检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：赵思扬华南农业大学

学位级别：硕士

鱼露，又称鱼酱油、胰油，是一种清澈的红棕色液体调味料。我国传统鱼露的加工生产方式落后，生产品质难以控制，没有规范的生产技术标准；生产周期较长，大约需要2～3年的时间。为了缩短发酵周期，加快鱼露发酵速度，国内主要采用保温... 详细信息

鱼露，又称鱼酱油、胰油，是一种清澈的红棕色液体调味料。我国传统鱼露的加工生产方式落后，生产品质难以控制，没有规范的生产技术标准；生产周期较长，大约需要2～3年的时间。为了缩短发酵周期，加快鱼露发酵速度，国内主要采用保温发酵、加曲发酵和外加酶等快速发酵法。外加蛋白酶是利用蛋白酶的水解作用促进鱼体蛋白质的分解，可缩短鱼露的发酵周期，此法的关键是找到高产蛋白酶的菌株。\n 本研究目的在于寻找高产蛋白酶的菌株，建立监测产蛋白酶菌株的方法，以便通过向发酵液中添加产酶菌种，缩短发酵周期，并实时监测发酵进程，为建立规范的生产标准打基础。\n 首先以酪蛋白为底物，采用透明圈法从鱼露发酵液中筛选高产蛋白酶的细菌，最终从不同批次的鱼露发酵液中筛选到了93株高产蛋白酶细菌，对其进行形态学观察和分类。\n 运用16S rDNA鉴定技术，对其中的55株进行了分类鉴定，共得到2个属，11个种。其中芽孢杆菌属的有：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、Bacillus aryabhattai、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、Bacillus tequilensis、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、嗜盐脱氮芽孢杆菌(Bacillus halodenitrificans)、黄海芽胞杆菌(Bacillusmarisflavi)和Bacillus aquimaris；枝芽孢杆菌属的有：盐脱氮枝芽孢杆菌(Virgibacillushalodenitrificans)。通过对其序列的分析及同源性比较，用MEGA软件构建树状图，判定其系统进化地位，绘制出55株菌的系统发育进化树，把筛选到的细菌进一步分为3类，即与淀粉液化芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌相似的细菌、与嗜盐脱氮芽孢杆菌相似的细菌以及与巨大芽孢杆菌相似的细菌。对编号为8-5、8-20、8-64和24-6的4株菌的产酶性质进行研究，测得各菌株所产蛋白酶酶活分别为：30.65U/mL、37.24U/mL、87.22U/mL和49.24U/mL。\n 利用实时荧光定量pcr技术检测不同时期鱼露发酵液中芽孢杆菌属的菌群数量变化，用芽孢杆菌属菌株的DNA为模板扩增237bp的特异性片段，以60℃的退火温度进行实时荧光定量pcr反应得到标准曲线，进而按照标准曲线的条件检测鱼露发酵液中芽孢杆菌属的菌株数量。应用此技术检测芽孢杆菌属的菌株时，检测下限为1.44×103个拷贝数，并测得发酵7个月的鲇鱼发酵液中芽孢杆菌浓度为：1.70×104个/mL。此研究结果为进一步研究菌株在鱼露发酵中的更替以及鱼露发酵过程菌群变化的实时监测打下基础。

关键词：菌株筛选定量检测鱼露发酵液产蛋白酶细菌实时荧光定量pcr法

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LDR-qpcr法检测乳腺癌细胞miRNA122a的表达及其与雌激素调控的关系

LDR-qPCR法检测乳腺癌细胞miRNA122a的表达及其与雌激素调控的关系

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作者：恽文徐州医科大学

学位级别：硕士

目的：研究表明，肿瘤的发生与发展与某些miRNA的异常表达相关，然而成熟miRNA分子量较小，检测比较困难。经过多次摸索，我们建立了一种新的基于连接酶依赖反应的实时定量pcr方法(LDR-qpcr)，对人乳腺癌细胞系MCF-7中miR-122a的表达量... 详细信息

