基于PMA-CELL-qPCR的葡萄酒发酵中酿酒酵母活菌计数方法的开发与应用

作     者：卫博 王杰 陈亦新 王春光 陈卓君 张柏林 朱保庆 WEI Bo;WANG Jie;CHEN Yixin;WANG Chunguang;CHEN Zhuojun;ZHANG Bolin;ZHU Baoqing

作者机构：北京林业大学林业食品加工与安全北京市重点实验室生物科学与技术学院北京100083 

出 版 物：《食品与发酵工业》 (Food and Fermentation Industries)

年 卷 期：2022年第48卷第17期

页      面：79-86页

核心收录：

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 0836[工学-生物工程] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 083203[工学-农产品加工及贮藏工程] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31471834) 北京林业大学大学生创新创业训练计划项目(G202010022092,G202010022093) 

主　　题：叠氮溴化丙啶 CELL-qPCR 酿酒酵母 活菌定量 葡萄酒 

摘      要：实时监测发酵过程中的微生物动态对葡萄酒的质量控制至关重要。开发了一种将荧光染料叠氮溴化丙啶(propidium monoazide,PMA)与CELL-qPCR相结合的方法,不需要提取DNA,即可以高效、快速地检测葡萄酒发酵过程中酿酒酵母的动态变化。针对酿酒酵母开发的PMA-CELL-qPCR计数方法对葡萄酒环境下的细胞破壁处理、PMA处理浓度、PMA检测灵敏度和样品预处理等多种条件进行了优化,结果表明,优化后的方法可以准确定量目标菌株10~3~10~7CFU/mL;当体系中死菌与活菌的浓度比例高于10000∶1时,检测结果存在0.5 lg CFU/mL的误差;用优化的PMA-CELL-qPCR方法监测赤霞珠葡萄酒发酵过程中酿酒酵母的动态变化,结果与平板计数法一致。研究开发的PMA-CELL-qPCR对酿酒酵母的活菌定量方法具有定量准确、操作简单等优势,可以作为准确监测葡萄酒和其他果酒中微生物动态变化的手段。