检索结果-内蒙古大学图书馆

LILRB2过表达慢病毒载体以及THP-1-LILRB2稳转细胞株的构建

首都医科大学学报 2023年第1期44卷 93-98页

作者：白若靖吕诗韵画伟吴昊代丽丽首都医科大学附属北京佑安医院感染中心HIV/AIDS研究北京重点实验室北京100069 首都医科大学附属北京佑安医院感染中心旅行门诊北京100069

目的采用慢病毒载体(lentivirus,LV)感染并探究其在人髓系白血病单核细胞(human myeloid leukemia mononuclear cells,THP-1)中的最佳感染条件,之后病毒包装白细胞免疫球蛋白样受体B2(leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2,LILRB2)的过表达病毒载体并感染THP-1细胞,最终嘌呤霉素筛选出经mRNA和蛋白水平均成功验证LILRB2过表达效果的THP-1稳定转染细胞株,为研究LILRB2在单核细胞中的作用提供前提条件。方法LILRB2过表达慢病毒载体以pLV-SFFV-MCS-EF1-ZsGreen1-T2A-Puro为慢病毒骨架载体,通过Xba I与BamH I位点插入经聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增的LILRB2基因片段构建而成。待筛选阳性克隆与测序鉴定后,病毒感染预实验确定感染复数(multiplicity of infection,MOI);以293T细胞包装病毒,浓缩后获得的原液进行病毒滴度检测。设置过表达(LV-OE-LILRB2)组和对照(LV-OE-NC)组,用荧光显微镜观察各组病毒感染THP-1的绿色荧光情况;嘌呤霉素筛选出稳定表达LILRB2的THP-1细胞株。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和免疫印迹(Western blotting,WB)的方法分别检测THP-1细胞中LILRB2的mRNA和蛋白表达水平。结果载体中的碱基序列经PCR及测序鉴定正确,确认LILRB2过表达慢病毒载体构建完成。病毒感染预实验确定按MOI=5,感染72 h的条件感染单核细胞系THP-1。病毒滴度测定得出,LV-OE-LILRB2组的滴度为1×108 TU/mL,LV-OE-NC组的滴度为3.3×108 TU/mL。用浓度为2μg/mL嘌呤霉素筛选出的稳转细胞株经qPCR检测结果表明LV-OE-LILRB2组中LILRB2的mRNA表达水平较LV-OE-NC组显著上调(P<0.001);且WB检测表明LV-OE-LILRB2组中LILRB2的蛋白表达水平较LV-OE-NC组明显提高(P<0.05)。结论过表达LILRB2慢病毒载体成功构建并在THP-1细胞株中稳定表达,为研究LILRB2在单核细胞中的作用机制提供了细胞模型。

关键词：白细胞免疫球蛋白样受体B2 悬浮细胞慢病毒载体稳定转染株

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结核抗原特异细胞因子在hiv感染者中诊断结核病的临床价值评估

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中国防痨杂志 2025年第5期47卷 605-612页

作者：姚明旭王泽琦宋瑞雪贾红彦孙琦张蓝月杜博平张宗德汪雯吴亮潘丽萍首都医科大学附属北京胸科医院/北京市结核病胸部肿瘤研究所分子生物学实验室/耐药结核病研究北京市重点实验室北京101149 首都医科大学附属北京佑安医院感染中心北京100069 首都医科大学附属北京地坛医院感染性疾病诊疗中心北京100015

目的:评估hiv感染者中应用结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)抗原特异细胞因子和趋化因子诊断结核病的临床价值。方法:前瞻性纳入2021年12月至2024年6月在首都医科大学附属北京地坛医院、首都医科大学附属北京佑安医院就诊... 详细信息

