达水平(P<0.05),下调CD86 mRNA的表达(P<0.05),细胞中CD206蛋白的表达增加(P<0.01),而CD86蛋白的表达下降(P>0.05)。结论本研究发现外源性乳酸能促进DENV-2在人源及鼠源巨噬细胞中的感染,该现象与细胞M2型极化有关。

关键词：乳酸巨噬细胞登革病毒病毒复制 M2型极化干扰素信号通路

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寄生虫感染中TGF-β/Smad信号通路参与调控宿主T细胞免疫应答的研究进展

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中华地方病学杂志 2023年第9期42卷 758-762页

作者：孙晓晴何威周必英遵义医科大学寄生虫学教研室遵义563000

寄生虫感染是全球重要的公共卫生问题,寄生虫可以通过各种方式调节和逃避宿主免疫攻击。近年来研究表明,寄生虫感染过程中,转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad信号通路可参与宿主T细胞免疫应答,诱导T细胞向调... 详细信息

寄生虫感染是全球重要的公共卫生问题,寄生虫可以通过各种方式调节和逃避宿主免疫攻击。近年来研究表明,寄生虫感染过程中,转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad信号通路可参与宿主T细胞免疫应答,诱导T细胞向调节性T细胞(regulatory cell,Treg)、辅助性T细胞(helper T cell,Th)增殖与分化,调控Treg/Th17细胞平衡,抑制Th1细胞增殖分化,在寄生虫病的发生发展及其与宿主的相互作用中起重要作用。本文就寄生虫感染过程中TGF-β/Smad信号通路参与调控T细胞免疫应答的研究进展进行综述。

关键词：寄生虫 T细胞免疫应答 TGF-β/Smad信号通路

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寄生虫感染中参与宿主巨噬细胞极化的信号通路研究进展

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中国病原生物学杂志 2025年第4期20卷 544-548,F0004页

作者：熊海婷周必英遵义医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州遵义563000

巨噬细胞是重要的固有免疫细胞和抗原提呈细胞,在机体感染与免疫中发挥着重要的作用。巨噬细胞具有可塑性和异质性,微环境的改变可使巨噬细胞发生极化,主要分为经典活化型(M1型)和替代活化型(M2型)巨噬细胞,M1型巨噬细胞可促进机体炎症... 详细信息

巨噬细胞是重要的固有免疫细胞和抗原提呈细胞,在机体感染与免疫中发挥着重要的作用。巨噬细胞具有可塑性和异质性,微环境的改变可使巨噬细胞发生极化,主要分为经典活化型(M1型)和替代活化型(M2型)巨噬细胞,M1型巨噬细胞可促进机体炎症反应,在炎症早期发挥抗感染作用;M2型巨噬细胞可抑制炎症反应,在炎症后期与组织修复相关。本文就寄生虫感染中调控宿主巨噬细胞极化相关信号通路的研究进展进行综述。

关键词：寄生虫巨噬细胞极化信号通路综述

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猪囊尾蚴排泄分泌抗原TPx蛋白的筛选验证、T细胞抗原表位预测及真核表达

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中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 174-179,184页

作者：何威李丽竹孙晓晴罗波周必英遵义医科大学寄生虫学教研室贵州遵义563000

目的在对猪囊尾蚴及其排泄分泌抗原(excretory secretory antigen, ESA)非标定量(label-free quantification, LFQ)蛋白质组学分析的基础上,筛选并验证具有调控T细胞免疫应答功能的硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase, TPx)... 详细信息

目的在对猪囊尾蚴及其排泄分泌抗原(excretory secretory antigen, ESA)非标定量(label-free quantification, LFQ)蛋白质组学分析的基础上,筛选并验证具有调控T细胞免疫应答功能的硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase, TPx)蛋白,预测TPx蛋白的亲水性和T细胞抗原表位并进行真核表达。方法对猪囊尾蚴ESA差异蛋白进行基因本体论(gene ontology, GO)富集和生物学功能注释,筛选TPx蛋白。运用平行反应监测技术(parallel reaction monitoring, PRM)验证TPx蛋白。运用Kyte&Doolittle法预测TPx蛋白的亲水性,运用Propred软件预测TPx蛋白T细胞抗原表位。采用基于PCR准确合成(PCR-based accurate synthesis, PAS)方法,全基因合成TPx抗原编码基因并克隆至pcDNA3.4载体,构建重组质粒pcDNA3.4-TPx,转染至HEK293细胞,表达和纯化TPx蛋白。结果根据GO富集和生物学功能注释,筛选出差异表达量最大的TPx蛋白。TPx蛋白经PRM验证,LFQ蛋白质组学与靶向蛋白质组学对TPx蛋白表达量的趋势一致。预测该蛋白为亲水性蛋白,且含有多个可能的优势T淋巴细胞抗原表位。重组质粒pcDNA3.4-TPx构建正确,经SDS-PAGE电泳分析和Western blot鉴定,在细胞培养上清获得相对分子质量约为26×10^(3)的TPx蛋白,且纯化后带有His标签的TPx重组蛋白能被抗His单克隆抗体识别。结论成功实现了对猪囊尾蚴ESA中TPx蛋白的筛选、验证、T细胞抗原表位预测和真核表达,且表达的TPx蛋白具有反应原性,为该蛋白的进一步研究奠定了基础。

