Ca_v1.2钙通道GST-CT1蛋白片段与胞浆钙调蛋白提取纯化的比较

作     者：晏珊 封瑞 杨磊 孙宇 王千慧 郭凤 赵美眯 孙雪菲 郝丽英 

作者机构：中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122 天津出入境检验检疫局工业品安全技术中心天津300308 

出 版 物：《解剖科学进展》 (Progress of Anatomical Sciences)

年 卷 期：2016年第22卷第2期

页      面：121-123页

学科分类：08[工学] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

基　　金：国家自然科学基金(31400981 31471091) 

主　　题：融合蛋白 胞浆蛋白 钙通道 钙调蛋白 

摘      要：目的对比分析心肌Ca_V1.2钙通道片段GST-CT1融合蛋白与胞浆钙调蛋白(calmodulin,CaM)提取与纯化方法的异同。方法将pGEX-6p-3/CT1和pGEX-6p-3/CaM重组质粒转入*** BL21菌株,筛选得到转化成功的菌株并用IPTG诱导其表达,GS-4B beads分离纯化,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定目的蛋白及其相对纯度,Pull down assay方法鉴定GST-CT1融合蛋白和CaM蛋白的生物学活性。结果采用超声破碎法,应用N-laurylsarcosine和Triton X-100处理后提取的GST-CT1融合蛋白浓度和纯度显著高于未用两者处理的对照组,而N-laurylsarcosine和Triton X-100对胞浆蛋白CaM的提取和纯化无明显影响。结论细胞膜通道蛋白GST-CT1的提取和纯化方法与胞浆蛋白Ca M存在明显差别。