检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2023年第4期54卷 1525-1534页

作者：王涵蒙利洁刘文娇徐永健龚婷贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025

旨在探究 TAS1 R3基因通过mTOR对从江香猪自噬相关基因表达的影响。本试验选择30日龄健康雄性从江香猪3头,采集睾丸组织并培养出睾丸间质细胞。将构建成功的干扰载体和空载体转染至细胞中,利用qRT-PCR检测其对 TAS 1R3基因表达影响,运用... 详细信息

旨在探究 TAS1 R3基因通过mTOR对从江香猪自噬相关基因表达的影响。本试验选择30日龄健康雄性从江香猪3头,采集睾丸组织并培养出睾丸间质细胞。将构建成功的干扰载体和空载体转染至细胞中,利用qRT-PCR检测其对 TAS 1R3基因表达影响,运用qRT-PCR和Western blot检测 TAS1 R3基因干扰后对味觉受体第一家族一号受体(TAS1R1)、细胞外信号调节激酶1(ERK1 ) 、细胞外信号调节激酶2(ERK2)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、 BECN1 和微管相关蛋白1轻链3β(MAP1LC3B)表达的影响。结果表明,当 TAS 1R3基因被干扰后,相较于shRNA-NC对照组, TAS 1R1、 ERK 1、 ERK 2、 mTOR 基因mRNA表达量均极显著降低( P <0.01),自噬因子 BECN1 和 MAP 1LC3B表达量极显著升高( P <0.01)。Western blot结果表明当 TAS 1R3基因被干扰后,与 shRNA-NC 对照组相比,蛋白T1R3、T1R1、p-mTOR、p-S6K1、p-ERK12均极显著降低( P <0.01),而自噬蛋白 Beclin 1 表达量极显著升高( P <0.01)。本试验通过将 TAS 1R3基因干扰载体转染至睾丸间质细胞,发现当 TAS 1R3基因被干扰后可通过影响 mTOR 基因的表达,调控其下游自噬因子的表达,提示 TAS 1R3基因与睾丸间质细胞的自噬密切相关,这为进一步研究 TAS 1R3基因通过调节自噬影响香猪生殖活动提供了借鉴。

关键词：从江香猪 T1R3 RNA干扰睾丸间质细胞自噬

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关岭牛MEF2A基因干扰载体构建及其转染对成肌细胞的影响

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畜牧兽医学报 2023年第2期54卷 584-595页

作者：孙金魁许厚强石鹏飞阮涌贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025

旨在构建肌细胞增强因子MEF2A(myocyte enhancer factor 2A)基因的重组干扰载体,探究MEF2A基因对牛成肌细胞的影响。本研究选择3头健康的3日龄雌性关岭牛,体重约为21 kg,采集背最长肌组织成功培养成肌细胞。设计MEF2A基因的4对shRNA干... 详细信息

旨在构建肌细胞增强因子MEF2A(myocyte enhancer factor 2A)基因的重组干扰载体,探究MEF2A基因对牛成肌细胞的影响。本研究选择3头健康的3日龄雌性关岭牛,体重约为21 kg,采集背最长肌组织成功培养成肌细胞。设计MEF2A基因的4对shRNA干扰序列和1对NC阴性对照序列,将其连接至pGPU6-GFP-Neo载体上,转染重组载体至关岭牛成肌细胞。采用qRT-PCR法筛选干扰效率最佳的载体,并检测干扰MEF2A基因对肌生成因子MEF2B、MEF2C、MEF2D,周期与凋亡因子CDK2、CCNA2、BCL2 mRNA表达水平的影响;随后利用流式细胞仪与酶标仪探究干扰载体对成肌细胞增殖生长的影响,各试验组别设置3个生物学重复。同时运用在线软件预测牛MEF2A蛋白理化性质与网络谱图。结果显示,本研究成功筛选出干扰效率最佳的shRNA-MEF2A-3载体(P<0.01)。MEF2A基因被抑制后,成肌细胞中MEF2B、MEF2C与MEF2D基因表达量均极显著上调(P<0.01);CDK2与BCL2表达量皆显著下调(P<0.05),CCNA2表达量极显著下调(P<0.01);与对照组相比,干扰组细胞周期明显延长,干扰组成肌细胞在6 h后的增殖活性均极显著低于对照组(P<0.01)。由此可初步推测,MEF2A干扰载体成功转染至牛成肌细胞后,可有效抑制MEF2A基因表达,改变基因表达模式,影响了关岭牛成肌细胞的分裂增殖,为进一步探究MEF2A基因对关岭牛肉质性状调控机制和挖掘地方种质资源提供数据支撑。