关键词：猪囊尾蚴排泄分泌抗原硫氧还蛋白过氧化物酶抗原表位预测真核表达

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猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪T细胞免疫应答的影响

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中国病原生物学杂志 2023年第8期18卷 927-933页

作者：李丽竹何威周必英遵义医科大学寄生虫学教研室贵州遵义563000

目的观察猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪T细胞免疫应答的影响方法用LRRC15蛋白刺激健康仔猪外周血PBMC和脾脏CD4^(+)T细胞,分析T细胞免疫应答水平:①在PHA处理下,以RPMI 1640、ESA、ConA为对照组,用LRRC15蛋白刺激PBMC,流式检测C... 详细信息

目的观察猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪T细胞免疫应答的影响方法用LRRC15蛋白刺激健康仔猪外周血PBMC和脾脏CD4^(+)T细胞,分析T细胞免疫应答水平:①在PHA处理下,以RPMI 1640、ESA、ConA为对照组,用LRRC15蛋白刺激PBMC,流式检测CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞数量比例变化,以及CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)、CD8^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞表达水平;②在有和无LPS存在下,用LRRC15蛋白刺激PBMC,ELISA检测培养上清中IL-10含量;③分别于加入LRRC15蛋白后24、48、72 h检测初始CD4^(+)Th细胞分化情况。分离仔猪脾脏CD4^(+)T细胞并与未成熟髓源性DC共培养,采用ELISA方法检测加入LRRC15蛋白24、48、72 h培养上清中的IL-4、IL-5、IL-10、IL-17、IFN-γ水平。结果LRRC15蛋白刺激PBMC后,CD4^(+)T淋巴细胞数量比例显著增加(P<0.05),并诱导CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)、CD8^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg表达(均P<0.05),但不能诱导IL-10的分泌。LRRC15蛋白分别作用于CD4^(+)T细胞24、48、72 h,PBMC细胞IL-4、IL-17分泌水平显著降低(均P<0.05);LRRC15蛋白诱导24与48 h相比,PBMC细胞分泌IL-5水平升高(P<0.05);诱导72 h的IL-5水平与48 h时比较差异无统计学意义(P<0.05);LRRC15蛋白诱导IFN-γ水平升高(P<0.05),诱导24、48、72 h时的分泌水平差异无统计学意义(P>0.05);LRRC15蛋白于CD4^(+)T细胞24、48、72 h均不能诱导IL-10分泌(均P>0.05)。结论LRRC15蛋白可诱导仔猪PBMC中CD4^(+)/CD8^(+)T细胞免疫失衡,诱导Treg细胞表达,通过非依赖性IL-10途径发挥免疫抑制作用,并诱导早期Th1型免疫应答和后期Th1/Th2混合型免疫应答。

关键词：猪囊尾蚴排泄分泌抗原 LRRC15蛋白 T细胞免疫应答

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自转录活性调节区测序技术在增强子发现研究中的应用

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遗传 2024年第8期46卷 589-602页

作者：王纪龙李青战廷正广西医科大学寄生虫学教研室南宁530021 广西医科大学细胞生物学教研室南宁530021 广西高校区域性疾病基础研究重点实验室(广西医科大学) 南宁530021

自转录活性调节区测序(self-transcribing active regulatory region sequencing,STARR-seq)是一种可发现并同时验证全基因组增强子活性的高通量测序方法。其原理为:将待验证序列插入质粒载体并电转入细胞中,该序列在作为增强子提高靶... 详细信息

自转录活性调节区测序(self-transcribing active regulatory region sequencing,STARR-seq)是一种可发现并同时验证全基因组增强子活性的高通量测序方法。其原理为:将待验证序列插入质粒载体并电转入细胞中,该序列在作为增强子提高靶基因转录的同时,其本身也作为靶基因被增强转录。通过对转录组进行测序,并对比未插入片段的测序结果,可获得增强子在基因组位置及活性的信息。在传统增强子研究方法中,通过对染色质开放区域和转录活性区域进行测序以预测增强子,但只能逐一验证预测结果,无法高通量验证增强子活性。STARR-seq技术解决了上述缺陷,可在对全基因组增强子高通量挖掘的同时,对其活性进行可靠的验证。自STARR-seq技术发明以来,已被广泛运用于不同物种与细胞中的增强子发现及活性验证研究。本文对传统增强子预测方法以及STARR-seq技术的基本原理、发展历史和具体运用进行了介绍,并对其发展前景进行展望,以期为后续增强子相关领域研究人员提供参考。

