检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：石岩西南大学

学位级别：博士

桔小实蝇是重要的农业害虫,由于寄主范围广、适应能力强以及抗药性发展快速等因素,对其持续防控愈发困难。神经肽是昆虫体内一种重要的信号分子,通过激活G蛋白偶联受体（G-protein coupled receptors,GPCRs）调控昆虫的多种生理功能,阻... 详细信息

桔小实蝇是重要的农业害虫,由于寄主范围广、适应能力强以及抗药性发展快速等因素,对其持续防控愈发困难。神经肽是昆虫体内一种重要的信号分子,通过激活G蛋白偶联受体（G-protein coupled receptors,GPCRs）调控昆虫的多种生理功能,阻断或扰乱神经肽信号传递系统的信号传导,能够达到控制害虫的目的。因此,神经肽信号传递系统被认为是一种理想的杀虫剂靶标。本学位论文基于桔小实蝇幼虫的骨化结构制订幼虫龄期的划分标准,基于基因组和转录组大数据,鉴定和注释双翅目88个物种的ETH前体基因;在此基础上克隆桔小实蝇ETH前体及其受体基因的cDNA序列,解析基因组结构信息;利用中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary,CHO）细胞表达系统及胞内钙离子流动测定技术,鉴定桔小实蝇的ETH信号传递系统。利用实时荧光定量PCR（qPCR）技术,分析BdETH及其受体在桔小实蝇幼虫和雌虫体内的表达模式;运用免疫组化（Immunohistochemistry）和荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization）技术,定位桔小实蝇气管组织分泌表达BdETH的Inka细胞;采用活体钙离子成像技术,定位表达ETHR的组织;利用RNA干扰（RNA interference,RNAi）、高效液相色谱（High performance liquid chromatography,HPLC）以及行为学分析技术和方法,确定ETH信号传递系统在桔小实蝇幼虫和雌虫体内承担的具体生理功能;最后,利用三维建模、分子动力学模拟和分子盲对接分析,从分子结构角度可视化桔小实蝇BdETH1和BdETH2内源性配体分别与受体BdETHR-A和BdETHR-B的结合位点。研究旨在为将来进一步靶向昆虫ETH神经肽信号传递系统创制新型控制剂奠定理论基础。本学位论文主要研究结果如下:1桔小实蝇幼虫龄期的划分基于桔小实蝇幼虫的骨化结构,准确鉴定桔小实蝇各龄幼虫。研究结果表明,桔小实蝇幼虫分为3龄,头咽骨是幼虫龄期划分的最佳特征性结构,幼虫各项指标的测量值均随龄期的增长呈现出相同的增长规律。头咽骨长是划分桔小实蝇幼虫龄期的最佳测量指标,头咽骨宽、口钩长和口钩宽均可作为分龄的辅助指标;相邻龄期幼虫的体长变化范围存在重叠,不能准确划分幼虫龄期。2 ETH及其受体的注释、克隆及鉴定基于InsectBase数据库、I5K基因组数据库和1KITE数据库鉴定和注释了双翅目88种昆虫的ETH前体基因的序列,通过系统发育分析发现同属不同种的ETH前体氨基酸序列聚为一支,双翅目昆虫ETH前体一般具有的保守结构特征为信号肽+成熟肽1+成熟肽2,但采采蝇Glossina属5种昆虫、Mycetophila sp.、Megaselia abdita、Haematopota和Clusia lateralis共9个物种的ETH前体基因序列仅鉴定得到1个ETH1,成熟肽ETH2丢失。成熟肽的切割位点保守为赖氨基酸残基（K）和精氨基酸残基（R）组合,大多数ETH成熟肽C端具有酰胺化修饰,成熟肽均具有保守的C端继续XXPRLX amide（X表示任意氨基酸）。克隆获得了桔小实蝇BdETH前体基因及其受体基因BdETHR-A和BdETHR-B的cDNA序列,BdETH前体氨基酸序列均具有神经肽保守的结构特征。其中,BdETH前体含有2个成熟肽,并具有昆虫ETH保守的基序KxxKxxPRLx amide。此外,受体BdETHR-A和BdETHR-B具有7个跨膜结构域,为典型的G蛋白偶联受体,序列比对分析发现BdETHR-A和BdETHR-B与其它昆虫相应ETH受体的跨膜结构域序列具有高度的保守性,暗示ETH信号传递系统在种间具有相似的信号传导机制。另外,利用CHO表达系统对BdETHR-A和BdETHR-B进行瞬时表达,并采用细胞内钙离子流动测定的方法对BdETHR-A和BdETHR-B进行功能性测定,结果显示,BdETH1和BdETH2两个内源性配体均能够呈浓度依赖性的激活BdETHR-A和BdETHR-B,且EC50值达到nM级。其中,BdETH1、BdETH2对-BdETHR-A的EC50值为69±31 nM和769±182 nM;BdETH1、BdETH2对-BdETHR-B的EC50值为39±16 nM和30±11nM。其中,BdETH2-BdETHR-A的EC50值相比BdETH1-BdETHR-A的EC50值高10倍以上,暗示BdETH1配体在桔小实蝇ETH信号传递系统中起主导作用。3 ETH信号传递系统对桔小实蝇幼虫生长发育的调控qPCR分析结果表明,桔小实蝇BdETH、BdETHR-A和BdETHR-B在幼虫期均有所表达,但BdETH的表达模式具有组织特异

