检索结果-内蒙古大学图书馆

肝脏 2000年第4期5卷 213-215页

作者：张斌万谟彬潘欣李成忠张迁戚中田上海第二军医大学附属长海医院感染科 200433 第二军医大学微生物学教研室

目的　扩增HBV基因C区启动子 ,将其与 β 干扰素基因进行连接 ,以构建真核表达载体 ,为下一步研究表达打下基础。方法　PCR方法扩增HBV基因C区启动子 ,产物经DNA自动测序正确后 ,与表达干扰素的 p3 .1cDNA(+ ) β IFN质粒进行粘端连接 ... 详细信息

目的　扩增HBV基因C区启动子 ,将其与 β 干扰素基因进行连接 ,以构建真核表达载体 ,为下一步研究表达打下基础。方法　PCR方法扩增HBV基因C区启动子 ,产物经DNA自动测序正确后 ,与表达干扰素的 p3 .1cDNA(+ ) β IFN质粒进行粘端连接 ,并对构建真核表达载体进行限制性片段长度多态性 (RFLP)分析。结果　扩增出HBV .CP ,序列与报告资料基本一致 ;与p3 .1cDNA(+ ) β IFN质粒连接成功 ,分别应用HindⅢ /XhoⅠ及BamHⅠ /XhoⅠ进行酶切后均得到与预计相一致的片段。结论　成功扩增出HBV .CP ,并构建出可用于进一步研究增强干扰素表达的HBV .CP β IFN真核表达载体。

关键词：乙型肝炎病毒 β-干扰素乙型肝炎真核表达载体

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携带人β干扰素基因的人乙型肝炎特异性真核表达载体的构建

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世界华人消化杂志 2000年第5期8卷 520-523页

作者：潘欣柯重伟潘卫武文斌张斌贺祥曹广文戚中田中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院普外科上海市200433

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)C 区启动子调控的人β干扰素(IFN-β)基因的真核表达载体.方法切除真核表达载体 pcDNA3.1(+)-DT_(390)-VEG_(exon7)内部的 CMV 启动子及 DT_(390)序列使之成为 p3.1V_7;从逆转录病毒载体 pMNSM-IFN-β质粒中... 详细信息

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)C 区启动子调控的人β干扰素(IFN-β)基因的真核表达载体.方法切除真核表达载体 pcDNA3.1(+)-DT_(390)-VEG_(exon7)内部的 CMV 启动子及 DT_(390)序列使之成为 p3.1V_7;从逆转录病毒载体 pMNSM-IFN-β质粒中游离人β干扰素基因;用 PCR 方法从 pGEM.7Z-HBV 质粒中扩增人乙型肝炎病毒(HBV)的 C区启动子序列;通过转换酶切位点,将 HBV C 区启动子和人β干扰素基因共同插入到 p3.1V_7中,构建成受 HBV C 区启动子控制的人β干扰素基因真核表达载体 p3.1 V_***-IFN-β.结果构建完成携带人β干扰素基因的人乙型肝炎特异性真核表达载体.结论该载体为慢性病毒性肝炎的特异性干扰素基因治疗奠定了基础.

关键词： IFN-β基因乙型肝炎病毒真核表达载体治疗

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四环素tet-off系统调控的DT/VEGF融合基因对肝细胞癌的杀伤效应

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世界华人消化杂志 2000年第8期8卷 867-873页

作者：潘欣潘卫倪灿荣柯重伟曹广文戚中田中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院病理科中国人民解放军第二军医大学附属长海医院普外科

目的研究四环素 tet-off 调控系统对 DT_(390)-VEGF_(165)及DT_(390)-VEGF_(exon7)融合基因的调控作用,探索毒素融合基因在调控状态下治疗肝癌的有效途径。方法构建四环素 tet-off 调控的 DT_(390)-VEGF_(165)或 DT_(390)-VEGF_(exon7)融合基因真核表达载体,用脂质体介导转染肝细胞癌 HepG2,在四环素有或无的情况下观察肝癌细胞的形态变化,用质粒直接注射法观察构建物对荷肝癌裸鼠的治疗效果,结果 3μg真核表达构建物转染5×10~5个肝癌细胞/孔(24孔板)96h 后发现,无四环素时转毒素融合基因的细胞存活率为20%,对照细胞存活率为77%;四环素存在时转毒素融合基因的细胞存活率为68%,对照细胞存活率为74%;转染细胞在四环素有或无的情况下经免疫荧光抗体染色均呈现黄绿色荧光,表明融合基因在细胞中得到了表达,且四环素调控系统存在基础量的漏表达;用质粒直接注射瘤体虽可观察到质粒被吸收和表达,但由于表达效率低下,没有明显的治疗效果,结论四环素调控系统基本上可以控制毒素基因在肝癌细胞中的表达。

