检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2005年第2期21卷 265-269页

作者：赵小玲荫俊张素娟陈伟强军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 解放军第254医院天津300142 军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津300050

对抗狂犬病毒scfv进行稳定性改构 ,纯化制备有活性的人源抗狂犬病毒二硫键稳定性fv抗体片段 (dsfv) ,然后对其生物学活性进行研究。将dsfvVH 、VL 基因在原核表达系统pET2 2b(+) BL2 1(DE3)中表达 ,将其包涵体分别在变性缓冲液中溶解 ... 详细信息

对抗狂犬病毒scfv进行稳定性改构 ,纯化制备有活性的人源抗狂犬病毒二硫键稳定性fv抗体片段 (dsfv) ,然后对其生物学活性进行研究。将dsfvVH 、VL 基因在原核表达系统pET2 2b(+) BL2 1(DE3)中表达 ,将其包涵体分别在变性缓冲液中溶解 ,稀释后加入折叠缓冲液使其折叠形成有活性的dsfv抗体片段 ,上Ni NTA柱进行纯化。然后以其亲本scfv作为对照 ,对dsfv的亲和力、稳定性以及体外中和活性进行评价。结果显示 ,与其母本抗体scfv相比 ,改构后的抗狂犬病毒dsfv保持了对狂犬病毒Vero疫苗的特异性识别能力 ,而且其亲和力明显提高 ;抗狂犬病毒dsfv在血清和BSA中的稳定性有明显的改进 ,而且其热稳定性和抵抗尿素化学变性的能力亦大大改进 ;蚀斑减少中和实验显示 ,抗狂犬病毒dsfv抗体片段能特异中和狂犬病毒 ,阻止狂犬病毒对Vero细胞的吸附 ,抑制狂犬病毒对靶细胞的感染 ,从而导致蚀斑减少甚至消失 ;scfv抗体片段仅可部分抑制蚀斑的形成 ,但不能全部抑制。这为进一步研究抗狂犬病毒dsfv基因工程抗体的免疫保护作用及其在临床的应用奠定了基础。

关键词：狂犬病毒稳定性二硫键稳定性fv抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗人氨基末端脂多糖结合蛋白二硫键稳定性fv抗体的制备及生物学活性的初步研究

引用

第三军医大学学报 2008年第14期30卷 1308-1311页

作者：邹佳葛晓冬杨艳丽刘友生第三军医大学西南医院病理学研究所重庆400038

目的制备抗人氨基末端脂多糖结合蛋白(N-terminal fragment of human lipopolysaccharide binding protein,NH-LBP)的二硫键稳定性fv抗体(disulfide stabilized fv fragment,dsfv),并初步测定其生物学活性。方法将含有dsfv-VL与dsfvVH包涵体蛋白经复性、折叠和纯化,获得完整的dsfv抗体。通过ELISA、TNF-α分泌等方法,初步测定dsfv抗体在体内外的生物学活性。结果获得dsfv抗体蛋白约2.1mg,dsfv与NH-LBP有较好的结合能力,并在动物体内减轻了LPS所诱导的炎症反应,发挥了一定的保护活性。结论通过分别表达VL和VH片段,再制备dsfv抗体是可行的,dsfv能部分抑制LBP的生物学功能。

关键词：人氨基末端脂多糖结合蛋白包涵体二硫键稳定性fv抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人源抗狂犬病毒二硫键稳定性fv抗体片段基因的构建与表达

引用

解放军医学杂志 2006年第2期31卷 124-127页

作者：赵小玲荫俊陈伟强杨冠张素娟军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 天津军事医学科学院卫生学环境医学研究所军事医学科学院生物工程研究所解放军第254医院

目的构建人源抗狂犬病毒二硫键稳定性fv(dsfv)抗体基因,并在原核系统中实现高效表达,制备有活性的人源抗狂犬病毒dsfv抗体片段。方法采用PCR定点突变的方法,构建抗狂犬病毒dsfv抗体的重、轻链(VH、VL)突变基因,NdeⅠ和NotⅠ双酶切后分... 详细信息

