检索结果-内蒙古大学图书馆

心肺血管病杂志 2017年第11期36卷 945-950页

作者：张燕李晓洋辛毅李温斌秦彦文首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心外科 100029 首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所分子生物研究室 100029 首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所上气道功能障碍相关心血管疾病研究室 100029

目的:运用组织工程学方法和纳米技术对牛心包进行处理,研究其免疫原性,以期制备免低疫原性的组织工程补片。方法:采用明胶再基质化、碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(简称EDC/NHS)交联和高速搅拌复乳溶剂挥发法对牛心包进行相关处理,之后... 详细信息

目的:运用组织工程学方法和纳米技术对牛心包进行处理,研究其免疫原性,以期制备免低疫原性的组织工程补片。方法:采用明胶再基质化、碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(简称EDC/NHS)交联和高速搅拌复乳溶剂挥发法对牛心包进行相关处理,之后植入大鼠皮下进行观察,通过HE染色对比纳米组、交联组、脱细胞组和新鲜组四组植入前后的组织形态学改变,并对各组心包片进行机械性能、厚度、含水量和钙含量检测;免疫组织化学法检测心包片表面CD4的沉积。结果:肉眼观察到大鼠皮下降解率纳米组明显低于脱细胞组,与交联组相当,脱细胞组降解较快;抗张强度测定结果显示,纳米组抗张强度与交联组(P=0.76)及脱细胞组(P=0.61)相比较差异无统计学意义,但远低于新鲜组(P<0.01);钙含量纳米组远低于新鲜组(P<0.001),与交联组相当;免疫组化结果显示各组心包片表面均有明显的CD4沉积,纳米组的排斥反应远低于新鲜组,与交联组相当。结论:组织工程学方法和纳米技术结合制备的纳米心包片具有低免疫原性,低降解率和抗钙化的优良特性。与交联组相比,纳米微球的嵌合并未明显影响心包片的机械性能和免疫原性,有望成为构建组织工程补片缓释模型的理想载体。

关键词：纳米牛心包组织工程免疫原性钙含量

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人脐带间充质干细胞外泌体对高糖诱导脐静脉内皮细胞功能的影响

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中华实用儿科临床杂志 2017年第3期32卷 220-225页

作者：辛毅李娜黄然然崔巍刘飒王超黄益民张颖周玉杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室100029 中国人民解放军96669部队北京102208

