检索结果-内蒙古大学图书馆

热带生物学报 2020年第2期11卷 200-209,216页

作者：梁峻玮曾凡云漆艳香彭军张欣谢培兰谢艺贤海南大学植物保护学院海口570228 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海口571101

为了研究中性海藻糖酶在香蕉枯萎病菌4号生理小种(Foc4-37)致病和耐受不良环境中的作用,笔者构建了中性海藻糖酶编码基因敲除突变体Δnth1,并对敲除突变体的致病力、生物学特性和对氰烯菌酯的抗药性开展测定分析。结果表明:与野生型相比... 详细信息

为了研究中性海藻糖酶在香蕉枯萎病菌4号生理小种(Foc4-37)致病和耐受不良环境中的作用,笔者构建了中性海藻糖酶编码基因敲除突变体Δnth1,并对敲除突变体的致病力、生物学特性和对氰烯菌酯的抗药性开展测定分析。结果表明:与野生型相比,Δnth1菌落生长缓慢、孢子萌发率下降,对巴西蕉苗致病力明显减弱,但产孢量没有显著差异,对氰烯菌酯的敏感性(EC50=6.07 mg·L^−1)也无明显变化。由此推断NTH1基因参与调控香蕉枯萎病菌的分生孢子萌发和生长,参与细胞壁合成和氧化应激反应的应答,不参与FOC对渗透压力、高糖和高低温胁迫的应答。

关键词：香蕉枯萎病菌中性海藻糖酶基因敲除致病力

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面包酵母B-N+M及其制备方法、引物组和它们在发酵不加糖冷冻面团中的应用

面包酵母B-N+M及其制备方法、引物组和它们在发酵不加糖冷冻面团...

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作者：孙溪李瑞鹏刘海晴范志华张军肖萍刘珊娜王娜 300000 天津市西青区津静公路22号

本发明提供了一种面包酵母B‑N+M及其制备方法、引物组和它们在发酵不加糖冷冻面团中的应用，涉及酵母技术领域。该面包酵母B‑N+M缺失中性海藻糖酶编码基因NTH1，并且过表达麦芽糖酶编码基因MAL62。能够部分切断海藻糖分解途径，同时提... 详细信息

标准号: CN110423706A

本发明提供了一种面包酵母B‑N+M及其制备方法、引物组和它们在发酵不加糖冷冻面团中的应用，涉及酵母技术领域。该面包酵母B‑N+M缺失中性海藻糖酶编码基因NTH1，并且过表达麦芽糖酶编码基因MAL62。能够部分切断海藻糖分解途径，同时提高了海藻糖合成能力与麦芽糖代谢能力，从而提高酵母细胞内海藻糖含量，进而增强其耐冷冻性能，并且还能够提升冷冻前后的发酵性能，缓解了现有技术中存在的面包酵母在冷冻面团低温贮藏的过程中受环境胁迫，导致菌体死亡，令解冻后酵母菌的产气能力下降，面团膨胀不足，品质变劣的技术问题。

关键词：面包酵母编码基因冷冻面团麦芽糖海藻糖合成能力酵母菌中性海藻糖酶耐冷冻性能代谢能力低温贮藏发酵性能环境胁迫酵母细胞麦芽糖酶内海藻糖海藻面团糖分解引物组产气菌体酵母制备解冻发酵冷冻膨胀缓解死亡应用

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一株耐冷冻面包酵母菌株及其基因无痕敲除方法

一株耐冷冻面包酵母菌株及其基因无痕敲除方法

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作者：肖冬光王光路董建张翠英 300457 天津市滨海新区塘沽经济技术开发区第十三大街29号

本发明公布了一株耐冷冻面包酵母菌株及其构建方法，具体是通过无痕敲除基因NTH1构建的耐冷冻面包酵母BY-14AΔU，保藏编号CGMCC No.7379。无痕基因敲除方法构建耐冷冻面包酵母，是通过融合PCR和酵母整合质粒YIplac211，敲除编码中性海... 详细信息

标准号: CN103232947B

本发明公布了一株耐冷冻面包酵母菌株及其构建方法，具体是通过无痕敲除基因NTH1构建的耐冷冻面包酵母BY-14AΔU，保藏编号CGMCC No.7379。无痕基因敲除方法构建耐冷冻面包酵母，是通过融合PCR和酵母整合质粒YIplac211，敲除编码中性海藻糖酶基因NTH1来实现的。本发明实现了将面包酵母NTH1基因快速、高效地无痕敲除，菌株BY-14AΔU在其他发酵性能不受影响的情况下，胞内海藻糖含量较亲本菌株提高了134％；细胞在液体面团中冷冻21天后，存活率达到78％，是亲本菌株的2.6倍。本发明构建的酵母菌中基因组上不残留任何外源基因，因此可以安全的用于工业生产。

