检索结果-内蒙古大学图书馆

水产学报 2016年第3期40卷 388-395页

作者：王树云高志强张旻谷强任彤刘艳华江育林张利峰北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心中国检验检疫科学研究院

为规避活病毒作参考物质存在的生物安全风险,本研究利用毕赤酵母表达系统表达了传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的糖蛋白来制备参考蛋白,作为IHNV免疫学检测参考物质。本研究选用IHNV糖蛋白基因(IHNV-G)为目的基因,根据Gen Bank中IHNV... 详细信息

为规避活病毒作参考物质存在的生物安全风险,本研究利用毕赤酵母表达系统表达了传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的糖蛋白来制备参考蛋白,作为IHNV免疫学检测参考物质。本研究选用IHNV糖蛋白基因(IHNV-G)为目的基因,根据Gen Bank中IHNV全基因序列设计特异性引物,以IHNV-uk株病毒核酸为模板,通过RT-PCR获得糖蛋白基因片段,将其克隆至真核表达载体p PICZαA,转入毕赤酵母感受态细胞GS115中,使外源基因与酵母基因融合,通过1%甲醇诱导表达外源蛋白,SDS-PAGE分析显示获得可溶性表达蛋白,分子量大于70 ku。经Western Blot和ELISA分析,该表达产物可以被IHNV多抗特异性识别。0.1531 mg的重组蛋白与0.3125TCID50 IHNV在ELISA实验中反应原性相当,–20°C可稳定保存2个月,说明其在一定程度上可替代病毒作为参考物质。该研究为IHNV ELISA检测试剂盒的开发奠定基础。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒参考蛋白毕赤酵母

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

传染性造血器官坏死病病毒CJ-13株糖蛋白的原核表达及免疫原性

引用

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2015年第7期43卷 1-6,14页

作者：吉尚雷张培军卢玉婷王建超李月红吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 吉林省卫生监测检验中心吉林长春130000

【目的】克隆传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)CJ-13株糖蛋白(G蛋白)基因,构建原核表达载体,并检测其在大肠杆菌BL21中的表达情况,为IHNV诊断试剂盒和疫苗的研制奠定基础。【方法】设计1对G基因特异引物对G基因进行RT-PCR扩增,将扩增产... 详细信息

【目的】克隆传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)CJ-13株糖蛋白(G蛋白)基因,构建原核表达载体,并检测其在大肠杆菌BL21中的表达情况,为IHNV诊断试剂盒和疫苗的研制奠定基础。【方法】设计1对G基因特异引物对G基因进行RT-PCR扩增,将扩增产物克隆到pGEM-T Easy载体上,构建重组质粒pGEM-T Easy-G,经双酶切鉴定、核苷酸序列分析后,将G基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,构建传染性造血器官坏死病病毒G基因原核表达质粒pET-32a-G,转化至宿主菌BL21中,诱导表达目的蛋白,采用SDS-PAGE、Western blot和ELISA等方法对表达产物进行分析。【结果】成功克隆了IHNV G蛋白基因,该基因长度为1 527bp。成功构建了原核表达质粒pET-32a-G,诱导表达出约76ku的产物,与预期分子质量大小相符。Western blot分析结果显示,所表达的G蛋白能够被小鼠抗IHNV血清识别。间接ELISA结果显示,小鼠抗G蛋白血清能够识别IHNV全病毒。【结论】成功构建了IHNV G蛋白原核表达系统,重组G蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒 G蛋白原核表达免疫原性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

传染性造血器官坏死病病毒RT-RAA-LFD检测方法的建立与应用

引用

中国兽医科学 2023年第8期53卷 991-996页

作者：廖立珊徐彬陈兵吴江王津津朱裕敏刘荭王婉君孙洁深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 深圳市质量安全检验检测研究院广东深圳518000 大连海洋大学辽宁大连116023 华润五丰肉类食品(河南)有限公司深圳分公司广东深圳518031

为针对传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)建立一种可实现现场快速、准确的检测方法,结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,在IHNVG基因保守区域设计引物和探针,通过优化反应时间和温度等条件,建立了可用于IHNV现场可视化检测的... 详细信息