目的探讨人脐带间充质干细胞（hUMSCs）外泌体对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（hUVECs）功能的影响。方法酶消化法原代培养hUMSCs和hUVECs，传代扩增至第3代，采用流式细胞仪分别鉴定2种细胞表面标志物；收集培养的第3代hUMSCs无血清培养... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞（hUMSCs）外泌体对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（hUVECs）功能的影响。方法酶消化法原代培养hUMSCs和hUVECs，传代扩增至第3代，采用流式细胞仪分别鉴定2种细胞表面标志物；收集培养的第3代hUMSCs无血清培养基，提取外泌体，在电镜下观察其超微结构，并用流式细胞分析仪鉴定其表面标志物；体外培养第3代hUVECs分为对照组、高糖组（20 mmol/L）、外泌体＋高糖组（20 mmol/L）、miR－22抑制剂（50 nmol/L）＋高糖组（20 mmol/L），孵育24 h后采用Annexin V/PI双染流式细胞术观察hUVECs凋亡，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察各组细胞的增殖能力，Transwell系统中观察各组细胞的迁移功能，成血管实验检测各组内皮细胞功能。结果流式细胞术检测第3代hUMSCs的表面标志物CD105、CD73、CD90呈高表达；同时检测第3代hUVECs表面标志物CD309、CD31、CD34呈高表达，提示分离培养的hUMSCs和hUVECs具有间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）和内皮细胞（endothelial cells，ECSs）特异性表型特征。外泌体扫描电镜观察可见大小不一的球状膜性结构，且流式细胞仪检测CD63、CD105、CD73、CD90、CD44呈阳性表达。MTT法检测各组细胞增殖结果：对照组、高糖组、miR－22抑制剂＋高糖组、外泌体＋高糖组细胞存活率分别为（99.0±1.6）%、（75.0±2.2）%、（66.0±1.8）%、（95.0±2.6）%，与对照组比较，高糖组和miR－22抑制剂＋高糖组细胞增殖明显下降，差异均有统计学意义（t＝28.271，P〈0.05；t＝43.213, P〈0.01）,外泌体＋高糖组细胞增殖无明显下降，差异无统计学意义（t＝2.001，P〉0.05）。流式细胞仪检测各组细胞凋亡结果：对照组、高糖组、miR－22抑制剂＋高糖组、外泌体＋高糖组细胞凋亡率分别为16.44%、52.67%、45.92%、17.58%，与对照组比较，高糖组和miR－22抑制剂＋高糖组细胞凋亡率明显增高，差异均有统计学意义（t＝－13.756、－16.489，均P〈0.01）,外泌体＋高糖组细胞凋亡率略有增高，差异无统计学意义（t＝－2.182，P〉0.05）。Transwell系统中观察细胞的迁移功能：对照组、高糖组、miR－22抑制剂＋高糖组、外泌体＋高糖组细胞迁移数量分别为834.5个、295.8个、252.2个、779.5个，与对照组比较，高糖组和miR－22抑制剂＋高糖组细胞迁移数量明显减少，差异均有统计学意义（t＝18.280、27.266，均P〈0.01）,外泌体＋高糖组细胞迁移数量略有减少，差异无统计学意义（t＝1.985，P〉0.05）。体外成管实验结果：对照组、高糖组、miR－22抑制剂＋高糖组、外泌体＋高糖组细胞成管数量分别为29.8个、13.3个、11.3个、29.6个，与对照组比较，高糖组和miR－22抑制剂＋高糖组细胞成管数量明显减少，差异均有统计学意义（t＝9.030，P〈0.05；t＝10.671，P〈0.01）,外泌体＋高糖组细胞成管数量略有减少，差异无统计学意义（t＝0.083，P〉0.05）。结论hUMSCs外泌体可有效抑制高糖诱导hUVECs的凋亡、促进细胞增殖、迁移和血管再生作用，为寻找糖尿病微血管病变治疗的新靶点提供实验依据。

关键词：人脐带间充质干细胞人脐静脉内皮细胞外泌体高糖凋亡

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纳米心包片的研究进展

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心肺血管病杂志 2017年第5期36卷 414-416页

作者：张燕李晓洋马小龙辛毅李温斌首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所分子生物研究室 100029 首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心外科 100029

心血管疾病已成为危害人类健康的主要疾病,尤其是先天性心血管畸形、心血管缺损性疾病。目前最常用的外科治疗手段为补片修补术。同种或异种、自体或人造织物补片、合成型或生物型等材料都在心血管外科手术中得到了广泛的应用。

关键词：组织工程纳米技术和纳米材料脱细胞牛心包缓释作用

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循环长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5与冠状动脉钙化的相关性研究

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中国医药 2017年第2期12卷 178-181页

作者：信满坤朱小玲张抒扬齐永芬柳景华首都医科大学附属北京安贞医院心内科北京市心肺血管疾病研究所 100029 中国医学科学院北京协和医院心内科 100730 北京大学医学部基础医学院生物活性小分子研究室分子心血管学教育部重点实验室 100191

目的探讨外周血中长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5（lncRNAGAS5）与冠状动脉钙化（CAC）的相关性。方法选取2016年1—3月于首都医科大学附属北京安贞医院就诊的具有典型心绞痛症状和高度疑似冠状动脉粥样硬化性心脏病患者39例，计... 详细信息

