检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2022年第7期53卷 2074-2082页

作者：赵旭阳靳家鑫路闻龙张帅黄丽张改平孙爱军庄国庆河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心郑州450046 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

非洲猪瘟(African swine fever,ASf)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASfV)感染猪引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,至今没有研发出安全有效的疫苗,一旦暴发会造成重大经济损失。ASfV在和宿主长期作用过程中,通过抑... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASf)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASfV)感染猪引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,至今没有研发出安全有效的疫苗,一旦暴发会造成重大经济损失。ASfV在和宿主长期作用过程中,通过抑制干扰素和炎症反应,调节凋亡、自噬及细胞免疫等多种途径逃逸机体免疫反应促进自身复制,但具体的机制仍不完全清楚。ASfV复杂的免疫逃逸机制可能是阻碍有效疫苗研发的关键因素之一。借助生物信息学技术对ASfV的基因组和蛋白质组深入分析,筛选病毒的免疫调控关键基因和保护性抗原表位,将在ASfV免疫逃逸分子机制的研究与疫苗研发中发挥重要作用。本文主要对ASfV感染引起的免疫应答反应及可能的免疫逃逸机制研究进行概述,以期为ASf疫苗研制及综合防控提供思路。

关键词：非洲猪瘟非洲猪瘟病毒免疫应答免疫逃逸疫苗研发

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MAVS^(-/-)细胞系的构建及其影响禽流感病毒复制的研究

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中国兽医科学 2022年第3期52卷 344-350页

作者：张子博田璐史鑫琪郭慧娟陈洪岩王金泉孟庆文新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MAVS基因稳定敲除的细胞株,对流感病毒的增殖特性进行初步研究。设计、构建靶向MAVS基因sgRNA表达载体,与pCAG-Cas9-EGfP表达载体共转染MDCK细胞,经过流式细胞仪分选、PCR、基因测序筛选MAVS敲除... 详细信息

本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MAVS基因稳定敲除的细胞株,对流感病毒的增殖特性进行初步研究。设计、构建靶向MAVS基因sgRNA表达载体,与pCAG-Cas9-EGfP表达载体共转染MDCK细胞,经过流式细胞仪分选、PCR、基因测序筛选MAVS敲除细胞系,CCK-8法检测细胞增殖速度;荧光定量PCR方法检测H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染后的TCID_(50)、病毒拷贝数以及IRf3、IfN-β、Mx1基因转录水平变化。结果显示,筛选出1株MAVS基因缺失44 bp的MDCK细胞(MAVS^(-/-)MDCK),其增殖速度与正常细胞相比未观察到显著差异;荧光定量PCR结果表明,TCID_(50)、病毒拷贝数差异最高可分别达到MDCK细胞的4.11倍和1.82倍;MAVS^(-/-)MDCK中IRf3、IfN-β和Mx1 m RNA表达水平显著降低,表明MAVS敲除后抑制了Ⅰ型干扰素信号通路。表明,本研究获得的MAVS^(-/-)MDCK能够促进禽流感病毒的复制,为提高疫苗生产效率和质量提供候选细胞株;该细胞株也为进一步研究MAVS参与抗病毒天然免疫应答奠定基础。

关键词： MAVS MDCK CRISPR/Cas9 H9N2亚型禽流感病毒

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NDV或H9N2 AIV感染对坦布苏病毒继发感染宿主单核-巨噬细胞的影响

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黑龙江畜牧兽医 2022年第19期 15-22,139页

作者：张艳慧马勇梁雨萌崔露陈志杰李雪峰胥利刘柘一刘胜旺李海中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道传染病创新团队/国家禽类实验动物资源库哈尔滨150069

为研究新城疫病毒(NDV)或H9N2禽流感病毒(AIV)对坦布苏病毒(TMUV)继发感染宿主单核-巨噬细胞的影响及其潜在机制,试验通过实时荧光定量PCR方法检测NDV或H9N2 AIV预先感染鸭单核-巨噬细胞和HD11细胞后再感染TMUV 12,24小时时的TMUV基因... 详细信息