为针对传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)建立一种可实现现场快速、准确的检测方法,结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,在IHNVG基因保守区域设计引物和探针,通过优化反应时间和温度等条件,建立了可用于IHNV现场可视化检测的RT-RAA-LFD方法。优化后的检测方法在35℃水浴锅中恒温反应15 min即可实现对IHNV目的基因片段的有效扩增。结果显示:该方法可以特异性地检测出IHNV,不与其他常见鱼类病毒发生交叉反应;对IHNV质粒标准品的检测下限可以达到2.15×101 copies/μL;采用该方法和实时荧光RT-PCR、实时荧光RT-RAA同时对35份临床样本进行检测,其阳性符合率为100%。上述结果表明,本研究针对IHNV成功建立了一种快速、准确、便捷的试纸条检测方法,并可适应于多种场合。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒重组酶介导扩增侧向流试纸条快速检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白杆状病毒表达系统的构建及其抗原性分析

引用

中国畜牧兽医 2017年第3期44卷 854-860页

作者：谢三磊温书香罗琳马志宏李桂萍李铁梁姜娜邢薇孙惠玲北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 北京市水产科学研究所北京100068

为研究传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)主要结构蛋白糖蛋白(G),本研究采用RT-PCR方法从IHNV中提取RNA并进行反转录,经PCR方法扩增获得1 380bp的G蛋白基因片段,将其克隆到pFB-LIC-Bse杆状病毒... 详细信息

为研究传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)主要结构蛋白糖蛋白(G),本研究采用RT-PCR方法从IHNV中提取RNA并进行反转录,经PCR方法扩增获得1 380bp的G蛋白基因片段,将其克隆到pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,成功构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-G,转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,获得了重组杆粒rBacmid-G。将重组杆粒转染至Sf9昆虫细胞,获得了重组杆状病毒。间接免疫荧光(IFA)和Western blotting分析显示,重组G蛋白可与抗组氨酸单抗(Anti-His)、抗IHNV鼠血清发生特异性反应,表明本研究克隆的IHNV G蛋白在真核表达系统中得到正确表达,且该蛋白具有良好的抗原性。本试验结果为研究G蛋白的功能及开发IHNV新型疫苗奠定了基础。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白重组杆状病毒

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

传染性造血器官坏死病病毒-SX1704毒株的序列分析及GiCK细胞系的建立

传染性造血器官坏死病病毒-SX1704毒株的序列分析及GiCK细胞系的...

引用

作者：刘思佳西北农林科技大学

学位级别：硕士

传染性造血器官坏死病病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)是一种单股负链RNA病毒,可以水平、垂直感染虹鳟、硬头鳟等冷水鱼类,引起的高致病性和高死亡率给我国鲑鳟养殖业带来了巨大经济损失。IHNV隶属于弹状病毒科(Rha... 详细信息

