检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王少岩中国医科大学

学位级别：硕士

目的:血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）通透性增高是脑血管疾病后炎症反应的重要病理基础,BBB通透性增加后引起白细胞-内皮细胞相互作用并跨内皮细胞向脑内迁移,从而加重中枢神经系统炎性损伤并导致神经元破坏。本研究以小鼠脑微血... 详细信息

目的:血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）通透性增高是脑血管疾病后炎症反应的重要病理基础,BBB通透性增加后引起白细胞-内皮细胞相互作用并跨内皮细胞向脑内迁移,从而加重中枢神经系统炎性损伤并导致神经元破坏。本研究以小鼠脑微血管内皮细胞（b End.3）模拟体外BBB模型,观察组织蛋白酶D（cathepsin D,CTSD）对小鼠脑微血管内皮细胞通透性改变的影响,并探讨其作用机制。方法:1.细胞培养及分组:小鼠脑微血管内皮细胞用含10%的胎牛血清的高糖培养基,在37℃、5%CO2的孵箱内培养,2-3天·细胞传代一次,取其对数生长期的细胞进行试验。2.研究方法:首先通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法,检测不同CTSD浓度（0ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml、200ng/ml、400ng/ml、800ng/ml）对小鼠脑微血管内皮细胞（b End.3）增殖活性的影响。然后利用小鼠脑微血管内皮细胞模拟体外BBB模型,通过荧光素异硫氰酸酯标记的葡萄糖（Fluorescein isothiocyanate labeled dextrance,FITC-dextrance）渗透实验Transwell方法,检测上述不同CTSD浓度时小鼠脑微血管内皮细胞通透性的变化。采用蛋白质免疫印迹法（western blot,WB）和免疫荧光染色法,检测不同CTSD浓度（0ng/ml、200ng/ml、400ng/ml、800ng/ml）时小凹调节蛋白-2（Cavin-2）、紧密连接蛋白-1（Zonula Occludens-1,ZO-1）、钙粘连蛋白（VE-cadherin）在小鼠脑微血管内皮细胞的表达水平。采用全内反射荧光显微镜（Total Interal Reflection Fluorescenc Microscopy,Tirf）观察对照组和CTSD浓度为800ng/ml时Cavin2蛋白在小鼠脑微血管内皮细胞的定位情况,并通过透射电镜检测细胞膜内囊泡数量的改变。采用免疫荧光染色法和WB方法检测核因子κB（Neuclear factor-κ-gene binding,NFκB）信号通路及小鼠脑微血管内皮细胞Cavin2蛋白的表达。分别以胃抑素A（Pepstatin A,Pep A）及四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯（Pyrrdidine dithiocarbamate,PDTC）作为抑制剂进行实验,观察其能否抑制CTSD对小鼠脑微血管内皮细胞通透性的改变。结果:1.不同CTSD浓度作用下,小鼠脑微血管内皮细胞活性无显著差别。2.随着CTSD浓度的增加,透过Transwell小室的FITC-dextrance明显增加,CTSD浓度与小鼠脑微血管内皮细胞细胞通透性呈正相关。3.免疫荧光结果显示,随着CTSD浓度的增加,小鼠脑微血管内皮细胞Cavin-2蛋白荧光强度增加,ZO-1和VE-cadherin蛋白荧光强度没有改变。***结果显示,随着CTSD浓度的增加,小鼠脑微血管内皮细胞Cavin-2蛋白表达量增加,ZO-1和VE-cadherin蛋白表达量没有改变。***显微镜结果显示,Cavin2蛋白主要定位于小鼠脑微血管内皮细胞膜上,且CTSD浓度为800ng/ml组Cavin2蛋白较对照组表达量增多;6.电镜结果显示CTSD浓度为800ng/ml组小鼠脑微血管内皮细胞膜附近囊泡较对照组数量增多。7.与对照组相比,高CTSD浓度组小鼠脑微血管内皮细胞中NFκB信号通路活化进入细胞核,且这一现象能被PDTC抑制。***和免疫荧光结果显示,高CTSD浓度组小鼠脑微血管内皮细胞Cavin-2蛋白表达增加,能被PDTC抑制而不能被Pep A抑制。9.通过检测Transwell下室中FITC-dextrance浓度的方法发现,说明PDTC能阻断由CTSD导致的小鼠脑微血管内皮通透性升高。结论:***能够导致小鼠脑微血管内皮细胞通透性增高,且呈剂量依赖性。***能够导致小鼠脑微血管内皮细胞Cavin2表达上调,但对紧密连接结构无明显影响。***上调Cavin2蛋白是通过激活小鼠脑微血管内皮细胞NFκB信号通路来实现的。

