检索结果-内蒙古大学图书馆

肝脏 2000年第4期5卷 213-215页

作者：张斌万谟彬潘欣李成忠张迁戚中田上海第二军医大学附属长海医院感染科 200433 第二军医大学微生物学教研室

目的　扩增HBV基因C区启动子 ,将其与 β 干扰素基因进行连接 ,以构建真核表达载体 ,为下一步研究表达打下基础。方法　PCR方法扩增HBV基因C区启动子 ,产物经DNA自动测序正确后 ,与表达干扰素的 p3 .1cDNA(+ ) β IFN质粒进行粘端连接 ... 详细信息

目的　扩增HBV基因C区启动子 ,将其与 β 干扰素基因进行连接 ,以构建真核表达载体 ,为下一步研究表达打下基础。方法　PCR方法扩增HBV基因C区启动子 ,产物经DNA自动测序正确后 ,与表达干扰素的 p3 .1cDNA(+ ) β IFN质粒进行粘端连接 ,并对构建真核表达载体进行限制性片段长度多态性 (RFLP)分析。结果　扩增出HBV .CP ,序列与报告资料基本一致 ;与p3 .1cDNA(+ ) β IFN质粒连接成功 ,分别应用HindⅢ /XhoⅠ及BamHⅠ /XhoⅠ进行酶切后均得到与预计相一致的片段。结论　成功扩增出HBV .CP ,并构建出可用于进一步研究增强干扰素表达的HBV .CP β IFN真核表达载体。

关键词：乙型肝炎病毒 β-干扰素乙型肝炎真核表达载体

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携带人β干扰素基因的人乙型肝炎特异性真核表达载体的构建

引用

世界华人消化杂志 2000年第5期8卷 520-523页

作者：潘欣柯重伟潘卫武文斌张斌贺祥曹广文戚中田中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院普外科上海市200433

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)C 区启动子调控的人β干扰素(IFN-β)基因的真核表达载体.方法切除真核表达载体 pcDNA3.1(+)-DT_(390)-VEG_(exon7)内部的 CMV 启动子及 DT_(390)序列使之成为 p3.1V_7;从逆转录病毒载体 pMNSM-IFN-β质粒中... 详细信息

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)C 区启动子调控的人β干扰素(IFN-β)基因的真核表达载体.方法切除真核表达载体 pcDNA3.1(+)-DT_(390)-VEG_(exon7)内部的 CMV 启动子及 DT_(390)序列使之成为 p3.1V_7;从逆转录病毒载体 pMNSM-IFN-β质粒中游离人β干扰素基因;用 PCR 方法从 pGEM.7Z-HBV 质粒中扩增人乙型肝炎病毒(HBV)的 C区启动子序列;通过转换酶切位点,将 HBV C 区启动子和人β干扰素基因共同插入到 p3.1V_7中,构建成受 HBV C 区启动子控制的人β干扰素基因真核表达载体 p3.1 V_***-IFN-β.结果构建完成携带人β干扰素基因的人乙型肝炎特异性真核表达载体.结论该载体为慢性病毒性肝炎的特异性干扰素基因治疗奠定了基础.

关键词： IFN-β基因乙型肝炎病毒真核表达载体治疗

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内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒的包装与鉴定

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世界华人消化杂志 2003年第6期11卷 741-744页

作者：李喆潘欣潘卫曹贵松闻兆章方国恩戚中田毕建威华积德中国人民解放军第二军医大学附属长海医院普通外科上海市200433 中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433

目的:构建内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒载体并包装成重组腺病毒,为下一步基因治疗打下基础。方法:用PCR方法在hENDO基因的5’端引入IL_3信号肽、3’端引入弹性蛋白连接肽序列(linker),再与sVEGI基因连接... 详细信息