关键词：关岭牛 MEF2A基因干扰成肌细胞细胞增殖

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鸡GDF5基因遗传多样性及生物信息学分析

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基因组学与应用生物学 2015年第5期34卷 955-961页

作者：郭发荣陈彬李太山张小卿綦世金贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州大学动物科学学院贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州大学贵阳550025

为分析鸡GDF5基因的遗传多样性及结构与功能,本试验采用DNA池结合PCR产物直接测序法和生物信息学对9个鸡品种11种样品的GDF5基因进行研究。试验共检测出10个SNPs,且全为同义突变,突变后RNA二级结构发生变化,自由能变小,稳定性随之增强;G... 详细信息

为分析鸡GDF5基因的遗传多样性及结构与功能,本试验采用DNA池结合PCR产物直接测序法和生物信息学对9个鸡品种11种样品的GDF5基因进行研究。试验共检测出10个SNPs,且全为同义突变,突变后RNA二级结构发生变化,自由能变小,稳定性随之增强;GDF5蛋白存在信号肽,成熟肽始于第19位氨基酸;同源模建预测得到的蛋白结构模型理想可靠。结果表明GDF5基因具有丰富的多态性,生物信息学结果可为进一步研究GDF5基因的作用机制和GDF5蛋白功能提供理论基础。

关键词： GDF5基因遗传多样性生物信息学鸡

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CYP19A1、STS基因在黔北麻羊不同组织中的表达

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基因组学与应用生物学 2020年第11期39卷 5045-5051页

作者：周志楠敖叶骆金红洪磊吴雨陈祥贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025

为探究CYP19A1、STS基因在黔北麻羊下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢5个性腺组织中的表达水平。本试验以黔北麻羊为研究对象,提取下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢5个性腺组织的RNA并逆转录合成cDNA第一链,采用实时荧光定量PCR(q-PCR... 详细信息

为探究CYP19A1、STS基因在黔北麻羊下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢5个性腺组织中的表达水平。本试验以黔北麻羊为研究对象,提取下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢5个性腺组织的RNA并逆转录合成cDNA第一链,采用实时荧光定量PCR(q-PCR)技术检测CYP19A1、STS基因的m RNA在黔北麻羊5个性腺组织中的表达水平。结果表明CYP19A1、STS基因的mRNA在黔北麻羊5个性腺组织中均有不同程度的表达,且2个基因在卵巢中的表达量相对最高,在下丘脑中的表达量相对最低,两者之间差异极显著(p<0.01)。CYP19A1基因的mRNA在黔北麻羊5个性腺组织中的表达量由高到低依次为:卵巢>子宫>输卵管>垂体>下丘脑;STS基因的m RNA在黔北麻羊5个性腺组织中的表达量由高到低依次为:卵巢>垂体>子宫>输卵管>下丘脑。本研究结果为今后进一步探讨CYP19A1、STS基因对山羊的遗传机理提供了研究依据。

关键词：黔北麻羊 CYP19A1 STS 差异表达量

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5-Aza-dC对牛成肌细胞MyoD1启动子甲基化及mRNA表达的影响

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畜牧兽医学报 2021年第9期52卷 2439-2451页

作者：李雄田念念宋林锦陈晨许厚强贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025

旨在探究5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dC)对牛成肌细胞的增殖和肌分化因子(myogenic differentiation 1,MyoD1)启动子甲基化以及mRNA表达的影响。本研究复苏了前期冻存的关岭牛成肌细胞,并进行培养,待其生长到对... 详细信息