关键词：组织蛋白酶D 小鼠脑微血管内皮细胞血脑屏障囊泡

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模拟失重下miR-212-3p/SIRT1通路调控微血管内皮细胞增殖

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空军军医大学学报 2022年第1期43卷 6-12页

作者：徐丽群张晓雁张丽君孙权薛桐胡泽兵曹新生石菲张舒空军军医大学航空航天医学系生物动力学教研室航空航天医学教育部重点实验室陕西西安710032

目的探究模拟失重下miR-212-3p/SIRT1信号通路对微血管内皮细胞增殖的影响,为失重导致的心血管功能失调的在体靶向干预寻求治疗靶点。方法利用2D回转器对小鼠脑微血管内皮细胞进行模拟失重处理,探究miR-212-3p及沉默信息调节因子2相关... 详细信息

目的探究模拟失重下miR-212-3p/SIRT1信号通路对微血管内皮细胞增殖的影响,为失重导致的心血管功能失调的在体靶向干预寻求治疗靶点。方法利用2D回转器对小鼠脑微血管内皮细胞进行模拟失重处理,探究miR-212-3p及沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)在模拟失重下的表达变化;向bEnd.3细胞中转染mimic-212-3p、inhibitor-212-3p、pcDNA3.1-SIRT1及相应的阴性对照进行功能验证或挽救实验;采用qRT-PCR检测miR-212-3p及SIRT1 mRNA表达变化;采用Western blotting检测PCNA、SIRT1蛋白的表达变化;采用CCK-8及5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)检测微血管内皮细胞增殖能力。结果模拟失重下,bEnd.3细胞中miR-212-3p表达升高、而SIRT1表达下降(P<0.01);转染mimic-212-3p、inhibitor-212-3p后,Western blotting、CCK-8及EdU检测均表明过表达miR-212-3p能够显著抑制微血管内皮细胞增殖,抑制miR-212-3p能够促进微血管内皮细胞增殖(P<0.01);此外,沉默miR-212-3p可以缓解模拟失重导致的微血管内皮细胞增殖抑制,表现为模拟失重下转染inhibitor-212-3p后PCNA蛋白表达增加,细胞增殖率升高(P<0.01);mimic-212-3p与pcDNA3.1-SIRT1共转染实验表明miR-212-3p通过抑制SIRT1从而负调控微血管内皮细胞增殖(P<0.01)。结论模拟失重促进miR-212-3p表达,而抑制SIRT1表达;miR-212-3p通过直接负调控SIRT1从而抑制微血管内皮细胞增殖,提示抑制miR-212-3p/SIRT1通路可以部分降低模拟失重对微血管内皮细胞的增殖抑制,miR-212-3p可以作为潜在的干预靶点。

关键词： miR-212-3p SIRT1 模拟失重细胞增殖小鼠脑微血管内皮细胞

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紫朱醇提取物对高糖高脂诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

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中国组织工程研究 2023年第26期27卷 4132-4138页

作者：王莉娟柳国斌韩秋琴赵志弘何金晶李文惠上海健康医学院上海市201318 上海中医药大学上海市201203

背景:紫朱软膏由黄芪、紫草、朱砂、龙血竭、阿胶、冰片6味中药组成,有清热解毒、祛腐生肌、补气益血的功效。前期临床和动物实验已证实其在糖尿病溃疡愈合过程中发挥抑制炎症、促进血管生成的作用。目的:在细胞水平上探究紫朱醇提取物... 详细信息