关键词：肝肿瘤白喉毒素分子克隆脂质体基因疗法

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人肾细胞癌细胞的原代培养及癌基因表达初步分析

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第二军医大学学报 1999年第5期20卷 280-282页

作者：张晓琴曹广文侯建国戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院泌尿外科

目的：研究人肾细胞癌（ＲＣＣ）原代细胞生物学特性及其癌基因的表达情况。方法：应用改良的原代肿瘤细胞分离法分离培养７例人ＲＣＣ原代细胞。应用染色体核型分析和免疫组化方法，分析原代细胞核型以及癌基因与抑癌基因的表达。结果... 详细信息

目的：研究人肾细胞癌（ＲＣＣ）原代细胞生物学特性及其癌基因的表达情况。方法：应用改良的原代肿瘤细胞分离法分离培养７例人ＲＣＣ原代细胞。应用染色体核型分析和免疫组化方法，分析原代细胞核型以及癌基因与抑癌基因的表达。结果：用本法培养的原代细胞比其他常规方法所得细胞既多且纯。所培养的人ＲＣＣ原代细胞的癌基因表达分析发现ｂｃｌ－２，ｃ－ｅｒｂＢ－２，ｃ－ｍｅｔ，表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）有轻度至中度表达，而ｐ５３没有表达。结论：人ＲＣＣ原代培养及其癌基因表达检测，为应用原代ＲＣＣ所开展ｅｘｖｉｖｏ的ＲＣＣ基因治疗打下了初步的基础。

关键词：肾肿瘤原代培养癌基因肾细胞癌

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献血员中TT病毒感染的检测及序列分析

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第二军医大学学报 1999年第9期20卷 605-607,F003页

作者：任浩钱宝华朱分禄倪武戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院血库第二军医大学长征医院感染科

目的：研究ＡＬＴ正常的献血员中ＴＴＶ（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ）的感染情况，探讨ＴＴＶ感染的传播途径和致病性。方法：设计ＴＴＶ保守区域的特异性引物，聚合酶链反应（Ｐ ... 详细信息

目的：研究ＡＬＴ正常的献血员中ＴＴＶ（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ）的感染情况，探讨ＴＴＶ感染的传播途径和致病性。方法：设计ＴＴＶ保守区域的特异性引物，聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测１２０例ＡＬＴ正常的献血员，对１例ＴＴＶＤＮＡ阳性标本（ＴＴＶＤ０２６）进行ＰＣＲ产物测序，并与已知ＴＴＶ核苷酸序列比较同源性。结果：１２０例ＡＬＴ正常献血员中有２０例为ＴＴＶＤＮＡ阳性，感染率为１６．７％。同源性分析表明ＴＴＶＤ０２６与ＴＡ２７８，ＧＨ１，ＴＴＶＣＨＮ１和ＴＴＶＣＨＮ２的核苷酸同源性分别为９９％，９９％，９９％和８９％。结论：ＡＬＴ正常的献血员中存在ＴＴＶ的感染；ＴＴＶＤ０２６与ＴＴＶＴＡ２７８，ＧＨ１，ＴＴＶＣＨＮ１和ＴＴＶＣＨＮ２可能属于同一个基因型；输血可能是ＴＴＶ传播的主要途径。

关键词：肝炎病毒 TT病毒序列分析献血员 DNA病毒

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TT病毒基因组DNA是线性的吗?