目的探讨外周血中长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5（lncRNAGAS5）与冠状动脉钙化（CAC）的相关性。方法选取2016年1—3月于首都医科大学附属北京安贞医院就诊的具有典型心绞痛症状和高度疑似冠状动脉粥样硬化性心脏病患者39例，计算所有患者CAC积分。根据CAC积分将患者分为无CAC组（19例，CAC积分为0-100分）和CAC组（20例，CAC积分为101-2800分）。比较2组患者外周血中lncRNAGAS5含量，并分析CAC和lncRNAGAS5的独立相关因素。结果CAC组外周血中IncRNAGAS5含量明显高于无CAC组[（0．0142±0．0111）比（0．0074±0．0072）]，差异有统计学意义（P=0．030）。多元线性回归分析模型显示lncRNAGAS5（t=1．99，P=0．045）、低密度脂蛋白胆固醇（t=2．47，P=0．019）、血钾（t=2．86，P=0．007）是CAC的独立相关因素；白细胞介素6（t=-2．516，P=0．017）和脑钠肽（t=2．236，P=0．032）是lncRNAGAS5的独立相关因素。结论外周血中lncRNAGAS5在CAC患者中表达升高，且可作为预测CAC的指标，其升高可能与炎症指标和心室功能相关。

关键词：冠状动脉钙化长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5 白细胞介素6 脑钠肽

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心肌肌球特定基因-肌球蛋白轻链基因可在人脐带间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞表达

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心肺血管病杂志 2016年第8期35卷 653-658页

作者：辛毅李娜许秀芳崔巍刘飒王超黄益民张颖周玉杰首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所细胞与分子生物学研究室首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所实验中心中国人民解放军96669部队首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心内科

目的:探讨人心肌肌球蛋白轻链(2v)基因启动子(p MLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体在人脐带间充质干细胞(h UCMSC)向心肌样细胞分化中的表达。方法:酶消化法原代分离培养h UCMSC,采用流式细胞仪鉴定分析... 详细信息

目的:探讨人心肌肌球蛋白轻链(2v)基因启动子(p MLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体在人脐带间充质干细胞(h UCMSC)向心肌样细胞分化中的表达。方法:酶消化法原代分离培养h UCMSC,采用流式细胞仪鉴定分析其细胞表面标记物及检测体外向成骨细胞、成脂细胞、内皮细胞诱导分化潜能;经5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导h UCMSC定向分化成心肌样细胞;诱导细胞并同时转染p MLC2v-GFP,于d3,d7,d10,d14,d17及d21时间点在荧光显微镜下观察及流式细胞仪检测其阳性率;用生物发光检测仪检测相同时间点的萤光素酶(p MLC2v-Luc)报告基因慢病毒载体转染分化细胞发光特征;在激光共聚焦显微镜下观察p MLC2v-GFP及红色荧光蛋白(RFP)共转染诱导21d后分化细胞蛋白的表达分布状况;与鼠心肌细胞作为对照,脉冲电流激发细胞收缩和细胞内及细胞间的钙离子流,以检测诱导分化细胞"兴奋-收缩"偶联功能;Western blot法检测诱导分化细胞p MLC2v蛋白的表达。结果:原代培养的P3 h UCMSC,经FCM检测CD90、CD105及CD73阳性率均为99%以上为高表达;获得的细胞分别经体外诱导能够向成骨细胞、成脂细胞、成内皮细胞分化;经5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导h UCMSC同时并转染p MLC2v GFP,在荧光显微镜下观察并用流式仪检测GFP表达阳性细胞数随诱导时间的延长而增加(P<0.05);生物发光检测仪检测诱导细胞p MLC2v-Luc表达同样呈阳性递增;p MLC2v GFP及RFPC共转染诱导21d后分化的细胞,细胞浆内形成较清晰的与细胞长轴平行的肌束样结构;诱导后的细胞用共聚焦显微镜检测无细胞内及细胞间的钙离子流动;随诱导时间的延长p MLC2v蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论:在h UCMSC体外诱导形成心肌样细胞过程中,p MLC2v基因随诱导时间的延长而表达增加,为监测干细胞的移植在心肌疾病治疗中提供了实验依据。

关键词：人脐带胶样组织间充质干细胞心肌样细胞肌球蛋白轻链荧光素酶绿色荧光蛋白

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嵌合型组织工程牛心包片在大鼠皮下包埋效果的初步研究

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心肺血管病杂志 2016年第3期35卷 223-228页

