检索结果-内蒙古大学图书馆

心肺血管病杂志 2013年第5期32卷 652-654页

作者：张凌燕王绿娅蔺洁首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所妇产科北京100029 北京市心肺血管疾病研究所心血管生物研究室北京100029 北京市心肺血管疾病研究所动脉硬化研究室北京100029

血浆脂蛋白包括LDL、HDL、乳糜微粒（chylomicrons,CM）及VLDL-C。近年来对LDL亚组分与冠心病的关系,进行了深入的研究[1-2],认为小而密LDL比大而轻LDL在动脉粥样硬化（As）的发生中起着更为重要的作用,是冠心病的危险因子[1]。

关键词：脂蛋白亚组快速分析系统低密度脂蛋白低密度脂蛋白亚组分冠心病危险因素

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间充质干细胞治疗心肌缺血性疾病的临床研究进展

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心肺血管病杂志 2013年第3期32卷 377-379页

作者：李娜孔晴宇辛毅黄益民张兆光周玉杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所细胞与分子生物学研究室北京100029 北京市心肺血管疾病研究所心外科北京100029 北京市心肺血管疾病研究所心内科北京100029

心肌缺血性疾病导致梗死区心肌细胞不可逆死亡,疤痕组织形成,心室重构,心功能降低最终导致心力衰竭。尽管现行心脏内外科治疗可以很大程度地降低了急性心肌梗死的病死率。然而并不能使梗死区梗死心肌细胞再生,导致心功能不可逆的降低。... 详细信息

心肌缺血性疾病导致梗死区心肌细胞不可逆死亡,疤痕组织形成,心室重构,心功能降低最终导致心力衰竭。尽管现行心脏内外科治疗可以很大程度地降低了急性心肌梗死的病死率。然而并不能使梗死区梗死心肌细胞再生,导致心功能不可逆的降低。间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）是来源于骨髓和脐带,可以在体外被培养扩增,具有分化多种组织细胞能力的小细胞群。

关键词：间充质干细胞,细胞治疗心肌梗死心肌缺血性疾病

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组织蛋白酶S在人和小鼠腹主动脉瘤组织中的表达

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中国基层医药 2013年第2期20卷 161-163,I0001页

作者：秦彦文张耀中方微刘欧曹旭张宏家首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心血管生物研究室北京市100029 首都医科大学附属北京安贞医院病理科北京市100029 首都医科大学附属北京安贞医院心外科北京市100029

目的探讨组织蛋白酶S（CathepsinS）在人腹主动脉瘤（AAA）组织和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）灌注载脂蛋白E基因缺陷小鼠（ApoE-／-）引起AAA病变中的表达。方法收集符合临床诊断的腹主动脉瘤患者标本（AAA组），以正常血管为对照（对照组）... 详细信息

目的探讨组织蛋白酶S（CathepsinS）在人腹主动脉瘤（AAA）组织和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）灌注载脂蛋白E基因缺陷小鼠（ApoE-／-）引起AAA病变中的表达。方法收集符合临床诊断的腹主动脉瘤患者标本（AAA组），以正常血管为对照（对照组）；AngⅡ以1000ng·kg^-1·d^-1的剂量持续灌注ApoE-／-小鼠28d建立小鼠AAA模型，以0．9％氯化钠注射液灌注作为对照。弹力纤维染色观察人和小鼠AAA病变组织弹力纤维断裂，免疫组化观察人和小鼠AAA病变组织CathepsinS的蛋白表达。结果弹力纤维染色显示，人和小鼠AAA组织的弹力纤维断裂显著增加（P〈0．05）；免疫组化结果显示人和小鼠AAA组织的CathepsinS表达较对照组显著增加（P〈0．05）。结论CathepsinS在人和小鼠AAA病变组织中被激活，可能参与AAA的发病过程。

关键词：腹主动脉瘤组织蛋白酶S 载脂蛋白E基因缺陷小鼠

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器官移植病人外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达与移植器官功能和活组织病理学改变时相比较