背景:紫朱软膏由黄芪、紫草、朱砂、龙血竭、阿胶、冰片6味中药组成,有清热解毒、祛腐生肌、补气益血的功效。前期临床和动物实验已证实其在糖尿病溃疡愈合过程中发挥抑制炎症、促进血管生成的作用。目的:在细胞水平上探究紫朱醇提取物对高糖高脂诱导小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3细胞)损伤的保护作用,并研究其对血管生成的影响。方法:模拟高糖高脂环境,采用不同质量浓度的葡萄糖和棕榈酸诱导bEnd.3细胞损伤,给予不同质量浓度的紫朱醇提取物干预,用CCK-8法筛选出最合适的刺激物质量浓度和最佳给药质量浓度;然后通过划痕实验、血管生成实验观察紫朱醇提取物对bEnd.3细胞促血管生成的影响,采用AnnexinV/PI凋亡试剂盒检测bEnd.3细胞凋亡率,采用Western blot和qRT-PCR法检测bEnd.3细胞中VEGFA、Ang-2、SPRED1、PIK3R2的蛋白和mRNA表达水平。结果与结论:①经CCK-8法检测细胞活力,最终选定25 mmol/L葡萄糖+200μmol/L棕榈酸作用24 h作为模型组,500 mg/L紫朱醇提取物作用24 h作为紫朱醇提取物组给药方式;②与正常对照组相比,模型组bEnd.3细胞迁移和生成血管能力下降(P<0.001,P<0.05),bEnd.3细胞凋亡率上升(P<0.001),VEGFA、Ang-2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.001),SPRED1、PIK3R2 mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.001);③与模型组相比,紫朱醇提取物组bEnd.3细胞迁移和血管生成能力上升(P<0.05),bEnd.3细胞凋亡率显著下降(P<0.001),VEGFA、Ang-2 mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.001),SPRED1、PIK3R2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.001,P<0.05);④结果表明,紫朱醇提取物对高糖高脂诱导的bEnd.3细胞具有保护作用,能够促进细胞迁移和血管生成并减少细胞凋亡。

关键词：紫朱醇提取物高糖高脂小鼠脑微血管内皮细胞血管生成血管内皮生长因子

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miR-881-3p对MBMEC增殖和迁移作用的研究

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中国预防兽医学报 2024年第11期46卷 1107-1116页

作者：曹芳魏勇吴忧任静静齐亚银石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆天润科技股份有限公司新疆乌鲁木齐830063

为探究miR-881-3p对白细胞介素9受体(IL9R)的靶向性及其对小鼠脑微血管内皮细胞(MBMEC)增殖和迁移的调控作用,本研究将MBMEC分为模拟物组(转染miR-881-3p模拟物)、模拟物对照组(转染miR-881-3p模拟物对照物)、抑制剂组(转染miR-881-3p... 详细信息

为探究miR-881-3p对白细胞介素9受体(IL9R)的靶向性及其对小鼠脑微血管内皮细胞(MBMEC)增殖和迁移的调控作用,本研究将MBMEC分为模拟物组(转染miR-881-3p模拟物)、模拟物对照组(转染miR-881-3p模拟物对照物)、抑制剂组(转染miR-881-3p抑制剂)、抑制剂对照组(转染miR-881-3p抑制剂对照物),通过双荧光素酶试验检测miR-881-3p对IL9R的靶向性;采用RT-qPCR检测各组细胞中miR-881-3p、IL9R、增殖细胞核抗原(PCNA)、小型染色体维持蛋白复合体3(MCM3)、紧密连接蛋白-5(Claudin-5)的相对转录水平;采用CCK-8法检测各组细胞增殖水平;采用划痕试验检测各组细胞的迁移情况;通过western blot检测IL9R、PCNA蛋白、MCM3、claudin-5的表达水平。双荧光素酶试验结果显示,miR-881-3p对IL9R具有直接靶向作用。RTqPCR结果显示,转染48 h后,与对照组相比,模拟物组中miR-881-3p的相对转录水平极显著升高(P<0.01),而IL9R的相对转录水平极显著降低(P<0.01),与抑制剂对照组相比,抑制剂组中miR-881-3p的相对转录水平极显著降低(P<0.01),而IL9R的相对转录水平极显著升高(P<0.01),与抑制剂组相比,模拟物组中PCNA、MCM3、claudin-5的相对转录水平极显著降低(P<0.001)。CCK-8法检测结果显示,miR-881-3p通过负调控IL9R进而抑制MBMEC的增殖。划痕试验结果显示,miR-881-3p通过负调控IL9R进而抑制MBMEC的迁移。Western blot检测结果显示,过表达miR-881-3p后MBMEC中的IL9R、MCM3、claudin-5蛋白表达量极显著降低(P<0.001),PCNA蛋白表达量显著降低(P<0.05)。上述结果首次证实miR-881-3p通过负调控IL9R抑制MBMEC的增殖和迁移,本研究为探究细菌性脑膜炎损伤机制提供了可靠依据。