目的：研究表明，肿瘤的发生与发展与某些miRNA的异常表达相关，然而成熟miRNA分子量较小，检测比较困难。经过多次摸索，我们建立了一种新的基于连接酶依赖反应的实时定量pcr方法(LDR-qpcr)，对人乳腺癌细胞系MCF-7中miR-122a的表达量进行了检测，并初步研究雌激素水平对它的影响。　　方法：以人乳腺癌细胞系MCF-7为检测样本，HepG2细胞为阳性参照，将探针的连接反应与实时荧光定量pcr技术相结合，建立检测成熟的miR-122a的LDR-qpcr法，并开展方法学评价以及不同培养环境(有或无雌激素)下MCF-7细胞miR-122a的表达分析。　　结果：熔解曲线和琼脂糖凝胶电泳图均显示LDR-qpcr法的扩增产物特异;多次重复试验证实该方法重复性较好(CV<10％);梯度稀释系列样本的检测结果表明：LDR-qpcr法的检测下限为10-4稀释度(RNA浓度为5pg/μ1)，茎环RT-qpcr法的检测下限为10-3稀释度(RNA浓度为50pg/μ1)，前者比后者敏感10倍，检测范围也更宽。MCF-7细胞表达miR-122a，其表达水平随着雌激素含量的增加而下调，呈负相关关系(r=-0.960);激素饥饿细胞的miR-122a表达上调，约为常规培养组的3.65倍;经5nmol/L雌二醇处理后又出现下调，差异有统计学意义(P=0.040)。　　结论：LDR-qpcr法特异性高、重复性好，与茎环RT-qpcr相比，其灵敏度更高，检测范围更广，具有推广应用价值。miR-122a表达于乳腺癌细胞MCF-7，雌激素是其表达水平的调节因子之一。

关键词：实时荧光定量pcr法细胞miRNA122a 调控机制乳腺癌雌激素

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TCF7L2基因多态性与肾移植后糖尿病的相关性研究

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中国药理通讯 2013年第3期30卷 63-63页

作者：余爱荣范星刘慧明辛华雯广州军区武汉总医院临床药理科武汉430070 广州军区武汉总医院肾内科武汉430070

目的：探讨TCF7L2基因多态性与肾移植后糖尿病（PTDM）的相关性。方法：采用实时荧光定量pcr法检测97例PTDM患者（PTDM组）和301例未发生PTDM的肾移植患者（对照组）的TCF7L2基因rs290487的基因型，采用logistic回归分析该基因多态性与P... 详细信息

目的：探讨TCF7L2基因多态性与肾移植后糖尿病（PTDM）的相关性。方法：采用实时荧光定量pcr法检测97例PTDM患者（PTDM组）和301例未发生PTDM的肾移植患者（对照组）的TCF7L2基因rs290487的基因型，采用logistic回归分析该基因多态性与PTDM的相关性。结果：PTDM组和对照组患者rs290487的基因型分布差异具有统计学意义（P〈0．05）。

关键词：肾移植后糖尿病基因多态性相关性 logistic回归分析实时荧光定量pcr法肾移植患者 PTDM 分布差异

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尿巨细胞病毒-DNA载量与血清巨细胞病毒-IgM检测在新生儿巨细胞感染中的价值

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全科医学临床与教育 2012年第2期10卷 161-163页

作者：茅利明傅金可许德顺绍兴县中心医院检验科浙江绍兴312030

目的以实时荧光定量pcr法(FQ-pcr)检测尿液中巨细胞病毒载量,以化学发光法检测血清中CMV-IgM,探讨两种方法联合应用在新生儿巨细胞病毒(CMV)感染中的临床价值。方法 144例疑似CMV感染新生儿的血清用化学发光检测CMV-IgM,尿液用FQ-pcr检... 详细信息

