检索结果-内蒙古大学图书馆

中国科学：生命科学 2023年第12期53卷 1794-1805页

作者：高彩霞张贺于海波孟庆文李昌文陈洪岩夏长友中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室国家禽类实验动物资源库哈尔滨150069

农业实验动物是指来源于农业养殖的动物或宠物,按照相关标准经过严格培育成的实验动物,主要包括:鸡、鸭、猪、马、牛、羊、犬、貂等.农业实验动物是国家科技创新的基础性、战略性生物资源和支撑生命科学研究的重要条件之一,更是畜禽疫... 详细信息

农业实验动物是指来源于农业养殖的动物或宠物,按照相关标准经过严格培育成的实验动物,主要包括:鸡、鸭、猪、马、牛、羊、犬、貂等.农业实验动物是国家科技创新的基础性、战略性生物资源和支撑生命科学研究的重要条件之一,更是畜禽疫病防控技术研究的核心依靠.因此,本文综述了国内外农业实验动物的发展概况、国内农业实验动物平台的建设及资源培育情况,分析了农业实验动物在畜禽疫病防控研究、生物制品研发、生产和检验研究、临床教学、人类医学模型创制及医用材料评价中的应用.

关键词：农业实验动物资源培育应用

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实验用荣昌猪SLA-1等位基因鉴定及分子遗传特征分析

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畜牧兽医学报 2023年第7期54卷 3064-3077页

作者：刘弘毅罗霆宇李昌文于海波路小野陈洪岩夏长友高彩霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室国家禽类实验动物资源库哈尔滨150069

旨在明确实验用荣昌猪SLA遗传背景,深入研究SLA-1分子相关的抗原递呈和免疫应答机制,本研究对27头荣昌猪采集抗凝血,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,设计特异性引物对SLA-1基因进行RT-PCR扩增、克隆和测序,对获得序列的分子特征进行分析... 详细信息

旨在明确实验用荣昌猪SLA遗传背景,深入研究SLA-1分子相关的抗原递呈和免疫应答机制,本研究对27头荣昌猪采集抗凝血,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,设计特异性引物对SLA-1基因进行RT-PCR扩增、克隆和测序,对获得序列的分子特征进行分析。结果显示,荣昌猪中共获得11个SLA-1等位基因,其中,9个为新等位基因,全部获得GenBank登录号和ISAG SLA命名委员会官方命名,SLA-1^(*)24:01等位基因在该群体中频率最高。SLA-1基因编码区全长1086 bp,存在127个核苷酸多态位点,非同义单核苷酸多态性位点数高于同义单核苷酸多态性位点数。核苷酸多样度为0.0449,单倍型多样度为1,平均核苷酸差异数为48.782,G+C含量为64.9%。SLA-1基因编码的361个氨基酸中,有75个氨基酸变异位点;第2和第3外显子编码区多态性最高,且第2外显子区域的氨基酸变异程度高于第3外显子区,组成抗原肽结合槽6个口袋的33个关键氨基酸位点中,11个在人与荣昌猪之间高度保守,与β2-微球蛋白结合的19个关键氨基酸位点中,10个保持一致,CD8分子与MHC结合的关键氨基酸位点中,只有225(Thr/Ser)和228(Thr/Met)位点不同。同源性和系统进化树分析表明,SLA-1^(*)10:03和SLA-1^(*)18:03分别与人HLA-A^(*)02:01和HLA-A^(*)11:01等位基因的同源性最高,荣昌猪与亚洲野猪、巴马小型猪和融水小型猪等亚洲猪种具有较近的亲缘关系。本研究成功获得了中国地方猪种荣昌猪SLA-1基因,发现其具有极为丰富的多态性,为揭示荣昌猪的SLA遗传背景和开展异种移植研究奠定了遗传学基础。

关键词：荣昌猪 SLA-1等位基因鉴定分子特征

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鹅源星状病毒ORF2基因原核表达及遗传进化分析

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浙江农业学报 2020年第5期32卷 789-797页

作者：蒲路莎苏世博陈肖韩赵丽丽陈洪岩黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

应用RT-PCR方法扩增鹅源星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)HLJ01株的ORF2基因,将扩增产物克隆至pET32a原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21进行表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到大小约为106 ku的ORF2蛋白,与理论值相符。将诱... 详细信息