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安徽医药 2013年第7期17卷 1130-1135页

作者：许秀芳张颖辛毅黄益民顾云李娜孟旭伍冀湘周玉杰张兆光许学敏李京悻首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院外科北京100029

目的系统比较移植后外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达时相与病理改变时相间的差别,探讨外周血淋巴细胞免疫活性变化与移植器官排斥反应时间进程间的关系。方法分别通过对临床4例肾移植、4例心脏移植和1例单肺移植病人的观察,利用病理学... 详细信息

目的系统比较移植后外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达时相与病理改变时相间的差别,探讨外周血淋巴细胞免疫活性变化与移植器官排斥反应时间进程间的关系。方法分别通过对临床4例肾移植、4例心脏移植和1例单肺移植病人的观察,利用病理学、流式细胞术等技术,系统比较了移植器官功能改变时相、移植器官的病理改变时相、外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达时相的时间进程的差别和先后顺序。结果 (1)9例器官移植病人中有4例在发生急性排斥反应,免疫抑制剂不能完全阻断脏器移植排斥反应的发生;(2)肾移植术后早期,对外周血淋巴细胞表面蛋白分子CD3、CD4、CD8和TCR表达水平的监测可以帮助发现和判断急性排斥反应的时间进程,并可较准确地监测抗排冲击的疗效,减少免疫药物冲击疗程的盲目性;(3)心脏移植排斥反应病人淋巴细胞HLA-DR分子于移植后24～72 h期间出现高于没有排斥反应病人的表达高峰,比活组织检查诊断排斥反应时间提前5～7 d;(4)9例病人24 h内平均淋巴细胞表面蛋白分子CD3、CD4、CD8、HLA-DR、ICAM-I、MHC-Ⅱ、TCR等负调表达,淋巴细胞活性被一过性抑制;(5)9例病人24～48 h期间,平均淋巴细胞表面蛋白分子CD3、CD4、HLA-DR、ICAM-I、MHC-Ⅱ、TCR等正调表达。结论外周血淋巴细胞表面蛋白分子的测定对临床急性排斥反应的早期发现和时间进程的监测、抗排斥反应药物治疗效果的判断与监测具有一定的指导意义。

关键词：脏器移植外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达时相

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碱性成纤维细胞生长因子体外诱导犬骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

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新乡医学院学报 2013年第10期30卷 777-782页

作者：缪黄泰吴星欣辛毅王晓甄雷聂绍平首都医科大学附属北京安贞医院急诊危重症中心北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029

目的探讨不同剂量的碱性成纤维细胞生长因子体外定向诱导犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的可行性。方法采用密度梯度离心法分离犬BMSCs并进行传代培养。四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术检测第3代BMSCs的增殖及DNA周期;取... 详细信息

目的探讨不同剂量的碱性成纤维细胞生长因子体外定向诱导犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的可行性。方法采用密度梯度离心法分离犬BMSCs并进行传代培养。四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术检测第3代BMSCs的增殖及DNA周期;取第3代BMSCs设置对照组,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)10、100μg·L^(-1)组进行体外诱导培养,镜下观察其形态变化,细胞生长曲线法检测细胞增殖情况;免疫荧光法鉴定心肌肌钙蛋白I(TnI)、肌球蛋白重链(MHC)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果密度梯度离心法得到的BMSCs呈长梭形、聚集性生长,第3代BMSCs MTT法检测结果显示细胞生长阶段为潜伏期、对数生长期及平台期。DNA周期检测结果:G_0/G_1期为(91.90±1.68)%,表明绝大部分细胞处于非增殖状态。经诱导分化3周后,3组细胞经生长曲线法检测结果显示:1~3 d,bFGF10、100μg·L^(-1)组细胞数较对照组增殖明显,差异有统计学意义(P<0.05);4~5 d,对照组细胞呈对数生长趋势,bFGF 10、100μg·L^(-1)组细胞数量减少;6~7 d,bFGF诱导组较对照组细胞数明显减少(P<0.05),而bFGF 10μg·L^(-1)组与bFGF100μg·L^(-1)组比较细胞数量明显偏少(P<0.05)。免疫荧光法检测结果显示:经诱导分化4周后,bFGF 10μg·L^(-1)组和bFGF100μg·L^(-1)组的细胞均表达TnI和MHC,不表达Vimentin;对照组均不表达TnI、MHC和Vimentin。结论 10μg·L^(-1)bFGF能够有效促进BMSCs的体外增殖,并具有向心肌样细胞分化能力。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子骨髓间充质干细胞心肌样细胞分化犬