关键词：自转录活性区域测序增强子转录调控单核苷酸多态性

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感染蠕虫后宿主T细胞免疫应答相关信号通路的研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第2期40卷 223-227,235页

作者：何威周必英遵义医科大学寄生虫学教研室遵义563000

蠕虫感染普遍存在于亚洲、非洲和南美洲,严重影响人类健康和经济发展。蠕虫感染可启动宿主T细胞免疫应答,影响T细胞增殖与分化。宿主感染蠕虫后,转化生长因子-β/Smad、诱导共刺激分子-诱导共刺激分子配体、程序性死亡蛋白-1/程序性死... 详细信息

蠕虫感染普遍存在于亚洲、非洲和南美洲,严重影响人类健康和经济发展。蠕虫感染可启动宿主T细胞免疫应答,影响T细胞增殖与分化。宿主感染蠕虫后,转化生长因子-β/Smad、诱导共刺激分子-诱导共刺激分子配体、程序性死亡蛋白-1/程序性死亡蛋白-1配体、Toll样受体/髓样分化因子88等信号通路可参与T细胞免疫应答,信号分子相互作用可诱导T细胞增殖与分化,进而影响宿主T细胞发挥抗蠕虫感染的作用。本文就宿主感染蠕虫后T细胞免疫应答相关信号通路的研究进展进行综述。

关键词：蠕虫细胞免疫应答信号通路

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白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的特异性细胞免疫应答对BMDM细胞中DENV-2复制的影响

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中国热带医学 2024年第8期24卷 907-913页

作者：覃燕春李莹胡欢周璐黄贞植吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳561113 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州贵阳561113

目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒(dengue virus type 2,DENV-2)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋白对免疫/未免疫小鼠脾细胞的特异性增殖反应;制备荷载蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1、rAalb_CTL1蛋白(蚊唾液C型凝集素蛋白)的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养,取细胞培养上清处理DENV-2感染的BMDM细胞,实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测DENV-2的核酸变化,分析rAlb-34k2-1蛋白诱导的特异性T淋巴细胞应答对BMDM内DENV-2复制的影响。将免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞与rAlb-34k2-1蛋白预处理的感染BMDM进行共培养,通过qRT-PCR检测培养48、72 h后DENV-2 E基因的表达,分析免疫/未免疫小鼠淋巴细胞对预处理的BMDM中DENV-2复制的影响。结果小鼠脾细胞体外特异性增殖实验显示,与未免疫组比较,rAlb-34k2-1蛋白能导致免疫小鼠脾细胞特异性增殖,刺激指数(stimulation index,SI)>2,P<0.0001;荷载rAalb_CTL1蛋白的混合淋巴细胞培养上清未影响BMDM细胞中DENV-2的复制,荷载rAlb-34k2-1蛋白的混合淋巴细胞培养上清可抑制BMDM中DENV-2复制(2^(-ΔΔCT) <0.5,P<0.05);与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞混合培养后,rAlb-34k2-1预处理的BMDM中DENV-2复制无差异。结论rAlb-34k2-1蛋白诱导的小鼠T淋巴细胞应答上清可抑制BMDM细胞中DENV-2的复制,为探究蚊唾液蛋白诱导免疫效应在蚊媒病毒致病中的作用提供前期实验基础。

关键词： rAlb-34k2-1蛋白 2型登革病毒细胞免疫应答

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Toll样受体7在抗感染免疫中的作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第1期40卷 99-103,108页

作者：尹昌竹李迪蔡娟徐红玲王灵军郑明辉刘晖遵义医科大学寄生虫学教研室遵义563000

Toll样受体7 (Toll-like receptor 7,TLR7)是一种模式识别受体,细胞静息状态下主要定位于浆细胞样树突状细胞、巨噬细胞、 T淋巴细胞、中性粒细胞等免疫细胞,以及上皮细胞、内皮细胞、角质形成细胞等非免疫细胞的内质网上。病原体感染时... 详细信息

Toll样受体7 (Toll-like receptor 7,TLR7)是一种模式识别受体,细胞静息状态下主要定位于浆细胞样树突状细胞、巨噬细胞、 T淋巴细胞、中性粒细胞等免疫细胞,以及上皮细胞、内皮细胞、角质形成细胞等非免疫细胞的内质网上。病原体感染时,TLR7从内质网转移到效应细胞的内体膜上。TLR7可直接识别单链RNA或核酸类似物等配体,与特异性招募蛋白结合并激活核因子-κB、丝裂原活化蛋白激酶和干扰素等调控因子,从而启动固有免疫应答和适应性免疫应答,参与抗感染免疫。本文就TLR7及其配体的结构与功能、 TLR7在抗感染免疫中的作用及其相关信号通路等进行综述,以期为TLR7在抗感染免疫中的作用机制研究提供科学依据。

关键词： Toll样受体7 抗感染免疫应答分子机制

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