旨在探究5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dC)对牛成肌细胞的增殖和肌分化因子(myogenic differentiation 1,MyoD1)启动子甲基化以及mRNA表达的影响。本研究复苏了前期冻存的关岭牛成肌细胞,并进行培养,待其生长到对数生长期,再通过不同浓度的5-Aza-dC对牛成肌细胞进行处理,利用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期;结合高通量检测方法检测MyoD1启动子甲基化水平,并利用qRT-PCR检测MyoD1及相关基因的表达水平。研究发现,0.1μmol·L^(-1) 5-Aza-dC为最适浓度,该浓度下细胞抗凋亡因子Bcl的表达极显著降低(P<0.01),促凋亡因子Bax的表达极显著提高(P<0.01),促凋亡因子Caspase-9的表达显著提高(P<0.05);周期因子Cyclin A2的表达显著提高(P<0.05),而细胞因子Cyclin B1、Cyclin D的表达无显著变化;检测空白组和试验组MyoD1启动子甲基化水平发现,试验组甲基化水平极显著低于空白组(P<0.01);而mRNA的表达水平极显著高于空白组(P<0.01)。5-Aza-dC能够通过改变Caspase-9、Bcl、Bax、Cyclin A2等基因的表达来调节关岭牛成肌细胞的增殖和凋亡,并能够有效降低MyoD1基因启动子的甲基化水平(P<0.01);极显著提高其mRNA的表达量(P<0.01)。低浓度的5-Aza-dC能通过促进细胞凋亡及调控关岭牛MyoD1的甲基化水平来调控MyoD1的表达;同时推测,MyoD1基因启动子的甲基化水平能够影响关岭牛成肌细胞的生长发育,可为遗传标记辅助关岭牛的改良提供理论参考。

关键词：关岭牛 5-氮杂-2-脱氧胞苷 DNA甲基化细胞周期细胞凋亡

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贵州黑山羊和黔北麻羊LEPR基因第7、8、10和18外显子的多态性分析

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基因组学与应用生物学 2016年第12期35卷 3351-3357页

作者：封竣淇徐伟康建兵钱成黄兰罗卫星蔡惠芬贵州大学动物科学学院贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025

为探究LEPR基因的遗传多态性,丰富山羊LEPR基因的研究,本研究以贵州黑山羊和黔北麻羊为试验材料,运用DNA池结合直接测序方法进行LEPR基因SNPs位点的筛选,从而对突变的SNPs位点进行RNA二级结构以及所编码蛋白质的二级结构和三级结构进行... 详细信息

为探究LEPR基因的遗传多态性,丰富山羊LEPR基因的研究,本研究以贵州黑山羊和黔北麻羊为试验材料,运用DNA池结合直接测序方法进行LEPR基因SNPs位点的筛选,从而对突变的SNPs位点进行RNA二级结构以及所编码蛋白质的二级结构和三级结构进行生物信息学分析。在试羊LEPR基因中共发现4个SNPs,分别为Exon7-T81C(同义突变)、Exon8-C39T(同义突变)、Exon10-A70G(Asn-Ser)和Exon18-C94T(Ser-Leu)。分析表明,4个位点突变前后的等位基因频率、mRNA二级结构的最小自由能、LEPR蛋白质二级结构和三级结构均有改变。结果表明,LEPR基因拥有较为丰富的遗传多态性。

关键词： LEPR SNPs 贵州黑山羊黔北麻羊生物信息学

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洛美沙星对Bloom综合征解旋酶生物学特性影响的机理研究

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生物化学与生物物理进展 2011年第11期38卷 1060-1071页

作者：骆衡陈祥丁玫杨齐心许厚强高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州大学动物科学学院贵阳550025 贵州大学贵州省山地农业病虫害重点实验室贵阳550025 贵州大学教育部绿色农药与农业生物工程重点实验室贵阳550025

Bloom综合征解旋酶(BLM)是RecQ家族DNA解旋酶中的一个重要成员,参与了DNA复制、修复、转录、重组以及端粒的维持等细胞代谢过程,在维持染色体的稳定性中具有重要作用.BLM解旋酶的突变可导致Bloom综合征.Bloom综合征是一种罕见隐性常染... 详细信息