传染性造血器官坏死病病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)是一种单股负链RNA病毒,可以水平、垂直感染虹鳟、硬头鳟等冷水鱼类,引起的高致病性和高死亡率给我国鲑鳟养殖业带来了巨大经济损失。IHNV隶属于弹状病毒科(Rhabdoviruses)粒弹状病毒属(Novirhabdovirus)。自1985年中国辽宁省发现第一例IHNV病毒以来,有关IHNV的疫情在中国北京、河北、山东、甘肃、四川、吉林、新疆等地相继报道。多地IHNV病毒感染的检出表明该病毒已成为危害优良鲑鳟种苗的重大隐患。通过对IHNV中国株进行鉴定、分析,进一步明确国内IHNV的分布和遗传进化特征,对于IHNV的安全防治和风险管控具有深远的意义。本实验从中国陕西省宁陕县某渔场采集患病虹鳟,鉴定病样为IHNV阳性。通过在GenBank中查找IHNV序列并设计扩增引物,采用RT-PCR的方法扩增获得部分基因片段。将扩增得到的序列克隆到载体pTriEx-1.1或T载体上构建重组质粒,并进行测序分析。采用步进法扩增,成功克隆到IHNV的六个基因:N、P、M、G、NV、L,以及基因之间的非编码区。将虹鳟病鱼中鉴定的IHNV毒株命名为SX1704,并将序列提交至GenBank获得登录号:MH629974。IHNV-SX1704毒株全长10802bp,从3’到5’依次编码:核衣壳蛋白-聚合酶相关磷酸蛋白-基质蛋白-表面糖蛋白-非结构蛋白-病毒聚合酶蛋白。将毒株SX1704与GenBank其他IHNV序列进行同源性比对,发现与IHNV中国株CH20101008(登录号:KJ421216),HLJ-09(登录号:JX649101)有很高的核酸同源性,相似性百分比达99.3%。CH20101008作为参考毒株,IHNV-SX1704与其相比有78个核苷酸突变,其中24个导致编码氨基酸突变。对SX1704的全序列和六个基因分别构建生物进化树。系统发育进化结果显示,除中国株外,IHNV-SX1704毒株与韩国株、日本株有较近的亲缘关系,基于G基因分型表明SX1704属于J基因型的J Nagano亚型。IHNV的G蛋白是病毒的囊膜蛋白,是病毒用于识别宿主的结构蛋白,也是疫苗设计的主要靶标。本论文的研究中,将IHNV-G基因克隆到膜蛋白表达载体pQBD上,获得了重组质粒pQBD-G。将重组质粒与线性化的杆粒qBac-III共转染sf9细胞培养得到重组杆状病毒rAcMNPV-G。Western blot检测表明G蛋白在重组杆状病毒中成功表达,为今后重组病毒疫苗的免疫效果检测打下了基础。本实验还建立了一株异育银鲫肾细胞系并命名为GiCK。通过用线粒体16s核糖体RNA鉴定新制备细胞系的种属来源,证实其来自于异育银鲫。经PCR检测证明CyHV-2在GiCK细胞上连续传代不超过三代。将构建的重组病毒rAcMNPV-GFP转导GiCK细胞证实重组病毒能进入异育银鲫细胞。因此,GiCK细胞能否作为CyHV-2体外连续增殖的高敏感性细胞系仍值得讨论。细胞系的建立对将来关于CyHV-2病毒感染及其引起疱疹病毒性造血器官坏死病的发病机制的深入研究可能发挥重要作用。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白真核表达序列比对同源性进化树异育银鲫肾细胞系

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

传染性造血器官坏死病病毒的分离鉴定及其糖蛋白抗血清的制备和应用

传染性造血器官坏死病病毒的分离鉴定及其糖蛋白抗血清的制备和应...

引用

作者：朱旭华中农业大学

学位级别：硕士

本研究从吉林省某渔场患病的虹鳟幼鱼中分离得到了一株病毒,毒株编号IHNV-1008,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)以及电镜观察的结果,确定该病毒分离株为传染性造血器官坏死病病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus, IHNV),并... 详细信息

本研究从吉林省某渔场患病的虹鳟幼鱼中分离得到了一株病毒,毒株编号IHNV-1008,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)以及电镜观察的结果,确定该病毒分离株为传染性造血器官坏死病病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus, IHNV),并对其理化特性、生物特性进行了研究。同时,建立IHNV原核表达系统,表达出IHNV糖蛋白作为免疫原,免疫小鼠制备抗血清,并对其进行效价测定及与全病毒免疫反应等应用。结果如下：本次所分离的病毒株,通过RT-PCR可扩增出特异性条带,进一步对感染该病毒的细胞切片进行电镜观察,在细胞质中可见到大量病毒颗粒,呈典型弹状,直径约为(70～90)nm,长度(150～170)nm。挑斑纯化后,对其特性进行研究,结果显示该病毒能够使EPC、FHM等5种常见水生细胞产生明显细胞病变(Cytopathic effects, CPE),表现为细胞变圆,聚集成葡萄状,形成空斑,最终完全脱离。病毒生长曲线显示产生CPE5d后,病毒达到最大感染滴度,约为***50/100μ。理化特性试验结果显示该病毒增殖温度为10℃-25℃,最适温度为15℃,不耐热,对脂溶剂和酸敏感,对碱具有较强抗受能力。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,该病毒蛋白条带与IHNV文献记载的相近似。以IHNV感染的细胞悬液为材料,应用RT-PCR方法克隆病毒的糖蛋白基因,并将其亚克隆至原核表达载体pCWori,转化到大肠杆菌DH5α,通过发酵大肠杆菌制备病毒糖蛋白。经SDS-PAGE分析,诱导表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,使用Ni-NTA亲和层析柱在变性条件下进行纯化并透析复性,最终得到了较高纯度的可溶性糖蛋白,分子量约为57KDa。免疫印迹(Western-blot)分析结果显示所表达的蛋白能够被兔抗IHNV血清识别。用复性后的蛋白免疫小鼠制备抗血清,酶联免疫吸附实验(ELISA)显示抗体效价可达1：64000。经制备的抗血清可以作为一抗建立ELISA检测方法,用于检测细胞悬液中的病毒粒子,将抗血清稀释到1：16000仍能与IHNV全病毒发生反应。本试验利用重组的IHNV糖蛋白成功制备了高效价的抗血清,并能够与IHNV全病毒发生特异性结合,为IHNV免疫学检测方法建立奠定了基础。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒分离鉴定病毒特性糖蛋白抗血清