为研究新城疫病毒(NDV)或H9N2禽流感病毒(AIV)对坦布苏病毒(TMUV)继发感染宿主单核-巨噬细胞的影响及其潜在机制,试验通过实时荧光定量PCR方法检测NDV或H9N2 AIV预先感染鸭单核-巨噬细胞和HD11细胞后再感染TMUV 12,24小时时的TMUV基因组拷贝数,分析是否可用HD11细胞替代鸭单核-巨噬细胞进行后续试验;分别通过高分辨率活细胞共聚焦显微镜和ELISA检测NDV和H9N2 AIV感染12,24 h对HD11细胞中活性氧(ROS)和Ⅰ型干扰素(IfN)含量的影响;通过实时荧光定量PCR方法分别检测PMA、外源Ⅰ型IfN与细胞共孵育后,感染TMUV 12,24小时时ROS和24小时时Ⅰ型IfN对TMUV基因组在细胞中复制的影响。结果表明:感染12,24小时时,在鸭单核-巨噬细胞中,NDV混合感染组的TMUV基因组拷贝数极显著低于TMUV单独感染组(P<0.01);感染12,24小时,H9N2 AIV混合感染组的TMUV基因组拷贝数分别显著和极显著低于TMUV单独感染组(P<0.05,P<0.01)。在HD11细胞中,NDV混合感染组的TMUV基因组拷贝数分别显著和极显著低于TMUV单独感染组(P<0.05,P<0.01);H9N2 AIV混合感染组的TMUV基因组拷贝数极显著低于TMUV单独感染组(P<0.01)。感染12,24小时时,NDV和H9N2 AIV均可极显著提高HD11细胞中ROS的含量(P<0.01)。感染24小时时,NDV可显著提高IfN-α的含量(P<0.05),感染12,24小时时,NDV可极显著提高IfN-β的含量(P<0.01);H9N2 AIV可在感染12,24小时时极显著提高IfN-β的含量(P<0.01)。ROS可在感染TMUV 12,24小时时极显著抑制TMUV基因组的复制(P<0.01),Ⅰ型IfN可在感染TMUV 24小时时显著抑制TMUV基因组的复制(P<0.05)。说明可用HD11细胞替代鸭单核-巨噬细胞进行后续试验;在鸭单核-巨噬细胞中,NDV或H9N2 AIV感染均可以有效抑制TMUV基因组的复制,其作用可能是通过提高ROS和Ⅰ型IfN含量实现的。

关键词：坦布苏病毒新城疫病毒 H9N2禽流感病毒混合感染单核-巨噬细胞

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STAT3在猪流行性腹泻病毒感染的作用及机制初步探索

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中国预防兽医学报 2021年

作者：杨丽君郭龙军张健许嘉宇张璐冯力陈洪岩王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

为探究信号传导及转录激活因子3(STAT3)在猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染过程中的作用,本研究采用STAT3特异性si RNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和western blot检测结果显示其能够明显降低STAT3的m RNA水平和蛋白水平... 详细信息

为探究信号传导及转录激活因子3(STAT3)在猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染过程中的作用,本研究采用STAT3特异性si RNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和western blot检测结果显示其能够明显降低STAT3的m RNA水平和蛋白水平;在此条件下接种PEDV,通过荧光定量PCR检测,显示当STAT3的m RNA水平降低时能够显著抑制PEDV的RNA水平,western blot实验结果也显示抑制STAT3内源性表达能够显著抑制PEDV复制。为进一步研究STAT3的作用机制,采用STAT3特异性si RNA处理这两种细胞,24 h后经过荧光定量PCR检测发现敲低STAT3后,干扰素刺激基因Mx A、ISG15以及IfN-β,IfN-λ的m RNA水平均显著升高。本研究对于进一步阐明STAT3参与PEDV感染引发的IfN抗病毒反应提供了实验依据。