作者：辛志飞万居易马小龙李殿坤辛毅龚达周子凡许秀芳李温斌北京市心肺血管疾病研究所-首都医科大学附属北京安贞医院心脏外科 100029 泸州医学院附属医院心胸外科北京市心肺血管疾病研究所-首都医科大学附属北京安贞医院分子生物研究室 100029 北京大学国际医院心脏外科

目的:探索"体外去细胞-明胶再基质化-碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(以下均简称EDC/NHS)交联-体内自体细胞植入"的"嵌合型组织重构理论"在牛心包片处理过程中的科学性和可行性,以寻找组织工程生物瓣膜理想的支架材... 详细信息

目的:探索"体外去细胞-明胶再基质化-碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(以下均简称EDC/NHS)交联-体内自体细胞植入"的"嵌合型组织重构理论"在牛心包片处理过程中的科学性和可行性,以寻找组织工程生物瓣膜理想的支架材料。方法:采用"明胶再基质化-EDC/NHS交联"对脱细胞牛心包组织进行嵌合处理后植入大鼠皮下,通过HE染色对比新鲜组、脱细胞组、戊二醛组、嵌合组植入前后组织形态学改变,并对各组牛心包片进行厚度检测、含水量和力学检测、钙含量测定试验,判断该嵌合方法对牛心包基质的影响。结果:基线水平抗张强度测定结果显示,嵌合组牛心包抗张强度与戊二醛组(P=0.09)及脱细胞组(P=0.56)相比较并无显著差异远低于新鲜组(P=0.001);钙含量远低于新鲜组(P<0.001)及戊二醛组(P<0.001)。包埋2月后,嵌合组牛心包钙含量远低于新鲜组(P<0.001)及戊二醛组(P<0.001)。大鼠机体对明胶嵌合组处理牛心包的浸润程度最轻,然后是戊二醛组、脱细胞组,而新鲜组的浸润程度最重。在大鼠皮下降解率明显低于脱细胞组,炎症细胞浸润程度显著低于新鲜组,与戊醛组相当。结论:作为瓣膜组织工程支架材料,嵌合型牛心包膜比戊二醛交联效果具有更好生物相容性,钙化降解低,是较好的交联方法。

关键词：嵌合型牛心包戊二醛组织工程钙含量生物相容性

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长链非编码RNA在心肌生理和病理生理功能调控中的作用

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生理科学进展 2015年第2期46卷 157-160,F0003页

作者：信满坤齐永芬柳景华首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心内科北京100029 北京大学医学部基础医学院生物活性小分子研究室分子心血管学教育部重点实验室北京100191

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一组超过200个核苷酸的非编码转录RNA,能与DNA或RNA、miRNA结合位点和启动子的靶碱基结合,改变基因表达,或者直接调节蛋白功能,参与胚胎发生发育、器官功能稳态维持以及疾病发生发展等多种... 详细信息

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一组超过200个核苷酸的非编码转录RNA,能与DNA或RNA、miRNA结合位点和启动子的靶碱基结合,改变基因表达,或者直接调节蛋白功能,参与胚胎发生发育、器官功能稳态维持以及疾病发生发展等多种生理和病理过程。近年多项研究结果表明,lncRNA不但在生理性心脏发生发育、心脏各类型细胞分化和转化过程发挥重要作用,而且在心脏疾病,如心肌肥厚、心力衰竭、心肌梗死和心脏缺血再灌注损伤等病理性疾病中,表达谱发生动态改变。

关键词：长链非编码 RNA 心脏发育心肌疾病表达谱

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绿色荧光蛋白转基因小鼠不同源性间充质干细胞原代培养及生物学特性比较

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中国病理生理杂志 2014年第6期30卷 1141-1147页

作者：辛毅李娜张颖黄益民刘飒许秀芳张兆光首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029

目的：探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠脐带和骨髓源性间充质干细胞（ MSCs ）的体外分离培养方法、生物学特性、表面标志及多向分化潜能。方法：应用Ⅱ型胶原酶消化培养法分离脐带MSCs及密度梯度离心法分离骨髓MSCs进行体外培养。在倒置显... 详细信息