目的:构建内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒载体并包装成重组腺病毒,为下一步基因治疗打下基础。方法:用PCR方法在hENDO基因的5’端引入IL_3信号肽、3’端引入弹性蛋白连接肽序列(linker),再与sVEGI基因连接,插入到pCAl3腺病毒载体中,用脂质体介导包装出重组腺病毒,PCR法对重组腺病毒进行鉴定。结果:构建完成hENDO-sVEGI融合基因重组腺病毒载体,融合基因包括IL_3信号肽、hENDO全长基因、弹性蛋白连接肽序列和sVEGI基因,总长度约1114bp,经酶切鉴定、序列分析证实克隆序列、插入方向和读码框架均正确,可包装出携带融合基因的重组腺病毒,用TCID_(50)法测定粗制重组腺病毒滴度为2×10^(11) TCID_(50)/L。结论:成功构建了hENDO-sVEGI融合基因,连接肽序列使两蛋白空间构象不受影响,IL_3信号肽保证蛋白可被分泌至胞外,完成携带融合基因的重组腺病毒的包装与鉴定,为进一步开展肿瘤基因治疗研究奠定了基础。

关键词：内皮抑素可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒包装鉴定基因治疗肿瘤

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四环素tet-off系统调控的DT/VEGF融合基因对肝细胞癌的杀伤效应

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世界华人消化杂志 2000年第8期8卷 867-873页

作者：潘欣潘卫倪灿荣柯重伟曹广文戚中田中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院病理科中国人民解放军第二军医大学附属长海医院普外科

目的研究四环素 tet-off 调控系统对 DT_(390)-VEGF_(165)及DT_(390)-VEGF_(exon7)融合基因的调控作用,探索毒素融合基因在调控状态下治疗肝癌的有效途径。方法构建四环素 tet-off 调控的 DT_(390)-VEGF_(165)或 DT_(390)-VEGF_(exon7)融合基因真核表达载体,用脂质体介导转染肝细胞癌 HepG2,在四环素有或无的情况下观察肝癌细胞的形态变化,用质粒直接注射法观察构建物对荷肝癌裸鼠的治疗效果,结果 3μg真核表达构建物转染5×10~5个肝癌细胞/孔(24孔板)96h 后发现,无四环素时转毒素融合基因的细胞存活率为20%,对照细胞存活率为77%;四环素存在时转毒素融合基因的细胞存活率为68%,对照细胞存活率为74%;转染细胞在四环素有或无的情况下经免疫荧光抗体染色均呈现黄绿色荧光,表明融合基因在细胞中得到了表达,且四环素调控系统存在基础量的漏表达;用质粒直接注射瘤体虽可观察到质粒被吸收和表达,但由于表达效率低下,没有明显的治疗效果,结论四环素调控系统基本上可以控制毒素基因在肝癌细胞中的表达。

关键词：肝肿瘤白喉毒素分子克隆脂质体基因疗法

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乙型肝炎病毒表面—核心融合抗原和白细胞介素—12共表达DNA疫苗的免疫原性

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中华肝脏病杂志 2003年第7期11卷 443-443页

作者：柯金山赵平吴淑梅戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院实验诊断科

乙型肝炎病毒(HBV)特异性细胞免疫应答对急性HBV感染的恢复起关键作用,其中HBV表面抗原和核心抗原均是重要的靶抗原.曾构建HBV表面-核心融合抗原DNA疫苗,可有效诱导小鼠细胞和体液免疫应答,为进一步增强该DNA疫苗诱导细胞免疫应答,在该... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)特异性细胞免疫应答对急性HBV感染的恢复起关键作用,其中HBV表面抗原和核心抗原均是重要的靶抗原.曾构建HBV表面-核心融合抗原DNA疫苗,可有效诱导小鼠细胞和体液免疫应答,为进一步增强该DNA疫苗诱导细胞免疫应答,在该疫苗分子中增加了小鼠白细胞介素-12(IL-12)基因,观察IL-12对其免疫应答的影响.