目的:评估hiv感染者中应用结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)抗原特异细胞因子和趋化因子诊断结核病的临床价值。方法:前瞻性纳入2021年12月至2024年6月在首都医科大学附属北京地坛医院、首都医科大学附属北京佑安医院就诊的hiv感染者132例,所有患者均采集外周血12 ml,完成结核感染T细胞检测,并收集MTB抗原刺激和未刺激的全血,在全自动细胞提取仪完成RNA提取,采用SYBG引物法完成白细胞介素-2(IL-2)、IL-5、IL-18、IL-24、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、单核细胞趋化蛋白-2(MCP-2)、单核细胞趋化蛋白-3(MCP-3)、趋化因子CXC配体9(CXCL9)、趋化因子CXC配体10(CXCL10)、CC基序趋化因子配体19(CCL19)、巨噬细胞集落刺激因子(CSF-1)和γ-干扰素(IFNG)等基因的qPCR检测,分析上述因子在结核组和非结核组间的表达差异,采用Lasso回归模型筛选特征性指标,并绘制受试者工作特征曲线(receiver operating curve,ROC),评价上述因子及组合在hiv感染者中诊断结核病的临床价值。结果:根据研究对象临床诊断信息,剔除诊断不明者35例,最终97例纳入分析,其中,结核病患者44例,非结核病患者53例。结核病组MTB抗原特异的IL-18和IFNG的ΔΔCt值[中位数(四分位数)]分别为0.5601(-0.0207,1.2880)和1.0130(0.0284,3.9950),与非结核病组[分别为0.0364(-0.6420,0.7438)和0.3727(-0.5992,1.2460)]相比,均明显上调,差异均有统计学意义(Z值分别为-2.284和-1.989,P值分别为0.018和0.028);而结核病组MTB抗原特异的MCP-1、MCP-2、CXCL9、CXCL10的ΔΔCt值[中位数(四分位数)]分别为-1.1660(-1.8920,-0.5699)、-1.4640(-3.5530,0.5763)、-1.7680(-6.3950,-0.2807)、-1.8260(-4.6000,-0.0814),与非结核病组[分别为-0.5803(-1.0040,0.1794)、-0.2367(-1.3010,0.7079)、0.2730(-1.2750,1.8360)、-0.2505(-0.6528,0.9105)]相比,均明显下调,差异均有统计学意义(Z值分别为3.162、2.529、3.745、3.743,P值分别为0.003、0.014、0.001、<0.001)。ROC分析显示,IL-18、MCP-1、MCP-2、CXCL9、CXCL10、IFNG的曲线下面积范围为0.632~0.724,基于Lasso分析获得的IL18、MCP-2、CXCL10联合检测的曲线下面积为0.797,均高于任一单一指标。结论:IL18、MCP-2和CXCL10联合检测在hiv感染者中筛查结核病患者具有一定的潜力。

关键词：分枝杆菌,结核 hiv 感染细胞因子类诊断,鉴别

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CX3CL1/CX3CR1轴在hiv感染者动脉粥样硬化性心脏病中的作用

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中国艾滋病性病 2023年第5期29卷 608-611页

作者：吴亚鑫张彤李珍黄晓婕首都医科大学附属北京佑安医院感染性疾病临床研究中心艾滋病研究北京市重点实验室北京100069

动脉粥样硬化性心脏病目前是hiv/aids患者死亡的主要原因之一,也是hiv/aids患者慢病管理的重要一环。然而,hiv/aids患者动脉粥样硬化性心脏病的发生机制仍不完全清楚。研究表明,慢性持续性炎症是hiv/aids患者心血管疾病发生的主要诱因。... 详细信息

动脉粥样硬化性心脏病目前是hiv/aids患者死亡的主要原因之一,也是hiv/aids患者慢病管理的重要一环。然而,hiv/aids患者动脉粥样硬化性心脏病的发生机制仍不完全清楚。研究表明,慢性持续性炎症是hiv/aids患者心血管疾病发生的主要诱因。CX3CL1/CX3CR1是重要的炎症性趋化因子,hiv/aids患者中CX3CL1/CX3CR1的表达上调,可通过细胞趋化作用、炎性反应等参与动脉粥样硬化(AS)的形成。因此,了解CX3CL1/CX3CR1在hiv/aids患者动脉粥样硬化过程中的作用机制有助于研发新的干预措施,延缓甚至预防hiv/aids患者动脉粥样硬化性心脏病的发生发展。本文将从CX3CL1/CX3CR1与动脉粥样硬化的关系,CX3CL1/CX3CR1在hiv/aids患者动脉粥样硬化性心脏病中的作用机制等方面进行综述。

