检索结果-内蒙古大学图书馆

心肺血管病杂志 2024年第6期43卷 635-642页

作者：董竹君张璟李扬李玉琳首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病防治协同创新中心100029

目的:探索人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)分化为心脏类器官的方法。方法:首先通过免疫荧光染色验证hiPSCs多能性标志物的表达;之后将hiPSCs培养为拟胚体(embryoid bodies,EBs),利用双向调控WNT(wingless and Int-1,WNT)信号通路法诱导EBs向心脏类器官分化,记录分化过程中的形态变化。最后,通过免疫荧光染色、实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和微电极阵列(multi-electrode array,MEA)技术检测心脏类器官的细胞成分、基因表达谱、电生理特性和收缩舒张功能,验证心脏类器官分化方案的有效性。结果:免疫荧光染色显示hiPSCs中OCT4和SSEA4高表达。利用双向调控WNT信号的方法成功诱导hiPSCs产生跳动的心脏类器官。免疫荧光染色表明心脏类器官中cTNT阳性心肌细胞比例为(59.3±12.8)%,非心肌细胞比例为(40.7±12.8)%。qRT-PCR结果表明其中非心肌细胞包括平滑肌细胞、成纤维细胞及内皮细胞。与分化15D相比,分化30D的类器官中心肌成熟相关基因和心脏各项功能相关基因表达水平更高。MEA检测结果显示,随分化时间增加,类器官逐渐具备类似在体心脏的电生理特征,跳动频率减小[分化15d时跳动(58±5)vs.30d(38±5)次/min],收缩幅度增加15d时收缩幅度[(8.57±3.7)vs.30d(16.4±5.9)%]。结论:通过该方法能使hiPSCs分化出成熟且有功能的心脏类器官。

关键词：诱导多能干细胞心脏类器官拟胚体

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单细胞转录谱揭示小鼠心肌缺血再灌注后心肌细胞的异质性研究

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心肺血管病杂志 2023年第5期42卷 500-505,509页

作者：朱硕霖邵怡辉杜杰李玉琳首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所、教育部心血管重塑相关疾病重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病防治协同创新中心 100029

目的:利用单细胞转录组测序(single-cell transcriptome sequencing,sc RNA-seq)的方法,探究小鼠心肌缺血再灌注(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)损伤后心肌细胞的异质性。方法:首先对C57BL/6J小鼠进行心肌缺血再灌注损伤模型的构建,分别对假手术组和MI/R术后24h小鼠心脏进行消化酶液灌流以分离获得单个小鼠心肌细胞。利用ICELL8?Single-Cell System平台进行单细胞转录组建库,后进行降维聚类和差异分析,以探究心肌细胞的异质性。结果:1029个心肌细胞主要分为三个亚群。相比较于假手术组,其中cluster 1在MI/R后增多,并发挥组蛋白乙酰化功能。Cluster 2在MI/R后减少,主要具有负调控血管新生,调节细胞周期等功能。Cluster 3在MI/R后数量几乎没有变化,主要发挥维持心脏发育的功能。并且在MI/R后,各心肌细胞亚群的基因同样发生显著变化。结论:以上结果表明,小鼠在缺血再灌注损伤后,心肌细胞具有显著异质性。

关键词：心肌细胞心肌缺血再灌注损伤单细胞转录组测序

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橙皮素减轻胸主动脉瘤/夹层发生发展作用的实验研究

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心肺血管病杂志 2019年第6期38卷 696-701,704页

作者：齐斐然张言真子李玉琳徐恪杜杰首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病防治协同创新中心

目的:探究橙皮素对胸主动脉瘤/夹层形成的作用。方法:利用β-氨基丙腈(BAPN)饮水28 d的方法构建小鼠主动脉瘤/夹层模型。选择C57BL/6小鼠20只,分为实验组(n=10)和对照组(n=10),实验组自第一天开始饮用含有BAPN(1 g·kg^-1·day^... 详细信息