关键词： miR-881-3p 白细胞介素9受体小鼠脑微血管内皮细胞细胞增殖细胞迁移

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慢病毒介导的小RNA干扰组织蛋白酶B转染小鼠脑微血管内皮细胞的条件

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中国综合临床 2012年第11期28卷 1128-1131页

作者：周国宏孔丽山西省眼科医院玻璃体视网膜科太原030022 山西医科大学解剖学教研室

目的研究慢病毒介导下小RNA干扰组织蛋白酶B转染小鼠脑微血管内皮细胞（bEND．3）的最佳条件。方法实验分3组，完全培养基组（NP组）、培养基＋5mg／L凝聚胺组（P1组）和培养基＋8mg／L凝聚胺组（P2组），每组均有5个不同梯度的转染复数... 详细信息

目的研究慢病毒介导下小RNA干扰组织蛋白酶B转染小鼠脑微血管内皮细胞（bEND．3）的最佳条件。方法实验分3组，完全培养基组（NP组）、培养基＋5mg／L凝聚胺组（P1组）和培养基＋8mg／L凝聚胺组（P2组），每组均有5个不同梯度的转染复数（MOI），即1、5、10、15、20，每个MOI值设3个孔，共45组。转染48、72、96h分别在荧光显微镜下计数绿色荧光蛋白，并求其转染率，从而得到其最佳MOI值；1周后采用MTr法检测最佳MOI值对bEND．3活性和存活率的影响。结果转染48h时，在各组观察到少量绿色荧光蛋白，其转染率介于1％～9％；72h和96h时，MOI相同的各组问差异无统计学意义（P〉0．01），其中，MOI为1、5、15的各组转染率均低于20％；MOI为10和20组，转染率介于71％～97％与60％～84％，且MOI为10组转染率高于MOI为20组，差异有统计学意义（P〈0．01）。M1rr检测Pl组和P2组存活率，l周时分别为（81．38±6。69）％、（62．03±5．13）％，Pl组显著高于P2组（t=15．795，P〈0．001）。结论慢病毒介导的小RNA干扰组织蛋白酶B转染bEND．3最佳优化条件为MOI=10，凝聚胺为5mg／L，最佳转染时间为转染后72h。

关键词： RNA干扰慢病毒组织蛋白酶B 小鼠脑微血管内皮细胞转染率

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P-糖蛋白抑制剂tariquidar对黄芪甲苷在bEND.3细胞上跨膜转运的影响及机制

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中国药学杂志 2021年第3期56卷 204-209页

作者：张伟朱全刚上海市皮肤病医院Ⅰ期临床试验中心上海200443

目的研究P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂N-[2-[[4-[2-(6,7-二甲氧基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)乙基]苯基]氨基甲酰基]-4,5-二甲氧基苯基]喹啉-3-甲酰胺(tariquidar)对黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASI)跨膜转运的影响及机制。方法采用bEND.3细胞模型评价P-gp抑制剂tariquidar对bEND.3细胞摄取ASI的影响,以及P-gp抑制剂tariquidar对ASI跨膜转运的影响。结果ASI浓度在10~100μmol·L^(-1)内对bEND.3细胞活性无影响。P-gp抑制剂tariquidar能够明显增加ASI在bEND.3细胞内摄取含量(P<0.05)。当加入P-gp抑制剂tariquidar后,ASI从AP→BL侧P_(app)值基本没有变化,而ASI从BL→AP侧P_(app)值明显下降(P<0.05),ASI的P_(app)(B→A)/P_(app)(A→B)从1.01降到0.55,表明ASI跨膜转运受到转运蛋白P-gp的外排作用。结论ASI跨膜转运机制为被动转运,兼有外排蛋白参与。P-gp抑制剂可以减少ASI外排进而增加ASI在组织中的渗透和吸收。