关键词：乙型肝炎病毒 HBV 表面-核心融合抗原白细胞介素-12 DNA疫苗免疫原性基因表达

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HIV-1 HXB2株蛋白酶在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

引用

中国生物制品学杂志 2006年第2期19卷 108-112页

作者：贾建安周波钱宝华蒋少华陈秋莉潘欣赵平任浩温宗梅邓松华卢洪洲潘卫第二军医大学微生物学教研室上海200433 安徽医科大学病理学教研室合肥230032 上海长海医院输血科上海200433 上海市公共卫生中心上海201508

目的原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(Protease,PR),用于对HIV-1GagP2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选。方法根据HIV-1HXB2株PRDNA序列设计引物,用重叠延伸PCR方法合成使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DN... 详细信息

目的原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(Protease,PR),用于对HIV-1GagP2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选。方法根据HIV-1HXB2株PRDNA序列设计引物,用重叠延伸PCR方法合成使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体进行测序。将HIV-1PRDNA克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中进行诱导表达,用Ni-NTA亲和柱对表达蛋白进行纯化,SDS-PAGE鉴定,并用HIV阳性血清进行免疫反应性的鉴定。结果合成的使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经测序显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致。所构建的HIV-1PR原核表达质粒pQE30-pr,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为14000的HIV-1PR蛋白,纯化的目的蛋白浓度为7.74mg/ml。ELISA检测该蛋白与HIV阳性血清呈特异性反应。结论已成功合成并克隆了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经表达及纯化的HIV-1PR蛋白具有免疫学特性。

关键词：人免疫缺陷病毒蛋白酶基因表达大肠杆菌 HIV-1 HXB2

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内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对荷胃癌裸鼠的治疗

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世界华人消化杂志 2003年第9期11卷 1282-1285页

作者：潘欣李喆张珉王泳潘卫戚中田中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院普通外科上海市200433 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院眼科上海市200433

目的:研究重组腺病毒携带hENDO-VEGI_(151)融合基因治疗胃癌的可行性。方法:分别用 500 μL滴度为 1×10^(12)TCID_(50)/L的粗制重组腺病毒AdCA13—hENDO—VEGI_(151)或AdLacZ皮下注射治疗荷胃癌裸鼠,隔天1次,共注射10次。最后一次... 详细信息

目的:研究重组腺病毒携带hENDO-VEGI_(151)融合基因治疗胃癌的可行性。方法:分别用 500 μL滴度为 1×10^(12)TCID_(50)/L的粗制重组腺病毒AdCA13—hENDO—VEGI_(151)或AdLacZ皮下注射治疗荷胃癌裸鼠,隔天1次,共注射10次。最后一次注射24h后处死动物,检测肿瘤体积、抑瘤率、目的基因的表达、增生细胞核抗原指数(PCNA LI)、肿瘤细胞凋亡指数(AI)、肿瘤微血管密度(MVD)。结果:注射AdCA13-hENDO-VEGI_(151)的治疗组肿瘤体积为328±156mm^3,注射AdLacZ的对照组肿瘤体积为2356±1 140 mm^3,差异显著(F=12.42,P=0.0125),抑瘤率为86.1％;重组腺病毒携带的目的基因均能在荷胃癌裸鼠肿瘤组织中表达;治疗组PCNA LI为 0.13± 0.09％,对照组为 1.40 ± 0.53％,差异显著(F=22.30,P=0.0033);治疗组AI为5.09 ± 0.25％,对照组AI为0.61±0.67％,差异显著(F=155.13,P=0.0 001);治疗组MVD为0.06±0.03％,对照组MVD为 1.09 ± 0.76％,差异明显(F=7.38,P=0.0348)。结论:重组腺病毒携带的融合基因能在荷胃癌裸鼠体内表达出有生物学活性的融合蛋白,并表现出一定的抑瘤效果。

关键词：胃癌基因治疗动物实验 hENDO—VEGI151 重组腺病毒内皮抑素血管内皮细胞抑制因子新生血管

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丙型肝炎患者血清中HCV交叉中和抗体的检测

丙型肝炎患者血清中HCV交叉中和抗体的检测

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第十次全国生物制品学术会议

作者：陈志辉童一民赵平戚中田第二军医大学长海医院感染科，上海 200433 第二军医大学微生物学教研室，上海 200433

目的：分析HCV感染者血清中是否存在交叉反应性中和抗体。方法：以分泌表达HCV包膜E2蛋白真核表达质粒转染的293T细胞培养上清液中的HCV E2蛋白作为检测抗原，建立检测HCV E2抗体的ELISA方法，检测32份HCV抗体阳性的慢性丙肝患者血... 详细信息