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小鼠肾小管上皮细胞的原代培养及生物学特性

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新乡医学院学报 2013年第8期30卷 593-597页

作者：白蓉唐辛徐进许秀芳李温斌北京卫生职业学院医学基础教研室北京100053 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029 北京市心肺血管疾病研究所心外科北京100029

目的探讨适用于小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)分离培养及鉴定的技术方法。方法采用机械研磨肾脏组织分离肾小管节段并结合Ⅱ型胶原酶消化分离培养法进行mRTECs原代培养,利用倒置显微镜观察细胞生长情况;锥虫蓝法、绘制生长曲线法、3-(4,5... 详细信息

目的探讨适用于小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)分离培养及鉴定的技术方法。方法采用机械研磨肾脏组织分离肾小管节段并结合Ⅱ型胶原酶消化分离培养法进行mRTECs原代培养,利用倒置显微镜观察细胞生长情况;锥虫蓝法、绘制生长曲线法、3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法、DNA周期检测法分别测定和观察mRTECs传代成活率、生长情况及增殖特征;免疫荧光染色法鉴定细胞。结果获得的细胞3 d后从贴壁的肾小管节段边缘长出,7 d后呈铺路石样,生长迅速可传代;传代细胞成活率达96%以上;第1代(P1)、第3代(P3)细胞生长曲线近似"S"形,MTT法显示P1、P3细胞生长至第3～5天光密度值变化较明显;随传代次数的增加,第5代细胞生长曲线近似平缓,光密度值无明显变化,细胞逐渐衰老;P1细胞G0/G1和(S+G2)/M分别为78.9%和21.1%,P3细胞G0/G1和(S+G2)/M分别为82.1%和17.9%;P3细胞行免疫荧光染色细胞角质蛋白-18及上皮型钙黏素显示细胞质内蛋白表达阳性,细胞阳性率均达98%。结论机械研磨并结合Ⅱ型胶原酶消化培养法能成功培养mRTECs,建立稳定、高效的细胞分离和培养技术方法,为肾脏疾病与心血管功能相关性研究提供理想的细胞来源。

关键词：肾小管上皮细胞原代培养生物学特性小鼠

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成年小鼠心成纤维细胞的原代培养及生物学特性

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第11期28卷 1194-1199页

作者：辛毅刘飒许秀芳李温斌黄益民罗毅周玉杰首都医科大学附属北京安贞医院、北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院、北京市心肺血管疾病研究所实验中心北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院心外科北京100029

目的:建立适用于成年小鼠心成纤维细胞的体外分离培养及鉴定的技术方法。方法:应用胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶联合消化法及组织贴块法两种方法对小鼠心成纤维细胞进行体外培养。在倒置显微镜下观察心成纤维细胞生长情况;台盼蓝法测定细胞传... 详细信息