目的构建人源抗狂犬病毒二硫键稳定性fv(dsfv)抗体基因,并在原核系统中实现高效表达,制备有活性的人源抗狂犬病毒dsfv抗体片段。方法采用PCR定点突变的方法,构建抗狂犬病毒dsfv抗体的重、轻链(VH、VL)突变基因,NdeⅠ和NotⅠ双酶切后分别插入pET-22b(+)表达质粒中,转化***21(DE3),IPTG诱导表达。将VL、VH包涵体蛋白经盐酸胍变性,按比例混合在复性折叠缓冲液中,使二者折叠形成dsfv抗体片段。并以其母本抗体scfv作对照,对其抗原特异性和稳定性进行初步评价。结果在VH的第44位氨基酸和VL的第100位氨基酸引入了半胱氨酸,成功构建了抗狂犬病毒dsfv抗体基因,并在原核系统中实现了对二者的高效表达,VH、VL蛋白在复性缓冲液中正确折叠形成了dsfv抗体片段。结论对筛选获得的抗狂犬病毒scfv成功进行了稳定性改构,制备了有活性的dsfv抗体片段,改构以后的dsfv保持了对狂犬病毒的特异结合活性,而其在血清中的稳定性有明显改进,而且其热稳定性和抵抗尿素化学变性的能力亦大大改进。

关键词：狂犬病病毒二硫键稳定性fv抗体基因表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗人脂多糖结合蛋白氨基端片段抗体dsfv V_L链的构建、表达和鉴定

引用

第三军医大学学报 2007年第14期29卷 1364-1367页

作者：葛晓冬邹佳杨艳丽刘友生第三军医大学西南医院病理学研究所重庆400038

目的将抗人脂多糖结合蛋白氨基端片段(NH-LBP)抗体的fv L链引入半胱氨酸(Cys),并表达、纯化。方法应用mega-primer PCR方法,在抗NH-LBP单克隆Fab抗体的轻链基因骨架区中引入编码Cys的基因序列,将目的序列放入载体pET-28a(+),于工程菌BL2... 详细信息

目的将抗人脂多糖结合蛋白氨基端片段(NH-LBP)抗体的fv L链引入半胱氨酸(Cys),并表达、纯化。方法应用mega-primer PCR方法,在抗NH-LBP单克隆Fab抗体的轻链基因骨架区中引入编码Cys的基因序列,将目的序列放入载体pET-28a(+),于工程菌BL21star(DE3)中表达及TALON柱芯亲合纯化,通过ELISA法初步鉴定其与NH-LBP的结合力。结果dsfv VL链的Thr21替换为Cys,扩增出基因片段长约为650bp,经BL21star(DE3)菌表达出相对分子质量约为28×103的目的蛋白,与NH-LBP具有一定的结合力。结论抗体轻链中成功引入了Cys。

关键词：脂多糖结合蛋白氨基端片段二硫键稳定性fv抗体半胱氨酸

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人源抗HBsAg dsfv抗体靶向干扰素重组质粒的构建与表达

引用

解放军医学杂志 2010年第4期35卷 391-394页

作者：江乐阎瑾琦郭炳冉任杰于继云曲阜师范大学生命科学学院山东曲阜273165 军事医学科学院基础医学研究所北京100850 解放军总医院泌尿外科北京100853

目的构建抗体靶向干扰素的重组表达质粒pEE14.1-dsfvαpr+,并在真核细胞中验证重组质粒的表达情况。方法通过重叠延伸PCR将dsfv抗体重链基因与带正电荷的DNA负载区基因融合,并在抗体轻链α干扰素融合基因3′端连入6×His标签。先在... 详细信息

