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中国实验血液学杂志 2013年第3期21卷 746-753页

作者：辛毅刘小希赵伟刘飒李娜许秀芳黄益民罗毅张宏家首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029

本研究探讨一种高效、稳定的从兔骨髓中同时分离培养间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)和内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPC)的方法并观察其生物学特性。抽取兔骨髓,应用密度梯度分离单个核细胞,采用差速贴壁经纤连... 详细信息

本研究探讨一种高效、稳定的从兔骨髓中同时分离培养间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)和内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPC)的方法并观察其生物学特性。抽取兔骨髓,应用密度梯度分离单个核细胞,采用差速贴壁经纤连蛋白包被并结合EGM-2MV培养基分别扩增MSC和EPC。用台盼蓝法测定细胞传代成活率,通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测MSC和EPC的增殖能力及诱导分化成骨细胞、成脂肪细胞能力,并结合流式细胞术(FCM)检测MSC免疫原型以鉴定MSC;细胞吞噬功能特异性地摄取Dil-ac-LDL及FITC-UEA-1,并结合CD133、VEGFR2/KDR、CD34免疫荧光鉴定EPC,并计算其纯度。结果表明,经密度梯度分离单个核细胞,在早期贴壁细胞24 h换液时即可见明显集落形成,8 d后达80%融合,细胞呈均匀一致的长梭形排列;2次贴壁细胞经EGM-2MV培养基培养,第3天开始伸展,约8 d可融合近80%,细胞呈多角形,出现条索状结构;2种细胞台盼蓝法测定细胞传代成活率均在90%以上,传至第2代后,生长曲线均近似"S"形;MTT法检测显示,细胞生长d 3至d 5时光密度值变化较明显;MSC G0-G1期为(93.32±1.65)%、EPC G0-G1为(93.05±1.95)%,2种细胞DNA周期无明显差异;早期贴壁细胞FCM检测CD90、CD44阳性率为(99.7±1.12)%、(99.1±2.33)%;CD14、CD45、CD79a阳性率分别为(4.8±0.38)%、(6.8±0.49)%及(0.4±0.08)%,经体外诱导能够向成骨细胞及脂肪细胞分化,鉴定为MSC;2次贴壁细胞传至第2代经Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色阳性率(82.1±3.4)%,CD133、VEGFR2/KDR、CD34免疫荧光染色阳性率分别为(74.2±3.2)%、(64.7±4.3)%及(43.5±1.5)%,鉴定为EPC。结论:应用密度梯度分离法结合差速贴壁筛选法可培养出高纯度的MSC,2次贴壁细胞经纤连蛋白预包被并结合EGM-2MV培养基体外诱导可培养出增殖能力较强的EPC,为组织工程学研究提供种子细胞。

关键词：差速贴壁法骨髓间充质干细胞内皮祖细胞细胞培养生物学特性

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人脐带间充质干细胞的原代培养及多向分化潜能的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第10期29卷 1087-1093页

作者：辛毅李娜黄益民崔巍刘飒许秀芳张兆光首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029 北京市心肺血管疾病研究所实验中心北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院心外科北京100029