目的以实时荧光定量pcr法(FQ-pcr)检测尿液中巨细胞病毒载量,以化学发光法检测血清中CMV-IgM,探讨两种方法联合应用在新生儿巨细胞病毒(CMV)感染中的临床价值。方法 144例疑似CMV感染新生儿的血清用化学发光检测CMV-IgM,尿液用FQ-pcr检测CMV-DNA载量,比较抗病毒治疗前、后两种检测结果的变化。结果两种方法单独检测的阳性率分别为55.56%和66.67%,两者比较,差异无统计学意义(χ2=3.20,P>0.05),两种方法联合检测的阳性符合率为76.39%(110/144),明显高于两方法单独检测阳性率,差异均有统计学意义(χ2分别=4.47、5.21,P均<0.05)。抗病毒治疗后血CMV-IgM和尿CMV-DNA两种检测结果均较治疗前明显下降,差异均有统计学意义(t分别=7.45、9.31,P均<0.05)。结论尿液CMV-DNA病毒载量与化学发光法血清CMV-IgM联合检测,可以明显提高新生儿巨细胞病毒感染检测的阳性率。

关键词：实时荧光定量pcr法化学发光法巨细胞病毒感染婴幼儿

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清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA基因表达的影响

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辽宁中医杂志 2012年第4期39卷 745-748页

作者：袁斌周立华徐建亚于希忠朱越王爱华南京中医药大学附属医院江苏南京210029 南京中医药大学江苏南京210029

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞间黏附分子(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干... 详细信息

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞间黏附分子(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量pcr法(RealTime-pcr)测定各组人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA表达变化。结果:病毒感染后ICAM-1、IL-8以GAPDH为内参的△Ct值明显小于正常细胞组及生理盐水血清对照组,而清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清作用后△Ct值显著增大。结论:(1)RSV病毒作用后ICAM-1及IL-8 mRNA表达水平显著升高;(2)清肺口服液可以降低ICAM-1、IL-8的表达,缓解RSV感染后细胞的异常变化,起到间接预防RSV肺炎的作用。

关键词：清肺口服液呼吸道合胞病毒细胞间黏附分子-1 白细胞介素-8 实时荧光定量pcr法

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乳腺癌中RRIG1的表达及其临床病理学意义

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安徽医科大学学报 2012年第11期47卷 1282-1282页

作者：曹渊张瑰红安徽医科大学基础医学院病理学教研室

目的探讨维甲酸受体诱导基因1(RRIG1)表达与乳腺癌临床病理特征间的关系。方法采用组织芯片平台,应用免疫组织化学PV二步法检测77例乳腺浸润性导管癌(非特殊类型)、10例导管原位癌和20例乳腺良性增生组织中RRIG1、雌激素受体(ER)及孕激... 详细信息

目的探讨维甲酸受体诱导基因1(RRIG1)表达与乳腺癌临床病理特征间的关系。方法采用组织芯片平台,应用免疫组织化学PV二步法检测77例乳腺浸润性导管癌(非特殊类型)、10例导管原位癌和20例乳腺良性增生组织中RRIG1、雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)蛋白的表达;实时荧光定量pcr法检测76例新鲜乳腺浸润性导管癌(非特殊类型)、5例导管原位癌组织和20例乳腺良性增生组织RRIG1、ER及PR的mRNA表达。结果①乳腺良性增生组织和乳腺癌组织中均能检测到RRIG1 mRNA表达,导管原位癌组织和浸润性导管癌RRIG1 mRNA表达均明显低于良性增生组织(P=0.004,P=0.036)。乳腺导管原位癌和浸润性导管癌RRIG1蛋白表达阳性率均明显低于正常组织(P=0.028,P=0.029)。②乳腺浸润性导管癌组织中RRIG1 mRNA的相对表达水平在淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组(P=0.023);淋巴结转移组RRIG1蛋白表达显著低于无淋巴结转移组(P=0.01)。浸润性导管癌中肿瘤>5 cm的患者RRIG1 mRNA表达高于肿瘤≤5 cm患者,但差异无统计学意义(P=0.081);RRIG1 mRNA相对表达水平及蛋白表达与患者年龄、组织学分级均无关。③浸润性导管癌组织ER mRNA相对表达水平为2.9±1.2,浸润性导管癌组织中ER与RRIG1 mR-NA相对表达水平呈正相关(P=0.043);浸润性导管癌组织PR mRNA相对表达水平为3.0±2.2,与RRIG1 mRNA相对表达水平无关(P=0.057),ER、PR蛋白表达与RRIG1蛋白表达无关。结论乳腺浸润性导管癌中RRIG1 mRNA表达与乳腺癌的淋巴结转移呈负相关,提示RRIG1作为抑癌基因参与乳腺癌的浸润进展,其表达水平低下,对乳腺癌早期诊断和预后判断具有重要参考价值。