目的：分析HCV感染者血清中是否存在交叉反应性中和抗体。方法：以分泌表达HCV包膜E2蛋白真核表达质粒转染的293T细胞培养上清液中的HCV E2蛋白作为检测抗原，建立检测HCV E2抗体的ELISA方法，检测32份HCV抗体阳性的慢性丙肝患者血清，然后用免疫荧光分析血清与HCV全长包膜蛋白表达质粒转染的293T细胞的结合反应，再用5株HCV假病毒(HCVpp)及两株细胞培养产生的HCV(HCVcc)为模型分析血清的病毒中和活性。结果：32份HCV抗体阳性血清中，26份血清可检测出E2抗体，阳性率81.3％。其中HCV RNA阳性的12份血清均为E2抗体阳性，E2抗体水平与HCV RNA水平呈负相关。HCV E2抗体阳性血清对5株HCVpp以及两株HCVcc的感染性均有不同程度的中和作用，中和活性与E2抗体水平相平行。结论：HCV感染可诱导保护性体液免疫应答，丙肝患者血清中存在交叉中和抗体，提示开发能诱导广泛交叉中和抗体的丙肝疫苗具有可行性。

关键词：丙型肝炎病毒丙型肝炎中和抗体真核表达质粒转染

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内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对新生血管的抑制效应

内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对新生血管的抑制效应

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第五次全国医学分子微生物学学术研讨会

作者：潘欣王泳张珉赵平潘卫戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学附属长海医院眼科上海200433

本文为了探讨两分子融合后的生物学功能,以重组腺病毒为载体介导融合基因在体内外表达。结果提示:重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够表达有生物学活性的融合蛋白,并发挥特异性的新生血管抑制作用。

关键词：内皮抑素重组腺病毒新生血管抑制效应

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能结合HCV E2蛋白的人CD81模拟肽的筛选与活性鉴定

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热带医学杂志 2006年第10期6卷 1055-1057,1067页

作者：廖小玲曹洁吴淑梅赵平高军戚中田第二军医大学微生物教研室军队医学微生物学重点实验室上海200433 第二军医大学附属长海医院实验诊断科上海200433

目的用CD81单克隆抗体筛选噬菌体随机展示十二肽库,以期得到可模拟人CD81功能位点、能抑制HCVE2与其受体—人CD81分子结合的小肽。方法用CD81单抗从噬菌体随机展示十二肽库中筛选人CD81模拟肽,用ELISA鉴定阳性噬菌体克隆;以阳性噬菌体免... 详细信息

目的用CD81单克隆抗体筛选噬菌体随机展示十二肽库,以期得到可模拟人CD81功能位点、能抑制HCVE2与其受体—人CD81分子结合的小肽。方法用CD81单抗从噬菌体随机展示十二肽库中筛选人CD81模拟肽,用ELISA鉴定阳性噬菌体克隆;以阳性噬菌体免疫BALB/c小鼠,分析小鼠免疫血清对阳性噬菌体与HCVE2结合的阻断作用;以HCVE2蛋白包被酶标板,检测阳性噬菌体对HCVE2与人CD81分子结合的抑制作用。结果对十二肽库进行3轮筛选后,经ELISA和DNA测序,鉴定出3个(C4,C13和C16)阳性克隆,与人CD81无同源序列。阳性噬菌体克隆C16免疫小鼠血清能阻断该克隆与HCVE2的结合。C16克隆能以剂量依赖的方式竞争性抑制HCVE2蛋白与人CD81的结合。结论用人CD81单抗从噬菌体随机展示肽库中筛选出的阳性噬菌体克隆所编码的小肽在功能上能模拟人CD81与HCVE2的结合活性,能竞争性抑制HCVE2与人CD81分子的结合,在抗HCV药物及疫苗研究中具有潜在应用价值。

关键词：丙型肝炎病毒噬菌体肽库 CD81分子模拟肽

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