关键词： CX3CL1/CX3CR1 艾滋病病毒感染者/艾滋病患者动脉粥样硬化信号轴

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舒肝宁注射液对于氯丙嗪引起的新型组织工程肝构建的胆汁淤积型药物性肝损伤模型的影响

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临床肝胆病杂志 2022年第3期38卷 587-593页

作者：黄龙陈煜吴桥段钟平首都医科大学附属北京佑安医院肝病中心四科北京100069 首都医科大学附属北京佑安医院肝衰竭与人工肝治疗研究北京市重点实验室北京100069 首都医科大学附属北京天坛医院感染中心北京100070

目的研究舒肝宁注射液(SGN)减轻药物引起的胆汁淤积症以及可能涉及的机制。方法将Sprague-Dawley大鼠肝脏去细胞化制为肝脏胶原支架,用人HepG2细胞对支架再细胞化,从而获得组织工程肝(正常对照组),加入10μmol/L浓度的氯丙嗪(CPZ)与胆... 详细信息

目的研究舒肝宁注射液(SGN)减轻药物引起的胆汁淤积症以及可能涉及的机制。方法将Sprague-Dawley大鼠肝脏去细胞化制为肝脏胶原支架,用人HepG2细胞对支架再细胞化,从而获得组织工程肝(正常对照组),加入10μmol/L浓度的氯丙嗪(CPZ)与胆汁酸盐混合物灌注组织工程肝建立药物性胆汁淤积模型(CPZ损伤组),该模型进一步用舒肝宁注射液(10^(3)倍稀释)处理后为损伤保护组(CPZ+SGN)。随后检测不同组别的肝细胞损伤标志物(ALT、AST、LDH、ALP)、抗氧化及氧化应激标志物(GSH、MDA、SOD、ROS),比较正常组、CPZ组和SGN组肝脏胆汁酸盐代谢相关酶类mRNA以及Western Blot表达水平;比较正常组、CPZ组和SGN组肝脏胆汁淤积相关酶类mRNA以及Western blot表达水平。并行HE染色评估肝脏病理学。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果CPZ+SGN组ALT、AST、LDH、ALP肝细胞损伤标记指标较CPZ损伤组显著降低(P值均<0.0001),CPZ+SGN组GSH、SOD氧化应激标志物较CPZ组升高(P值分别为<0.0001、<0.001),MDA和ROS指标较CPZ组降低(P值分别为<0.0001、<0.001)。CPZ+SGN组较CPZ组肝细胞的胆固醇7α-羟化酶、胆固醇12α羟化酶的mRNA表达明显降低(P值均<0.001),法尼醇X受体、小异二聚体伴侣、胆盐输出泵及和多药耐药相关蛋白2的mRNA表达水平显著升高(P值分别为<0.0001、<0.01、<0.0001、<0.0001)。HE染色结果显示CPZ+SGN组肝细胞的损伤明显减少,细胞的数量相对于损伤组有明显的提高。结论SGN可以减轻CPZ引起的药物性胆汁淤积肝损伤,其主要保护机制是通过激活肝细胞的法尼醇X受体,增加小异二聚体伴侣表达发挥调控胆汁酸盐平衡的保护作用,同时抑制胆固醇7α-羟化酶和胆固醇12α羟化酶等减少疏水性胆汁酸合成,上调胆盐输出泵、多药耐药相关蛋白2的表达促进胆汁酸盐的排出。

关键词：化学性与药物性肝损伤胆汁淤积舒肝宁注射液大鼠,Sprague-Dawley

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γδT细胞在人类免疫缺陷病毒感染及治疗中的研究进展

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中华实验和临床病毒学杂志 2022年第3期36卷 361-365页

作者：白若靖吕诗韵代丽丽吴昊李珍首都医科大学附属北京佑安医院感染中心艾滋病研究北京市重点实验室北京100069 首都医科大学附属北京佑安医院感染中心旅行门诊北京100069