目的:探究橙皮素对胸主动脉瘤/夹层形成的作用。方法:利用β-氨基丙腈(BAPN)饮水28 d的方法构建小鼠主动脉瘤/夹层模型。选择C57BL/6小鼠20只,分为实验组(n=10)和对照组(n=10),实验组自第一天开始饮用含有BAPN(1 g·kg^-1·day^-1)的ddH2O,对照组饮用普通ddH2O。采用大体图和弹力纤维染色观察每周主动脉变化情况。②选取C57BL/6小鼠40只,分为橙皮素20 mg/kg组(n=10)、橙皮素50 mg/kg组(n=10)、对照组(n=10)。在第14天开始给药, 1次/d,实验组给予相应剂量橙皮素溶液,对照组给予等量0. 9%氯化钠溶液。实验结束后处死存活小鼠,统计TAAD发生率和病死率;大体图观察血管直观变化;采用弹力纤维染色观察胸主动脉弹力纤维板断裂情况。③荧光标记法检测橙皮素处理后Hep G2细胞上清中基质金属蛋白酶(MMPs)活性变化;原位荧光明胶酶染色检测小鼠主动脉组织上明胶酶(MMP-2、MMP-9)活性表达。结果:给予BAPN饮水28 d的小鼠生存曲线较普通饮水组,差异有统计学意义(P<0.001),且从第14 d天后的小鼠胸主动脉开始出现不同程度病理变化,并随着时间加重。橙皮素50 mg/kg实验组与0. 9%氯化钠溶液对照组相比,小鼠病死率和TAAD形成率明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),且主动脉扩张程度减轻,弹力纤维紊乱与断裂有明显改善。20 mg/kg实验组也有类似效果,但不如前者明显。此外,橙皮素处理后的Hep G2细胞上清中MMPs活性明显下降(P<0.0001);实验组小鼠主动脉组织上明胶酶活性减弱。结论:橙皮素能够减轻主动脉瘤/夹层的发生发展,其机制可能与抑制基质金属蛋白酶活性有关。

关键词：橙皮素主动脉瘤主动脉夹层基质金属蛋白酶

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新型主动脉夹层免疫缺陷动物模型的建立

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心肺血管病杂志 2017年第4期36卷 309-313页

作者：刘璐鑫王春筱王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病防治协同创新中心 100029

目的:构建缺乏免疫反应的新型主动脉夹层(AD)动物模型,并研究不同的造模药物剂量,为探讨人源性活性物质在AD发生发展中的作用奠定实验基础。方法:将52只裸鼠随机分为实验组(42只)和对照组(10只)。实验组42只随机分为A、B、C、D四组,使... 详细信息

目的:构建缺乏免疫反应的新型主动脉夹层(AD)动物模型,并研究不同的造模药物剂量,为探讨人源性活性物质在AD发生发展中的作用奠定实验基础。方法:将52只裸鼠随机分为实验组(42只)和对照组(10只)。实验组42只随机分为A、B、C、D四组,使用不同剂量给予β-氨基丙腈(BAPN)饮水28d和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)皮下灌泵24h;对照组正常饮水28d。每7天测量一次体质量,观察体质量改变;第28天处死存活裸鼠,观察血管直观变化,使用HE和EVG染色观察形态学改变,并计算各组AD形成率及破裂率。结果:对照组无AD形成,实验组部分小鼠可见明显的主动脉扩张及壁内血肿,血管可见内膜撕裂、血细胞进入管壁,弹力纤维紊乱或断裂,证实形成AD。实验A、B、C、D组形成率分别为50%、90%、70%及80%,破裂率分别为41.67%、80%、20%及70%。结论:成功构建简单、方便的主动脉夹层免疫缺陷动物模型,并形成不同的形成、破裂率,以适应不同研究方案。