Bloom综合征解旋酶(BLM)是RecQ家族DNA解旋酶中的一个重要成员,参与了DNA复制、修复、转录、重组以及端粒的维持等细胞代谢过程,在维持染色体的稳定性中具有重要作用.BLM解旋酶的突变可导致Bloom综合征.Bloom综合征是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者遗传不稳定,并易患多种类型癌症.洛美沙星(LMX)可以抑制细胞内多种酶,并通过结合DNA干扰DNA代谢,从而治疗多种疾病,但是其具体的作用机理还未完全清楚.运用荧光偏振技术和自由磷检测技术,研究了LMX对BLM642～1290解旋酶DNA结合活性、解链活性和ATP酶活性的影响.运用荧光及紫外吸收光谱法研究了LMX与解旋酶结合的结合常数、结合位点数、作用力类型、结合距离等参数.结果表明,LMX与解旋酶之间能自发进行反应,两种分子有一个结合位点,通过静电引力和疏水作用力形成稳定的BLM-LMX复合物,且解旋酶的内源荧光被LMX静态猝灭,主要原因是非辐射能量转移.在这一过程中,LMX能抑制解旋酶的解链活性和ATP酶活性,而促进解旋酶的DNA结合活性.LMX对BLM解旋酶生物学活性影响的机理可能是LMX使解旋酶通过别构机制影响其ATP酶活性,并使酶的构象维持在较低解链活性的状态,通过抑制ATP催化水解与解链过程的偶联和阻止解旋酶的易位,从而抑制其解链.LMX能够促进解旋酶的DNA结合活性,可能是因为其C-6和C-7上的取代功能基团可以增加酶活力,以及增强药物、酶和DNA的结合,从而形成药物-酶-DNA复合物.这些结果为研究以DNA解旋酶为药物靶标的分子机理和理解喹诺酮类药物的作用机理奠定相关理论基础.

关键词：洛美沙星 BLM解旋酶生物学特性机理

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贵州地方山羊ERα多态性及组织差异表达

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农业生物技术学报 2017年第8期25卷 1300-1306页

作者：李鹏程孙振梅许厚强陈祥贵州大学动物科学学院/高原山地遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室

雌激素受体α(estrogen receptor,ERα)基因在动物繁殖过程中起着重要作用,已经被认为是影响猪(Sus scrofa)产仔数的主效基因,但在山羊(Capra hicus)方面研究较少。为了揭示雌激素受体基因对贵州本地山羊繁殖性状的影响,本研究采用直接... 详细信息

雌激素受体α(estrogen receptor,ERα)基因在动物繁殖过程中起着重要作用,已经被认为是影响猪(Sus scrofa)产仔数的主效基因,但在山羊(Capra hicus)方面研究较少。为了揭示雌激素受体基因对贵州本地山羊繁殖性状的影响,本研究采用直接测序技术检测了该基因8个外显子的SNP,并使用qRT-PCR检测ERα基因在黔北麻羊的下丘脑,垂体,性腺轴中不同表达量。结果表明,ERα基因在黔北麻羊和贵州黑山羊第8外显子中均存在C127T突变,且属于错义突变,致使该基因mRNA二级结构以及编码蛋白结构的改变。在第8外显子的C127T位点发现CC、CT和TT 3种基因型,其中,在黔北麻羊群体中CC基因型个体的产羔数与TT和CT基因型间达差异显著水平(P<0.05),在贵州黑山羊群体中未达到显著差异。qRT-PCR检测结果显示,单羔组和多羔组黔北麻羊的5个组织中ERα基因均有表达,且卵巢均最高。进一步研究发现,单羔组和多羔组黔北麻羊卵巢组织中的ERαmRNA表达量差异显著(P<0.05),而在其他组织间均未达到差异显著(P>0.05)。结果显示,ERα中的C127T突变可能影响贵州地方山羊的产羔数,为培育贵州地方山羊高繁殖力品系提供了理论依据。

关键词：黔北麻羊贵州黑山羊单核苷酸多态性 qRT-PCR 雌激素受体α(ERα)

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黔北麻羊KISS1基因多态性及组织差异表达研究

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农业生物技术学报 2018年第7期26卷 1213-1218页

作者：陈祥李鹏程孙振梅许厚强陈伟贵州大学动物科学学院/高原山地遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室

转移抑制素(kisspeptins,KISS1)被认为是哺乳动物繁殖机制的调控者。KISS1基因编码的蛋白,可以影响促性腺激素释放激素的释放,具有调节动物性腺产生性激素与生殖细胞的能力。本研究以黔北麻羊(Capra hircus)为研究对象,对KISS1基因的多... 详细信息