目的探讨人脐带间充质干细胞（hUCMSC）的体外分离培养鉴定方法及多向分化潜能。方法应用Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法及组织贴块培养法对hUCMSC进行体外培养。在倒置显微镜下观察不同方法获得的hUCMSC的生长特点；台盼蓝法测定细... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞（hUCMSC）的体外分离培养鉴定方法及多向分化潜能。方法应用Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法及组织贴块培养法对hUCMSC进行体外培养。在倒置显微镜下观察不同方法获得的hUCMSC的生长特点；台盼蓝法测定细胞传代成活率；采用生长曲线、MTT法测定hUCMSC的增殖、流式细胞术（FCM）测定细胞周期变化及细胞免疫表型变化；采用相应试剂盒鉴定其向成脂细胞、成骨细胞的分化，采用免疫荧光细胞化学技术检测向成心肌样细胞的分化、采用荧光标记技术检测hUCMSC向血管内皮细胞的分化。结果酶消化法分离培养的细胞1d后，在倒置相差显微镜下可见细胞贴壁呈圆形生长，4d后生长迅速呈长梭形，7d后由中心向周围生长且增殖明显，10d后达80％融合即可传代；贴块法培养的细胞7d后，可见细胞从组织块边缘长出，10d后细胞数量逐渐增多，16d后细胞生长迅速呈单层致密排列即可传代，细胞传代成活率均为96％以上。2种方法获得的第3代细胞生长曲线近似“S”形、MTr法显示3～5d细胞增殖较明显；酶消化法培养的细胞G0／G1期和s＋G2／M期所占比例分别为88．78％和10．21％，组织贴块法培养的细胞G0／G1期和S＋G2／M期所占比例分别为84．82％和13．87％，细胞DNA周期无明显差异；2种方法获得的细胞经FCM检测CD90、CD105、CD73阳性率均为99％以上为高表达；CD45、CD34、CD14、CD11b、CD79a、CD19、HLA—DR低表达；2种方法获得的细胞在体外诱导都能向成骨细胞、成脂细胞、成心肌样细胞及血管内皮细胞分化，其诱导阳性率均为90％以上。结论酶消化法和贴块法均可高效获得hUCMSC，与贴块法培养相比较，酶消化法能更有效的获得扩增迅速、细胞成分单一的细胞。

关键词：人脐带间充质干细胞原代培养诱导分化

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小鼠心肌微血管内皮细胞的原代培养及生物学特性

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中国病理生理杂志 2013年第3期29卷 565-570页

作者：辛毅许秀芳黄益民张颖李温斌李娜首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029

目的:探讨一种高效、稳定的从小鼠心肌组织中分离培养心肌微血管内皮细胞的方法并观察细胞的生物学特性。方法:以多聚赖氨酸对培养皿作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁分离法,结合内皮细胞专用培养基,分离培养微血管内皮细胞并进... 详细信息

目的:探讨一种高效、稳定的从小鼠心肌组织中分离培养心肌微血管内皮细胞的方法并观察细胞的生物学特性。方法:以多聚赖氨酸对培养皿作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁分离法,结合内皮细胞专用培养基,分离培养微血管内皮细胞并进行扩增。利用倒置显微镜观察细胞生长情况;台盼蓝法、绘制生长曲线和MTT法分别测定心肌微血管内皮细胞传代成活率、不同代生长及增殖特征;以DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1荧光双标,结合CD31、vWF和CD34免疫荧光鉴定细胞表面特异性抗原;体外血管形成实验检测心肌微血管内皮细胞的功能。结果:酶消化、差速贴壁法分离培养2 d后,细胞呈散在的、小簇状聚集性生长,4～5 d迅速生长呈单层排列,细胞为梭形、三角形或多角形,7～8 d后呈铺路石样即可传代;传代细胞经台盼蓝法检测成活率均为95%以上;第1、3代细胞生长曲线近似"S"形,MTT法显示第1、3代细胞在第2～4 d吸光度变化较明显(P<0.05);随传代次数的增加,第5代细胞生长曲线近似平缓,吸光度无明显变化,细胞逐渐衰老;DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1荧光双标阳性率为(89.2±3.5)%,相关特异性抗原CD31、vWF和CD34免疫荧光鉴定阳性率为(56.7±3.7)%、(78.5±2.6)%和(67.8±4.2)%;体外血管形成实验显示,6～12 h后出现明显的管腔结构。结论:以多聚赖氨酸作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁法并结合内皮细胞专用培养基,可获得纯度较高的小鼠心肌微血管内皮细胞,为心脏疾病的研究提供种子细胞。

关键词：心肌微血管内皮细胞原代细胞培养生物学特性小鼠

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环孢霉素A对大鼠心脏移植模型淋巴细胞分子表达与移植心脏病理学改变时相关系的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2013年第2期34卷 161-169页

作者：许秀芳辛毅李娜张颖黄益民顾云周玉杰张兆光首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院外科北京100029

【目的】通过环孢素A(CsA)干预的异体异位心脏移植动物模型的研究,对移植术后淋巴细胞分子表达、心肌组织淋巴细胞浸润能力和移植心脏病理改变时相进行比较,探讨环孢素A对其影响。【方法】SD大鼠为移植心脏供体,Wistar大鼠为移植心脏受... 详细信息

