检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2013年第3期21卷 746-753页

作者：辛毅刘小希赵伟刘飒李娜许秀芳黄益民罗毅张宏家首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029

本研究探讨一种高效、稳定的从兔骨髓中同时分离培养间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)和内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPC)的方法并观察其生物学特性。抽取兔骨髓,应用密度梯度分离单个核细胞,采用差速贴壁经纤连... 详细信息

本研究探讨一种高效、稳定的从兔骨髓中同时分离培养间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)和内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPC)的方法并观察其生物学特性。抽取兔骨髓,应用密度梯度分离单个核细胞,采用差速贴壁经纤连蛋白包被并结合EGM-2MV培养基分别扩增MSC和EPC。用台盼蓝法测定细胞传代成活率,通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测MSC和EPC的增殖能力及诱导分化成骨细胞、成脂肪细胞能力,并结合流式细胞术(FCM)检测MSC免疫原型以鉴定MSC;细胞吞噬功能特异性地摄取Dil-ac-LDL及FITC-UEA-1,并结合CD133、VEGFR2/KDR、CD34免疫荧光鉴定EPC,并计算其纯度。结果表明,经密度梯度分离单个核细胞,在早期贴壁细胞24 h换液时即可见明显集落形成,8 d后达80%融合,细胞呈均匀一致的长梭形排列;2次贴壁细胞经EGM-2MV培养基培养,第3天开始伸展,约8 d可融合近80%,细胞呈多角形,出现条索状结构;2种细胞台盼蓝法测定细胞传代成活率均在90%以上,传至第2代后,生长曲线均近似"S"形;MTT法检测显示,细胞生长d 3至d 5时光密度值变化较明显;MSC G0-G1期为(93.32±1.65)%、EPC G0-G1为(93.05±1.95)%,2种细胞DNA周期无明显差异;早期贴壁细胞FCM检测CD90、CD44阳性率为(99.7±1.12)%、(99.1±2.33)%;CD14、CD45、CD79a阳性率分别为(4.8±0.38)%、(6.8±0.49)%及(0.4±0.08)%,经体外诱导能够向成骨细胞及脂肪细胞分化,鉴定为MSC;2次贴壁细胞传至第2代经Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色阳性率(82.1±3.4)%,CD133、VEGFR2/KDR、CD34免疫荧光染色阳性率分别为(74.2±3.2)%、(64.7±4.3)%及(43.5±1.5)%,鉴定为EPC。结论:应用密度梯度分离法结合差速贴壁筛选法可培养出高纯度的MSC,2次贴壁细胞经纤连蛋白预包被并结合EGM-2MV培养基体外诱导可培养出增殖能力较强的EPC,为组织工程学研究提供种子细胞。

关键词：差速贴壁法骨髓间充质干细胞内皮祖细胞细胞培养生物学特性

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人脐带间充质干细胞的原代培养及多向分化潜能的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第10期29卷 1087-1093页

作者：辛毅李娜黄益民崔巍刘飒许秀芳张兆光首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029 北京市心肺血管疾病研究所实验中心北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院心外科北京100029