关键词： STAT3 PEDV IfN

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现用重组AIV(H5+H7)三价灭活疫苗对近期H5和H7亚型AIV分离株的免疫效力研究

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中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 514-520页

作者：刘艳晶麻琦潘舒心和新文王燕邓国华李雁冰施建忠包红梅毛胜刚胡井雷路通刘景利郭兴福田国彬曾显营陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司黑龙江哈尔滨150069

为评估现用重组禽流感病毒(AIV)(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株+Re-12株,H7N9 H7-Re3株)对我国近期H5和H7亚型AIV分离株的免疫预防效果,本研究对60只3周龄SPf鸡以肌肉注射途径接种该疫苗(0.3 mL/只),另外,60只鸡注射PBS作为阴性对照... 详细信息

为评估现用重组禽流感病毒(AIV)(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株+Re-12株,H7N9 H7-Re3株)对我国近期H5和H7亚型AIV分离株的免疫预防效果,本研究对60只3周龄SPf鸡以肌肉注射途径接种该疫苗(0.3 mL/只),另外,60只鸡注射PBS作为阴性对照组;免疫3周后分组,每10只免疫鸡和10只对照鸡为一组,共6组,采集各组鸡血清并检测针对6株AIV分离株(2020年~2021年分离的4株H5N6、1株H5N8和1株H7N9亚型AIV)的相应HI抗体效价。同时用上述6株AIV分离株作为抗原差异代表株,分别以105EID50的剂量进行攻毒试验,攻毒后5 d采集各组所有存活鸡的喉头和泄殖腔拭子样品,死亡鸡样品随时采集,进行排毒检测。HI抗体检测结果显示,免疫后3周,5组免疫鸡血清中针对H5亚型Re-11株和Re-12株抗原的HI抗体效价在8log2~8.6log2,针对4株H5N6 AIV分离株(DK/HuN/S11553/2020、 DK/GD/SC001/2020、 DK/fJ/S1424/20和GS/GZ/S1569/21)和1株H5N8 AIV分离株(WS/SX/4-1/20)的平均抗体效价分别为5.0log2、4.6 log2、4.3log2、3.8 log2、3.7log2;针对H7N9 AIV H7-Re3株的HI抗体效价为7.8log2,而针对H7N9 AIV分离株CK/YN/SD024/21的平均抗体效价为4.0log2;对照组鸡血清中针对疫苗株和所有分离株的HI抗体均为阴性。表明上述分离株与现用疫苗株存在较大抗原性差异。攻毒后14 d的观察期内,所有免疫组鸡均健活,且攻击3株H5N6和1株H7N9 AIV分离株的免疫组鸡均不排毒,但攻击1株H5N6 AIV分离株(GS/GZ/S1569/21)和H5N8 AIV分离株的免疫组分别有2/10和3/10只鸡的喉头拭子样品中检测到低水平的病毒;所有对照组鸡在攻毒后4 d内全部发病、死亡,且死亡对照组鸡的喉头和泄殖腔拭子样品均呈AIV阳性。以上结果表明,以近期野鸟或家禽中分离的H5和H7亚型AIV抗原变异株攻击各组鸡后,现用的H5+H7 AIV三价灭活疫苗可对免疫鸡提供无临床发病的保护,并可有效阻止分离株在鸡体内的复制。本研究为H5和H7三价疫苗的应用及更新提供了科学依据。

关键词：禽流感 H5+H7亚型三价灭活疫苗抗原变异株免疫效力

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一株野鸟源H1N1亚型禽流感病毒的遗传演化及其对小鼠的致病性分析

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中国预防兽医学报 2022年第9期44卷 915-920页

作者：王冬雪穆国冬侯玉杰李斌邓国华崔鹏飞施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 吉林省动物疫病预防控制中心吉林长春130000