关键词：冷冻面包菌株无痕基因亲本酵母酵母菌酵母整合质粒中性海藻糖酶发酵性能发明构建酵母菌株面包酵母内海藻糖外源基因存活率面团基因组冷冻细胞融合

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昆虫病原真菌金龟子绿僵菌中性海藻糖酶基因对耐热性的作用研究

昆虫病原真菌金龟子绿僵菌中性海藻糖酶基因对耐热性的作用研究

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作者：冷亚君重庆大学

学位级别：硕士

在世界范围内,绝大多数国家都发生过不同程度的蝗灾,给农业生产带来了严重的经济损失,蝗虫被认为是世界性的农业害虫。金龟子绿僵菌是一种杀蝗虫真菌,作为一种生物农药,由于具有许多独特的优点,已用于蝗虫的防治工作中,并在生物农药产... 详细信息

在世界范围内,绝大多数国家都发生过不同程度的蝗灾,给农业生产带来了严重的经济损失,蝗虫被认为是世界性的农业害虫。金龟子绿僵菌是一种杀蝗虫真菌,作为一种生物农药,由于具有许多独特的优点,已用于蝗虫的防治工作中,并在生物农药产业中具有良好的前景。但是绿僵菌杀蝗剂在使用过程中的一个主要而显著的局限性在于在生产、储藏、运输及使用过程中对环境条件的要求十分苛刻。这限制了绿僵菌杀虫剂在生产上的大量使用并使其研究难以取得突破性进展。大量研究报道表明,海藻糖是广泛存在于各种生物体内的抗逆境剂,具有增强生物体对高温、脱水、干旱、冷冻、高渗透性、重金属及有毒试剂等逆境的抵抗能力。它可用于对菌体及细胞的储藏和保护。海藻糖酶是海藻糖水解酶,它将海藻糖水解成两分子葡萄糖。目前,已经从很多生物体中分离出海藻糖酶。研究表明,除了毕赤酵母是利用海藻糖磷酸化酶来分解海藻糖以外,所有真菌对海藻糖的分解都是通过海藻糖酶实现的,并且海藻糖为其严格专一底物。因此,有望通过利用海藻糖酶改变海藻糖的代谢,提高孢子内海藻糖含量,增强其环境稳定性,解决绿僵菌杀蝗剂使用过程的以上局限性。本实验室从我国蝗虫病原菌中分离、选育出一株高毒力、高产孢、强专化性的杀蝗新菌株金龟子绿僵菌CQMa102,并且已经从该绿僵菌菌株中克隆到了中性海藻糖酶基因,NCBI登录号为:AY557613。本研究根据该基因序列构建了带双启动子的中性海藻糖酶RNA干扰载体和能随机插入至真菌基因组中的超表达载体,基因枪法转化绿僵菌分生孢子,通过除草剂及PCR筛选,分别得到4个RNA干扰菌株及4个超表达菌株,分析这些菌株得到以下主要结果: 1.与野生型菌株相比,RNA干扰转化菌株内中性海藻糖酶mRNA含量下降至35%-66%,超表达转化菌株内中性海藻糖酶mRNA含量增加至2-3倍。 2. RNA干扰菌株与野生型菌株相比,有更低的海藻糖酶活性,积累了更多的海藻糖,更强的耐热性。同时,在超表达菌株内发现了相反的现象。 3.毒力并没有受中性海藻糖酶RNA含量改变及酶活性的改变而改变。这些结果表明,绿僵菌中性海藻糖酶通过降解海藻糖影响绿僵菌体内的海藻糖含量,间接的影响了真菌孢子的耐热性。这些结果也提供了一种新的途径,用于不影响致病真菌的毒力而提高它的耐热性。同时,研究结果证明,双启动子的RNA干扰系统可以作为致病真菌中的一种有效的基因功能研究工具。

关键词：海藻糖中性海藻糖酶耐热性双启动子RNA干扰

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一株用于面包发酵的耐冷冻酵母菌株及其选育方法

一株用于面包发酵的耐冷冻酵母菌株及其选育方法

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作者：张翠英肖冬光董建吴鸣月孙溪 300457 天津市滨海新区塘沽经济技术开发区第十三大街29号