转移抑制素(kisspeptins,KISS1)被认为是哺乳动物繁殖机制的调控者。KISS1基因编码的蛋白,可以影响促性腺激素释放激素的释放,具有调节动物性腺产生性激素与生殖细胞的能力。本研究以黔北麻羊(Capra hircus)为研究对象,对KISS1基因的多态性及其在繁殖相关组织的表达量进行研究,旨在揭示KISS1基因对黔北麻羊产羔性状的影响。结果表明,在黔北麻羊内含子1处检测到3个SNPs,分别为G277C,G436T和T486A,其中在G277C、T486A位点,黔北麻羊3种基因型个体间的产羔数达到显著差异水平。qRT-PCR结果显示,在检测的黔北麻羊的5个组织中KISS1基因均有表达,其中下丘脑的表达量显著高于其他各组织(P<0.05),但子宫、卵巢、输卵管3个组织间的KISS1基因的表达量差异不显著(P>0.05)。结果表明,KISS1基因中的G277C、T486A位点的突变对黔北麻羊的产羔数有一定的关联,对其进行研究可为黔北麻羊高繁殖力品系的培育提供一定的基础。

关键词：黔北麻羊 SNP qRT-PCR 转移抑制素(KISS1)

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关岭牛IGF1基因干扰载体构建及其对成肌细胞的影响

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农业生物技术学报 2022年第5期30卷 896-907页

作者：宋林锦许厚强李永孙金魁贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州大学动物科学学院贵州大学生命科学学院

胰岛素样生长因子1 (insulin like growth factor 1, IGF1)是通过调控骨骼肌蛋白的合成影响肌肉发育的单链多肽类激素，对细胞增殖等多种生理功能具有重要作用，本研究旨在探究IGF1基因对关岭牛(Bos taurus)成肌细胞的影响。选用健康的... 详细信息

胰岛素样生长因子1 (insulin like growth factor 1, IGF1)是通过调控骨骼肌蛋白的合成影响肌肉发育的单链多肽类激素，对细胞增殖等多种生理功能具有重要作用，本研究旨在探究IGF1基因对关岭牛(Bos taurus)成肌细胞的影响。选用健康的成年(2～3岁)关岭牛3头，采集心、肝、脾、肺、肾、前腿肌、后腿肌、背最长肌、斜方肌、臀肌、胃、小肠12个组织样提取RNA，采集背最长肌组织成功培养关岭牛成肌细胞。运用qPCR技术检测IGF1基因在不同组织中的相对表达量；运用在线软件对关岭牛IGF1蛋白质理化性质、二级结构和三级结构、亚细胞定位进行分析；同时通过在线软件设计IGF1基因的3对短发夹RNA (short hairpin RNA, shRNA)干扰序列和1对阴性对照序列，与pGPU6-GFP-Neo载体连接后进行测序，将构建成功的IGF1基因干扰载体转染至成肌细胞；运用qPCR技术检测并筛选出干扰效率最高的干扰载体，分析该干扰载体对IGF1基因表达的影响；运用qPCR技术检测干扰IGF1基因对细胞增殖相关基因细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶2 (cyclin-dependent kinases 2, CDK2)的相对表达量影响；运用CCK8 (Cell Counting Kit-8)法检测成肌细胞增殖情况。结果表明，IGF1基因在关岭牛心、前腿肌、后腿肌、背最长肌、斜方肌、臀肌等12个组织样中均有表达，在肝中相对表达量最高，极显著高于其他组织(P<0.01)；在培养关岭牛成肌细胞的基础上，成功构建关岭牛IGF1基因干扰载体，并筛选出shRNA-IGF1-1干扰效率最高(P<0.01);IGF1蛋白的分子式为C744H1186N214O216S15，相对分子质量为17.06581 kD，理论等电点为9.36，属碱性不稳定蛋白；IGF1基因被抑制后，细胞增殖相关基因cyclin D1和CDK2的表达量均极显著低于shRNA-NC (P<0.01)。CCK8法检测细胞增殖结果表明，IGF1基因被抑制后，在24和72 h成肌细胞增殖均显著低于对照组(P<0.05),48 h为极显著水平(P<0.01)，表明体外沉默IGF1基因后，会影响成肌细胞增殖能力和抑制成肌细胞增殖相关基因表达。本研究为进一步研究IGF1基因对关岭牛肌肉生长发育的作用及调控机制提供了基础数据。

关键词：关岭牛胰岛素样生长因子1 (IGF1) RNA干扰成肌细胞细胞增殖

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