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

两株传染性造血器官坏死病病毒的分离及其糖蛋白基因序列分析

引用

中国动物检疫 2012年第1期29卷 37-41页

作者：申斯思郑晓聪刘荭史秀杰贾鹏兰文升何俊强张朋余剑敏杜娟肖启明康林湖南农业大学生物安全科技学院湖南长沙410128 深圳市外来有害生物重点实验室广东深圳518045 深圳出入境检验检疫局广东深圳518045 华中农业大学水产学院湖北武汉430070

对所分离编号为20101008和20101032的两株传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的糖蛋白编码基因进行遗传进化分析,以揭示我国毒株与其他不同国家和地区毒株间的遗传进化关系。以反转录RCR(RT-PCR)法扩增其糖蛋白(G)编码基因,然后克隆入PMD-... 详细信息

对所分离编号为20101008和20101032的两株传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的糖蛋白编码基因进行遗传进化分析,以揭示我国毒株与其他不同国家和地区毒株间的遗传进化关系。以反转录RCR(RT-PCR)法扩增其糖蛋白(G)编码基因,然后克隆入PMD-18T载体并测序。应用DNAStar和MEGA4.0软件,将20101008和20101032的G基因与多株GenBank中已发表的IHNV毒株相应基因进行比较。结果表明两株病毒间G编码基因的核苷酸和推导出来的氨基酸同源性分别为98%和81.9%,其氨基酸序列分别发生了35和20处氨基酸的替换。20101008和20101032与日本、韩国分离株同源性较高,核苷酸及推导出来的氨基酸同源性分别为93.3%～96.4%和75.9%～84.6%;两株病毒在进化关系上亲缘关系最近,属于同一分支,均为基因U型传染性造血器官坏死病病毒,但其G基因的核苷酸序列以及推导出来的氨基酸序列与已知的基因U型IHNV都有一定的差异。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白同源性进化分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

间接酶联免疫法检测鲑鳟鱼类传染性造血器官坏死病病毒

引用

食品安全质量检测学报 2014年第8期5卷 2327-2331页

作者：金爽金莉莉郭欣硕蔺翠翠罗靳王秋雨辽宁大学生命科学院沈阳110036 辽宁省水产品质量安全检验检测局沈阳110031

目的建立快速检测传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的间接酶联免疫法。方法以传染性造血器官坏死病毒G蛋白(IHNV-G)为抗原,免疫实验白兔,制备兔抗IHNV免疫血清,通过ELISA对兔抗血清进行效价及特异性评估,并通过PCR方法进行验证。结果应... 详细信息

目的建立快速检测传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的间接酶联免疫法。方法以传染性造血器官坏死病毒G蛋白(IHNV-G)为抗原,免疫实验白兔,制备兔抗IHNV免疫血清,通过ELISA对兔抗血清进行效价及特异性评估,并通过PCR方法进行验证。结果应用间接ELISA技术,检测到抗血清对IHNV-G和IHNV的效价分别达到1:32000和1:16000,与其他对照病毒无交叉反应。与PCR检测结果符合率达到98%。结论本文建立的间接酶联免疫法方法具有良好的灵敏性和特异性,为IHNV的检测提供了快捷、高效的技术手段。