【目的】通过环孢素A(CsA)干预的异体异位心脏移植动物模型的研究,对移植术后淋巴细胞分子表达、心肌组织淋巴细胞浸润能力和移植心脏病理改变时相进行比较,探讨环孢素A对其影响。【方法】SD大鼠为移植心脏供体,Wistar大鼠为移植心脏受体。实验分为心脏移植对照组和环孢素A干预+心脏移植组实验组两组。在移植前及移植后24 h、3 d、7d、10 d和12 d时间点免疫荧光测定淋巴细胞在心肌组织中浸润能力、实时定量PCR检测淋巴细胞编码基因CD4、CD8和酪氨酸激酶P59 mRNA表达水平、心肌组织病理学检查判断排斥反应程度。【结果】①心脏移植后24 h内,外周血淋巴细胞基因的转录与表达为一过性降低;②心肌组织CD4+、CD8+淋巴细胞浸润和Ⅱ级排斥反应病理改变,主要出现于心脏移植后的d3～d7;③环孢素A不能有效抑制移植后3 d内心肌组织CD4+、CD8+淋巴细胞浸润程度的快速增加,但可明显降低移植后d3～d7的心肌组织CD4+淋巴细胞的浸润程度;④环孢素A不能完全阻断淋巴细胞P59基因的表达;⑤环孢素A不能有效抑制淋巴细胞CD4基因正调表达,但可抑制CD8基因的转录。【结论】环孢素A的移植排斥反应的抑制作用在大鼠移植后d3～d7。淋巴细胞基因表达、心肌组织淋巴细胞浸润与排斥反应病理改变有关。这将有助于同种移植病人环孢素A的临床应用。

关键词：大鼠心脏移植模型心脏外科心肌组织淋巴细胞浸润病理学外周血淋巴细胞基因表达时相免疫学

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Akt1在高血压心肌纤维化中的作用及其机制

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中华高血压杂志 2013年第3期21卷 265-271页

作者：苗艳菊杨敏郑娇王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院心血管生物学研究室北京市心肺血管疾病研究所省部共建心血管重塑相关疾病教育部重点实验室

目的观察Akt1在高血压心肌纤维化中的作用,并探讨其对心脏成纤维细胞转分化的影响。方法 34只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组和高血压组,采用植入式胶囊渗透压泵分别灌注生理盐水和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),于第7天时采用鼠尾套法检... 详细信息

目的观察Akt1在高血压心肌纤维化中的作用,并探讨其对心脏成纤维细胞转分化的影响。方法 34只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组和高血压组,采用植入式胶囊渗透压泵分别灌注生理盐水和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),于第7天时采用鼠尾套法检测小鼠尾动脉血压、超声检测心脏结构及功能;处死并取其心脏进行组织切片,行Masson染色观察胶原沉积;流式细胞学方法检测心脏中巨噬细胞浸润;免疫组织化学染色检测炎症细胞因子[诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]和促纤维化因子[转化生长因子β(TGF-β)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]表达;实时定量PCR检测Akt1及α-SMAmRNA水平;Westernblot检测α-SMA蛋白表达以及Akt1蛋白表达和激活。体外分离原代骨髓巨噬细胞进行Akt1siRNA及ControlsiRNA干扰后与乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)共培养,观察促纤维化因子mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,高血压组在AngⅡ灌注7d时血压升高[(147.1±1.0)比(104.6±2.1)mmHg,P<0.01],射血分数和短轴缩短率均升高(P<0.05);胶原沉积明显增加[(2.06±0.18)%比(0.35±0.04)%,P<0.01];心脏组织中巨噬细胞浸润增加[(1.75±0.15)%比(0.44±0.07)%,P<0.01],促炎因子(iNOS、IL-1β、TNF-α)及促纤维化因子(TGF-β、α-SMA)表达升高(均P<0.01)。高血压组Akt1及α-SMAmRNA表达上调(P<0.01),Akt1磷酸化水平上调(P<0.01),同时α-SMA蛋白表达明显上调(P<0.05)。体外实验,与单独CFs组相比,CFs与转染ControlsiRNA巨噬细胞共培养组促纤维化因子(α-SMA、TGF-β、Ⅰ型胶原)mRNA表达升高(P<0.05或P<0.01),α-SMA蛋白表达明显上调(P<0.01),而CFs与转染Akt1siRNA巨噬细胞共培养组上述促纤维化因子mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01),α-SMA蛋白表达下降(P<0.05)。结论在高血压心脏纤维化疾病早期,心脏组织Akt1活性增加,可能通过促进炎症反应,介导巨噬细胞作用下的成纤维细胞转分化,进而促进高血压导致的心肌纤维化。