关键词：乳腺肿瘤 RRIG1 免疫组织化学法实时荧光定量pcr法

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他克莫司对HaCaT细胞干细胞因子mRNA及小鼠B16黑素瘤细胞c-kitmRNA表达的影响

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中华皮肤科杂志 2011年第7期44卷 509-510页

作者：张峻岭索丹凤天津市长征医院皮肤色素科天津大学300120 天津市第一中心医院皮肤科

目的探讨他克莫司对角质形成细胞干细胞因子（SCF）mRNA及黑素细胞c-kitmRNA表达水平的影响。方法分别培养人永生化角质形成细胞（HacaT）和小鼠B16黑素瘤细胞，经他克莫司作用48h后，采用实时荧光定量pcr法检测SCFmRNA及c-kitmRNA的表... 详细信息

目的探讨他克莫司对角质形成细胞干细胞因子（SCF）mRNA及黑素细胞c-kitmRNA表达水平的影响。方法分别培养人永生化角质形成细胞（HacaT）和小鼠B16黑素瘤细胞，经他克莫司作用48h后，采用实时荧光定量pcr法检测SCFmRNA及c-kitmRNA的表达。结果他克莫司作用后，HaCaT细胞SCFmRNA、B16黑素瘤细胞c-kitmRNA的相对表达量均升高，与空白对照组比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论他克莫司可以上调HaCaT细胞SCFmRNA及B16黑素瘤细胞c-kitmRNA的表达量。

关键词： B16黑素瘤细胞 HaCaT细胞 mRNA表达他克莫司 c-kit 细胞因子mRNA 小鼠实时荧光定量pcr法

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龙眼14-3-3基因及其启动子的克隆以及在体胚发生过程中的表达分析

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热带作物学报 2011年第5期32卷 845-853页

作者：蔡英卿赖钟雄陈义挺林玉玲张妙霞李惠华福建农林大学园艺植物生物工程研究所福建福州350002 福建省泉州师范学院福建泉州362000

分离克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织14-3-3基因,并分析该基因在龙眼体胚发生过程中的表达情况。采用RT-pcr结合RACE法,获得龙眼胚性愈伤组织14-3-3基因的cDNA全长序列和DNA序列,采用TAIL-pcr法,获得龙眼胚性愈伤组织14-... 详细信息

分离克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织14-3-3基因,并分析该基因在龙眼体胚发生过程中的表达情况。采用RT-pcr结合RACE法,获得龙眼胚性愈伤组织14-3-3基因的cDNA全长序列和DNA序列,采用TAIL-pcr法,获得龙眼胚性愈伤组织14-3-3基因的启动子DNA序列,运用生物信息学方法对序列进行分析,并通过实时荧光定量pcr(qRT-pcr)研究该基因在龙眼体胚发生过程中的表达。结果表明:经克隆得到龙眼胚性愈伤组织14-3-3基因786 bp的cDNA全长序列(GenBank检索号为GU573765),该cDNA开放阅读框推定的氨基酸序列(含261个氨基酸)与其它植物14-3-3具有较高同源性;该基因的DNA序列(GenBank检索号为GU573766)长为1 859 bp,包含3个内含子,内含子的剪切位点均符合真核生物"GT-AG"规则;该基因的启动子DNA序列(GenBank检索号为GU573766)长为910 bp;该基因在龙眼体胚各阶段均有表达,其中在松散型胚性愈伤组织阶段和心形胚及鱼雷形胚阶段呈现高表达,整个变化趋势呈"倒S"状。