目的探讨人脐带间充质干细胞（hUCMSC）的体外分离培养鉴定方法及多向分化潜能。方法应用Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法及组织贴块培养法对hUCMSC进行体外培养。在倒置显微镜下观察不同方法获得的hUCMSC的生长特点；台盼蓝法测定细... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞（hUCMSC）的体外分离培养鉴定方法及多向分化潜能。方法应用Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法及组织贴块培养法对hUCMSC进行体外培养。在倒置显微镜下观察不同方法获得的hUCMSC的生长特点；台盼蓝法测定细胞传代成活率；采用生长曲线、MTT法测定hUCMSC的增殖、流式细胞术（FCM）测定细胞周期变化及细胞免疫表型变化；采用相应试剂盒鉴定其向成脂细胞、成骨细胞的分化，采用免疫荧光细胞化学技术检测向成心肌样细胞的分化、采用荧光标记技术检测hUCMSC向血管内皮细胞的分化。结果酶消化法分离培养的细胞1d后，在倒置相差显微镜下可见细胞贴壁呈圆形生长，4d后生长迅速呈长梭形，7d后由中心向周围生长且增殖明显，10d后达80％融合即可传代；贴块法培养的细胞7d后，可见细胞从组织块边缘长出，10d后细胞数量逐渐增多，16d后细胞生长迅速呈单层致密排列即可传代，细胞传代成活率均为96％以上。2种方法获得的第3代细胞生长曲线近似“S”形、MTr法显示3～5d细胞增殖较明显；酶消化法培养的细胞G0／G1期和s＋G2／M期所占比例分别为88．78％和10．21％，组织贴块法培养的细胞G0／G1期和S＋G2／M期所占比例分别为84．82％和13．87％，细胞DNA周期无明显差异；2种方法获得的细胞经FCM检测CD90、CD105、CD73阳性率均为99％以上为高表达；CD45、CD34、CD14、CD11b、CD79a、CD19、HLA—DR低表达；2种方法获得的细胞在体外诱导都能向成骨细胞、成脂细胞、成心肌样细胞及血管内皮细胞分化，其诱导阳性率均为90％以上。结论酶消化法和贴块法均可高效获得hUCMSC，与贴块法培养相比较，酶消化法能更有效的获得扩增迅速、细胞成分单一的细胞。

关键词：人脐带间充质干细胞原代培养诱导分化

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小鼠心肌微血管内皮细胞的原代培养及生物学特性

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中国病理生理杂志 2013年第3期29卷 565-570页

作者：辛毅许秀芳黄益民张颖李温斌李娜首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029

目的:探讨一种高效、稳定的从小鼠心肌组织中分离培养心肌微血管内皮细胞的方法并观察细胞的生物学特性。方法:以多聚赖氨酸对培养皿作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁分离法,结合内皮细胞专用培养基,分离培养微血管内皮细胞并进... 详细信息

目的:探讨一种高效、稳定的从小鼠心肌组织中分离培养心肌微血管内皮细胞的方法并观察细胞的生物学特性。方法:以多聚赖氨酸对培养皿作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁分离法,结合内皮细胞专用培养基,分离培养微血管内皮细胞并进行扩增。利用倒置显微镜观察细胞生长情况;台盼蓝法、绘制生长曲线和MTT法分别测定心肌微血管内皮细胞传代成活率、不同代生长及增殖特征;以DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1荧光双标,结合CD31、vWF和CD34免疫荧光鉴定细胞表面特异性抗原;体外血管形成实验检测心肌微血管内皮细胞的功能。结果:酶消化、差速贴壁法分离培养2 d后,细胞呈散在的、小簇状聚集性生长,4～5 d迅速生长呈单层排列,细胞为梭形、三角形或多角形,7～8 d后呈铺路石样即可传代;传代细胞经台盼蓝法检测成活率均为95%以上;第1、3代细胞生长曲线近似"S"形,MTT法显示第1、3代细胞在第2～4 d吸光度变化较明显(P<0.05);随传代次数的增加,第5代细胞生长曲线近似平缓,吸光度无明显变化,细胞逐渐衰老;DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1荧光双标阳性率为(89.2±3.5)%,相关特异性抗原CD31、vWF和CD34免疫荧光鉴定阳性率为(56.7±3.7)%、(78.5±2.6)%和(67.8±4.2)%;体外血管形成实验显示,6～12 h后出现明显的管腔结构。结论:以多聚赖氨酸作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁法并结合内皮细胞专用培养基,可获得纯度较高的小鼠心肌微血管内皮细胞,为心脏疾病的研究提供种子细胞。

关键词：心肌微血管内皮细胞原代细胞培养生物学特性小鼠

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环孢霉素A对大鼠心脏移植模型淋巴细胞分子表达与移植心脏病理学改变时相关系的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2013年第2期34卷 161-169页

作者：许秀芳辛毅李娜张颖黄益民顾云周玉杰张兆光首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院外科北京100029