关键词：高血压心肌纤维化炎症反应 Akt1 血管紧张素Ⅱ

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不同剂量人脐带间充质干细胞异种移植对大鼠血液学及肝肾功能影响的研究

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中国医药 2013年第6期8卷 805-808页

作者：李娜辛毅张颖林筝孔晴宇周玉杰袁慧刘荣凤马雪莲黄益民张兆光首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所细胞与分子生物学研究室 100029 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心外科 100029 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心内科 100029 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所检验科 100029

目的观察不同剂量的人脐带胶样组织间充质干细胞（hUMSCs）经静脉移植人大鼠体内对血常规及肝肾功能等指标的影响。方法①体外培养人脐带间充质干细胞；利用流式细胞仪鉴定第4代***表面抗原的表达；标准试剂盒鉴定第4代hUMSCs向脂肪细... 详细信息

目的观察不同剂量的人脐带胶样组织间充质干细胞（hUMSCs）经静脉移植人大鼠体内对血常规及肝肾功能等指标的影响。方法①体外培养人脐带间充质干细胞；利用流式细胞仪鉴定第4代***表面抗原的表达；标准试剂盒鉴定第4代hUMSCs向脂肪细胞和成骨细胞分化的潜能；②182～203g的50只SD大鼠随机分为5组：空白对照组；盐水组；3．5×10^7／kg干细胞移植为干细胞I组；3．5×10。／kg干细胞移植为干细胞Ⅱ组；3．5X10’／kg干细胞移植为干细胞Ⅲ组；注射后第11天，腹主动脉取血，监测和比较血常规和生化指标，分析比较各项指标的变化和差异。结果①第4代hUMSCs特异性表面抗原CD73、CD90和CD105表达强阳性，能分成脂细胞和成骨细胞，比例分别为98．4％和95．7％；②注射干细胞后实验动物全部存活，第11天时实验组24项血常规指标与空白对照组相比差异无统计学意义；③干细胞组血糖较空白对照组明显降低[（8．4±1．6），（7．7±1．6），（7．1±1．6）mmol／L比（9．6±4．9）mmol／L]；干细胞组糖化血清白蛋白较空白对照组明显降低[（0．69±0．10），（0．68±0．12），（0．65±0．08）mmol／L比（0．85±0．14）mmol／L]；干细胞组的心肌酶水平较空白对照组明显降低[（1844-8），（155±24），（144±18）U／L比（223±21）U／L，P〈0．05]。结论不同剂量hUMSCs经尾静脉注射人大鼠体内引起血糖、糖化血红蛋白和心肌酶等的降低，且与剂量相关，选择适当剂量的干细胞移植将对临床治疗效果起到重要的作用。

关键词：人脐带胶样组织间充质干细胞大鼠异种移植血液检测

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组织蛋白酶抑制剂胱抑素C的表达和炎性反应在腹主动脉瘤发病中的意义

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新乡医学院学报 2013年第1期30卷 1-4,8页

作者：秦彦文曹旭方微刘静张耀中王淼首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心血管生物研究室北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院病理科北京100029 北京市心肺血管疾病研究所流行病研究室北京100029

目的探讨组织蛋白酶抑制剂胱抑素C(Cystatin C)和炎性反应在腹主动脉瘤(AAA)发病中的意义。方法收集31例AAA患者(AAA组)和32例非AAA患者(对照组)的血浆和AAA组的病变样本,免疫组织化学法检测AAA组病变组织中Cystatin C的表达和巨噬细胞... 详细信息

