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2014北京大学心血管转化医学论坛

作者：赵帆齐玥刘静刘军孙佳艺王淼谢武祥秦兰萍赵冬首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所流行病研究室北京 100029

基础研究显示极低密度脂蛋白受体(VLDL-R)直接参与极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)致动脉粥样硬化(AS)的病理过程,但在人群中VLDL-R,VLDL-C和AS三者的关系尚不清楚.本文用横断面数据初步探讨了VLDL-R对VLDL-C与AS关系的影响.结果显示，VLD... 详细信息

基础研究显示极低密度脂蛋白受体(VLDL-R)直接参与极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)致动脉粥样硬化(AS)的病理过程,但在人群中VLDL-R,VLDL-C和AS三者的关系尚不清楚.本文用横断面数据初步探讨了VLDL-R对VLDL-C与AS关系的影响.结果显示，VLDL-R mRNA表达对VLDL-C水平与AS的关系有效应修饰作用.VLDL-C位于低水平的人群,如果VLDL-R mRNA表达水平升高同样需要引起重视.

关键词：动脉粥样硬化极低密度脂蛋白受体蛋白胆固醇效应修饰作用

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血清代谢组与高血压发生风险的巢式病例对照研究

血清代谢组与高血压发生风险的巢式病例对照研究

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2014北京大学心血管转化医学论坛

作者：郝永臣郗璐李国齐赵帆齐玥刘静赵冬首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所流行病研究室北京 100029

目的：在巢式病例对照人群中,筛查与高血压发生风险相关的小分子代谢物. 方法：本研究对1133名正常血压个体进行为期5年的随访,其中460名研究对象基线时为理想血压(＜120/80 mmHg).笔者选取29名基线为理想血压且随访过程中发生高血... 详细信息

目的：在巢式病例对照人群中,筛查与高血压发生风险相关的小分子代谢物. 方法：本研究对1133名正常血压个体进行为期5年的随访,其中460名研究对象基线时为理想血压(＜120/80 mmHg).笔者选取29名基线为理想血压且随访过程中发生高血压的研究对象,并按照年龄、性别和基线收缩压匹配的方法挑选29名基线和随访均为理想血压的对照.采用气相色谱-质谱联用方法对研究对象基线血清进行代谢组学检测.采用t检验和logistic回归分析基线代谢物水平与高血压发生风险之间的关系. 结果：本研究共鉴别出241种小分子代谢物,其中26种代谢物基线水平在高血压组和对照组存在差别.在调整体重指数、吸烟和饮酒后,16种代谢物与高血压发生风险存在显著关联.氨基酸水平(包括两种必需氨基酸,苏氨酸和苯丙氨酸)与高血压发生风险呈负相关.来苏糖为肠道微生物发酵产物,血清较高的来苏糖水平与高血压发生风险升高显著相关.通路分析表明与高血压发生风险相关的26种代谢物富集于3条代谢通路,分别为苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成代谢通路,氨酰tRNA生物合成代谢通路和氮代谢通路. 结论：本研究发现多个小分子代谢物与高血压发生风险相关.研究结果表明氨基酸和肠道细菌代谢可能在高血压发生过程中起重要作用.

关键词：高血压巢式病例血清代谢相关性分析

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自噬相关基因5下调抑制血管紧张素Ⅱ介导的巨噬细胞凋亡

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中国分子心脏病学杂志 2014年第1期14卷 807-811页

作者：赵伟李玉琳贾立昕石洪涛张文美杜杰首都医科大学附属北京安贞医院教育部重塑相关心血管疾病重点实验室北京市心肺血管疾病研究所北京市100029

目的探讨自噬相关基因5(autophagy-related gene5,Atg5)在血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)诱导高血压心脏损伤中对巨噬细胞凋亡的影响。方法 40只雄性C57BL/6小鼠及10只Atg5+/-分为对照组,AngⅡ灌泵1d组,AngⅡ灌泵3d组,AngⅡ灌泵7d... 详细信息