关键词：桔小实蝇蜕皮触发激素气管蜕皮生殖力三维结构模拟分子对接

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一种嵌合蛋白AQP4-CH2、制备及其应用

一种嵌合蛋白AQP4-CH2、制备及其应用

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作者：祖向阳胡志刚杜喆张晓兰黄磊付东辽薛云高伟娜马晓孟宋春辉 471000 河南省洛阳市涧西区西苑路48号

本发明涉及一种嵌合蛋白AQP4‑CH2、制备及其应用，属于生物医药工程技术领域。本发明首先利用蛋白质三维结构模拟，将AQP4的三段抗原表位(A环、C环和E环)取代人抗体恒定区CH2中不规则卷曲，使其展示在CH2蛋白表面；然后人工合成密码子... 详细信息

标准号: CN109053902A

本发明涉及一种嵌合蛋白AQP4‑CH2、制备及其应用，属于生物医药工程技术领域。本发明首先利用蛋白质三维结构模拟，将AQP4的三段抗原表位(A环、C环和E环)取代人抗体恒定区CH2中不规则卷曲，使其展示在CH2蛋白表面；然后人工合成密码子优化的嵌合蛋白基因，利用分子克隆技术，构建原核表达载体；转化大肠杆菌筛选高效表达嵌合蛋白菌株，Ni‑亲和层析纯化嵌合蛋白AQP4‑CH2；以嵌合蛋白为抗原包被酶标版，采用酶联免疫分析(ELISA)法测定视神经脊髓炎患者的血清及脑脊液中的AQP4抗体，用于早期鉴别诊断视神经脊髓炎与多发性硬化。

关键词：嵌合蛋白视神经脊髓炎分子克隆技术工程技术领域酶联免疫分析亲和层析纯化人抗体恒定区三维结构模拟原核表达载体大肠杆菌多发性硬化密码子优化蛋白表面高效表达鉴别诊断抗原包被抗原表位生物医药不规则脑脊液卷曲血清构建菌株抗体酶标三段制备蛋白质筛选基因转化应用展示

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豆野螟嗅觉相关基因GOBP1、CSP1和OBP1的功能分析

豆野螟嗅觉相关基因GOBP1、CSP1和OBP1的功能分析

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作者：周菁华中师范大学

学位级别：硕士

在漫长的进化历程中,昆虫逐渐具备了极其灵敏的嗅觉系统,并以此感知来自于外界的多种化学刺激并作出相应的生理行为反应,如寻找配偶、定位食物源和栖息地,两性交流,聚集产卵和趋避敌害等,由此可见,嗅觉及化学感受系统在昆虫的各项生命... 详细信息