应用RT-PCR方法扩增鹅源星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)HLJ01株的ORF2基因,将扩增产物克隆至pET32a原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21进行表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到大小约为106 ku的ORF2蛋白,与理论值相符。将诱导表达的蛋白经镍亲和层析柱纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,并测定其抗体效价。Western-blotting结果显示,ORF2蛋白可被鼠抗GoAstV阳性血清识别。序列分析表明,该毒株与其他鹅源星状病毒参考毒株的核苷酸相似性介于37.8%~99.3%之间,HLJ-1801分离株与已发表的8株鹅源星状病毒毒株位于同一分支,表明其属于一种新型星状病毒成员。利用原核表达系统成功高效地表达了GoAstV ORF2蛋白,融合蛋白以包涵体形式存在。本试验成功获得了纯化的ORF2重组蛋白和小鼠抗GoAstV多克隆抗体,为进一步研究ORF2蛋白对星状病毒感染的诊断试剂的研发奠定了基础。

关键词：鹅星状病毒 ORF2 原核表达遗传进化分析

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利用CRISPR/Cpf1技术构建HEK293细胞DDX21基因稳定敲除株及功能鉴定

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中国兽医学报 2020年第2期40卷 257-263页

作者：鲁国涛王辉曾为俊邵玉乐许曼陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

利用CRISPR/Cpf1基因编辑技术构建DDX21基因稳定敲除的细胞株,并检测其生物学功能。设计、构建靶向DDX21基因向导RNA表达载体,与Cpf1表达载体共转染HEK293细胞,通过流式筛选、基因测序、Western blot和细胞增殖能力检测鉴定细胞株;荧光... 详细信息

利用CRISPR/Cpf1基因编辑技术构建DDX21基因稳定敲除的细胞株,并检测其生物学功能。设计、构建靶向DDX21基因向导RNA表达载体,与Cpf1表达载体共转染HEK293细胞,通过流式筛选、基因测序、Western blot和细胞增殖能力检测鉴定细胞株;荧光定量PCR检测病毒感染后模式识别受体(TLR-3、TLR-7、MDA-5)、Ⅰ型干扰素、IL-6以及抗病毒蛋白OAS mRNA水平表达情况。结果显示:成功筛选到2株DDX21基因敲除的细胞株,蛋白免疫印迹显示DDX21蛋白不表达;与野生型(wild type,WT)相比敲除株形成细胞单层的时间明显延长(P<0.01);H9N2亚型禽流感病毒感染试验表明,模式识别受体TLR-3、MDA-5的mRNA表达水平上调,TLR-7表达水平无明显差异,IFN-α、IFN-β、IL-6及抗病毒蛋白OAS的mRNA表达水平下调,表明DDX21基因敲除阻断了DDX21-TRIF-MyD88信号通路;TCID50测定结果显示,差异最高可达到WT的3.01倍,表明DDX21基因敲除后流感病毒复制增加。本研究利用CRISPR/Cpf1系统获得2株DDX21基因稳定敲除的HEK293细胞株,为深入研究DDX21基因功能、病毒感染的天然免疫应答和调控研究奠定理论基础。

关键词： DDX21基因 H9N2亚型禽流感病毒 CRISPR/Cpf1 HEK293细胞基因敲除

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DHV-Ⅰ和DEV双重荧光定量PCR方法的建立

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中国兽医科学 2021年第2期51卷 169-175页

作者：陈肖韩刘海燕苏世博赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其... 详细信息

为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其特异性及敏感性。结果,该方法特异性好,对鹅细小病毒、番鸭细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、鸭坦布苏病毒、禽网状内皮增生病毒、禽呼肠弧病毒、减蛋综合征病毒、鸭甲肝病毒3型9种病毒检测,均无荧光信号。而且其灵敏度高,对DHV-I和DEV的最小检出量均为200拷贝。利用所建立的荧光定量PCR方法对江苏徐州采集的166份肛拭子进行检测,检出I型鸭肝炎病毒13份(阳性率为7.8%),鸭肠炎病毒75份(阳性率为45%)。上述结果表明,本研究建立了灵敏度高特异性强的DHV-I和DEV双重荧光定量PCR方法。

关键词： Ⅰ型鸭肝炎病毒鸭肠炎病毒,双重荧光定量

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奶牛A6型溶血性曼氏杆菌与牛支原体混合感染的实验室诊断

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中国兽医杂志 2022年第12期58卷 79-84,87页

作者：金圣子尢振东黄思琪刘星尧郑铎刘雪松刘云东北农业大学动物医学学院黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院黑龙江齐齐哈尔161005

为探明某奶牛场呼吸系统疾病暴发的原因,本研究在排除了病毒感染的情况下,检测奶牛支原体和细菌感染情况。无菌采集5头病死奶牛的肺脏后进行牛支原体检测,细菌分离培养后染色镜检,随后对疑似致病菌进行随机引物PCR扩增、分子学鉴定、菌... 详细信息