目的：探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠脐带和骨髓源性间充质干细胞（ MSCs ）的体外分离培养方法、生物学特性、表面标志及多向分化潜能。方法：应用Ⅱ型胶原酶消化培养法分离脐带MSCs及密度梯度离心法分离骨髓MSCs进行体外培养。在倒置显微镜下观察2种细胞的生长特点，运用生长曲线和MTT法检测其原代细胞增殖能力，台盼蓝法测定细胞传代成活率，采用流式细胞术测定2种第3代（ P3）细胞DNA周期及表面标志物的表达，并比较其向成脂细胞和成骨细胞的分化潜能。结果：酶消化法分离培养的脐带MSCs 1 d后，细胞贴壁呈成纤维形，2 d后呈漩涡状生长且增殖明显，3 d后达80％融合即可传代；应用密度梯度离心法分离骨髓MSCs，体外培养4 d后，细胞贴壁呈圆形、梭形和多角形生长，5 d后呈克隆样生长且增殖明显，7 d后达80％融合即可传代。原代培养的脐带MSCs生长曲线近似“S”形，骨髓MSCs 生长曲线较平缓；MTT法显示脐带MSCs在3～5 d增殖较明显，骨髓MSCs 7 d后细胞增殖较明显。2种P3细胞传代成活率均为96％以上，G0／G1期细胞均为85％以上，无明显差异（P＞0．05）；2种P3细胞CD44、CD90和CD105阳性率均为（60．7±2．3）％以上高表达，CD45、CD19、CD14和CD79a均为（25．6±4．8）％低表达，两者无明显差异（ P＞0．05）；2种MSCs在体外均具有向成骨细胞和成脂细胞分化的潜能，脐带MSCs向成骨及成脂细胞分化率均为90％以上，与骨髓MSCs的分化潜能比较有显著差异（ P＜0.05）。结论：脐带MSCs较骨髓MSCs具有较强的增殖能力及分化潜能。绿色荧光蛋白转基因小鼠的脐带MSCs可作为较好干细胞示踪的细胞源。

关键词：脐带骨髓间充质干细胞生物学特性绿色荧光蛋白转基因小鼠

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小鼠骨髓间充质干细胞定向诱导分化血管内皮细胞的实验研究

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新乡医学院学报 2014年第1期31卷 8-14页

作者：辛毅李娜黄益民刘飒许秀芳张兆光首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029 北京市心肺血管疾病研究所实验中心北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院心外科北京100029

目的探讨体外小鼠骨髓间充质干细胞(mBMMSCs)的分离培养对其定向诱导分化为血管内皮细胞(VECs)的可行性。方法采用全骨髓贴壁法,分离骨髓间充质干细胞(MSCs)体外纯化培养并传代,倒置显微镜观察原代细胞形态变化,采用生长曲线法及3-(4,5... 详细信息

目的探讨体外小鼠骨髓间充质干细胞(mBMMSCs)的分离培养对其定向诱导分化为血管内皮细胞(VECs)的可行性。方法采用全骨髓贴壁法,分离骨髓间充质干细胞(MSCs)体外纯化培养并传代,倒置显微镜观察原代细胞形态变化,采用生长曲线法及3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法观察传代细胞生长特性。采用第3代mBMMSCs在内皮细胞生长培养基(EBM-2)中以血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)进行定向诱导,观察细胞形态学变化;流式细胞仪分析比较第3代mBMMSCs及诱导后细胞DNA周期、细胞免疫表型的变化;免疫细胞荧光技术分别检测CD31、vWF和CD34表达及摄取Di-lac-LDL结合FITC-UEA-1的功能特点;体外血管形成实验检测血管内皮细胞的功能。结果 mBMMSCs原代培养呈长梭形、漩涡状排列生长,P1、P2、P3细胞生长曲线及MTT法显示呈潜伏期、对数生长期及平台期生长。诱导后的部分细胞形态可见类似血管内皮样改变,呈多角形、短梭形、铺路石样排列生长;细胞周期分析显示,第3代mBMMSCs G0/G1期为86%,诱导分化后的细胞G0/G1期为92%,细胞DNA周期无明显差异;第3代mBMMSCs免疫表型结果显示为CD105、CD90、CD73、CD44阳性表达,而CD34、CD45、VEGF(CD309)、CD14阴性表达;诱导分化后的细胞VEGF(CD309)、CD34弱阳性表达,而CD105、CD90、CD73、CD44、CD45、CD14阴性表达;细胞免疫荧光技术检测第3代mBMMSCs表面CD31、vWF和CD34阴性表达,不具有摄取Dil-ac-LDL、结合FITC-UEA-1的功能特点及形成血管管腔样结构;诱导后的细胞表达VECs特异性表面标志CD31、vWF和CD34,具有摄取Di-lac-LDL、结合FITC-UEA-1的功能特点及体外可形成血管管腔样结构。结论采用全骨髓贴壁法培养的mBMMSCs在体外具有定向诱导分化为VECs的潜能,成为血管组织工程理想的细胞来源。