目的:建立适用于成年小鼠心成纤维细胞的体外分离培养及鉴定的技术方法。方法:应用胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶联合消化法及组织贴块法两种方法对小鼠心成纤维细胞进行体外培养。在倒置显微镜下观察心成纤维细胞生长情况;台盼蓝法测定细胞传代成活率;通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测比较两种方法获得的心成纤维细胞的增殖情况;观察不同培养基对心成纤维细胞生长的影响;苏木素-伊红(HE)染色观察细胞形态,采用免疫荧光染色观察培养细胞波形蛋白、纤维连结蛋白及盘状结构域受体2(DDR2)的表达。结果:酶联合消化法分离培养的细胞1 d后,在倒置相差显微镜下可见细胞贴壁呈长椭圆形生长,3 d后生长迅速呈长梭形;贴块法培养的细胞4 d后,可见细胞从组织块边缘长出,7 d后细胞数量逐渐增多,细胞成活率均为97%。两种方法获得的第3代细胞生长曲线近似"S"形、MTT法显示3～5 d细胞增殖较明显;酶联合消化法培养的细胞G0-G1期和S+G2+M期所占比例分别为62.61%和30.87%,组织贴块法培养的细胞G0-G1期和S+G2+M期所占比例分别为69.24%和28.05%;含100 mL/L胎牛血清的HG/DMEM培养基培养的细胞出现明显对数期。两种方法培养的第3代细胞行苏木素-伊红染色可见细胞漩涡状排列,免疫荧光检测波形蛋白、纤维连接蛋白及盘状结构域受体2表达阳性。结论:两种方法均可高效获得心成纤维细胞在体外稳定培养。与贴块法培养相比较,利用联合酶消化法能较有效的获得波形蛋白、纤维连结蛋白、DDR2高表达阳性的心成纤维细胞。

关键词：成年小鼠心成纤维细胞分离和原代培养生物学鉴定

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器官移植患者外周血淋巴细胞分子表达

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第10期28卷 1041-1045,1050页

作者：许秀芳辛毅张颖黄益民顾云李娜周玉杰张兆光北京市心肺血管疾病研究所细胞与分子生物学研究室首都医科大学附属北京安贞医院外科北京100029

目的:比较移植后患者外周血淋巴细胞不同基因表达时相与病理改变时相,探讨外周血淋巴细胞分子的表达与排斥反应的关系。方法:通过对9例脏器移植的观察,系统比较了移植器官的实时荧光定量PCR检测患者外周血淋巴细胞CD4、CD8、P56、P59编... 详细信息

目的:比较移植后患者外周血淋巴细胞不同基因表达时相与病理改变时相,探讨外周血淋巴细胞分子的表达与排斥反应的关系。方法:通过对9例脏器移植的观察,系统比较了移植器官的实时荧光定量PCR检测患者外周血淋巴细胞CD4、CD8、P56、P59编码基因表达时相改变、荧光差异显示技术检测差异基因表达时相及其与脏器功能、病理改变时相的关系。结果:免疫抑制剂不能完全阻断脏器移植排斥反应的发生;移植术后24 h内,9例患者荧光差异显示-PCR技术外周血淋巴细胞P59、酪氨酸磷酸酶的基因表达上调,24～48 h PKC-θ、CD4等基因表达上调;肾移植和心脏移植术后PKC-θ、MHC-Ⅱ、丝/苏氨酸激酶和酪氨酸磷酸酯酶及丝氨酸/苏氨酸激酶15、凝血因子VIII、干扰素诱导蛋白、HLA-DR-H基因较术前有3倍以上升高。P59编码基因表达水平于移植后24 h内保持基本平稳,此后持续负调表达直到第10天达低谷。P56和CD8基因于移植后72 h内表现为持续负调表达,此后正调表达并于第5天时达到移植后的第一个峰值。CD4编码基因于移植后24 h内首先表现为负调表达,此后开始正调表达并于48 h达到移植后的第一个峰值。结论:外周血淋巴细胞基因表达水平的监测可能有助于临床早期急性排斥反应的诊断和免疫抑制剂治疗效果的判断。

关键词：脏器移植外周血淋巴细胞淋巴细胞基因表达时相

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ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化早期血脂变化及主动脉超声生物显微镜成像分析

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中国超声医学杂志 2012年第4期28卷 304-307页