【目的】通过环孢素A(CsA)干预的异体异位心脏移植动物模型的研究,对移植术后淋巴细胞分子表达、心肌组织淋巴细胞浸润能力和移植心脏病理改变时相进行比较,探讨环孢素A对其影响。【方法】SD大鼠为移植心脏供体,Wistar大鼠为移植心脏受... 详细信息

【目的】通过环孢素A(CsA)干预的异体异位心脏移植动物模型的研究,对移植术后淋巴细胞分子表达、心肌组织淋巴细胞浸润能力和移植心脏病理改变时相进行比较,探讨环孢素A对其影响。【方法】SD大鼠为移植心脏供体,Wistar大鼠为移植心脏受体。实验分为心脏移植对照组和环孢素A干预+心脏移植组实验组两组。在移植前及移植后24 h、3 d、7d、10 d和12 d时间点免疫荧光测定淋巴细胞在心肌组织中浸润能力、实时定量PCR检测淋巴细胞编码基因CD4、CD8和酪氨酸激酶P59 mRNA表达水平、心肌组织病理学检查判断排斥反应程度。【结果】①心脏移植后24 h内,外周血淋巴细胞基因的转录与表达为一过性降低;②心肌组织CD4+、CD8+淋巴细胞浸润和Ⅱ级排斥反应病理改变,主要出现于心脏移植后的d3～d7;③环孢素A不能有效抑制移植后3 d内心肌组织CD4+、CD8+淋巴细胞浸润程度的快速增加,但可明显降低移植后d3～d7的心肌组织CD4+淋巴细胞的浸润程度;④环孢素A不能完全阻断淋巴细胞P59基因的表达;⑤环孢素A不能有效抑制淋巴细胞CD4基因正调表达,但可抑制CD8基因的转录。【结论】环孢素A的移植排斥反应的抑制作用在大鼠移植后d3～d7。淋巴细胞基因表达、心肌组织淋巴细胞浸润与排斥反应病理改变有关。这将有助于同种移植病人环孢素A的临床应用。

关键词：大鼠心脏移植模型心脏外科心肌组织淋巴细胞浸润病理学外周血淋巴细胞基因表达时相免疫学

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器官移植病人外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达与移植器官功能和活组织病理学改变时相比较

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安徽医药 2013年第7期17卷 1130-1135页

作者：许秀芳张颖辛毅黄益民顾云李娜孟旭伍冀湘周玉杰张兆光许学敏李京悻首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院外科北京100029

目的系统比较移植后外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达时相与病理改变时相间的差别,探讨外周血淋巴细胞免疫活性变化与移植器官排斥反应时间进程间的关系。方法分别通过对临床4例肾移植、4例心脏移植和1例单肺移植病人的观察,利用病理学... 详细信息

目的系统比较移植后外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达时相与病理改变时相间的差别,探讨外周血淋巴细胞免疫活性变化与移植器官排斥反应时间进程间的关系。方法分别通过对临床4例肾移植、4例心脏移植和1例单肺移植病人的观察,利用病理学、流式细胞术等技术,系统比较了移植器官功能改变时相、移植器官的病理改变时相、外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达时相的时间进程的差别和先后顺序。结果 (1)9例器官移植病人中有4例在发生急性排斥反应,免疫抑制剂不能完全阻断脏器移植排斥反应的发生;(2)肾移植术后早期,对外周血淋巴细胞表面蛋白分子CD3、CD4、CD8和TCR表达水平的监测可以帮助发现和判断急性排斥反应的时间进程,并可较准确地监测抗排冲击的疗效,减少免疫药物冲击疗程的盲目性;(3)心脏移植排斥反应病人淋巴细胞HLA-DR分子于移植后24～72 h期间出现高于没有排斥反应病人的表达高峰,比活组织检查诊断排斥反应时间提前5～7 d;(4)9例病人24 h内平均淋巴细胞表面蛋白分子CD3、CD4、CD8、HLA-DR、ICAM-I、MHC-Ⅱ、TCR等负调表达,淋巴细胞活性被一过性抑制;(5)9例病人24～48 h期间,平均淋巴细胞表面蛋白分子CD3、CD4、HLA-DR、ICAM-I、MHC-Ⅱ、TCR等正调表达。结论外周血淋巴细胞表面蛋白分子的测定对临床急性排斥反应的早期发现和时间进程的监测、抗排斥反应药物治疗效果的判断与监测具有一定的指导意义。