γδT细胞是一类独特的天然免疫细胞,识别抗原无主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)限制性,在抗感染免疫中起重要作用,是机体维持免疫稳态的重要防线。人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,hiv)感... 详细信息

γδT细胞是一类独特的天然免疫细胞,识别抗原无主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)限制性,在抗感染免疫中起重要作用,是机体维持免疫稳态的重要防线。人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,hiv)感染打破了γδT细胞亚群间的平衡,长期抗反转录病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)后γδT细胞的数量和功能并不能完全恢复。γδT细胞数量和功能的改变与hiv感染者疾病的进展、ART后免疫重建密切相关。因此,本文将从γδT细胞的表型功能、γδT细胞在hiv感染中的作用及其基于γδT细胞的免疫治疗三个方面加以综述。

关键词： γδT细胞 hiv 免疫治疗

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肝衰竭患者能量代谢与血清甲状腺激素水平的相关性及其对预后的影响

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临床肝胆病杂志 2023年第1期39卷 137-141页

作者：刘兴孔明华鑫杨银川徐曼曼毕研贞李璐段钟平陈煜临沂市人民医院感染科山东临沂276000 首都医科大学附属北京佑安医院肝病中心四科北京100069 首都医科大学附属北京佑安医院营养科北京100069 北京市肝衰竭与人工肝治疗研究重点实验室北京100069 青岛市立医院感染科山东青岛266011

目的探讨肝衰竭患者终末期肝病模型(MELD)评分、能量代谢与血清甲状腺激素水平的相关性以及对病情及预后的预测价值。方法选取2016年11月—2019年4月在首都医科大学附属北京佑安医院肝病中心四科住院的60例肝衰竭患者并随访分为死亡组(2... 详细信息

目的探讨肝衰竭患者终末期肝病模型(MELD)评分、能量代谢与血清甲状腺激素水平的相关性以及对病情及预后的预测价值。方法选取2016年11月—2019年4月在首都医科大学附属北京佑安医院肝病中心四科住院的60例肝衰竭患者并随访分为死亡组(23例)和存活组(37例),检测能量代谢及甲状腺功能等指标进行比较分析。两组连续变量的比较,符合正态分布的采用独立样本t检验,非正态分布的采用Mann-Whitney U检验;分类变量两组间比较采用χ^(2)检验。采用Spearman相关系数评价各指标的相关性。受试者工作特征(ROC)曲线分析血清总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)水平预测肝衰竭患者预后的最佳分界点。结果所有肝衰竭患者低TT3和低FT3的发生率为分别为78.2%和69.1%,死亡组和存活组的低TT3发生率分别为95.2%和67.6%,低FT3的发生率分别为90.5%和55.9%,差异均具有统计学意义(P值均<0.05)。死亡组的MELD评分显著高于存活组[26.0(21.0~29.0)vs 21.0(19.0~24.0),Z=-3.369,P=0.001],而血清TT3、FT3水平显著低于存活组[0.69(0.62~0.73)vs 0.83(0.69~0.94)、2.17(1.99~2.31)vs 2.54(2.12~2.86),Z值分别为-2.884、-2.876,P值均<0.01]。MELD评分与血清TT3、FT3、促甲状腺激素(TSH)水平及呼吸商(RQ)呈负相关(r值分别为-0.487、-0.329、-0.422、-0.350,P值均<0.01),RQ与血清TT3、FT3水平呈正相关(r值分别为0.271、0.265,P值均<0.05)。通过血清TT3、FT3水平预测肝衰竭患者生存预后的最佳分界点分别为0.75 nmol/L、2.37 pmol/L,其敏感度分别为67.6%、64.7%,特异度分别为90.5%、81.0%。结论肝衰竭患者可出现异常能量代谢状态导致呼吸商降低,并可出现甲状腺激素水平的异常,对评估肝衰竭患者病情严重程度及预后具有潜在的临床应用价值。

关键词：肝功能衰竭能量代谢甲状腺素预后

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肝纤维化通过抑制坏死性凋亡抵抗D-氨基半乳糖/脂多糖诱导的致死性损伤

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中华肝脏病杂志 2022年第4期30卷 413-418页