关键词：黄芪甲苷 P-糖蛋白小鼠脑微血管内皮细胞跨膜转运

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柴油废气颗粒物通过氧化损伤和炎症反应诱导血脑屏障损伤的体外实验研究

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国际免疫学杂志 2021年第4期44卷 377-382页

作者：高志健陈莹莹游一帆姜月高淑英哈尔滨医科大学卫生毒理教研室 150081

目的探讨柴油废气颗粒物(diesel exhaust particulates,DEP)是否通过氧化损伤和炎症反应导致血脑屏障损伤。方法用小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3细胞系构建血脑屏障体外模型,按照DEP染毒浓度不同将细胞分为对照组(0μg/mL)和实验组(DEP浓... 详细信息

目的探讨柴油废气颗粒物(diesel exhaust particulates,DEP)是否通过氧化损伤和炎症反应导致血脑屏障损伤。方法用小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3细胞系构建血脑屏障体外模型,按照DEP染毒浓度不同将细胞分为对照组(0μg/mL)和实验组(DEP浓度为12.5、25、50、100μg/mL),染毒48 h后,检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎性细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β,IL-6,肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌水平。Western blot检测紧密连接蛋白claudin-5和ZO-1的表达。结果bEnd.3细胞经不同浓度DEP染毒48 h后,100μg/mL浓度组与对照组相比,GSH-Px活力显著下降,差异具有统计学意义[(15.51±2.22)U/mg protein比(23.22±3.27)U/mg protein,q=4.741,P<0.05];活性氧含量升高,差异具有统计学意义;[(1.28±0.03)比(1.00±0.00),q=12.400,P<0.05];IL-1β分泌水平显著增加,25,50和100μg/mL浓度组与对照组相比差异具有统计学意义[(3.74±0.36)ng/L,(3.20±0.37)ng/L,(3.26±0.33)ng/L比(1.76±0.09)ng/L,q值分别为6.708、5.982、6.216,P值均<0.05];IL-6分泌水平显著增加,100μg/mL浓度组与对照组相比差异具有统计学意义[(57.79±4.20)ng/L比(20.31±1.12)ng/L,q=15.000,P<0.05];TNF-α分泌水平显著增加,50μg/mL和100μg/mL浓度组与对照组相比,差异具有统计学意义,[(20.88±4.77)ng/L,(24.41±6.53)ng/L比(7.54±2.81)ng/L,q值分别为4.715、5.962,P<0.05];claudin-5表达水平显著下降,12.5,25和100μg/mL浓度组与对照组相比,差异具有统计学意义[(0.87±0.16)、(0.92±0.17)、(0.37±0.12)比(1.24±0.11),q值分别为5.551、5.152、11.280,P<0.05];ZO-1表达水平显著下降,25、50和100μg/mL浓度组与对照组相比,差异具有统计学意义[(0.46±0.06)、(0.39±0.08)、(0.30±0.05)比(1.06±0.13),q值分别为6.724、7.572、8.470,P<0.05]。结论DEP可能通过氧化损伤和炎症反应,导致紧密连接蛋白表达降低进而造成血脑屏障损伤。

关键词：柴油废气颗粒物小鼠脑微血管内皮细胞氧化损伤炎症反应血脑屏障

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基于细胞自噬探讨活血定眩胶囊含药血清对bEnd.3细胞缺氧损伤的影响

基于细胞自噬探讨活血定眩胶囊含药血清对bEnd.3细胞缺氧损伤的影...

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作者：黄凯甘肃中医药大学

学位级别：硕士

目的:1.通过培养小鼠脑微血管内皮细胞（bEnd.3细胞）,研究在不同氧糖剥夺（OGD）模型时间下,bEnd.3细胞的增殖情况并选择最优OGD时间;2.在最优OGD时间下,探究不同浓度活血定眩胶囊含药血清对bEnd.3细胞的保护作用及与细胞自噬的关系,... 详细信息