关键词：骨髓间充质干细胞血管内皮细胞诱导分化小鼠

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差速贴壁法分离兔骨髓源性间充质干细胞和内皮祖细胞及其生物学特性的研究

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中国实验血液学杂志 2013年第3期21卷 746-753页

作者：辛毅刘小希赵伟刘飒李娜许秀芳黄益民罗毅张宏家首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029

本研究探讨一种高效、稳定的从兔骨髓中同时分离培养间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)和内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPC)的方法并观察其生物学特性。抽取兔骨髓,应用密度梯度分离单个核细胞,采用差速贴壁经纤连... 详细信息

本研究探讨一种高效、稳定的从兔骨髓中同时分离培养间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)和内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPC)的方法并观察其生物学特性。抽取兔骨髓,应用密度梯度分离单个核细胞,采用差速贴壁经纤连蛋白包被并结合EGM-2MV培养基分别扩增MSC和EPC。用台盼蓝法测定细胞传代成活率,通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测MSC和EPC的增殖能力及诱导分化成骨细胞、成脂肪细胞能力,并结合流式细胞术(FCM)检测MSC免疫原型以鉴定MSC;细胞吞噬功能特异性地摄取Dil-ac-LDL及FITC-UEA-1,并结合CD133、VEGFR2/KDR、CD34免疫荧光鉴定EPC,并计算其纯度。结果表明,经密度梯度分离单个核细胞,在早期贴壁细胞24 h换液时即可见明显集落形成,8 d后达80%融合,细胞呈均匀一致的长梭形排列;2次贴壁细胞经EGM-2MV培养基培养,第3天开始伸展,约8 d可融合近80%,细胞呈多角形,出现条索状结构;2种细胞台盼蓝法测定细胞传代成活率均在90%以上,传至第2代后,生长曲线均近似"S"形;MTT法检测显示,细胞生长d 3至d 5时光密度值变化较明显;MSC G0-G1期为(93.32±1.65)%、EPC G0-G1为(93.05±1.95)%,2种细胞DNA周期无明显差异;早期贴壁细胞FCM检测CD90、CD44阳性率为(99.7±1.12)%、(99.1±2.33)%;CD14、CD45、CD79a阳性率分别为(4.8±0.38)%、(6.8±0.49)%及(0.4±0.08)%,经体外诱导能够向成骨细胞及脂肪细胞分化,鉴定为MSC;2次贴壁细胞传至第2代经Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色阳性率(82.1±3.4)%,CD133、VEGFR2/KDR、CD34免疫荧光染色阳性率分别为(74.2±3.2)%、(64.7±4.3)%及(43.5±1.5)%,鉴定为EPC。结论:应用密度梯度分离法结合差速贴壁筛选法可培养出高纯度的MSC,2次贴壁细胞经纤连蛋白预包被并结合EGM-2MV培养基体外诱导可培养出增殖能力较强的EPC,为组织工程学研究提供种子细胞。

关键词：差速贴壁法骨髓间充质干细胞内皮祖细胞细胞培养生物学特性

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