目的探讨组织蛋白酶抑制剂胱抑素C(Cystatin C)和炎性反应在腹主动脉瘤(AAA)发病中的意义。方法收集31例AAA患者(AAA组)和32例非AAA患者(对照组)的血浆和AAA组的病变样本,免疫组织化学法检测AAA组病变组织中Cystatin C的表达和巨噬细胞表面抗原2(Mac-2)的含量;酶联免疫吸附法测定AAA组和对照组血浆的Cystatin C水平,常规生物化学法检测血脂、血糖水平,采用免疫散射比浊法检测超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。结果对照组血管动脉壁高表达Cystatin C,而AAA组血管动脉壁的Cystatin C表达显著降低(P<0.01),同时Mac-2表达较对照组显著增加(P<0.01);AAA组患者血浆Cystatin C水平为(32.55±17.31)μg.L-1,显著低于对照组的(78.13±43.13)μg.L-1,2组比较差异有统计学意义(P<0.01),且与AAA直径呈显著负相关(r=-0.560,P<0.01);AAA组患者hs-CRP水平较对照组显著升高,与AAA直径大小呈显著正相关(r=0.762,P<0.01);血浆Cystatin C与hs-CRP水平显著负相关(r=-0.530,P<0.01);多元线性逐步回归分析结果显示,在校正了与AAA直径大小的相关因素后,Cystatin C和hs-CRP水平与AAA直径大小独立相关(P<0.05,0.01)。结论血浆Cystatin C联合hs-CRP水平检测结果可作为判断AAA炎性反应的参考指标。

关键词：腹主动脉瘤组织蛋白酶胱抑素C 炎性反应超敏C反应蛋白巨噬细胞

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多次移植人脐带间充质干细胞对大鼠Th1和Th2比值的影响

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心肺血管病杂志 2013年第6期32卷 789-793页

作者：李娜辛毅林筝孔晴宇张颖周玉杰黄益民张兆光首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所细胞与分子生物学研究室北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心外科北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心内科北京100029

目的：观察多次静脉移植人脐带间充质干细胞（human umbilical mesenchymal stem cells,HUMSCs）对大鼠Th1和Th2轴的影响.方法：①体外培养HUMSCs;流式细胞仪鉴定第4代hUMSCs表面抗原的表达；特异性诱导染色并鉴定第4代HUMSCs分化脂肪... 详细信息

目的：观察多次静脉移植人脐带间充质干细胞（human umbilical mesenchymal stem cells,HUMSCs）对大鼠Th1和Th2轴的影响.方法：①体外培养HUMSCs;流式细胞仪鉴定第4代hUMSCs表面抗原的表达；特异性诱导染色并鉴定第4代HUMSCs分化脂肪细胞和成骨细胞的潜能；②雄性SD大鼠30只,体质量182～203g,分为3组：空白对照组；0.9％氯化钠液组；干细胞移植组,每组10只.干细胞移植组：1次/w经尾静脉注射3.5×107/kg的HUMSCs,连续3次.第三次移植HUMSCs后11d,各组经腹主动脉取血,流式细胞仪检测T淋巴细胞的IFN-γ和IL-4阳性率.结果：3次注射干细胞后实验动物全部存活,干细胞组的Th1、Th2阳性率较0.9％氯化钠液组差异无统计学意义（P＞0.05）；Th1/Th2比值、血清IFN-γ和IL-4水平与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；干细胞组的心、脑、肺、肝及肾等脏器未发生病理改变.利用红色荧光蛋白转染的HUMSCs示踪,发现移植的HUMSCs大部分归巢于骨髓中.结论：多次尾静脉注射HUMSCs,未引起大鼠Th1、Th2细胞免疫和体液免疫系统的变化,Th1/Th2轴无明显改变.移植的HUMSCs能较长时间的存活于大鼠骨髓内,具有较好的免疫相容性.