关键词：脏器移植外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达时相

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碱性成纤维细胞生长因子体外诱导犬骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

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新乡医学院学报 2013年第10期30卷 777-782页

作者：缪黄泰吴星欣辛毅王晓甄雷聂绍平首都医科大学附属北京安贞医院急诊危重症中心北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029

目的探讨不同剂量的碱性成纤维细胞生长因子体外定向诱导犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的可行性。方法采用密度梯度离心法分离犬BMSCs并进行传代培养。四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术检测第3代BMSCs的增殖及DNA周期;取... 详细信息

目的探讨不同剂量的碱性成纤维细胞生长因子体外定向诱导犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的可行性。方法采用密度梯度离心法分离犬BMSCs并进行传代培养。四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术检测第3代BMSCs的增殖及DNA周期;取第3代BMSCs设置对照组,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)10、100μg·L^(-1)组进行体外诱导培养,镜下观察其形态变化,细胞生长曲线法检测细胞增殖情况;免疫荧光法鉴定心肌肌钙蛋白I(TnI)、肌球蛋白重链(MHC)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果密度梯度离心法得到的BMSCs呈长梭形、聚集性生长,第3代BMSCs MTT法检测结果显示细胞生长阶段为潜伏期、对数生长期及平台期。DNA周期检测结果:G_0/G_1期为(91.90±1.68)%,表明绝大部分细胞处于非增殖状态。经诱导分化3周后,3组细胞经生长曲线法检测结果显示:1~3 d,bFGF10、100μg·L^(-1)组细胞数较对照组增殖明显,差异有统计学意义(P<0.05);4~5 d,对照组细胞呈对数生长趋势,bFGF 10、100μg·L^(-1)组细胞数量减少;6~7 d,bFGF诱导组较对照组细胞数明显减少(P<0.05),而bFGF 10μg·L^(-1)组与bFGF100μg·L^(-1)组比较细胞数量明显偏少(P<0.05)。免疫荧光法检测结果显示:经诱导分化4周后,bFGF 10μg·L^(-1)组和bFGF100μg·L^(-1)组的细胞均表达TnI和MHC,不表达Vimentin;对照组均不表达TnI、MHC和Vimentin。结论 10μg·L^(-1)bFGF能够有效促进BMSCs的体外增殖,并具有向心肌样细胞分化能力。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子骨髓间充质干细胞心肌样细胞分化犬

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大鼠心脏移植淋巴细胞多基因差异表达及淋巴细胞表面蛋白分子的表达时相比较

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河北医药 2013年第18期35卷 2725-2728页

作者：许秀芳辛毅张颖黄益民顾云林筝孟旭周玉杰张兆光首都医科大学附属北京安贞医院北京心肺血管疾病研究所分子生物学研究室 100029 首都医科大学附属北京安贞医院心外科 100029

目的建立大鼠异体异位心脏移植动物模型,观察心脏移植前后淋巴细胞多基因表达和CD4、CD8分子表达及环孢素A对其影响。方法 SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,分为心脏移植对照组和环孢素A干预两组。移植前、移植后24 h、3 d、7 d、10 d和1... 详细信息

