目的利用耳蜗基底膜离体培养技术建立庆大霉素(gentamicin,GM)损伤模型,研究胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对小鼠耳蜗毛细胞(hair cell,HC)凋亡的影响及可能机制。方法取新生小鼠耳蜗基底膜,在分别含有预先制备的培养液(A组),含有GM0.5mmol/L(B组),含有GM0.5mmol/L和IGF-11ng/ml(C组),GM0.5mmol/L和IGF-110ng/ml(D组),GM0.5mmol/L和IGF-150ng/ml(E组),GM0.5mmol/L和IGF-1100ng/ml(F组)的培养液中离体培养后制作耳蜗铺片。利用DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)结合活性半胱氨酸蛋白酶-3抗体为标记物多重荧光免疫组织化学方法,激光共聚焦显微镜下观察各组耳蜗HC的凋亡情况。结果耳蜗铺片观察显示A组各转及各组顶转未发现TUNEL染色阳性的凋亡HC。C、D、E、F各组耳蜗底转和中转HC的TUNEL染色阳性HC数较B组减少(P﹤0.05),其中以D组减少最为明显。活性半胱氨酸蛋白酶-3抗体标记和TUNEL染色阳性的耳蜗HC凋亡的部位不完全重合。结论GM可诱导离体培养的小鼠耳蜗HC凋亡的发生。应用IGF-1能够通过抑制其凋亡作用,在特定浓度达到最佳效果。半胱氨酸蛋白酶-3活化参与耳蜗HC凋亡过程。
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