作者：杨娅王艳红谢谨捷李嵘娟李治安王征秦彦文首都医科大学附属北京安贞医院超声科首都医科大学附属北京友谊医院北京市朝阳区第二医院北京市心肺血管疾病研究所心血管生物研究室

目的分析ApoE基因敲除(ApoE—/—)小鼠血脂变化及主动脉动脉粥样硬化的超声生物显微镜(UBM)成像特征。方法 8周龄及16周龄雄性ApoE-/—小鼠各8只为实验组,同周龄同数量的雄性C57BL/6小鼠为对照组。应用超声生物显微镜观察小鼠主动脉根... 详细信息

目的分析ApoE基因敲除(ApoE—/—)小鼠血脂变化及主动脉动脉粥样硬化的超声生物显微镜(UBM)成像特征。方法 8周龄及16周龄雄性ApoE-/—小鼠各8只为实验组,同周龄同数量的雄性C57BL/6小鼠为对照组。应用超声生物显微镜观察小鼠主动脉根部、升主动脉和主动脉弓的形态结构,于主动脉根部短轴切面测量内-中膜厚度(IMT),并测定小鼠血脂。结果 ApoE—/—小鼠血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)及低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)水平较同周龄对照组明显升高(P<0.01);高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)水平较同周龄对照组减低(P<0.05)。16周龄ApoE-/—小鼠血脂较8周龄ApoE—/—小鼠增高更为明显,差异有统计学意义(P<0.01)。ApoE—/—小鼠的主动脉根部IMT较同周龄对照组增厚,差异有统计学意义(P<0.01);16周龄ApoE—/—小鼠IMT(0.208±0.038)mm较8周龄ApoE—/-小鼠主动脉根部IMT(0.121±0.025)mm增厚更为明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 ApoE-/-小鼠早期出现高脂血症,UBM成像可显示小鼠主动脉早期动脉粥样硬化的病变特征。

关键词：血脂载脂蛋白E 小鼠动脉粥样硬化超声生物显微镜

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人心肌肌球蛋白轻链基因启动子驱动的GFP和Luc报告基因在人心肌细胞系中的表达

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中国病理生理杂志 2012年第9期28卷 1722-1728页

作者：许秀芳辛毅汪劲松赵莉敏杜兰萍葛桂玲李娜张颖王世强黄益民罗毅首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所细胞与分子生物学研究室北京100029 首都医科大学附属北京儿童医院心外科北京100045 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所实验中心北京100029 北京放射医学研究所北京100850 北京大学生命科学学院北京100871 北京中医药大学电镜室北京100029

目的:构建人肌球蛋白2v基因启动子(pMLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和萤光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体并观察其在人心肌细胞系(HCM)和人肺癌细胞株A549中的整合表达特征。方法:应用去毒化的人类I型免疫缺陷病毒和pMLC2v-GFP或pMLC2v-Lu... 详细信息

目的:构建人肌球蛋白2v基因启动子(pMLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和萤光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体并观察其在人心肌细胞系(HCM)和人肺癌细胞株A549中的整合表达特征。方法:应用去毒化的人类I型免疫缺陷病毒和pMLC2v-GFP或pMLC2v-Luc报告基因构建慢病毒示踪载体,转染HCM和A549细胞,激光共聚焦显微镜及生物发光检测仪观察2种报告基因在不同细胞生长进程中的表达特征。非特异性启动子驱动的GFP(GFPC)和红色荧光蛋白(RFPC)报告基因作为对照。结果:2种细胞转染GFPC和RFPC后第3 d,都表达GFP和RFP;而HCM只在转染pMLC2v-GFP和pMLC2v-Luc 21 d后表达GFP和Luc,A549细胞不表达。结论:pMLC2v主要在培养21 d后新增殖的人心肌细胞中驱动GFP和Luc报告基因表达,这为监测干细胞向心肌细胞的分化进程提供了可靠的病理及活体示踪工具。

关键词：肌球蛋白轻链绿色荧光蛋白萤光素酶心肌细胞

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