在漫长的进化历程中,昆虫逐渐具备了极其灵敏的嗅觉系统,并以此感知来自于外界的多种化学刺激并作出相应的生理行为反应,如寻找配偶、定位食物源和栖息地,两性交流,聚集产卵和趋避敌害等,由此可见,嗅觉及化学感受系统在昆虫的各项生命活动中发挥着重要功能。通过鉴定筛选靶标害虫信息素成分干扰和阻断昆虫的嗅觉识别行为,并将其成功应用于田间实践一直是害虫综合生物防控的重要措施之一。豆野螟是一种在世界范围内都具有较大危害的豆科作物害虫,其幼虫具有较强的钻蛀习性,化学药剂的大量使用不易杀死害虫,并容易导致农药残留超标,严重威胁各蔬菜基地豆类蔬菜产品的供应和食品安全。豆野螟主要分布在热带和亚热带地区,幼虫主要蛀食豆科作物幼嫩的花、叶和豆荚等,给豆科蔬菜生产造成了巨大的损失。基于课题组前期豆野螟触角转录组测序结果,我们克隆、表达并纯化了豆野螟MvitGOBP1、MvitCSP1、MvitOBP1,采用RT-PCR技术分析检测这三个基因在豆野螟成虫的不同组织的表达情况。利用荧光竞争结合实验分析研究了MvitGOBP1、 MvitCSP1、MvitOBP1与寄主植物花挥发性化合物的结合,并利用三维结构模拟以及分子对接技术对MvitGOBP1、MvitCSP1蛋白与配体分子的可能的关键结合位点进行预测。主要研究结果如下：1.豆野螟MvitGOBP1、MvitCSP1、MvitOBP1的克隆、序列和进化分析克隆获得豆野螟三个嗅觉基因,分别命名为MvitGOBP1、MvitCSP1、MvitOBP1,序列分析三个基因的ORF分别为486bp、387bp和471bp。多重序列比对显示,MvitGOBP1、MvitCSP1和MvitOBP1均与鳞翅目其他昆虫的相应基因具有较高的相似性。系统进化分析发现,MvitGOBP1与CmedGOBP1聚为一支,MvitCSP1和CmedCSP,MvitOBP1和CmedOBP11分别具有较高序列相似性。2.组织特异性表达分析利用荧光定量PCR技术分析检测了MvitGOBP1、MvitCSPl和MvitOBP1在豆野螟成虫不同组织的表达水平。结果表明,这三个基因主要在触角中高表达,在头、足和翅等组织中分别有少量的表达分布。3. MvitGOBP1、MvitCSP1和MvitOBP1的原核表达及亲和层析纯化将构建好的原核表达重组载体转入到大肠杆菌BL21感受态细胞中,不同IPTG条件诱导后破碎取上清,采用Ni柱亲和层析的方法来纯化目的蛋白,并利用肠激酶切除His标签。SDS-PAGE分析检测显示,这三个蛋白大小在25 kD到35kD之间产生特异性的条带。4.荧光竞争结合实验荧光竞争结合实验结果显示,MvitGOBP1对1H-Indol-4-ol(4-羟基吲哚)、Butanoic acid butyl ester(丁酸丁酯)和Limonene(柠檬烯)的结合能力较强;MvitCSP1对1H-Indol-4-ol和2-methyl-3-phenylpropanal(2-甲基-3-苯基丙醛)的结合能力较强；MvitOBP1对1H-Indol-4-ol和Butanoic acid butyl ester的结合能力较强。5.田间诱捕试验基于嗅觉目的蛋白与寄主挥发物的结合特性分析结果,我们从17种豇豆花挥发物气味分子中选取了六种结合能力较强的化合物来进行田间诱捕实验,分别是Butanoic acid butyl ester、Limonene、1H-Indol-4-ol、2-methyl-3-phenylpropanal、 Butanoic acid octyl ester(丁酸辛酯)和4-ethylpropiophenone(乙基苯丙酮)。田间诱捕实验结果显示,相对于空白对照组,这六种化合物均能够有效吸引雌蛾,产生类似产卵聚集效应,其中柠檬烯的诱捕效果最为显著。6.同源建模和分子对接通过构建目的蛋白三维结构模型与分子对接分析,我们发现MvitGOBP1和MvitCSP1的结合腔主要由疏水性氨基酸组成,促进两种嗅觉蛋白与寄主挥发物成分1H-indol-4-ol和2-methyl-3-phenylpropanal的特异性结合,推测可能的关键氨基酸位点分别是Asn83和Arg127,Thr26和Glu63。上述试验结果表明,MvitGOBP1、MvitCSP1和MvitOBP1在豆野螟不同组织中分布广泛,结合特性分析和田间诱捕试验表明,MvitGOBP1、MvitCSP1和MvitOBP1在豆野螟的寄主识别以及产卵定位等嗅觉生理活动中发挥着重要作用。