目的建立大鼠异体异位心脏移植动物模型,观察心脏移植前后淋巴细胞多基因表达和CD4、CD8分子表达及环孢素A对其影响。方法 SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,分为心脏移植对照组和环孢素A干预两组。移植前、移植后24 h、3 d、7 d、10 d和12 d测定外周血淋巴细胞CD4、CD8分子表达、荧光差异显示分析淋巴细胞编码基因表达水平。结果 (1)移植组:7个基因差异表达,比同组的CD4和CD8分子开始正调表达的时间提前24 h;(2)环孢素A组外周血淋巴细胞的基因表达水平发生变化的有5个基因差异表达;(3)环孢素A组2.3-bisphosphoglycerate比对照组的第一个正调表达时相至少晚24 h,环孢素A还可抑制心脏移植后7 d内外周血淋巴细胞对gig18基因的转录;移植后24 h内,环孢素A组外周血淋巴细胞Na-通道蛋白基因正调表达。结论淋巴细胞多基因差异表达及与表面蛋白分子表达时相比较对于深入研究移植排斥反应机制和环孢素A的作用机制具有一定的意义。

关键词：大鼠心脏移植模型外周血淋巴细胞多基因差异表达时相淋巴细胞表面蛋白分子CD4、CD8分子表达时相

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不同剂量人脐带间充质干细胞异种移植对大鼠血液学及肝肾功能影响的研究

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中国医药 2013年第6期8卷 805-808页

作者：李娜辛毅张颖林筝孔晴宇周玉杰袁慧刘荣凤马雪莲黄益民张兆光首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所细胞与分子生物学研究室 100029 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心外科 100029 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心内科 100029 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所检验科 100029

目的观察不同剂量的人脐带胶样组织间充质干细胞（hUMSCs）经静脉移植人大鼠体内对血常规及肝肾功能等指标的影响。方法①体外培养人脐带间充质干细胞；利用流式细胞仪鉴定第4代***表面抗原的表达；标准试剂盒鉴定第4代hUMSCs向脂肪细... 详细信息

目的观察不同剂量的人脐带胶样组织间充质干细胞（hUMSCs）经静脉移植人大鼠体内对血常规及肝肾功能等指标的影响。方法①体外培养人脐带间充质干细胞；利用流式细胞仪鉴定第4代***表面抗原的表达；标准试剂盒鉴定第4代hUMSCs向脂肪细胞和成骨细胞分化的潜能；②182～203g的50只SD大鼠随机分为5组：空白对照组；盐水组；3．5×10^7／kg干细胞移植为干细胞I组；3．5×10。／kg干细胞移植为干细胞Ⅱ组；3．5X10’／kg干细胞移植为干细胞Ⅲ组；注射后第11天，腹主动脉取血，监测和比较血常规和生化指标，分析比较各项指标的变化和差异。结果①第4代hUMSCs特异性表面抗原CD73、CD90和CD105表达强阳性，能分成脂细胞和成骨细胞，比例分别为98．4％和95．7％；②注射干细胞后实验动物全部存活，第11天时实验组24项血常规指标与空白对照组相比差异无统计学意义；③干细胞组血糖较空白对照组明显降低[（8．4±1．6），（7．7±1．6），（7．1±1．6）mmol／L比（9．6±4．9）mmol／L]；干细胞组糖化血清白蛋白较空白对照组明显降低[（0．69±0．10），（0．68±0．12），（0．65±0．08）mmol／L比（0．85±0．14）mmol／L]；干细胞组的心肌酶水平较空白对照组明显降低[（1844-8），（155±24），（144±18）U／L比（223±21）U／L，P〈0．05]。结论不同剂量hUMSCs经尾静脉注射人大鼠体内引起血糖、糖化血红蛋白和心肌酶等的降低，且与剂量相关，选择适当剂量的干细胞移植将对临床治疗效果起到重要的作用。

关键词：人脐带胶样组织间充质干细胞大鼠异种移植血液检测

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多次移植人脐带间充质干细胞对大鼠Th1和Th2比值的影响

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心肺血管病杂志 2013年第6期32卷 789-793页

作者：李娜辛毅林筝孔晴宇张颖周玉杰黄益民张兆光首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所细胞与分子生物学研究室北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心外科北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心内科北京100029