关键词：鲑鳟鱼传染性造血器官坏死病病毒病毒糖蛋白间接酶联免疫法

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

纳米硒对虹鳟传染性造血器官坏死病毒抗性的影响

引用

水产科学 2025年第1期44卷 47-55页

作者：李亚军王建福海强吕娜娜罗志源郸彩霞李洁刘哲余海涛甘肃农业大学动物科学技术学院甘肃兰州730070 甘肃省农业科学院植物保护研究所甘肃兰州730070

为研究纳米硒对虹鳟传染性造血器官坏死病毒抗性的影响,在水温17~18℃下,将体质量(20±2)g的虹鳟养殖在直径1.2 m、高0.6 m的圆形鱼池中,水深0.3 m,投喂纳米硒含量为0(对照)、1、2、5 mg/kg的饲料7 d,腹腔注射1×10^(5)pfu/mL... 详细信息

为研究纳米硒对虹鳟传染性造血器官坏死病毒抗性的影响,在水温17~18℃下,将体质量(20±2)g的虹鳟养殖在直径1.2 m、高0.6 m的圆形鱼池中,水深0.3 m,投喂纳米硒含量为0(对照)、1、2、5 mg/kg的饲料7 d,腹腔注射1×10^(5)pfu/mL的传染性造血器官坏死病毒0.2 mL,放回原池继续饲养,分别在饲喂第7天和攻毒后的第1、2、3天,采集肝脏和尾静脉血液样品,比较各组虹鳟肝脏免疫和抗氧化相关酶活性、免疫相关基因表达量以及血清抗体水平差异。试验结果显示:攻毒前,添加1 mg/kg纳米硒可使虹鳟肝脏谷胱甘肽过氧化物酶和血清肿瘤坏死因子-α活性显著升高(P<0.05),添加5 mg/kg纳米硒可使MX-1和IL-1β基因表达量显著升高(P<0.05)。攻毒后,添加纳米硒各组虹鳟第1~3天血清肿瘤坏死因子-α、补体蛋白3和白介素-1β水平以及肝脏过氧化氢酶活性分别出现显著升高(P<0.05);而第3天肝脏丙二醛含量显著降低(P<0.05),添加2、5 mg/kg纳米硒可使虹鳟肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性,VIG-1、MX-1、TNF-α基因表达量均显著升高(P<0.05)。综上,饲料中添加纳米硒可提高虹鳟肝脏免疫和抗氧化能力以及血清抗体水平,增强对传染性造血器官坏死病毒的抗性。

关键词：虹鳟传染性造血器官坏死病病毒纳米硒抗病毒酶活性血清抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鱼类传染性造血器官坏死病毒糖蛋白的酵母表面展示

引用

水产学报 2016年第7期40卷 1106-1113页

作者：赵景壮徐黎明刘淼曹永生尹家胜刘红柏卢彤岩中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

糖蛋白(glycoprotein,G)是鱼类传染性造血器官坏死病毒的主要表面抗原,是病毒检测及疫苗研制的主要靶基因。为了对其进行酵母表面展示,本研究利用本实验室保存的含有IHNV-Sn1203毒株G基因的质粒为模板,PCR扩增富含抗原表位的糖蛋白基因... 详细信息

糖蛋白(glycoprotein,G)是鱼类传染性造血器官坏死病毒的主要表面抗原,是病毒检测及疫苗研制的主要靶基因。为了对其进行酵母表面展示,本研究利用本实验室保存的含有IHNV-Sn1203毒株G基因的质粒为模板,PCR扩增富含抗原表位的糖蛋白基因片段后,连接酵母表面展示载体p YD1,构建重组质粒p YD1-G。将p YD1-G转化酿酒酵母EBY100细胞后,利用半乳糖诱导G蛋白的表达。利用细胞免疫荧光、Western Blotting及流式细胞仪检测酵母表面G蛋白的表达情况。细胞免疫荧光结果显示,转化了p YD1-G重组质粒的酵母细胞表面呈现出特异性荧光;Western Blotting结果显示,经半乳糖诱导后G蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;流式细胞仪检测结果表明,随着半乳糖诱导时间的增加,G蛋白的表达量随之增加,并在诱导48 h时达到峰值。以上研究表明G蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达,本研究为以酵母为活载体的新型口服疫苗的研制奠定了基础。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白真核表达酵母表面展示

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：