关键词： 奶牛乳房炎   明串珠菌   抑菌活性  

摘要： 【目的】从奶牛场环境和牛体样本中分离明串珠菌(Leuconostoc)并深入探究其生物学特性，为防治奶牛乳房炎提供益生菌菌株。【方法】通过菌体形态学观察及分子生物学手段对分离菌进行菌种鉴定，通过双层平板法分析菌株对奶牛乳房炎常见病原菌的抗菌活性，并分析其主要抑菌物质成分，建立生长曲线及产酸曲线，探究其消化道环境耐受特性，并通过药敏试验和溶血试验评估菌株的安全性。【结果】分离得到3株益生菌，在MRS琼脂培养基上均呈乳白色单菌落，镜检为革兰阳性球菌，分别命名为11、14和18号菌株。16S rDNA测序结果显示，11和14号菌株与NCBI登录的肠膜明串珠菌相似性均在99%以上，18号菌株与乳明串珠菌相似性在99%以上，确定3株分离株均为明串珠菌。3株明串珠菌对大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的抑菌圈直径均>19 mm,具有良好的抑菌活性。3株明串珠菌对大肠杆菌的抑菌物质主要包括有机酸、细菌素和过氧化氢；而11、14号菌株对肺炎克雷伯菌的主要抗菌物质包括有机酸和过氧化氢，18号菌株主要包括有机酸。生长曲线显示，3株明串珠菌生长规律基本一致，其中0～2 h为迟缓期，2～12 h为对数期，12 h后为稳定期，菌液产酸pH均稳定为4.0左右，具有较好的产酸性能。3株明串珠菌在人工胃液、人工肠液中培养4 h后的存活率均在56%以上，胆盐浓度为0.3%时，3株明串珠菌存活率均在26%以上，说明菌株具有良好的耐受性。药敏试验结果显示，3株明串珠菌对红霉素、米诺霉素、妥布霉素等高度敏感；对青霉素、氨苄西林和万古霉素耐受；对头孢呋辛、头孢曲松、左氧氟沙星等中度敏感。3株明串珠菌均不具有溶血性。【结论】本研究分离得到的3株明串珠菌均具有较好的抑菌特性和安全性，为后续开展益生菌防治细菌性奶牛乳房炎提供了研究基础。

关键词： 结节性皮肤病病毒(LSDV)   分离鉴定   生物学特性   疫苗  

摘要： 【目的】了解山东地区牛结节性皮肤病病毒（Lumpy skin disease virus, LSDV）流行株的病原学特性。【方法】采集山东某牛场疑似结节性皮肤病（lumpy skin disease, LSD）牛的皮肤结节组织，用原代羔羊睾丸细胞（primary lamb testicular cells, PLT）进行病毒分离；通过PCR扩增LSDV G蛋白偶联受体（G-protein-coupled chemokine receptor, GPCR）基因并测序，利用抗LSDV特异性血清进行间接免疫荧光试验（IFA）鉴定病毒特异性；对分离毒株进行基因组测序并分析其遗传变异情况；在不同细胞中对分离毒株连续传代并测定病毒滴度，绘制生长曲线，进一步测定其在不同细胞中的增殖能力；通过抗体中和试验测定分离毒株对山羊痘疫苗抗体的中和指数。【结果】病牛皮肤结节组织样品经PLT细胞培养，盲传3代后出现细胞变圆、聚集、脱落为特征的细胞病变效应（cytopathic effect, CPE）。PCR扩增获得大小约1 010 bp的分离毒株GPCR基因特异性条带，且该基因序列与国内外LSDV毒株相似性为99.3%～100%。分离毒株可与抗LSDV特异性血清结合，免疫荧光染色后出现特异性绿色荧光斑。基因组测序比对结果显示，分离毒株与2019—2022年流行的7株国内以及2022年泰国毒株遗传距离较近。分离毒株传代20～30代时，病毒滴度可稳定在10-6.08至10-6.17TCID50/mL。生长曲线显示，该分离毒株滴度在96 h达到峰值(10-6.16TCID50/mL),144 h下降至10-5.60TCID50/mL。分离毒株在MBDK和BHK-21细胞系上均能连续增殖3代，其病毒滴度可分别达10-4.85和10-4.63TCID50/mL。山羊痘疫苗抗体对该毒株的中和指数（276）显著低于山羊痘疫苗毒株（1 833）(P<0.05)。【结论】从病牛皮肤结节组织中成功分离到1株LSDV,该毒株与国内除西藏地区外的其他地区的毒株遗传距离较近，在MBDK和BHK-21细胞中可稳定传代培养，且山羊痘疫苗抗体对该毒株的中和能力较差。