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肝脏 1999年第2期 126-126页

作者：缪晓辉戚中田第二军医大学微生物学教研室 200003上海第二军医大学长征医院感染科

1997年,日本学者Nishzama和Okamoto等报告用差异显示分析技术(RDA)首次从1例输血后肝炎患者血清中分离别一种新的DNA病毒,不久又报告,该病毒DNA为单链、线性、无包膜、长约3739bp的细小病毒科(Parvoviridaefamily)成员,并命名为TT病毒... 详细信息

1997年,日本学者Nishzama和Okamoto等报告用差异显示分析技术(RDA)首次从1例输血后肝炎患者血清中分离别一种新的DNA病毒,不久又报告,该病毒DNA为单链、线性、无包膜、长约3739bp的细小病毒科(Parvoviridaefamily)成员,并命名为TT病毒。自此,TT病毒受到广泛关注。随着有关该病毒分子生物学和流行病学特征以及致病性等问题的研究不断深入,各种争论以及不同的研究结果也随之产生。最近,有人用很有说服力的研究资料说明TT病毒的基因组结构呈环状而非线性;基因组全长为3852bp,比Okamoto等报告的多117bp;在亲缘关系上与环状病毒(Circoviridae)更近,但也可能是一个完全独立的新种。如果TT病毒基因组的确为环状,那么,它的某些分子生物学性状必定与线性病毒有较大差异,如二级结构的复杂性、滚环状复制、可重叠利用的读码框架(如同我们熟知的乙型肝炎病毒基因)等。

关键词： DNA 环状基因组染色体组 TT

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裸鼠体内组织特异性胞嘧啶脱氨酶抗人类肿瘤的基因治疗

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第二军医大学学报 1998年第4期19卷 319-322页

作者：曹广文崔龙高军戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科

目的：研究组织特异性表达的胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因在裸鼠体内对人类大肠癌和肝细胞癌的治疗作用。方法：将ＣＤ基因修饰的大肠癌ＬｏＶｏ细胞移植到裸鼠体内，观察对全身给予５－氟胞嘧啶（５－ＦＣ）的反应，用含ＣＤ基因的重组病... 详细信息

目的：研究组织特异性表达的胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因在裸鼠体内对人类大肠癌和肝细胞癌的治疗作用。方法：将ＣＤ基因修饰的大肠癌ＬｏＶｏ细胞移植到裸鼠体内，观察对全身给予５－氟胞嘧啶（５－ＦＣ）的反应，用含ＣＤ基因的重组病毒产生细胞和５－ＦＣ治疗人肝癌裸鼠模型，并用ＰＣＲ法确定体内基因转移效果，骨髓涂片检查体内基因治疗对造血细胞的影响。结果：转ＣＤ基因对ＬｏＶｏ细胞的致瘤性无影响，全身给予５－ＦＣ治疗６０ｄ，转ＣＤ基因的大肠癌肿瘤明显缩小；ＣＥＡ启动子调控的ＣＤ（ＣＥＡ／ＣＤ）基因修饰的ＬｏＶｏ细胞形成的肿瘤在５－ＦＣ作用下消退。重组病毒在体内可以感染肿瘤、骨髓细胞，给予５－ＦＣ后取得了一定的抗肝细胞癌效果。ＣＥＡ／ＣＤ治疗组未发现明显的骨髓抑制，而ＬＴＲ调控ＣＤ的治疗组出现了明显的骨髓抑制。结论：组织特异性转录调控序列调控的ＣＤ基因体内基因治疗，较普通启动子调控的ＣＤ基因具有明显的安全性和有效性。

关键词：大肠肿瘤肝肿瘤胞嘧啶脱氨酶基因治疗裸鼠

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酪氨酸酶启动子调控的CD基因治疗恶性黑色素瘤

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第二军医大学学报 1998年第3期19卷 205-208页

作者：曹广文戚中田潘欣张晓琴高军崔龙孔宪涛第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科第二军医大学长征医院实验诊断科

目的：克隆酪氨酸酶（Ｔｙｒ）启动子并探索其调控细菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）在黑色素瘤基因治疗中的应用价值。方法：用ＰＣＲ法从小鼠恶性黑色素瘤细胞Ｂ１６基因组中克隆Ｔｙｒ启动子片段并与正常序列比较，并于逆转录病毒载体Ｇ１Ｎ... 详细信息