作者：李璐白丽郑素军陈煜段钟平北京大学第三医院感染疾病科北京100191 首都医科大学附属北京佑安医院肝病中心四科肝衰竭与人工肝治疗研究北京市重点实验室北京100069 首都医科大学附属北京佑安医院肝病中心一科北京100069

目的以坏死性凋亡为切入点,探讨肝纤维化抵抗D-氨基半乳糖/脂多糖(D-GalN/LPS)诱导致死性损伤的新机制。方法建立四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化小鼠模型,于纤维化6周时以致死剂量的D-GalN/LPS进行攻击,以同样处理的正常小鼠作为对照。... 详细信息

目的以坏死性凋亡为切入点,探讨肝纤维化抵抗D-氨基半乳糖/脂多糖(D-GalN/LPS)诱导致死性损伤的新机制。方法建立四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化小鼠模型,于纤维化6周时以致死剂量的D-GalN/LPS进行攻击,以同样处理的正常小鼠作为对照。即实验共分为4组:对照组(Control)、急性损伤(D-GalN/LPS)组、肝纤维化(Fib)组、肝纤维化+急性攻击(Fib+D-GalN/LPS)组。定量PCR和免疫荧光法分析坏死性凋亡(necroptosis)关键信号分子受体相互作用蛋白(RIPK)1、RIPK3、混合谱系激酶结构域蛋白(MLKL)和/或P-MLKL在各组中的表达。给予正常小鼠以靶向necroptosis关键信号分子的抑制剂,再给予急性攻击,根据转氨酶水平及肝组织学的变化来评估抑制necroptosis对D-GalN/LPS触发急性肝损害的影响。建立肝纤维化自发消融模型,再给予急性攻击,免疫组织化学法分析和比较各组小鼠肝组织中necroptosis关键信号分子的表达。组间差异的比较采用t检验或方差分析。结果定量PCR和免疫荧光检测结果显示,D-GalN/LPS攻击触发了RIPK1、RIPK3、MLKL和/或P-MLKL的明显上调。抑制necroptosis信号的关键分子可明显减轻D-GalN/LPS诱导的肝损害,表现为血清丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶水平的显著降低以及肝组织学的明显改善。纤维化肝脏中necroptosis信号分子的表达明显受到抑制。肝纤维化对D-GalN/LPS触发necroptosis的抑制随着纤维消融而逐渐削弱。结论肝纤维化可能通过抑制D-GalN/LPS触发的necroptosis而保护小鼠抵抗急性致死性损伤的攻击。

关键词：肝纤维化损伤抵抗坏死性凋亡发病机制

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双氢青蒿素体外抑制免疫恢复不理想者T细胞免疫活化

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中国艾滋病性病 2022年第7期28卷 769-774页

作者：李珍张洋王蕊吴昊张彤首都医科大学附属北京佑安医院感染性疾病临床研究中心艾滋病研究北京市重点实验室北京100069

目的阐明双氢青蒿素(DHA)对免疫恢复不理想者T细胞免疫活化、耗竭、增殖和分化的影响。方法入组免疫恢复不理想患者(n=17),分离外周血单个核细胞(PBMCs),体外用不同浓度DHA(1000μM、500μM、100μM和0μM)处理细胞,培养48 h后,流式细... 详细信息

目的阐明双氢青蒿素(DHA)对免疫恢复不理想者T细胞免疫活化、耗竭、增殖和分化的影响。方法入组免疫恢复不理想患者(n=17),分离外周血单个核细胞(PBMCs),体外用不同浓度DHA(1000μM、500μM、100μM和0μM)处理细胞,培养48 h后,流式细胞术检测T细胞免疫活化、耗竭、增殖和分化。结果与未处理组(DHA0μM)相比较,500μM和1000μM DHA处理后CD38-HLA-DR^(+)CD4^(+)T细胞和CD38^(+)HLA-DR^(+)CD8^(+)T细胞的比例降低(P<0.05)。此外,500μM DHA处理后,PD-1^(+)CD4^(+)T细胞和PD-1^(+)CD8^(+)T细胞的比例较未处理组降低(P<0.05)。不同浓度DHA处理后,Ki67^(+)PD-1^(+)CD4^(+)T细胞和Ki67^(+)PD-1^(+)CD8^(+)T细胞的比例较未处理组显著降低。然而,DHA处理并不影响CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞的分化。结论DHA在体外可抑制免疫恢复不理想者T细胞免疫活化、耗竭和增殖。