目的探讨自噬相关基因5(autophagy-related gene5,Atg5)在血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)诱导高血压心脏损伤中对巨噬细胞凋亡的影响。方法 40只雄性C57BL/6小鼠及10只Atg5+/-分为对照组,AngⅡ灌泵1d组,AngⅡ灌泵3d组,AngⅡ灌泵7d组和Atg5+/-灌泵组,每组10只。给予乙酸溶液(对照组)及AngⅡ(1500ng/kg*min)微量泵灌注。TUNEL染色观察心脏中细胞凋亡,免疫荧光共染明确凋亡细胞类型;qPCR检测Atg5+/-小鼠心脏中Atg5表达;TUNEL染色观察心脏中细胞凋亡,QuantiGenePlex(QGP)检测凋亡因子表达;体外AngⅡ刺激WT和Atg5+/-骨髓巨噬细胞,免疫荧光共染,检测巨噬细胞凋亡。结果 WT小鼠心脏于AngⅡ灌注1-7d后,TUNEL染色阳性细胞数显著增加,荧光共染显示凋亡细胞为巨噬细胞;Atg5+/-小鼠心脏中Atg5表达量较WT小鼠心脏降低53%;AngⅡ灌注7d后,与WT鼠相比,Atg5+/-小鼠心脏TUNEL染色阳性细胞数降低,促凋亡因子Caspase3、Caspase8、Caspase12表达降低。体外AngⅡ刺激下,Atg5+/-骨髓巨噬细胞较WT骨髓巨噬细胞凋亡减少。结论在AngⅡ致高血压心脏损伤中,Atg5下调可导致心脏中巨噬细胞凋亡下降。

关键词：高血压心脏损伤炎症巨噬细胞凋亡 Atg5

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利用目标基因测序技术发现马方综合征FBN1新突变

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心肺血管病杂志 2014年第4期33卷 596-598,603页

作者：郭俊蔡伦李小燕王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心血管重塑相关疾病教育部重点实验室100029

目的：建立目标基因捕获结合第二代测序技术,对马方综合征（Marfan syndrome,MFS）患者的原纤维蛋白-1（fibrillin-1,FBN1）基因进行突变筛查,探讨MFS与FBN1基因突变的关系.方法：提取5例MFS患者外周血全基因组DNA,利用GenCap目标基因... 详细信息

目的：建立目标基因捕获结合第二代测序技术,对马方综合征（Marfan syndrome,MFS）患者的原纤维蛋白-1（fibrillin-1,FBN1）基因进行突变筛查,探讨MFS与FBN1基因突变的关系.方法：提取5例MFS患者外周血全基因组DNA,利用GenCap目标基因捕获技术（北京迈基诺公司）,设计FBN1的65个外显子区域特异性捕获探针,与基因组DNA文库进行杂交,将目标基因组区域的DNA片段进行富集后,再利用illumina hiseq2000第二代测序仪进行测序,通过数据分析,确定突变位点,用Sanger测序法对突变位点进行验证.结果：设计合成的目标基因特异性捕获探针可有效地捕捉并富集基因组DNA的目标靶片段.5例患者目标区域平均测序深度为173.85 ～ 280.73,97.10％～ 98.00％目标区域＞4×覆盖度.经过数据分析及Sanger测序验证,发现1个新的无义突变c.5968 C＞T（***1990X）.结论：本研究所建立的GenCap目标基因捕获技术结合illumina hiseq2000第二代测序技术成功的发现了FBN1的新突变.该方法快速而有效,可以使我们对MFS分子病因学有更好的认识.

关键词：马方综合征原纤维蛋白-1 目标基因捕获第二代测序

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目标基因捕获结合第2代测序技术检测原发性高血压致病基因突变

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新乡医学院学报 2014年第6期31卷 414-416,419页

作者：郭俊蔡伦李小燕王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室北京100029

目的建立目标基因捕获结合第2代测序技术,对原发性高血压（EH）患者的13个已知致病基因进行突变筛查,探讨EH与致病基因突变的关系。方法提取5例EH患者外周血全基因组DNA,利用GenCap目标基因捕获技术,设计内皮素转化酶1（ECE1）、G蛋白... 详细信息