目的：克隆酪氨酸酶（Ｔｙｒ）启动子并探索其调控细菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）在黑色素瘤基因治疗中的应用价值。方法：用ＰＣＲ法从小鼠恶性黑色素瘤细胞Ｂ１６基因组中克隆Ｔｙｒ启动子片段并与正常序列比较，并于逆转录病毒载体Ｇ１Ｎａ中调控ＣＤ基因（ＴｙｒＣＤ）。测体外表达和体内抗肿瘤作用。结果：来源于Ｂ１６基因组的Ｔｙｒ启动子重要反式作用位点未见突变。该Ｔｙｒ启动子可使ＣＤ基因在Ｂ１６中特异表达。转ＴｙｒＣＤ的Ｂ１６可以抑制亲代细胞的成瘤作用。含ＴｙｒＣＤ的重组病毒可在体内感染黑色素瘤细胞和骨髓细胞。体内注射５氟胞嘧啶后可使黑色素瘤消退，并对骨髓细胞有保护作用。结论：来源于正常组织或肿瘤组织的Ｔｙｒ启动子指导的ＣＤ基因在恶性黑色素瘤ｉｎｖｉｖｏ基因治疗方面是安全。

关键词：酪氨酸酶胞嘧啶脱氨酶黑色素瘤基因治疗

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银屑病患者皮损组织中总RNA水平分析

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中华皮肤科杂志 1998年第2期31卷 118-118页

作者：汪治中郑茂荣焦炳华缪为民孙君红第二军医大学附属长海医院皮肤科上海200433 第二军医大学附属长海医院微生物学教研室上海200433

生物细胞的表型及其变化均由严密调控的基因表达所决定,转录产物mRNA是遗传信息从DNA流向蛋白质的重要媒介。我们抽提了12例银屑病患者皮损组织中的总RNA,发现其皮损组织中存在着十分活跃的转录过程。

关键词：银屑病皮损组织 RNA

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大肠癌组织CEA基因启动子序列克隆及与正常组织相应序列的比较

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第二军医大学学报 1997年第4期18卷 301-305页

作者：曹广文杜平崔龙高军潘欣戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科

目的：研究人类不同组织细胞中癌胚抗原（ＣＥＡ）产生与其基因顺式作用序列改变的关系，评价该顺式作用序列在大肠癌组织特异性基因治疗中的应用价值。方法：采用套式ＰＣＲ方法分别从人新鲜大肠癌、相应癌旁粘膜组织、正常血细胞、正... 详细信息

目的：研究人类不同组织细胞中癌胚抗原（ＣＥＡ）产生与其基因顺式作用序列改变的关系，评价该顺式作用序列在大肠癌组织特异性基因治疗中的应用价值。方法：采用套式ＰＣＲ方法分别从人新鲜大肠癌、相应癌旁粘膜组织、正常血细胞、正常胎盘组织及建株癌基因组中扩增ＣＥＡ基因启动子核心序列，ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法确定扩增序列可靠性。用ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和ＤＮＡ序列分析方法确定扩增序列突变情况。用Ｂａｎｄ－Ｓｈｉｆｔ分析法检验扩增序列的启动子功能。结果：不同组织细胞基因组中的ＣＥＡ基因转录起始位点上游－１３０ｂｐ～＋６９ｂｐ的ＣＥＡ基因启动子核心序列区段未发现明显序列差异。大肠癌组织中ＣＥＡ基因的转录与大肠癌基因组中ＣＥＡ基因启动子核心序列无明显的对应关系。从大肠癌组织和正常组织ＤＮＡ中扩增出来的ＣＥＡ启动子序列与ＣＥＡ阳性的ＬｏＶｏ大肠癌细胞核蛋白提取物的结合能力一致，但不能与ＣＥＡ阴性的ＲＣ９４０６人肾癌细胞结合。结论：ＣＥＡ基因在大肠癌细胞中的特异转录不是由于ＣＥＡ基因启动子序列的突变。来源于正常细胞或者大肠癌细胞基因组的ＣＥＡ基因启动子均适合大肠癌组织特异性基因治疗。

关键词：大肠肿瘤癌胚抗原基因启动子基因治疗

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