为探明某奶牛场呼吸系统疾病暴发的原因,本研究在排除了病毒感染的情况下,检测奶牛支原体和细菌感染情况。无菌采集5头病死奶牛的肺脏后进行牛支原体检测,细菌分离培养后染色镜检,随后对疑似致病菌进行随机引物PCR扩增、分子学鉴定、菌株荚膜血清型和基因型鉴定、动物致病性试验及药敏试验。结果显示,5头奶牛均感染了牛支原体及同一株β溶血革兰阴性杆菌,瑞氏染色可见两极浓染。经AJ11随机扩增多态性DNA(RAPD)、16S rRNA序列对比及血清型与基因型鉴定后,确认此致病菌为血清6型基因2型溶血性曼氏杆菌(Mh)。致病菌攻毒试验结果显示,该Mh菌株对小鼠的半数致死量(LD_(50))为1.94×10^(7)CFU。药敏试验结果显示该Mh菌株对多种抗菌药敏感。本研究为奶牛呼吸系统疾病的诊断及防控提供了参考。

关键词：奶牛牛支原体溶血性曼氏杆菌分离鉴定药敏试验

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肠炎沙门菌感染ICR小鼠模型的建立

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中国兽医科学 2017年第10期47卷 1257-1263页

作者：王伟尹海畅吕兴峰刘思国陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis,SE)是引起人类食源性疾病的重要革兰阴性菌之一,可引起禽、家畜等动物较为严重的感染症状。本研究为了建立肠炎沙门菌感染ICR小鼠模型,标准菌株SE 50336分别以1×10~8、1×10~7、1×0~6... 详细信息

肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis,SE)是引起人类食源性疾病的重要革兰阴性菌之一,可引起禽、家畜等动物较为严重的感染症状。本研究为了建立肠炎沙门菌感染ICR小鼠模型,标准菌株SE 50336分别以1×10~8、1×10~7、1×0~6、1×10~5、1×10~4CFU/mL的剂量通过口腔灌注方式感染6周龄ICR雌鼠,每组10只,以接种PBS的10只小鼠作为对照组,测定肠炎沙门菌对ICR小鼠的半数致死量(LD_(50))。将40只ICR雌鼠随机分成两组,以测定的LD_(50)剂量接种肠炎沙门菌,通过临床症状、体重变化、组织病理学、组织中细菌载量以及TNF-α与IL-6表达水平评价肠炎沙门菌对小鼠的致病性。结果,标准菌株SE 50336对ICR小鼠的LD_(50)为1×10^(5.67)CFU/mL。感染后第3天,小鼠出现采食量下降、活动减少、皮毛色泽变暗、畏寒扎堆等症状;感染后第5天,小鼠的平均体重较对照组呈现下降趋势,后期开始恢复。组织病理学结果显示,肝脏出现灶状坏死,形成血栓,出现坏死细胞;脾脏先后出现纤维素性坏死性脾炎,白髓内淋巴细胞减少,呈小空泡状,出现坏死灶。菌落载量分析发现,细菌载量随着感染进程而升高,在脾脏中繁殖速度最快,载量也最高,肝脏次之。定量PCR结果显示,TNF-α表达水平呈升高趋势,而IL-6表达水平降低。上述结果表明,本试验成功建立了肠炎沙门菌标准菌株SE50336感染ICR小鼠的模型,为肠炎沙门菌感染与致病机制的研究提供了有价值的动物模型,也为表达抗菌肽转基因小鼠抗肠炎沙门菌的评价奠定了基础。

关键词：肠炎沙门菌 ICR小鼠感染模型炎性细胞因子

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一例幼龄白狮后肢瘫痪的病例诊治

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野生动物学报 2021年第3期42卷 839-843页

作者：赵越冯国峰马海鹍高海婷范宏刚东北农业大学动物医学学院黑龙江省实验外科与比较医学重点实验室哈尔滨150030

近年来,随着多次调研发现,野生猫科(Felidae)动物野外种群数量显著减少,国家加大了对其保护力度,因此人工饲养量逐渐增多,同时由于饲养环境和营养不科学导致的内科疾病也频频发生。近期,东北农业大学动物医院收治1只6月龄发生后肢瘫痪... 详细信息

近年来,随着多次调研发现,野生猫科(Felidae)动物野外种群数量显著减少,国家加大了对其保护力度,因此人工饲养量逐渐增多,同时由于饲养环境和营养不科学导致的内科疾病也频频发生。近期,东北农业大学动物医院收治1只6月龄发生后肢瘫痪的白狮(Panthera leo),全面检查发现,患狮钙磷比例失调,血浆镁离子浓度降低,甲状腺旁腺激素水平升高。最终诊断为,因饲喂食物钙磷比例失调、光照不足导致患狮骨营养不良引发瘫痪,继发营养性甲状旁腺功能亢进(NSHPT)使前期补钙治疗未见效果。通过促进钙吸收、恢复钙磷正常比例、调整饮食结构、补充镁和抗感染治疗对患狮进行综合治疗,收到良好的治疗效果,经45 d治疗后患狮可正常行走,局部感染也得到治愈。