关键词：人脐带胶样组织间充质干细胞异种移植免疫反应动物实验,大鼠

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汉族散发法洛四联症患儿GATA6、TBX20基因的表达研究

汉族散发法洛四联症患儿GATA6、TBX20基因的表达研究

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第七届北京五洲心血管病研讨会

作者：赵鹤罗毅李玉琳张聪聪秦广宁屈昕芃首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所血管生物研究室

目的：通过研究中国汉族法洛四联症患儿心肌中GATA6、TBX20基因的表达变化,初步探讨GATA6、TBX20基因与汉族法洛四联症分子发病机制之间的关系.方法:实验组选取中国汉族法洛四联症患儿15例,年龄6.5个月～8岁,平均1.9岁,术中常规切除并... 详细信息

目的：通过研究中国汉族法洛四联症患儿心肌中GATA6、TBX20基因的表达变化,初步探讨GATA6、TBX20基因与汉族法洛四联症分子发病机制之间的关系.方法:实验组选取中国汉族法洛四联症患儿15例,年龄6.5个月～8岁,平均1.9岁,术中常规切除并留取右心室流出道肥厚心肌对照组选取汉族室间隔缺损患儿15例,年龄4.5个月～5岁,平均2.2岁.术中留取患儿右心房壁少量心肌组织.提取心肌组织RNA,应用实时荧光聚合酶链反应检测两组心肌中的GATA6、TBX20基因mRNA表达;应用免疫组化染色技术,检测两组心肌中的GATA6、TBX20蛋白的表达并进行统计学比较分析.结果:法洛四联症患者心肌中GATA6、TBX20基因mRNA和蛋白表达水平均较对照组显著降低,差异有统计学意义;同时,法洛四联症患儿心肌TBX20mRNA水平与患儿肺动脉指数呈正相关(r=0.6782,P＜0.05).结论:人类心肌中存在GATA6、TBX20mRNA和蛋白的表达;在中国汉族人群中,法洛四联症的发生可能与心肌组织中GATA6、TBX20基因表达下调相关.

关键词：先天性心脏病 GATA6基因 TBX20基因基因表达发病机制法洛四联症临床诊断儿童患者

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汉族散发法洛四联症患儿GATA6、TBX20基因的表达研究

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心肺血管病杂志 2013年第2期32卷 207-210页

作者：赵鹤罗毅李玉琳张聪聪秦广宁屈昕芃首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所小儿心脏外科北京100029 首都儿科研究所北京市心肺血管疾病研究所血管生物研究室北京100029

目的:通过研究中国汉族法洛四联症(tetralogy of Fallot,TOF)患儿心肌中GATA6、TBX20基因的表达变化,初步探讨GATA6、TBX20基因与汉族TOF分子发病机制之间的关系。方法:实验组选取中国汉族TOF患儿15例,年龄6.5个月～8岁,平均1.9岁,术中... 详细信息

目的:通过研究中国汉族法洛四联症(tetralogy of Fallot,TOF)患儿心肌中GATA6、TBX20基因的表达变化,初步探讨GATA6、TBX20基因与汉族TOF分子发病机制之间的关系。方法:实验组选取中国汉族TOF患儿15例,年龄6.5个月～8岁,平均1.9岁,术中常规切除并留取右心室流出道肥厚心肌;对照组选取汉族室间隔缺损患儿15例,年龄4.5个月～5岁,平均2.2岁。术中留取患儿右心房壁少量心肌组织。提取心肌组织RNA,应用实时荧光聚合酶链反应检测两组心肌中的GATA6、TBX20基因mRNA表达;应用免疫组化染色技术,检测两组心肌中的GATA6、TBX20蛋白的表达并进行统计学比较分析。结果:TOF患者心肌中GATA6、TBX20基因mRNA和蛋白表达水平均较对照组显著降低,差异有统计学意义;同时,TOF患儿心肌TBX20mRNA水平与患儿肺动脉指数呈正相关(r=0.6782,P<0.05)。结论:人类心肌中存在GATA6、TBX20mRNA和蛋白的表达;在中国汉族人群中,TOF的发生可能与心肌组织中GATA6、TBX20基因表达下调有关。

关键词： GATA6基因 TBX20基因先天性心脏病法洛四联症

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