关键词：主动脉夹层免疫缺陷动物 β-氨基丙腈血管紧张素Ⅱ 动物模型

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基于小鼠横向主动脉缩窄模型建立及超声影像的动态观察

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心肺血管病杂志 2015年第7期34卷 575-579页

作者：刘婷婷王月丽李平刘旭霞王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病防治协同创新中心 100029

目的:超声影像动态观察小鼠横向主动脉缩窄模型的心功能变化过程,探讨此模型法能否模拟临床早期心力衰竭病理过程。方法:100只,C57/B6L,雄性小鼠,体质量(22±3)g,随机分成假手术组(15只)和模型组(85只)。分别于手术后第1周分析结扎... 详细信息

目的:超声影像动态观察小鼠横向主动脉缩窄模型的心功能变化过程,探讨此模型法能否模拟临床早期心力衰竭病理过程。方法:100只,C57/B6L,雄性小鼠,体质量(22±3)g,随机分成假手术组(15只)和模型组(85只)。分别于手术后第1周分析结扎处血流速度峰值,第1,2,3,4,5,6及第8周使用小动物超声影像分析左心室心肌收缩功能和室腔变化。结果:术前小鼠主动脉弓内径为(1.161±0.025)mm,手术缩窄后主动脉弓横截面积为缩窄前横截面积的(19±1)%。模型第1周,超声检测缩窄处的血流峰值为(2279±54)mm/s,为假手术组血流峰值的2.85倍(P<0.01)。第4周,模型组左心室质量/体质量比值显著增加,超声影像学分析显示,左心室前壁舒张末厚度增加42.1%,左心室后壁舒张末厚度增加31.1%,左心室重量增加56.0%,与假手术组相比(分别P<0.01);组织切片WGA染色结果显示模型组心肌细胞横截面积明显增大,与假手术组相比(P<0.05);第8周,模型组小鼠左心室射血分数降低32.3%,短轴缩短率降低38.6%,与假手术组相比(分别P<0.01)。结论:横向主动脉缩窄第4周特征为左心室肥厚、心肌肥大,模拟了临床上心力衰竭早期的病理生理过程。

关键词：横向主动脉缩窄心肌肥大心脏重塑

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急性主动脉夹层患者补体活化及补体C3a受体表达的临床意义

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心肺血管病杂志 2016年第3期35卷 166-169,174页

作者：任卫红刘燕王雪蕊王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病防治协同创新中心 100029

目的:揭示急性主动脉夹层发生中,是否存在补体系统活化及补体活化产物C3a受体的表达变化。方法:收集2015年1月至2015年7月,在北京安贞医院接受体检的正常人、腹主动脉瘤手术以及急性主动脉夹层手术患者血液各5例,进行微量样本多指标流... 详细信息

目的:揭示急性主动脉夹层发生中,是否存在补体系统活化及补体活化产物C3a受体的表达变化。方法:收集2015年1月至2015年7月,在北京安贞医院接受体检的正常人、腹主动脉瘤手术以及急性主动脉夹层手术患者血液各5例,进行微量样本多指标流式蛋白定量试验,测定其补体系统活化产物过敏毒素C3a、C4a和C5a的水平;收集2015年1月至2015年7月,在北京安贞医院接受主动脉弓部替换术患者的升主动脉组织5例及心脏移植供受体正常的升主动脉组织5例,进行免疫组化组织染色,并提取蛋白,检测C3a受体的表达。结果:微量样本多指标流式蛋白定量试验结果显示,腹主动脉瘤和急性主动脉夹层患者血浆中补体活化产物C3a、C4a和C5a含量显著高于正常对照组(P<0.01),这说明补体活化不仅在腹主动脉瘤,急性主动夹层患者循环系统也存在。免疫印迹结果显示急性主动脉夹层患者标本中C3a受体蛋白表达量显著高于正常对照组(P<0.05)。免疫组化染色发现,与正常升主动脉壁相比较,急性主动脉夹层标本的C3a受体表达显著增高(P<0.01)。结论:急性主动脉夹层患者体内存在补体系统活化C3a-C3a受体信号通路,可能参与主动脉夹层的发生发展。