一株用于面包发酵的耐冷冻酵母菌株及其选育方法。本发明提供的酵母菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BT-N，保藏号为CGMCC No7151。该菌在其它发酵性能不受影响的情况下，-20℃冷冻21d后细胞冷冻存活率为92.75％，相对发酵力为... 详细信息

标准号: CN103497903A

一株用于面包发酵的耐冷冻酵母菌株及其选育方法。本发明提供的酵母菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BT-N，保藏号为CGMCC No7151。该菌在其它发酵性能不受影响的情况下，-20℃冷冻21d后细胞冷冻存活率为92.75％，相对发酵力为53.24％，与亲本菌株(冻存活率为35.36％，相对发酵力为28.46％)相比，分别增加了57.39％和24.78％。通过敲除面包酵母CICC31616中性海藻糖酶编码基因NTH1，同时选用强启动子PGK1过表达6-磷酸海藻糖合成酶编码基因TPS1来实现。选育得到的酵母菌株对发酵设备及条件没有特殊要求，一般工厂的设备和条件均可使用，因而有广泛的应用前景。

关键词：酵母菌株编码基因存活率发酵力冷冻选育海藻糖合成酶中性海藻糖酶发酵设备发酵性能面包酵母酿酒酵母细胞冷冻启动子磷酸菌株亲本发酵面包

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中性海藻糖酶在虫生真菌孢子储藏稳定性中的作用

中性海藻糖酶在虫生真菌孢子储藏稳定性中的作用

引用

以杀蝗绿僵菌CQMa102菌株材料，根据中性海藻糖酶基因NTL的同源序列设计引物，经PCR和RT-PCR 技术，采用5''-RACE、3''-RACE和Panhandle PCR方法克隆了金龟子绿僵菌CQMa102中性海藻糖酶基因。构建了中性海藻糖酶基因RN... 详细信息

标准号: hg08026988

以杀蝗绿僵菌CQMa102菌株材料，根据中性海藻糖酶基因NTL的同源序列设计引物，经PCR和RT-PCR 技术，采用5''-RACE、3''-RACE和Panhandle PCR方法克隆了金龟子绿僵菌CQMa102中性海藻糖酶基因。构建了中性海藻糖酶基因RNA干扰载体和超表达载体，采用电转法和基因枪法转化金龟子绿僵菌CQMa102，获得了RNA干扰转化子和超表达转化子，比较这两种转化子和出发菌株的mRNA表达情况，发现RNA干扰转化子中性海藻糖酶mRNA表达受到抑制，而超表达转化子中性海藻糖酶mRNA的表达量是出发菌株的2倍。对这三种菌株进行海藻糖含量的测定，储藏性和耐热性分析，发现RNA干扰转化子在不同生长时期的孢子体内海藻糖含量都高于出发菌株，储藏性和耐热性都比出发菌株好，而中性海藻糖酶转化子的表现正好与RNA干扰转化子相反。以上研究结果表明，金龟子绿僵菌CQMa102孢子体内海藻糖是由中性海藻糖酶降解的，海藻糖含量与耐储性和耐热性具有正相关性，中性海藻糖酶在虫生真菌金龟子绿僵菌孢子中的生理功能是通过降解分子内海藻糖调控海藻糖含量，从而影响其对不良环境的抗性，如储藏性、耐热性。

关键词：中性海藻糖酶虫生真菌孢子储藏稳定性

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一株耐冷冻面包酵母菌株及其基因无痕敲除方法

一株耐冷冻面包酵母菌株及其基因无痕敲除方法

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作者：肖冬光王光路董建张翠英 300457 天津市滨海新区塘沽经济技术开发区第十三大街29号

标准号: CN103232947A

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面包酵母中性海藻糖酶活性的测定方法

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食品工业科技 2007年第3期28卷 213-214,228页

作者：邹静肖冬光宋飞谷向春和东芹天津科技大学天津市工业微生物重点实验室天津300222 邯郸职业技术学院河北邯郸056000

酵母中性海藻糖酶是受蛋白激酶磷酸化作用调控的酶,其在体内的酶活性与用破壁后提出的酶活性有很大的差异。本文构建了一种活体测定面包酵母中性海藻糖酶活性的方法,在pH为6.8的100mL模拟面团溶液中,接新鲜酵母泥2g,30℃下作用5min,以... 详细信息