关键词： 无乳链球菌   Ⅶ型分泌系统   essC基因   细胞毒性  

摘要： [目的]本文旨在探究罗非鱼源无乳链球菌Ⅶ型分泌系统（type VII secretion system，T7SS）膜蛋白EssC的生物学功能。[方法]以GD201008-001菌株为研究对象，通过生物信息学分析，预测该菌株的T7SS基因簇及其潜在底物，并构建基因缺失株ΔessC和互补株CΔessC，测定菌株的生长曲线，制备T7SS底物多克隆抗体并检测T7SS底物的分泌，同时测定菌株抗巨噬细胞吞噬能力以及对罗非鱼脑细胞的毒性和对小鼠的毒力。[结果]成功构建了T7SS膜蛋白EssC的基因缺失株ΔessC和互补株CΔessC，并制备了4种预测的WXG家族底物多克隆抗体，通过蛋白免疫印迹法用多克隆抗体对提取的野生株和缺失株分泌蛋白进行检测，结果显示野生株的分泌蛋白中能检到预测的T7SS底物，说明该菌株的T7SS是具有功能性的，而ΔessC的分泌蛋白中未检测到T7SS底物，说明essC影响了T7SS底物分泌；细胞感染试验显示，与野生株相比，ΔessC的抗巨噬细胞吞噬能力显著下降（P<0.01），对罗非鱼脑细胞的毒性也显著降低（P<0.001），而基因互补株又能恢复至野生株水平；动物攻毒试验结果显示，essC基因缺失能延缓小鼠死亡。[结论]essC基因在无乳链球菌GD201008-001的T7SS底物分泌中发挥重要作用，并对细菌的毒力产生影响。

关键词： 动物分子生物学   “E+C”混合式教学模式   课程建设  

摘要： 动物分子生物学课程是动物医学和动物科学2个专业的核心专业基础课，讲授分子生物学的基本规律和原理，及其在动物科学研究工作中的应用和进展，对学生在动物科学领域的深入学习和研究能力的培养具有基础性的地位和作用。信息化浪潮下，数字化教育融合传统教学模式的需求逐渐增加，本文根据教学团队在动物分子生物学课程多年的教学实践，从教学资源建设、教学内容重构、学时调整和考评方式完善4个方面入手，围绕线上自主学习“E（Electronic-Learning）”、线下课堂精讲“C（Classroom）”和课后拓展，构建线上线下混合式教学模式，即“E+C”混合式教学模式，将线下课堂教学和线上自主学习进行有机融合。线下教学注重理论和知识体系的完整性，线上内容注重科普和趣味性，更易激发学生的学习兴趣和热情。经5年的实践证明，“E+C”混合式教学模式具有良好的教学效果，学生反馈本课程收获大，线下教学与线上学习连接紧密和互补性强，对专业知识的掌握具有很强的助力，同时也培养学习的内驱力，提高知识的获得感，显著提升教学效果。

关键词： 核心素养   初中生物学   跨学科教学  

摘要： 本研究核心目标是深入探究以核心素养为基础的初中生物学跨学科教学方法.全面分析当前初中生物学的教学实际,明确跨学科教学在培育学生核心素养方面的关键作用.为进一步推动初中生物学教学的创新与发展,详细提出一系列具有实践指导意义的跨学科教学策略,旨在为相关教学改革提供有力的参考与支持.