关键词：豆野螟 MvitGOBP1 MvitCSP1 MvitOBP1 基因克隆竞争结合特性三维结构模拟分子对接

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毛白杨α-微管蛋白基因家族的克隆与序列分析

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林业科学研究 2015年第1期25卷 44-49页

作者：饶国栋睢金凯张建国南京林业大学南方现代林业协同创新中心江苏南京210037 国家林业局林木培育重点实验室中国林业科学研究院林业研究所北京100091

采用本地化软件Blast P对杨树全基因组数据库和Gen Bank数据进行搜索,根据搜索结果对毛白杨TUA基因家族进行克隆,并利用软件Clustal W和MEGA对TUA基因进行了核酸和氨基酸序列的比对分析和系统进化分析;利用SWISS-MODEL服务器对TUA的蛋... 详细信息

采用本地化软件Blast P对杨树全基因组数据库和Gen Bank数据进行搜索,根据搜索结果对毛白杨TUA基因家族进行克隆,并利用软件Clustal W和MEGA对TUA基因进行了核酸和氨基酸序列的比对分析和系统进化分析;利用SWISS-MODEL服务器对TUA的蛋白质三维结构进行模拟。结果显示:毛白杨α-微管蛋白由8个成员构成,8个成员的氨基酸序列和其它植物α-微管蛋白序列的相似性在80%以上;TUA基因可分为2个家族,每个家族成员都有其独特的内含子外显子特征;TUA蛋白的三维结构表现出极高的相似性。毛白杨TUA基因在序列和结构上都十分保守;8个TUA基因起源于2个祖先TUA基因。

关键词： α-微管蛋白生物信息学系统进化三维结构模拟

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一种球面全景影像与三维激光扫描点云的配准及测量方法

一种球面全景影像与三维激光扫描点云的配准及测量方法

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作者：刘守军龚书林 430023 湖北省武汉市东湖新技术开发区武汉大学科技园慧业楼7楼

本发明提供了一种球面全景影像与三维激光扫描点云的配准及测量方法，首先用单位球体的三维结构模拟球面全景影像，将球面全景影像的像素坐标转换为三维直角坐标，然后计算出球面全景影像在点云数据中的姿态参数以及球面全景影像的光心... 详细信息

标准号: CN103017653B

本发明提供了一种球面全景影像与三维激光扫描点云的配准及测量方法，首先用单位球体的三维结构模拟球面全景影像，将球面全景影像的像素坐标转换为三维直角坐标，然后计算出球面全景影像在点云数据中的姿态参数以及球面全景影像的光心在点云数据中的位置坐标将球面全景影像在点云数据中进行配准；再通过计算得到球面全景影像的深度图；最后当需要在球面全景影像上测量时，将鼠标移动到需要测量的目标点位置，即可计算得出目标点的三维坐标。本发明提供的配准及测量方法不仅能够将球面全景影像与三维激光扫描点云进行高度配准，同时还能够对目标点实现快速测量。