关键词：龙眼胚性愈伤组织 14—3—3基因克隆序列分析实时荧光定量pcr法

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EBV感染与婴儿肝炎综合征相关分析

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辽宁医学杂志 2011年第1期25卷 15-16页

作者：况红星山东省淄博市周村区人民医院检验科 255300

目的为探讨婴儿肝炎综合征EB病毒(EBV)感染的相关性。方法采用实时荧光定量pcr技术检测80例婴肝患儿外周血EBV-DNA的拷贝数。采用pcr-Southern方法检测患儿咽分泌物EBV DNA;酶联免疫吸附法(ELISA)检测80例婴肝患儿血清EBV VCA-IgM。结果... 详细信息

目的为探讨婴儿肝炎综合征EB病毒(EBV)感染的相关性。方法采用实时荧光定量pcr技术检测80例婴肝患儿外周血EBV-DNA的拷贝数。采用pcr-Southern方法检测患儿咽分泌物EBV DNA;酶联免疫吸附法(ELISA)检测80例婴肝患儿血清EBV VCA-IgM。结果 80例患儿血标本EBV DNA阳性率为20.0%(16/80),40例正常对照儿童有1例外周血EBV DNA阳性,阳性率为2.5%,婴肝患儿组外周血EBV DNA阳性率明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。80例患儿咽分泌物标本EBV DNA阳性率为31.25%(25/80),40例正常对照儿童有1例咽分泌物EBV DNA阳性,阳性率为2.5%(1/40),患儿组咽分泌物EBV-DNA阳性率也明显高于对照组,差异有显著性(P<0.01)。80例患儿血EBV VCA-IgM阳性率为11.25%(9/80),40例正常对照儿童EBV VCA-IgM检测结果均为阴性,统计学分析表明,差异无显著性(P=0.066)。结论 EBV感染是婴儿肝炎综合征的致病因子之一,临床对年龄较小伴肝功能损害的患儿,在排除巨细胞病毒、乙肝病毒感染后,应考虑EBV感染的可能。

关键词：婴儿肝炎综合征 EB病毒 pcr-Southern杂交实时荧光定量pcr法

来源：评论

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中国江南地区男性雌激素受体基因多态性分布特征及连锁不平衡分析

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复旦学报（医学版） 2010年第3期37卷 356-360页

作者：朱虔兮沈月平苗茂华高尔生李德昆沈维雄梁敏红袁伟上海市计划生育科研所生殖流行病与社会医学研究室上海200032 苏州大学流行病与卫生统计学教研室苏州215006 Kaiser Research Institute Oakland CA 94612 USA

目的探讨雌激素受体基因PvuⅡ、XbaⅠ和Codon325位点单核苷酸多态性的分布特征及连锁不平衡关系。方法应用pcr-RFLP和荧光定量pcr法对678名江南男性雌激素受体基因单核苷酸多态性进行分析。研究对象主要来自江浙城市和湖南岳阳。结果江... 详细信息

目的探讨雌激素受体基因PvuⅡ、XbaⅠ和Codon325位点单核苷酸多态性的分布特征及连锁不平衡关系。方法应用pcr-RFLP和荧光定量pcr法对678名江南男性雌激素受体基因单核苷酸多态性进行分析。研究对象主要来自江浙城市和湖南岳阳。结果江浙、岳阳两组各位点基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡。PvuⅡ和Codon325位点的基因型分布在两组间存在差异,P值分别为0.012和0.011。Arlequin分析结果显示PvuⅡ和XbaⅠ两位点间存在较强的连锁不平衡(江浙:D′=0.908,岳阳:D′=0.974),但PvuⅡ或XbaⅠ与Codon325位点之间并不存在明显的连锁不平衡。结论雌激素受体基因单核苷酸多态位点的基因型存在地区差异;PvuⅡ和XbaⅠ两位点在江南男性中存在显著的连锁不平衡。

关键词：雌激素受体实时荧光定量pcr法分子信标连锁不平衡

来源：评论

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