酵母中性海藻糖酶是受蛋白激酶磷酸化作用调控的酶,其在体内的酶活性与用破壁后提出的酶活性有很大的差异。本文构建了一种活体测定面包酵母中性海藻糖酶活性的方法,在pH为6.8的100mL模拟面团溶液中,接新鲜酵母泥2g,30℃下作用5min,以每克菌体单位时间内胞内海藻糖的消耗量来定义酶的活性。

关键词：面包酵母中性海藻糖酶测定方法耐冷冻性

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高耐性酿酒酵母工程菌及其构建方法

高耐性酿酒酵母工程菌及其构建方法

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作者：肖冬光郭学武郝欣吕烨 300222 天津市河西区大沽南路1038号

本发明公开了一种高耐性酿酒酵母工程菌及其构建方法。本发明所提供的酿酒酵母工程菌，是利用改进的Cre/loxP系统将酿酒酵母中编码中性海藻糖酶的基因敲除，得到生物活性保护物质海藻糖含量提高的菌株Saccharomyces cerevisiae AY-18(... 详细信息

标准号: CN101440352B

本发明公开了一种高耐性酿酒酵母工程菌及其构建方法。本发明所提供的酿酒酵母工程菌，是利用改进的Cre/loxP系统将酿酒酵母中编码中性海藻糖酶的基因敲除，得到生物活性保护物质海藻糖含量提高的菌株Saccharomyces cerevisiae AY-18(保藏号CGMCCNo 2666)。本发明具有操作简单、方便易行的特点。本发明所获得的酿酒酵母工程菌胞内海藻糖含量高，具有良好高温耐性和酒精耐性，在52℃高温下处理60min细胞存活率为85.15％，经20％(V)酒精冲击4h细胞存活率为95.12％，发酵酒精浓度达18.2％(V)，适合于淀粉质原料的酒精浓醪发酵，能够为酒精发酵工业带来显著的经济效益。工程菌对发酵设备及条件没有特殊要求，一般酒精厂的设备和条件均可使用。

关键词：酿酒酵母工程菌酒精细胞存活率耐性中性海藻糖酶淀粉质原料海藻糖含量发酵工业发酵酒精发酵设备方便易行高温耐性酒精浓醪内海藻糖酿酒酵母生物活性工程菌酒精厂菌株发酵经济效益基因冲击

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金龟子绿僵菌中性海藻糖酶基因的克隆及其表达特性分析

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微生物学报 2005年第6期45卷 890-894页

作者：胡宗利王中康彭国雄殷幼平夏玉先蔡绍皙重庆大学基因工程研究中心重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400030

根据中性海藻糖酶NTL基因的同源序列设计引物,PCR扩增出杀蝗专一菌株———金龟子绿僵菌CQMa102NTL基因片段,利用5′_RACE和3′_RACE扩增出NTLcDNA的5′和3′端序列,经拼接得到CQMa102NTL基因cDNA全长。根据其全长cDNA序列,设计引物PCR... 详细信息

根据中性海藻糖酶NTL基因的同源序列设计引物,PCR扩增出杀蝗专一菌株———金龟子绿僵菌CQMa102NTL基因片段,利用5′_RACE和3′_RACE扩增出NTLcDNA的5′和3′端序列,经拼接得到CQMa102NTL基因cDNA全长。根据其全长cDNA序列,设计引物PCR扩增出CQMa102NTL的完整基因。为了解该基因的上游调控信息,采用PanhandlePolymeraseChainReactionAmplification方法扩增其上游序列。序列分析表明,CQMa102NTL全长DNA3484bp,cDNA全长2385bp,编码737个氨基酸的蛋白,推测蛋白分子量为83.1kD;含有3个内含子,包含一个依赖于cAMP的磷酸化作用位点(RRGS)和一个钙附着位点(DTDGNMQITIED);上游序列含有一个压力反应元件(CCCCT);与金龟子绿僵菌广谱性菌株ME1NTL的核苷酸序列和氨基酸序列分别具有93%和99%同源性,由此确定该序列为金龟子绿僵菌中性海藻糖酶基因序列。Southern杂交表明,NTL基因在CQMa102基因组中为单拷贝。Northern杂交表明,NTL基因转录出约2.5kb的mRNA单带,在液体培养条件下,对数生长前期表达水平最高,对数生长后期降到最低,进入稳定生长期后表达水平又有所提高。金龟子绿僵菌CQMa102中性海藻糖酶基因DNA全长和cDNA全长登录GenBank,登录号分别为:AY557613,AY557612。

关键词：金龟子绿僵菌中性海藻糖酶蝗虫昆虫病原真菌

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