目的建立目标基因捕获结合第2代测序技术,对原发性高血压（EH）患者的13个已知致病基因进行突变筛查,探讨EH与致病基因突变的关系。方法提取5例EH患者外周血全基因组DNA,利用GenCap目标基因捕获技术,设计内皮素转化酶1（ECE1）、G蛋白调节信号5（RGS5）、钠钾三磷腺苷酶通道β1多肽（ATP1β1）、选择素E（SELE）、血管紧张素原（AGT）、血管紧张素受体1（AGTR1）、α-内收蛋白（ADD1）、细胞色素P450 3A亚家族多肽5（CYP3A5）、一氧化氮合酶3（NOS3）、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β3（GNβ3）、一氧化氮合酶2A（NOS2A）、苯基乙醇胺N-甲基转移酶（PNMT）和前列腺素I2合成酶（PTGIS）基因外显子区域特异性捕获探针,与基因组DNA文库进行杂交,将目标基因组区域的DNA片段进行富集后,再利用Illumina HiSeq 2000第2代测序仪进行测序,通过数据分析,确定突变位点,对选定的突变位点用Sanger测序法验证。结果设计合成的目标基因特异性捕获探针可有效捕捉并富集基因组DNA的目标靶片段。目标区域平均测序深度为301.12~431.92,99.30%~99.70%目标区域覆盖度。5例患者中ADD1基因发现3个错义突变;AGT基因发现1个错义突变;SELE基因发现2个错义突变;PNMT基因发现1个剪切位点突变;PTGIS基因发现1个错义突变。结论 GenCap目标基因捕获技术结合Illumina HiSeq 2000第2代测序技术成功发现了EH患者的致病基因突变。该方法快速有效,对深入研究EH的分子病因学有重要意义。

关键词：原发性高血压致病基因目标基因捕获第2代测序

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小动物活体成像技术在结肠癌肝转移研究中的应用

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首都医科大学学报 2014年第4期35卷 468-472页

作者：朴春梅刘旭霞王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室北京100029

目的利用表达荧光素酶基因的稳定细胞株及小动物活体成像平台,观察小鼠SL4结肠癌肝转移及血管新生情况。方法利用表达荧光素酶SL4-luc结肠癌细胞株,通过小动物活体成像系统检测结肠癌肝转移的情况,通过血管新生的近红外线探针观察肝转... 详细信息

目的利用表达荧光素酶基因的稳定细胞株及小动物活体成像平台,观察小鼠SL4结肠癌肝转移及血管新生情况。方法利用表达荧光素酶SL4-luc结肠癌细胞株,通过小动物活体成像系统检测结肠癌肝转移的情况,通过血管新生的近红外线探针观察肝转移灶中血管新生情况。结果利用小动物活体成像系统,生物发光技术确定了结肠癌细胞肝转移,近红外线探针活性确定了肝转移的灶中血管新生。结论在结肠癌肝转移过程中,应用小动物活体成像技术,确定了结肠癌的肝转移及血管新生。

关键词：活体成像生物发光近红外发光结肠癌肝转移

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小动物活体成像生物发光稳定细胞株的构建

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新乡医学院学报 2014年第6期31卷 417-419页

作者：朴春梅邱淑兰刘飒王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室北京100029

目的构建能用于小动物活体成像系统的、能稳定表达荧光素酶基因的小鼠Panc02胰腺癌细胞株制作动物模型。方法利用表达荧光素酶基因pGL4.20为载体,转染小鼠Panc02胰腺癌细胞株,通过检测荧光素酶活性,检测其表达效果,通过嘌呤霉素筛选稳... 详细信息

目的构建能用于小动物活体成像系统的、能稳定表达荧光素酶基因的小鼠Panc02胰腺癌细胞株制作动物模型。方法利用表达荧光素酶基因pGL4.20为载体,转染小鼠Panc02胰腺癌细胞株,通过检测荧光素酶活性,检测其表达效果,通过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株,挑选高表达荧光素酶基因的单克隆细胞株,并利用此细胞株在小动物活体成像系统中确认小鼠胰腺癌皮下肿瘤形成。结果构建了表达荧光素酶基因的Panc02稳定转染细胞株,并且在体内形成皮下肿瘤。结论构建了高表达荧光素酶基因的Panc02稳定转染细胞株。

关键词：稳定细胞株活体成像生物发光胰腺癌

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Affymetrix基因芯片研究高血压对小鼠血管基因表达的影响

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心肺血管病杂志 2014年第2期33卷 258-262页

作者：王吉静李玉琳王月丽郑帅王绿娅李汇华杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所省部共建心血管重塑相关疾病教育部重点实验室北京100029

目的:利用基因芯片技术研究高血压早期血管损伤中基因表达变化。方法:30只8周龄雄性C57BL/6J小鼠,分为对照组和Ang II(血管紧张素II)组,采用置入式胶囊渗透压泵分别灌注0.9%氯化钠液和Ang II(1 500 ng·kg-1·min-1),于第3天,第... 详细信息