目的构建抗体靶向干扰素的重组表达质粒pEE14.1-dsfvαpr+,并在真核细胞中验证重组质粒的表达情况。方法通过重叠延伸PCR将dsfv抗体重链基因与带正电荷的DNA负载区基因融合,并在抗体轻链α干扰素融合基因3′端连入6×His标签。先在过渡载体pCI-GPI中实现轻、重链复合基因的连接,然后连入pEE14.1中,最终构建重组表达质粒pEE14.1-dsfvαpr+。将重组质粒LipofectamineTM2000瞬时转染到CHO-K1细胞,采用RT-PCR、ELISA和Western blotting方法验证目的基因的表达。结果重组质粒经酶切鉴定和测序验证与设计完全一致。RT-PCR结果显示只有重组质粒转染后的细胞能够扩增出1700bp的目的条带,ELISA检测瞬时转染细胞上清α干扰素的浓度约为1.1ng/ml,Western blotting检测显示重组质粒在转染细胞上清中获得表达。结论实现了抗体靶向干扰素在单一质粒中的高效表达,通过对表达蛋白的电性改造有利于后期治疗慢性乙肝的抗体靶向纳米粒药物的研制。

关键词：干扰素α 肝炎表面抗原,乙型二硫键稳定性fv抗体质粒基因表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人源抗HBsAg dsfv抗体靶向干扰素复合基因的克隆和表达

人源抗HBsAg dsFv抗体靶向干扰素复合基因的克隆和表达

引用

作者：江乐曲阜师范大学

学位级别：硕士

抗体技术经历血清多克隆抗体、单克隆抗体阶段后发展到了第三代抗体-基因工程抗体。我们在前期研究中通过噬菌体抗体库筛选到人源抗HBsAg基因工程抗体,利用PCR定点突变获得二硫键稳定的dsfv(disufide-stabilized fv fragments)抗体,但... 详细信息

抗体技术经历血清多克隆抗体、单克隆抗体阶段后发展到了第三代抗体-基因工程抗体。我们在前期研究中通过噬菌体抗体库筛选到人源抗HBsAg基因工程抗体,利用PCR定点突变获得二硫键稳定的dsfv(disufide-stabilized fv fragments)抗体,但抗体的轻链与干扰素α的融合基因和重链基因分别克隆于pCI-neo和pCdhfrl两个质粒中,需要共转染细胞才能获得表达。本研究拟在此基础上进一步探索改进,整体思路是将人源抗HBsAg dsfv抗体的轻链-干扰素α融合基因和重链基因通过自身切割肽F2A连接置于同一开放读码框,实现抗体的轻链和重链在同一质粒中的串联表达。首先在过渡载体pCI-GPI中构建抗体靶向干扰素复合基因：即通过重叠延伸PCR法将dsfv抗体重链基因VH的3′端融入一段带正电荷的DNA负载区基因,使目的蛋白带正电荷,以结合带负电的质粒DNA；并在抗体轻链-干扰素α融合基因3′端连入6×His标签,以方便表达蛋白的检测和纯化。通过自身切割肽F2A将人源抗HBsAg dsfv抗体的轻链复合基因和重链复合基因连接置于同一开放读码框,并在过渡载体pCI-GPI中实现轻、重链复合基因的连接即得到重组质粒pCIGPI-dsfvαpr+。其次,选择哺乳动物表达系统和昆虫细胞／杆状病毒表达系统分别表达抗体靶向干扰素重组复合基因。即在构建好pCIGPI-dsfvαpr+|的基础上,把抗体靶向干扰素复合基因通过酶切和PCR等方法克隆入真核表达载体pEE14.1及杆状病毒表达系统转移载体pAcGP67A,从而获得含抗体靶向干扰素复合基因的重组表达质粒pEE14.1-dsfvαpr+和pAcGP67A-dsfvαpr+,并分别在哺乳动物细胞CHO-K1和昆虫细胞Sf9中验证其表达。此外,我们还把哺乳动物表达系统和昆虫细胞／杆状病毒表达系统表达的上清中的目的蛋白分别进行了纯化,并对其进行了初步验证。总之,含抗体靶向干扰素重组基因的重组质粒的构建及其在哺乳动物表达系统和昆虫细胞／杆状病毒表达系统中表达的尝试,为后续抗体靶向干扰素蛋白结合HBV治疗性DNA疫苗的抗乙肝靶向纳米粒药物的研制奠定了基础,也为HBV的免疫基因治疗提供了新的技术策略。

关键词：乙肝病毒表面抗原二硫键稳定性fv抗体干扰素α 哺乳动物表达系统昆虫细胞/杆状病毒系统质粒构建基因表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：