为了解野鸟源H1N1亚型禽流感病毒(AIV)的分子特征及其对哺乳动物小鼠模型的致病风险,本研究对2020年分离到的一株H1N1亚型AIV A/wildbird/Jilin/SM199/2020(H1N1)(简称WB/JL/SM199/2020)进行基因组序列及遗传演化分析,并评估了其对BALB/... 详细信息

为了解野鸟源H1N1亚型禽流感病毒(AIV)的分子特征及其对哺乳动物小鼠模型的致病风险,本研究对2020年分离到的一株H1N1亚型AIV A/wildbird/Jilin/SM199/2020(H1N1)(简称WB/JL/SM199/2020)进行基因组序列及遗传演化分析,并评估了其对BALB/c小鼠的致病力。序列分析结果显示,分离株的8个基因节段分别与GISAID数据库中的野鸟源H1N1、H6N1、H11N9、H7N7、H1N2、H12N8和H3N8亚型AIV各基因节段的同源性较高,达98%以上,表明该病毒基因来源复杂,具有明显的遗传多样性。系统发育分析结果显示,该病毒的HA和NA基因均属于欧亚分支。各蛋白氨基酸序列分析结果显示,该病毒HA蛋白裂解位点基序为^(324)PSIQSR↓GLfG^(333),符合低致病性AIV(LPAIV)特征;其内部蛋白氨基酸序列存在多处对小鼠致病力增强的氨基酸突变,如PB1蛋白的D^(622)G、NS1蛋白的I^(106)M、C_(138)f和V^(149)A突变、M1蛋白的I^(43)M和T^(215)A突变。小鼠致病性试验结果显示,该病毒仅能在小鼠的鼻甲和肺脏中有效复制,病毒滴度均在3log_(10)EID_(50)/mL以上。而在小鼠的脑、脾脏和肾脏中均未检测到该病毒,且感染组与阴性对照组小鼠均无相应临床症状,体质量均无明显降低。以上结果表明该H1N1亚型AIV对小鼠呈低致病力。本研究为野鸟源H1N1亚型AI的防控提供了数据参考,并为其生物学特征的进一步研究奠定了基础。

关键词： H1N1亚型禽流感病毒野鸟遗传演化分析致病性

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新型鸭呼肠孤病毒动物感染模型的建立

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中国预防兽医学报 2022年第4期44卷 382-387,422页

作者：罗丹刘芮高玉龙李凯刘长军祁小乐崔红玉张艳萍潘青高立王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

为了建立新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)动物感染模型,本研究利用NDRV代表株SD19/6201,分别以10^(5.0)ELD_(50)/0.1 mL(低剂量)和10^(6.0) ELD_(50)/0.1 mL(高剂量)感染14日龄、21日龄SPf麻鸭,分别于感染后第5 d、第7 d迫杀雏鸭,观察脾脏剖检... 详细信息