关键词：补体系统 C3a受体急性主动脉夹层

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微小核糖核酸-223-3p对心脏缺血/再灌注损伤后心脏重构的影响

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心肺血管病杂志 2018年第3期37卷 231-234,243页

作者：李芸芸李玉琳王绿娅陈博雅张聪聪杜杰首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室科研基地建设心血管重大疾病防治协同创新中心(2011协同创新中心) 100029

目的:探讨微小核糖核酸-223-3p(miR-223)在小鼠心脏缺血/再灌注损伤(I/R)导致心脏重构中的作用及对心肌细胞氧化应激的影响。方法:随机选取9只,雄性,miR-223缺陷小鼠,为miR-223缺陷组;野生型C57BL/6J,雄性小鼠,9只,为对照组,均结扎冠状... 详细信息

目的:探讨微小核糖核酸-223-3p(miR-223)在小鼠心脏缺血/再灌注损伤(I/R)导致心脏重构中的作用及对心肌细胞氧化应激的影响。方法:随机选取9只,雄性,miR-223缺陷小鼠,为miR-223缺陷组;野生型C57BL/6J,雄性小鼠,9只,为对照组,均结扎冠状动脉前降支30min后拔出结扎线复制I/R模型。28d后测量小鼠体质量、心脏重量及胫骨长度,计算心脏重量与体质量比和心脏重量与胫骨长度比。收取心脏组织进行切片,Masson染色检测小鼠心脏肥大和纤维化情况。体外培养H9C2心肌细胞,用miR-223 mimic转染H9C2使其过表达miR-223后,缺氧/复氧刺激H9C2心肌细胞,检测活性氧自由基(ROS)的水平。结果:与对照组小鼠相比,术后28d miR-223缺陷组小鼠心脏重量与体质量比和心脏重量与胫骨长度比明显增高(均P<0.01),心脏纤维化增加[(5.16±2.11)vs.(13.19±1.96)%,P<0.05];miR-223 mimic转染心肌细胞后,miR-223的表达水平上调218.59倍;体外培养心肌细胞miR-223过表达能显著降低ROS的释放[(22.42±0.78)vs.(18.62±0.62)%,P<0.01]。结论:microRNA-223-3p可能通过抑制心肌细胞氧化应激减轻心脏缺血/再灌注损伤后心脏重构。

关键词：心脏缺血/再灌注损伤心脏重塑 microRNA-223-3p 氧化应激 ROS

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脂质运载蛋白2对腹主动脉瘤小鼠巨噬细胞表型转化的调节

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中国医药 2017年第3期12卷 447-451页

作者：孙颉李玉琳武栗妃张聪聪王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院心血管重塑相关疾病教育部重点实验室科研基地建设心血管重大疾病防治协同创新中心(2011协同创新中心)北京市心肺血管疾病研究所 100029

目的探讨脂质运载蛋白2（LCN2）对弹力蛋白酶灌注诱导的腹主动脉瘤病变中巨噬细胞表型的影响。方法10只野生型雄性C57BL／6小鼠和10只LCN2基因敲除（LCN2-／-）雄性小鼠分别列为野生型灌注组和LN2-／-灌注组，开腹肾下腹主动脉给予1％... 详细信息