目的:1.通过培养小鼠脑微血管内皮细胞（bEnd.3细胞）,研究在不同氧糖剥夺（OGD）模型时间下,bEnd.3细胞的增殖情况并选择最优OGD时间;2.在最优OGD时间下,探究不同浓度活血定眩胶囊含药血清对bEnd.3细胞的保护作用及与细胞自噬的关系,并完善活血定眩胶囊治疗椎动脉型颈椎病的作用机理,为活血定眩胶囊的进一步临床推广应用奠定基础。方法:1.取生长状况良好的bEnd.3细胞,传代后分为5组,分别为正常对照组、OGD 3h组、OGD 6h组、OGD 9h组和OGD 12h组。先将其放在正常二氧化碳细胞培养箱中培养36h后,再按照上述分组将细胞进行OGD处理。OGD处理方法如下,首先将无糖DMEM培养基置于37℃,5%C02、94%N2、1%02及饱和湿度的三气细胞培养箱中低氧预处理30min。弃去各OGD组的旧培养基并置换成已低氧预处理的无糖DMEM培养基,然后将它们置于上述三气细胞培养箱中分别培养3h、6h、9h和12h。正常对照组即为OGD 0h组,因而在共培养36h后,将其培养液更换为无糖DMEM,并直接进行检测。运用普通光学显微镜观察bEnd.3的细胞形态并拍照,比较对照组与OGD各处理组中细胞形态的变化并使用CCK-8检测各组细胞活力。2.采用血清药理学理论方法制备活血定眩胶囊含药血清及空白血清。取生长状况良好的bEnd.3细胞,在同一代下分为7组,分别为模型对照组、不同浓度活血定眩胶囊含药血清OGD组（5%、10%、15%）、不同浓度空白血清OGD对照组（5%、10%、15%）,先将其放在正常的二氧化碳细胞培养箱中培养,待细胞增殖到80%-90%密度时,再将各组的基础培养基更换为无糖DMEM培养基,其次根据各组分组方式不同加入相应的血清,其中模型对照组中不放任何血清,并根据上一部分的结果,所得到OGD最佳时间,将各组放入三气细胞培养箱中共培养OGD最佳时间后取出,吸取细胞培养基上清液,采用比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶（LDH）活性,采用硝酸根还原酶法检测一氧化氮（NO）;利用流式细胞仪检测细胞凋亡率,运用Western Blot法检测各组自噬指标LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62、Beclin 1蛋白的表达,运用qPCR法检测各组P62及Beclin 1 mRNA的表达,综合以上结果分析活血定眩胶囊含药血清对bEnd.3细胞的保护作用及与细胞自噬的关系。结果:1.在光学显微镜下,正常对照组中bEnd.3细胞为长条状、梭型且分布规则,彼此相连,并呈丝网状有序排列,而在OGD模型组（3h、6h、9h及12h）中,随着时间的延长,bEnd.3细胞由原来的梭型逐渐往椭圆型发展,并在12h时,bEnd.3细胞大量死亡;通过CCK-8检测发现,与正常组比较,OGD模型组在4个时间点OD值均呈现下降趋势（P<0.05）,表明活随着时间的延长,bEnd.3细胞活力逐渐下降,并且结合光学显微镜结果,随着时间的推移,bEnd.3细胞凋亡率逐渐上升,且在OGD 12h时,细胞大量死亡。根据线性回归方程:y=-0.1186x+1.7375（R2=0.9881）可得,当活细胞占比为50%时,OGD诱导时间大约需要7.3小时,根据本实验结果,结合文献可得,在本实验中OGD诱导的最佳时间为6小时,确定6小时为OGD最佳时间。***诱导6小时后,与模型对照组相比,不同浓度含药血清组及不同浓度空白血清组均能在不同程度降低LDH的释放并增加细胞内NO分泌从而减轻由于OGD模型造成bEnd.3细胞损伤从,表明大鼠血清能够缓解细胞的损伤,并且降低细胞膜通透性;不同浓度空白血清组与不同浓度含药血清组相比,在相同剂量下,活血定眩胶囊含药血清均能显著抑制细胞上清液中LDH的增加,并增强NO的量从而保护细胞,10%、15%的活血定眩胶囊含药血清组差异显著（P<0.05）,其中10%含药血清组NO含量较其余各组最高,且差异显著（P<0.05）。在凋亡检测中,我们发现模型对照组中bEnd.3细胞凋亡为35.5%。5%、10%、15%含药血清组中bEnd.3细胞凋亡率分别为18.4%、5.7%、11.2%;而5%、10%、15%空白血清组中bEnd.3细胞凋亡率分别为25.7%、20.7%、15.3%。同等剂量的含药血清组和空白血清组相比,各含药血清能够较好的抑制OGD诱导的bEnd.3细胞的凋亡率,且与其他各组相比,10%含药血清组能够明显抑制bEnd.3细胞凋亡的进程。Western Blot的结果可知:（1）与模型对照组相比,5%、10%、15%的含药血清组及5%、10%空白血清组中P62/β-Actin相对表达量均明显下降（P<0.05）,而15%空白血清组P62/β-Actin相对含量较模型对照组升高（P<0.05）,而10%含药血清组中P62/