关键词：双氢青蒿素免疫恢复不理想免疫活化 T细胞抗反转录病毒治疗

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hiv-1感染者外周血Tfh分泌CXCL13水平与浆母细胞分化的相关性分析

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中国艾滋病性病 2022年第4期28卷 392-396页

作者：王蕊李珍计云霞张欣粟斌张彤陆小凡首都医科大学附属北京佑安医院感染性疾病临床研究中心艾滋病研究北京市重点实验室北京100069

目的了解hiv-1不同感染阶段外周血滤泡辅助性T细胞(cTfh)分泌CXCL13的水平及与浆母细胞分化的相关性。方法选取25名hiv-1感染者和21名hiv-1阴性的健康对照者(HC),分别采用该25名感染者急性期感染(AHI)阶段和慢性期感染(CHI)阶段以及HC... 详细信息

目的了解hiv-1不同感染阶段外周血滤泡辅助性T细胞(cTfh)分泌CXCL13的水平及与浆母细胞分化的相关性。方法选取25名hiv-1感染者和21名hiv-1阴性的健康对照者(HC),分别采用该25名感染者急性期感染(AHI)阶段和慢性期感染(CHI)阶段以及HC的外周血单个核细胞,利用流式染色的方法,检测CXCL13+cTfh及浆母细胞(PB)的比例。同时,用ELISA方法检测AHI、CHI和HC血浆中CXCL13浓度。结果AHI和CHI阶段CXCL13+cTfh[AHI ***:(7.71±3.53)vs.(2.08±1.14),P<0.001;CHI ***:(8.52±3.74)vs.(2.08±1.14),P<0.001]和PB[AHI ***:(2.88±2.37)vs.(0.52±0.17),P<0.001;CHI ***:(1.90±1.49)vs.(0.52±0.17),P<0.001)]的比例均显著高于HC。CHI阶段,CXCL13+cTfh比例均与血浆CXCL13浓度(r=0.44,P=0.039)和PB比例(r=0.44,P=0.034)呈正相关。结论CHI阶段CXCL13+cTfh比例的升高,可能是导致PB过度分化的因素。

关键词： 1型艾滋病病毒滤泡辅助性T细胞浆母细胞 CXCL13

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纳米粒子技术应用于hiv诊治的新进展

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中国艾滋病性病 2022年第1期28卷 111-114页

作者：常琳琳黄晓婕吴昊高艳青首都医科大学附属北京佑安医院皮肤病与性病科国家皮肤与免疫疾病临床医学研究中心分中心建设单位北京100069 首都医科大学附属北京佑安医院感染与免疫医学科北京100069 首都医科大学附属北京佑安医院艾滋病研究北京市重点实验室北京100069

随着ART的广泛应用,艾滋病已经成为一种慢性病。然而,现仍未研制出有效的预防性疫苗、检测也存在较长窗口期、现有技术并不能彻底清除hiv感染者体内病毒贮存库,感染者需要终生服药以及药物不良反应等一系列问题亟待解决。纳米粒子具有... 详细信息

随着ART的广泛应用,艾滋病已经成为一种慢性病。然而,现仍未研制出有效的预防性疫苗、检测也存在较长窗口期、现有技术并不能彻底清除hiv感染者体内病毒贮存库,感染者需要终生服药以及药物不良反应等一系列问题亟待解决。纳米粒子具有剂量低、不良反应小、一致性强、低成本、生物利用度高、靶向特异性强、诊断灵敏度高等优点,未来有望成为攻克艾滋病的一种方法。本文就纳米材料与纳米相关技术应用在艾滋病诊断及治疗方面的最新进展做一综述,为艾滋病诊治研究提供新的解决思路。

关键词：艾滋病病毒纳米颗粒诊断抗病毒治疗

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