目的探讨脂质运载蛋白2（LCN2）对弹力蛋白酶灌注诱导的腹主动脉瘤病变中巨噬细胞表型的影响。方法10只野生型雄性C57BL／6小鼠和10只LCN2基因敲除（LCN2-／-）雄性小鼠分别列为野生型灌注组和LN2-／-灌注组，开腹肾下腹主动脉给予1％弹力蛋白酶灌注8min。于灌注后14d采用颈椎脱臼法处死小鼠并获取腹主动脉瘤组织样本，采用免疫组织化学法和实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测小鼠病变组织中白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF—α）、趋化蛋白1（MCP—1）、IL—10的表达水平。另外分离野生型小鼠和LCN2-／-小鼠各6只的骨髓巨噬细胞，以脂多糖刺激6h，PCR检测细胞中IL-1β、IL-6、TNF—α、MCP-1和IL-10水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF—α、MCP-1和IL-10水平；体外分别给予磷酸盐缓冲液（PBS）和LCN2预处理野生型小鼠巨噬细胞，30min后给予脂多糖刺激6h，分别检测上述指标。组间做比较。结果与野生型灌注组比较，LCN2-／-灌注组的IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1的表达水平明显升高，IL-10的表达水平明显降低，差异有统计学意义[（0．0119±0．0051）比（0．0028±0．0013）、（0．0134±0．0053）比（0．0036±0．0016）、（0．0129±0．0061）比（0．0031±0．0020）、（0．0125±0．0042）比（0．0024±0．0005）、（0．0003±0．0001）比（0．0029±0．0022）]（P〈0．01或P〈0．05）。体外脂多糖刺激下，LCN2-／-巨噬细胞较野生型巨噬细胞IL—1β、IL-6、TNF-α、MCP-1的表达明显增多，而IL-10明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。体外培养野生型巨噬细胞给予LCN2预处理，与PBS预处理比较，IL—10明显增多，同时抑制IL—1β，IL-6，TNF-α，MCP-1的产生（P〈0．01或P〈0．05）。结论LCN2可以通过调节巨噬细胞由M1型向M2型转化抑制弹力蛋白酶灌注诱导的腹主动脉瘤。

关键词：主动脉瘤腹脂质运载蛋白2 巨噬细胞表型转化

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多巴胺受体5活化对内毒素介导的急性肾脏炎症的影响

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中国医药 2016年第3期11卷 381-385页

作者：武栗妃李玉琳阚晓玉孙颉王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心血管重塑相关疾病教育部重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病防治协同创新中心(2011协同创新中心) 100029

目的探讨多巴胺受体5（D5R）激动剂非诺多泮对内毒素介导的急性肾脏炎症的影响.方法提取C57BL/6J小鼠骨髓单核巨噬细胞,蛋白质印迹法检测细胞中D1R ～ D5R蛋白水平,免疫荧光方法观察D5R在骨髓单核巨噬细胞中的表达.21只雄性C57BL/6J... 详细信息

目的探讨多巴胺受体5（D5R）激动剂非诺多泮对内毒素介导的急性肾脏炎症的影响.方法提取C57BL/6J小鼠骨髓单核巨噬细胞,蛋白质印迹法检测细胞中D1R ～ D5R蛋白水平,免疫荧光方法观察D5R在骨髓单核巨噬细胞中的表达.21只雄性C57BL/6J小鼠完全随机分为盐水组、盐水联合脂多糖组、非诺多泮联合脂多糖组,每组7只,采用腹腔注射的方法相应组别分别给予0.9％氯化钠注射液和非诺多泮;30 min后分别给予脂多糖和0.9％氯化钠注射液腹腔注射.于注射后6h采用实时荧光定量-聚合酶链反应（qRT-PCR）的方法检测肾脏D5R,肿瘤坏死因子（TNF）-α,干扰素-γ mRNA的水平;免疫组织化学染色观察肾脏单核巨噬细胞的浸润;检测血清中TNF-α,干扰素-y的水平.分离骨髓细胞,以巨噬细胞集落刺激因子诱导制备骨髓单核巨噬细胞.分别给予磷酸盐缓冲液和非诺多泮预处理巨噬细胞,5 min后给予脂多糖刺激12 h,酶联免疫吸附试验的方法检测巨噬细胞内环磷酸腺苷水平,qRT-PCR方法检测单核巨噬细胞中TNF-α,干扰素-γ mRNA水平.结果核细胞中以D5R表达为主.与盐水组比较,盐水联合脂多糖组小鼠肾脏D5R mRNA水平明显高[（110.5±3.7）比（1.2±1.0）,P＜0.001].与盐水联合脂多糖组比较,非诺多泮联合脂多糖组可以明显抑制脂多糖介导的肾脏炎症因子TNF-α、干扰素-γmRNA水平的升高[（0.089 ±0.007）比（0.231 ±0.019）、（0.363 ±0.102）比（0.920±0.007）,P＜0.01],骨髓单核细胞在肾脏的浸润以及血清炎症因子TNF-α及干扰素-γ的水平[（22±5）比（236 ±20）、（18±6）比（76±10）,P＜0.01或P＜0.05].体外培养骨髓单核巨噬细胞给予非诺多泮后环磷酸腺苷的产生明显增多[（8.726±0.909）nmol/L比（0.348 ±0.024） nmol/L,P＜0.01]、同时明显抑制TNF-α、干扰素-γ的产生[（0.669 ±0.010）比（1.362 ±0.199）、（0.896±0.071）比（2.854±0.270）,P＜0.05].结论 D5R在骨髓单核巨噬细胞上有表达,D5R活化可以明显抑制内毒素介导的急性肾脏炎性反应.