为了建立新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)动物感染模型,本研究利用NDRV代表株SD19/6201,分别以10^(5.0)ELD_(50)/0.1 mL(低剂量)和10^(6.0) ELD_(50)/0.1 mL(高剂量)感染14日龄、21日龄SPf麻鸭,分别于感染后第5 d、第7 d迫杀雏鸭,观察脾脏剖检变化并统计其病变率。结果显示,14日龄雏鸭低剂量感染组在感染后第5 d脾脏病变以出血点/斑为主,病变率为70%(7/10),感染后第7 d脾脏上述病变更加明显,病变率为80%(8/10);高剂量感染组雏鸭剖检脾脏病变比低剂量感染组明显,出现黄白色坏死灶,感染后第5 d、第7 d脾脏病变比率分别为100%(10/10)和90%(9/10)。21日龄低剂量感染组雏鸭感染后第5 d、第7 d脾脏出血或坏死的比率明显低于相同剂量的14日龄雏鸭感染组,脾脏病变率分别为60%(6/10)和40%(4/10),高剂量感染组雏鸭感染后第5 d、第7 d脾脏出现出血、坏死的比率均为80%(8/10)。14日龄和21日龄雏鸭感染后第5 d不同剂量感染组脾脏指数均明显高于对照组,感染后第7 d各感染组雏鸭脾脏肿大程度有所恢复,脾脏指数与对照组差异不明显,但脾脏坏死症状并未恢复。脾脏病理变化结果显示,与14日龄雏鸭感染组相比,21日龄雏鸭感染组脾脏组织病理变化程度更轻,与剖检病变基本一致。采用TaqMan荧光定量RT-PCR方法检测各组雏鸭脾脏病毒载量,结果显示,感染后第5 d即可在各感染组雏鸭脾脏中检测到大量的病毒,且14日龄雏鸭感染组脾脏病毒载量高于21日龄雏鸭感染组,各日龄感染雏鸭高剂量感染组脾脏病毒载量均高于低剂量感染组。以上结果表明,NDRV对14日龄雏鸭最佳感染剂量是10^(5.0)ELD_(50)/0.1 mL,NDRV对21日龄雏鸭最佳感染剂量是10^(6.0) ELD_(50)/0.1 mL,最佳剖检时间为感染后第7 d。本研究首次建立了NDRV动物感染模型,为该病毒后期疫苗质量标准的研究提供了重要依据。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒动物感染模型感染剂量脾脏出血或坏死

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B亚型禽偏肺病毒的分离鉴定及致病性研究

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畜牧兽医学报 2022年第10期53卷 3540-3549页

作者：于蒙蒙包媛玲王素艳辛子琪刘鹏冯笑艳孟令宅郭茹张艳萍刘长军祁小乐李俊平王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病创新团队哈尔滨150069 中国兽医药品监察所北京100081 扬州大学江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心扬州225009

旨在确定我国部分养鸡场的鸡出现甩头、精神萎靡和肿头综合征是否由禽偏肺病毒(aMPV)引起,本研究从山东、福建、黑龙江等地的发病蛋鸡和肉鸡场采集鼻甲骨、气管和肺等样品,首先利用aMPV特异性的RT-PCR方法对临床样品进行初步检测,将RT-... 详细信息

旨在确定我国部分养鸡场的鸡出现甩头、精神萎靡和肿头综合征是否由禽偏肺病毒(aMPV)引起,本研究从山东、福建、黑龙江等地的发病蛋鸡和肉鸡场采集鼻甲骨、气管和肺等样品,首先利用aMPV特异性的RT-PCR方法对临床样品进行初步检测,将RT-PCR检测阳性样品接种Vero细胞进行病毒分离,然后利用G/f基因序列分析及间接免疫荧光试验(IfA)等鉴定病毒的亚型,最后将分离株感染SPf鸡进行致病性分析。结果显示:在采集的220份样品中,RT-PCR检测结果显示,有3份鼻甲骨样品在228bp左右出现特异性条带,将阳性病料接种Vero细胞盲传5代后,细胞出现变圆、聚集和融合等aMPV特征性细胞病变(CPE),表明成功分离到3株aMPV,将其分别命名为SD2001、SD2002和HLJ2101。G和f基因同源性分析显示,来自蛋鸡的SD2001、SD2002和来自肉鸡的HLJ2101分离株的G和f基因与其他B亚型aMPV毒株的核苷酸和氨基酸序列相似性均较高,核苷酸的相似性分别为93.4%~98.6%和95.6%~100.0%,氨基酸的相似性分别为88.7%~97.8%和97.6%~100.0%;而与A、C和D亚型的G和f基因同源性较低,核苷酸的相似性分别为27.1%~61.8%和66.8%~74.8%,氨基酸的相似性分别为16.1%~36.7%和72.5%~86.5%,这些结果表明,SD2001、SD2002和HLJ2101分离株属于B亚型aMPV。进一步利用B亚型aMPV特异性的阳性血清进行IfA检测,接种SD2001、SD2002和HLJ2101的Vero细胞均可以观察到特异性的绿色荧光信号,进一步证实3个分离株属于B亚型aMPV。选择SD2001感染3周龄SPf鸡进行了致病性研究,结果发现SPf鸡感染后3~6d出现精神萎靡、甩头和流鼻涕等症状,鼻甲骨、气管和肺也出现病理性损伤,其发病率为90%(18/20)。3株B亚型aMPV的分离不仅有助于明确我国部分养鸡场出现肿头综合征的发病原因,同时也证实B亚型aMPV流行毒株对鸡有明显的致病性,这些结果为我国家禽疫病的诊断和有效防控提供了重要理论依据。