关键词：白狮后肢瘫痪骨营养不良继发营养性甲状旁腺功能亢进

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黄芪多糖诱导SOCS3表达对鸡巨噬细胞炎症反应的抑制作用

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中国畜牧兽医 2021年第11期48卷 4284-4291页

作者：陶新磊刘丹华田旭郑世民高雪丽吕晓萍刘超男东北农业大学动物医学学院黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150030 苏州华测技术有限公司苏州215300

试验旨在探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对LPS诱导的鸡巨噬细胞(HD11)炎症模型的抗炎效果和作用机制。用不同浓度的LPS刺激鸡巨噬细胞(HD11),通过CCK8法检测细胞活力,实时荧光定量PCR检测白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达... 详细信息

试验旨在探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对LPS诱导的鸡巨噬细胞(HD11)炎症模型的抗炎效果和作用机制。用不同浓度的LPS刺激鸡巨噬细胞(HD11),通过CCK8法检测细胞活力,实时荧光定量PCR检测白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达的变化,以确定构建细胞炎症模型的LPS最适添加浓度。将HD11分为对照组(C)、脂多糖(LPS)组(L)、黄芪多糖(APS)组(A)和黄芪多糖抑制脂多糖组(A+L),在LPS刺激后的2、6、12、24、48 h用实时荧光定量PCR法检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核转录因子(NF-κBp65)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)mRNA表达的变化,Western blotting法检测NF-κBp65、p38MAPK和SOCS3蛋白含量变化,ELISA检测IL-1β和TNF-α蛋白含量变化。细胞活力和IL-1β检测结果表明,构建细胞炎症模型的LPS最适添加浓度为0.5μg/mL。实时荧光定量PCR结果表明,与对照组相比,L和A组IL-1β、TNF-α、NF-κBp65、p38MAPK和SOCS3 mRNA表达均显著升高(P<0.05);与L组相比,A+L组在LPS刺激后的IL-1β、TNF-α、NF-κBp65和p38MAPK mRNA表达含量均显著降低(P<0.05),SOCS3 mRNA表达显著增加(P<0.05)。Western blotting结果表明,与对照组相比,A组P-NF-κBp65/NF-κBp65、P-p38MAPK/p38MAPK和SOCS3/α-tubulin比值均显著增加(P<0.05);与L组相比,A+L组P-NF-κBp65/NF-κBp65和P-p38MAPK/p38MAPK比值均显著降低(P<0.05);A+L组SOCS3/α-tubulin比值显著升高(P<0.05)。ELISA结果表明,与对照组相比,L组IL-1β和TNF-α蛋白含量在2~48 h均显著增加(P<0.05);与L组相比,A+L组IL-1β和TNF-α的蛋白含量在LPS刺激后12~48 h均显著降低(P<0.05)。以上结果表明,在LPS诱导的HD11细胞炎症模型中,APS通过促进SOCS3的表达抑制NF-κBp65和p38MAPK信号通路的过度活化,从而发挥抗炎作用。

关键词：黄芪多糖抗炎细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)

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水貂阿留申病毒、肠炎病毒与犬瘟热病毒多重PCR检测方法的建立与应用

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中国比较医学杂志 2017年第12期27卷 97-101页

作者：马芹王元智闫文卓赵丽丽陈洪岩陆涛峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨100193

目的水貂阿留申病、病毒性肠炎与犬瘟热并称影响水貂健康的三大疫病,拟建立一种可同时检测三种病毒的多重PCR检测方法。方法针对三种病毒基因保守区分别设计了3对特异性引物,对貂阿留申病毒(ADV)和水貂肠炎病毒(MEV)的DNA模板和犬瘟热病... 详细信息

目的水貂阿留申病、病毒性肠炎与犬瘟热并称影响水貂健康的三大疫病,拟建立一种可同时检测三种病毒的多重PCR检测方法。方法针对三种病毒基因保守区分别设计了3对特异性引物,对貂阿留申病毒(ADV)和水貂肠炎病毒(MEV)的DNA模板和犬瘟热病毒(CDV)的RNA模板进行了多重PCR扩增和扩增条件优化。结果 PCR可同时扩增出601 bp(ADV)、205 bp(MEV)和451 bp(CDV)的特异性目的条带,敏感性试验表明最低核酸检出量为ADV每微升2.67×10~4拷贝、MEV每微升3.02×10~4拷贝和CDV每微升1.72×10~5拷贝。临床样品检测结果表明多重PCR和单一PCR检测结果一致。结论建立的多重PCR检测方法可快速地检测ADV、MEV和CDV单一或混合感染的临床样品。

关键词：多重PCR 水貂阿留申病毒水貂肠炎病毒犬瘟热病毒

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