目的：观察多次静脉移植人脐带间充质干细胞（human umbilical mesenchymal stem cells,HUMSCs）对大鼠Th1和Th2轴的影响.方法：①体外培养HUMSCs;流式细胞仪鉴定第4代hUMSCs表面抗原的表达；特异性诱导染色并鉴定第4代HUMSCs分化脂肪... 详细信息

目的：观察多次静脉移植人脐带间充质干细胞（human umbilical mesenchymal stem cells,HUMSCs）对大鼠Th1和Th2轴的影响.方法：①体外培养HUMSCs;流式细胞仪鉴定第4代hUMSCs表面抗原的表达；特异性诱导染色并鉴定第4代HUMSCs分化脂肪细胞和成骨细胞的潜能；②雄性SD大鼠30只,体质量182～203g,分为3组：空白对照组；0.9％氯化钠液组；干细胞移植组,每组10只.干细胞移植组：1次/w经尾静脉注射3.5×107/kg的HUMSCs,连续3次.第三次移植HUMSCs后11d,各组经腹主动脉取血,流式细胞仪检测T淋巴细胞的IFN-γ和IL-4阳性率.结果：3次注射干细胞后实验动物全部存活,干细胞组的Th1、Th2阳性率较0.9％氯化钠液组差异无统计学意义（P＞0.05）；Th1/Th2比值、血清IFN-γ和IL-4水平与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；干细胞组的心、脑、肺、肝及肾等脏器未发生病理改变.利用红色荧光蛋白转染的HUMSCs示踪,发现移植的HUMSCs大部分归巢于骨髓中.结论：多次尾静脉注射HUMSCs,未引起大鼠Th1、Th2细胞免疫和体液免疫系统的变化,Th1/Th2轴无明显改变.移植的HUMSCs能较长时间的存活于大鼠骨髓内,具有较好的免疫相容性.

关键词：人脐带胶样组织间充质干细胞异种移植免疫反应动物实验,大鼠

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小鼠肾小管上皮细胞的原代培养及生物学特性

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新乡医学院学报 2013年第8期30卷 593-597页

作者：白蓉唐辛徐进许秀芳李温斌北京卫生职业学院医学基础教研室北京100053 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029 北京市心肺血管疾病研究所心外科北京100029

目的探讨适用于小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)分离培养及鉴定的技术方法。方法采用机械研磨肾脏组织分离肾小管节段并结合Ⅱ型胶原酶消化分离培养法进行mRTECs原代培养,利用倒置显微镜观察细胞生长情况;锥虫蓝法、绘制生长曲线法、3-(4,5... 详细信息

目的探讨适用于小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)分离培养及鉴定的技术方法。方法采用机械研磨肾脏组织分离肾小管节段并结合Ⅱ型胶原酶消化分离培养法进行mRTECs原代培养,利用倒置显微镜观察细胞生长情况;锥虫蓝法、绘制生长曲线法、3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法、DNA周期检测法分别测定和观察mRTECs传代成活率、生长情况及增殖特征;免疫荧光染色法鉴定细胞。结果获得的细胞3 d后从贴壁的肾小管节段边缘长出,7 d后呈铺路石样,生长迅速可传代;传代细胞成活率达96%以上;第1代(P1)、第3代(P3)细胞生长曲线近似"S"形,MTT法显示P1、P3细胞生长至第3～5天光密度值变化较明显;随传代次数的增加,第5代细胞生长曲线近似平缓,光密度值无明显变化,细胞逐渐衰老;P1细胞G0/G1和(S+G2)/M分别为78.9%和21.1%,P3细胞G0/G1和(S+G2)/M分别为82.1%和17.9%;P3细胞行免疫荧光染色细胞角质蛋白-18及上皮型钙黏素显示细胞质内蛋白表达阳性,细胞阳性率均达98%。结论机械研磨并结合Ⅱ型胶原酶消化培养法能成功培养mRTECs,建立稳定、高效的细胞分离和培养技术方法,为肾脏疾病与心血管功能相关性研究提供理想的细胞来源。

关键词：肾小管上皮细胞原代培养生物学特性小鼠

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