关键词：球面全景影像点云配准目标点三维激光扫描测量方法三维结构模拟三维直角坐标快速测量三维坐标位置坐标姿态参数坐标转换深度图光心球体像素鼠标

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一种球面全景影像与三维激光扫描点云的配准及测量方法

一种球面全景影像与三维激光扫描点云的配准及测量方法

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作者：刘守军龚书林 430023 湖北省武汉市东湖新技术开发区武汉大学科技园慧业楼7楼

标准号: CN103017653A

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苜蓿盲蝽气味结合蛋白AlinOBP5的结构预测及结合特性

苜蓿盲蝽气味结合蛋白AlinOBP5的结构预测及结合特性

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作者：王松莹中国农业科学院

学位级别：硕士

嗅觉对于昆虫的生存、繁殖等行为具有重要作用，气味结合蛋白（odorant binding proteins,OBPs）是昆虫嗅觉过程中关键功能蛋白之一。本文克隆、表达并纯化了一个新的苜蓿盲蝽气味结合蛋白AlinOBP5，利用荧光竞争结合实验研究了AlinOBP... 详细信息

嗅觉对于昆虫的生存、繁殖等行为具有重要作用，气味结合蛋白（odorant binding proteins,OBPs）是昆虫嗅觉过程中关键功能蛋白之一。本文克隆、表达并纯化了一个新的苜蓿盲蝽气味结合蛋白AlinOBP5，利用荧光竞争结合实验研究了AlinOBP5与盲蝽科性信息素类似物及棉花挥发物的气味结合谱。采用结构生物信息学技术，通过三维结构模拟与分子对接技术预测了该蛋白与配体分子的关键结合位点，然后运用定点突变试验对功能结合位点进行了验证。主要研究结果如下： 1.序列分析结果表明AlinOBP5是一个典型OBP，而且隶属于中链OBPs。在进化上该基因与蚊科的OBPs基因具有共同的祖先基因。 2.通过原核表达获得了纯化的重组蛋白AlinOBP5。荧光竞争结合实验显示，盲蝽科性信息素类似物不能与其有效结合，而棉花挥发物中的橙花叔醇与AlinOBP5结合能力最强。月桂酸乙酯、β-紫罗兰酮、β-石竹烯、法尼醇和2,3-二甲基苯甲酸与AlinOBP5也有较强的结合力。推测AlinOBP5可能为普通气味结合蛋白，能够选择性地结合某些挥发物并参与其识别过程。 3.通过构建3-D结构模型与分子对接模型，我们发现AlinOBP5的结合腔主要有疏水性氨基酸组成，能够与橙花叔醇有特异性的结合。推测三个可能的关键的氨基酸位点分别是Lys74、Met75和Pro121。 4.通过定点突变和荧光竞争结合实验证实，Lys74和Pro121在AlinOBP5与配体的识别结合中发挥着重要作用。其中，亲水性的氨基酸残基Lys74可能对初始识别配体以及特异性结合配体发挥作用，而Pro121还可能与配体的释放有关。

关键词：气味结合蛋白苜蓿盲蝽荧光竞争结合三维结构模拟分子对接定点突变结合特性

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基于MEMs技术的三维细胞培养芯片、制备方法及其应用

基于MEMs技术的三维细胞培养芯片、制备方法及其应用

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作者：王文杰 310001 浙江省杭州市滨江区长河街道秋水路279号金龙大厦1421房间

本发明涉及一种基于MEMs技术的三维细胞培养芯片、制备方法及其应用，所述芯片的制备方法包括步骤：首先将胶原溶液旋涂在玻璃基片上，在室温无菌条件下晾干。然后再使用旋涂的方法在上述胶原包被的基片上包被su8-50光刻胶，85℃烘干，... 详细信息