关键词： B亚型禽偏肺病毒分离鉴定致病性

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DHV-Ⅰ和DEV双重荧光定量PCR方法的建立

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中国兽医科学 2021年第2期51卷 169-175页

作者：陈肖韩刘海燕苏世博赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其... 详细信息

为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其特异性及敏感性。结果,该方法特异性好,对鹅细小病毒、番鸭细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、鸭坦布苏病毒、禽网状内皮增生病毒、禽呼肠弧病毒、减蛋综合征病毒、鸭甲肝病毒3型9种病毒检测,均无荧光信号。而且其灵敏度高,对DHV-I和DEV的最小检出量均为200拷贝。利用所建立的荧光定量PCR方法对江苏徐州采集的166份肛拭子进行检测,检出I型鸭肝炎病毒13份(阳性率为7.8%),鸭肠炎病毒75份(阳性率为45%)。上述结果表明,本研究建立了灵敏度高特异性强的DHV-I和DEV双重荧光定量PCR方法。

关键词： Ⅰ型鸭肝炎病毒鸭肠炎病毒,双重荧光定量

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猪内源性逆转录病毒在3种不同品系猪中的分布及序列特征研究

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中国预防兽医学报 2022年第11期44卷 1141-1148,1168页

作者：冯天悦 Kamal Shah 张文立付利芝李昌文王玉娥陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 重庆市畜牧科学研究院兽医兽药研究所重庆402460

为研究猪内源性逆转录病毒(PERV)在不同猪种中的分布情况、序列结构、遗传变异、表达特性等特征,本研究选取大白猪、荣昌猪、五指山小型猪3种常见猪种为研究对象,分别设计特异性引物,检测各猪种肺组织中PERV 3种亚型(PERV-A、PERV-B、PE... 详细信息

为研究猪内源性逆转录病毒(PERV)在不同猪种中的分布情况、序列结构、遗传变异、表达特性等特征,本研究选取大白猪、荣昌猪、五指山小型猪3种常见猪种为研究对象,分别设计特异性引物,检测各猪种肺组织中PERV 3种亚型(PERV-A、PERV-B、PERV-C)的分布情况。结果显示,PERV在3种猪种中均有分布,其中PERV-A分布最广泛。进一步分段扩增3种猪的PERV-A全基因组序列并测序分析。全基因组序列进化树与囊膜(env)基因进化树分析均显示,东北地区的大白猪与荣昌猪PERV-A归为同一分支,亲缘关系较近;对测序结果进行生物信息学分析和蛋白二级结构预测,结果显示,PERV-A Gag蛋白和Pol蛋白的变异程度较大,有多种结构,但Env蛋白保守性较高,结构较为单一。采用荧光定量PCR法检测SPf大白猪不同组织中的PERV-A,结果显示从SPf大白猪心、肝、脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结等7种组织中均检测出PERV-A,且在扁桃体等免疫器官组织中的转录水平最高。本研究共获得了5条不同猪种的PERV-A全基因组序列,首次鉴定了荣昌猪PERV全基因组序列,提示东北地区大白猪的引种来源可能与韩国猪种存在一定同源性,且五指山小型猪与荣昌猪、大白猪亲缘关系较远,有助于PERV分子特性的研究,并为评估不同猪种PERV在异种移植中的安全性并筛选合适猪种提供参考。

关键词：猪内源性逆转录病毒序列分析囊膜基因遗传进化分析

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