目的:利用基因芯片技术研究高血压早期血管损伤中基因表达变化。方法:30只8周龄雄性C57BL/6J小鼠,分为对照组和Ang II(血管紧张素II)组,采用置入式胶囊渗透压泵分别灌注0.9%氯化钠液和Ang II(1 500 ng·kg-1·min-1),于第3天,第7天取胸主动脉,提取核糖核酸(RNA),进行基因芯片分析;利用鼠尾套法检测Ang II灌泵3 d及7 d后小鼠尾动脉血压、苏木精伊红染色(HE)染色检测血管结构;实时定量聚合酶链式反应(PCR)验证Ang II灌泵7 d时部分芯片结果。结果:与对照组相比,Ang II组在灌泵7 d时血压升高[(104±4)vs.(146±6)mmHg(1mmHg=0.133kPa),P<0.001];基因芯片结果显示3d时有67个基因表达上调,27个基因表达下调,7d时有31个基因表达上调,没有检测下调基因;PCR验证磷酸分泌蛋白1(SPP1),金属蛋白酶组织抑制因子1(Timp1),4域跨膜超家族A,4C(MS4a4c),胰岛素样生长因子结合蛋白2(Igfbp2),重组激活基因1(Rag1)均表达升高。结论:Ang II导致高血压情况下,血管组织基因表达变化,可能参与高血压血管损伤的过程。

关键词：高血压血管损伤基因芯片炎症反应血管紧张素Ⅱ

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瓣膜性心脏病患者血浆基质金属蛋白酶-2,9的活性水平与心脏重塑相关性

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临床和实验医学杂志 2014年第17期13卷 1423-1426页

作者：陈新军薛辉刘洁琳温绍君陕西省人民医院急诊内科陕西西安710068 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所高血压研究室北京100029

目的探测瓣膜性心脏病(VHD)患者血浆基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9活性水平与心脏重塑指标左心室质量指数(LVMI)之间的关系。方法利用明胶酶谱方法测定147例VHD患者(观察组)和74例健康人(对照组)的血浆MMP-2、MMP-9的活性水平,分析两... 详细信息

目的探测瓣膜性心脏病(VHD)患者血浆基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9活性水平与心脏重塑指标左心室质量指数(LVMI)之间的关系。方法利用明胶酶谱方法测定147例VHD患者(观察组)和74例健康人(对照组)的血浆MMP-2、MMP-9的活性水平,分析两者与心脏重塑指标的关系。结果心脏重塑组患者的血浆MMP-2、MMP-9的活性高于对照组和非心脏重塑组(P均<0.05),非心脏重塑组患者的MMP-2、MMP-9活性水平高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。血浆MMP-2、MMP-9活性水平与LVMI明显正相关(r=0.542、0.566,P均<0.05)。结论 MMP-2、MMP-9在VHD患者心脏重塑的发生和发展过程中起着一定的作用,有可能用来预测VHD患者发生心脏重塑的进展及预后。

关键词：瓣膜性心脏病基质金属蛋白酶酶谱分析心脏重塑心力衰竭

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靶向外显子捕获芯片在家族性高胆固醇血症基因诊断中的应用

靶向外显子捕获芯片在家族性高胆固醇血症基因诊断中的应用

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2014北京大学心血管转化医学论坛

作者：武文峰孙立元伍健潘晓冬王绿娅首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所动脉硬化研究室北京市 100029 美国迈基诺北京公司北京 100029

利用自行设计研制脂代谢相关的基因靶向外显子捕获芯片,检测患者未知致病基因,选择临床确诊的纯合忠者,明确诊断患者的未知基因突变,探讨基因芯片在中国FH基因诊断中的应用价值.以30例临床诊断纯合的FH患者为对象,提取外周血DNA,通过靶... 详细信息

利用自行设计研制脂代谢相关的基因靶向外显子捕获芯片,检测患者未知致病基因,选择临床确诊的纯合忠者,明确诊断患者的未知基因突变,探讨基因芯片在中国FH基因诊断中的应用价值.以30例临床诊断纯合的FH患者为对象,提取外周血DNA,通过靶向外显子捕获芯片结合二代测序技术及生物信息方法发现突变位点,验证已知基因突变并明确未知基因突变,对检出的未知突变位点进行一代测序验证,FinchTV 1.4.0软件读取测序结果与GeneBank参考序列比对,确定突变位置及类型.笔者研发的靶向外显子捕获芯片准确性高、可靠性强,不仅可检出3种已知基因的突变位点,还可检测到脂代谢相关基因的变异及大量的SNP信息.与传统的全外显子捕获及测序方法比较,具有快速、高效和费用低廉等特点,值得临床推广.

关键词：家族性高胆固醇血症基因诊断靶向外显子捕获芯片临床应用

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