标准号: CN102816694A

本发明涉及一种基于MEMs技术的三维细胞培养芯片、制备方法及其应用，所述芯片的制备方法包括步骤：首先将胶原溶液旋涂在玻璃基片上，在室温无菌条件下晾干。然后再使用旋涂的方法在上述胶原包被的基片上包被su8-50光刻胶，85℃烘干，然后覆盖上预先刻录好图案的石英模板，经过紫外线照射曝光，90℃烘干，显影，用乙酸丁酯漂洗1min，再用清水漂洗10分钟，95℃烘干，即获得所述三维细胞培养芯片。本发明的三维细胞培养芯片具有方便、精确、集约的特性，可以精确控制多细胞三维结构模拟细胞体内的行为特征和生长环境，为研究细胞间的相互作用提供了方便，可用于研究细胞与细胞之间、细胞与细胞外基质之间的作用，使体外细胞研究环境更接近体内细胞环境。

关键词：三维细胞培养烘干芯片细胞研究细胞制备方法漂洗胶原旋涂三维结构模拟细胞外基质紫外线照射玻璃基片精确控制生长环境石英模板体内细胞体外细胞行为特征研究环境乙酸丁酯光刻胶无菌显影清水图案曝光

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苜蓿盲蝽两种气味结合蛋白功能的初步研究

苜蓿盲蝽两种气味结合蛋白功能的初步研究

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作者：张雪莹中国农业科学院

学位级别：硕士

苜蓿盲蝽Adelphocoris lineolatus Goeze是一种重要的农业害虫,常常在我国黄河流域棉区和西北内陆棉区对棉花造成危害。另外,苜蓿盲蝽的食性很杂,还能够为害黎科、豆科、葫芦科、亚麻科等作物和牧草等。在昆虫有效感受外界信息物质的过... 详细信息

苜蓿盲蝽Adelphocoris lineolatus Goeze是一种重要的农业害虫,常常在我国黄河流域棉区和西北内陆棉区对棉花造成危害。另外,苜蓿盲蝽的食性很杂,还能够为害黎科、豆科、葫芦科、亚麻科等作物和牧草等。在昆虫有效感受外界信息物质的过程中,昆虫的嗅觉系统发挥了重要的作用,能够保证昆虫准确觅食、寻找配偶和产卵场所等。昆虫的嗅觉识别过程复杂,包括气味结合蛋白(OBPs)、化学感受蛋白(CSPs)、信息素结合蛋白(PBPs)、气味降解酶(ODEs)以及气味受体(ORs)等多种蛋白参与。其中昆虫气味结合蛋白是目前研究的一个热点。以气味结合蛋白基因为靶标,对昆虫嗅觉行为进行调控是害虫治理的一条潜在有效途径。本文以苜蓿盲蝽气味结合蛋白AlinOBP4和AlinOBP8为研究对象对其功能进行了初步研究,主要取得以下主要结果。利用同源建模的方式对苜蓿盲蝽AlinOBP4和AlinOBP8的三维结构以及识别气味分子的结合位点进行了预测。结果表明,这两个气味结合蛋白的结合口袋主要是由疏水性氨基酸构成,但在结合口袋的内部也存在亲水性的氨基酸。模型显示,AlinOBP8比AlinOBP4结合口袋更大,同时口袋内部的疏水性的氨基酸也更多。据此推测AlinOBP8能够识别结合更多的气味分子,而AlinOBP4可能对气味的识别更具有专一性。气味结合蛋白的疏水性氨基酸可能与疏水性的气味分子的结合作用相关,亲水性的氨基酸残基则可与气味分子的官能团形成氢键。将苜蓿盲蝽触角中特异性表达的AlinOBP8基因进行了原核表达,纯化的重组蛋白与85种气味分子的进行荧光配体结合实验。结果表明,与AlinOBP8结合比较强烈的气味分子多为绿叶气味物质。其中结合能力最强的几种气味分子包括月桂酸乙酯、乙酸叶醇酯、法尼醇、异癸醇和(E)-2-己烯醛,结合常数分别为0.462μmol/L、0.650μmol/L、0.665μmol/L、0.784μmol/L和1.739μmol/L。而一些报道的盲蝽科性信息素类似物与AlinOBP8的反应并不强烈,丁酸己酯的结合常数为3.164μmol/L,丁酸反-2-乙烯酯的结合常数为3.274μmol/L,丁酸丁酯的结合常数为3.382μmol/L。据此,推测AlinOBP8可能是一种普通气味结合蛋白。采用EAG方法测定了苜蓿盲蝽雌/雄成虫触角对不同气味分子电生理反应。结果发现,EAG的相对值较大的多为醛类,如(E)-2-己烯醛、3,4-二甲基苯甲醛、戊醛、辛醛等。在反应值较大的前20个标样中,包括6种醛类、5种酯类、3种酮类、3种醇类、3种烷烃。其中包括7种棉花挥发物以及已报道的3种性信息素类似物成分。同时在EAG反应中雌雄虫反应差异极显著的8种气味分子中包括3,4-二甲基苯甲醛、辛醛、苯甲醛、十一烷、2-己醇、辛烷、十二醛、水杨酸甲酯。使用显微注射法对苜蓿盲蝽的气味结合蛋白基因AlinOBP4成功进行了RNA干扰。结果表明,显微注射48小时后干扰后的昆虫相较于未干扰的昆虫对于性信息素类似物的EAG反应明显下降,并且雄虫比雌虫下降的更多。RT-PCR检测发现,注射siRNA的苜蓿盲蝽的AlinOBP4的mRNA的表达量被降低至极低水平。采用实时荧光定量PCR (Real time qPCR)检测结果也证实AlinOBP4基因被有效沉默。解析昆虫气味结合蛋白在嗅觉过程中的功能,以OBPs为潜在作用靶标,干扰害虫的嗅觉感知来有效控制昆虫的行为,是一种治理害虫的有效策略。本研究结果有助于阐明苜蓿盲蝽识别气味物质的分子基础,可以帮助我们设计新型引诱剂或驱避剂,为开创害虫治理新途径提供理论基础。