关键词： 跨学科实践   核心素养   生物学  

摘要： 跨学科实践的探索不仅是理念提升的需要,也是发展中学生核心素养,提升学生高阶思维能力的需要,同样也是避免理论知识碎片化、实际应用能力低、不能有效处理现实问题的需要.本文从"科学筹备,助力跨学科实践落实到位""实践开拓,助力跨学科实践有效推进""深度反思,助力跨学科实践增值"三个维度,积极探索指向核心素养的跨学科实践活动的可行性路径.

关键词： 初中生物   探究性   教学情境  

摘要： 探究性的学习方法有助于学生掌握生物学习的核心要义,推动学生对生物学史历程有一个综合且条理分明的理解,这样一来能够辅助教师开展多样化的教育实践,进而提升学生在生物领域的学术水平.随着生物学新课程的进一步贯彻,教师得以构建相关场景以促进学生的探究活动.在此类教育策略中,将初中生物教育的基本概念与实际情境相结合,实现探究性学习情境创设有助于增强学生的理解力.

关键词： 无缝克隆   限制性内切酶克隆   碱性磷酸酶基因   突变体   国家级一流课程  

摘要： 无缝克隆技术作为一种革命性的和高效的分子生物学工具，已经应用到了基础生物学、生物技术和生物医药等多个研究领域。本文介绍一项适合本科生《分子生物学实验》课程的教学改革项目，即利用无缝克隆技术构建碱性磷酸酶突变体基因的原核表达载体，并将其引入国家级一流本科课程《分子生物学实验》中。通过具体的教学案例，本文对实验项目的设计与实施进行了系统化探索，并着重分析了该教学内容的重点和难点。本文的教学实践发现，该教改项目的实施在提升学生的生物学核心素养、生物信息学技能、科研思维和创新能力方面取得了非常好的教学效果；同时该技术的应用能够显著提升实验教学的质量，为推进国家级一流实验课程的改革创新提供了新的思路与实践参考。

关键词： C1GALT1   胶质母细胞瘤   细胞增殖   细胞迁移   细胞侵袭   细胞衰老  

摘要： 目的 探究核心1β1,3-半乳糖基转移酶1(C1GALT1)在胶质母细胞瘤(GBM)中的表达及其对GBM发生发展的影响。方法 利用GEPIA和CGGA数据库分析C1GALT1在GBM中的表达水平及预后情况。选择两种代表性的GBM细胞(U251和LN18),构建敲低C1GALT1的GBM细胞系并进行体外实验。细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、Transwell实验检测C1GALT1对GBM细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。转录组数据分析可能的信号通路。采用细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞β-半乳糖苷酶活性。结果 GEPIA和CGGA数据库分析结果显示，与癌旁组织相比，C1GALT1在GBM组织中高表达(P<0.05),其高表达与患者不良预后相关(P<0.000 1)。CCK-8实验结果显示敲低C1GALT1后，细胞的增殖能力下降(P<0.05)。Transwell实验结果显示敲低C1GALT1后细胞迁移和侵袭能力降低(P<0.001)。转录组测序和细胞衰老β-半乳糖苷酶染色实验结果显示C1GALT1参与到细胞衰老信号通路，敲低C1GALT1后细胞衰老相关的β-半乳糖苷酶活性明显增强(P<0.05)。结论 C1GALT1在GBM组织中高表达，并可能通过抑制细胞衰老增强GBM细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

关键词： 耐高温   产朊假丝酵母   生物学特性  

摘要： （目的）该研究从工业废水中筛选出耐高温产朊假丝酵母A-1，评价并考察其生物学特性。（方法）对该菌株进行了高温耐受性试验、脱氮试验以及耐酸、耐胆盐、耐盐、疏水性、自凝聚力、代谢物抑菌性评价等部分生物学特性研究。（结果）结果表明该菌株能耐受温度达到40 ℃，有较强的耐酸、耐胆盐、耐盐、疏水性和自凝聚力， 菌株代谢物对哈维氏弧菌和解藻酸弧菌都有明显的抑制作用。同时，该菌株具有较强的异养硝化和好氧反硝化能力。（结论）该菌株在饲料工业和水处理上具有较大的应用潜力。