关键词：多巴胺受体5 肾脏炎症

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心肌梗死后细胞衰老的关键调控基因及随时间变化规律的研究

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心肺血管病杂志 2024年第10期43卷 1105-1111页

作者：栗慧琴张俊蒙刘燕俞锫杰刘洁云秦雷新乡医学院 453003 北京市垂杨柳医院心脏中心首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病防治协同创新中心河南省开封市中心医院心内科

目的:探究急性心肌梗死后心脏中细胞衰老关键调控基因及其随时间变化规律。方法:结扎小鼠心脏冠状动脉建立急性心肌梗死模型。8~10周龄,雄性,C57BL/6J小鼠,30只随机分为三组:心肌梗死0d(6只)、3d(12只)和7d(12只)。在相应实验终点收取... 详细信息

目的:探究急性心肌梗死后心脏中细胞衰老关键调控基因及其随时间变化规律。方法:结扎小鼠心脏冠状动脉建立急性心肌梗死模型。8~10周龄,雄性,C57BL/6J小鼠,30只随机分为三组:心肌梗死0d(6只)、3d(12只)和7d(12只)。在相应实验终点收取心脏组织,提取RNA进行转录组测序,分析心肌梗死3d和0d的差异表达基因;从CellAge数据库获得细胞衰老相关基因,与上述差异基因取交集获得心肌梗死后细胞衰老相关基因,并通过蛋白-蛋白互作分析筛选其中的关键(Hub)基因;进一步分析Hub基因的功能,并通过转录组测序数据以及实时荧光定量聚合酶链式反应揭示其在心肌梗死后3d和7d的表达变化情况。结果:共获得129个心肌梗死后细胞衰老相关基因,通过蛋白互作分析筛选出连接度最高的10个Hub基因白细胞介素6、趋化因子配体2、周期素依赖性激酶抑制因子1a、组蛋白去乙酰化酶1、周期素依赖性激酶抑制因子2a、前列腺素内过氧化物合酶2、Toll样受体2、E2F转录因子1、神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同源物和细胞交流网络因子2,其功能与炎症、代谢、细胞周期等相关;其中9个Hub基因在心肌梗死后3d和7d表达均比0d升高,但大多表现出随时间延长其表达水平先升后降的情况。结论:急性心肌梗死后细胞衰老相关基因表达发生显著改变,白细胞介素6等细胞衰老hub基因可能主要参与了心肌梗死后炎症、代谢、细胞周期等生物过程,其表达随时间呈现先升后降的趋势。

关键词：心肌梗死细胞衰老关键基因转录组测序

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