关键词：苜蓿盲蝽气味结合蛋白三维结构模拟荧光竞争结合实验 EAG RNA干扰

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人巨细胞病毒耐药相关蛋白PUL97局部结构模拟和突变分析

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上海交通大学学报（医学版） 2010年第4期30卷 408-414页

作者：方风琴谢琼张玥毛客自章莉陆怡德华丽曹国君季育华上海交通大学医学院瑞金医院检验科上海200025 复旦大学药学院上海200032

目的初步探索人巨细胞病毒耐药相关蛋白PUL97局部序列(329～572aa)的三维模拟结构并进行突变的耐药分析。方法采用巢式PCR方法扩增UL97基因776 bp片段并测序,以此发现非同义突变;然后利用SWISS-MODEL结构模拟综合服务器和其他相关软件... 详细信息

目的初步探索人巨细胞病毒耐药相关蛋白PUL97局部序列(329～572aa)的三维模拟结构并进行突变的耐药分析。方法采用巢式PCR方法扩增UL97基因776 bp片段并测序,以此发现非同义突变;然后利用SWISS-MODEL结构模拟综合服务器和其他相关软件比对模式对野生型PUL97蛋白片段进行同源模建并优化,通过各种指标或服务器来评估模拟结构的优劣并作筛选。将筛选所得的最佳模拟结构用于非同义新突变型的初步耐药分析。结果最终筛选出的模拟结构是以1YDTE为模板,以***为比对文件所得的Model A。整个分子的能量最低,ProQ的预测分数最高。分子对接分析也发现了潜在的ATP和GCV结合口袋。利用已知的阴阳性耐药点突变验证了该结构的合理性。同时根据突变前后结构信息的改变,提示C518Y单点突变以及联合突变(E517G和C518Y)呈现高度可疑的耐药特性。结论 PUL97野生型蛋白计算机结构模拟和突变分析法是初步评估新突变型耐药特性的又一方便快捷的方法 ,可用于实验验证前的筛选;但模拟结构本身的准确性是成功运用该方法的前提。

关键词：人巨细胞病毒 PUL97蛋白三维结构模拟突变分析

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