关键词：椎动脉型颈椎病活血定眩胶囊小鼠脑微血管内皮细胞氧糖剥夺细胞自噬

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细胞在太赫兹辐射下的凋亡反应及太赫兹光谱特性研究

细胞在太赫兹辐射下的凋亡反应及太赫兹光谱特性研究

引用

作者：谢鹏飞深圳大学

学位级别：硕士

太赫兹辐射对生物系统的潜在影响是许多基于生物安全应用类项目中的重要研究内容,及时评估太赫兹辐射对生物系统健康的潜在危害和影响具有非常重要意义。大量研究表明,太赫兹辐射对生物体完全无损的早期观点在细胞水平上并不完全成立,... 详细信息

太赫兹辐射对生物系统的潜在影响是许多基于生物安全应用类项目中的重要研究内容,及时评估太赫兹辐射对生物系统健康的潜在危害和影响具有非常重要意义。大量研究表明,太赫兹辐射对生物体完全无损的早期观点在细胞水平上并不完全成立,所造成的影响也各不相同。而这些影响除了安全评估以外,也可为以太赫兹技术为手段的新型诊疗方法提供理论依据。本论文主要研究了小鼠视网膜神经节细胞（RGC-5）和小鼠脑微血管内皮细胞（bEnd.3）在太赫兹时域光谱系统低功率辐照下的生物学效应以及光谱特性分析。视网膜神经节细胞过度凋亡是造成青光眼等眼部疾病的主要原因,因此研究对视网膜神经节细胞凋亡的影响十分重要。本文首先对小鼠神经节视网膜细胞（RGC-5）进行了不同时间（5,10,20,30,40分钟）的太赫兹曝光处理,并在曝光后不同时间阶段对细胞进行凋亡率检测。结果发现,无论是曝光后0小时,6小时还是12小时,细胞的凋亡率相对对照组都出现了下降趋势。说明该条件下的太赫兹辐射对小鼠视网膜神经节细胞在不利环境下的凋亡增加具有一定的抑制作用。该结果为低功率宽频带脉冲太赫兹辐射成为一种可能的治疗工具提供了可能,为其对青光眼等眼部疾病的治疗提供了体外细胞学基础。此外,脑微血管内皮细胞作为血脑屏障的主要组成部分,它的死亡将会造成血脑屏障破裂并引起脑组织损伤。我们结合太赫兹光谱特性分析,详细评估了bEnd.3细胞在低功率（20uW/cm2）,频率为0.1-3.5 THz太赫兹辐射下曝光10,20和30分钟的细胞学反应。实验过程中使用红外摄像机对曝光期间的细胞温度进行实时监测并记录各个时间点的温度值和红外照片。使用光学显微镜观察细胞在太赫兹辐照前后的细胞形态学变化,使用流式细胞术对细胞在曝光后0小时和12小时的细胞凋亡、细胞周期进行检测分析。辐照期间实时采集细胞的太赫兹光谱数据。实验结果显示,在辐照过程中细胞几乎没有出现温度变化。同时,细胞在辐照前后细胞形态几乎无明显变化。细胞凋亡结果显示,在曝光后0小时,细胞凋亡率随曝光时间的增加而减少。然而,在曝光后12小时细胞凋亡率出现急剧上升。利用细胞周期学检测技术,我们发现在经过太赫兹辐照后0小时,处于G0/G1期的细胞数量随曝光时间减少,而G2/M期的细胞数量却随曝光时间增加,但在曝光后12小时检测结果却与之相反,这种变化趋势与凋亡率趋势相匹配。表明了即使是低功率太赫兹辐射,也会对脑微血管内皮细胞产生有害作用,只是由于细胞应激反应导致这种作用不会立刻表现,而是在曝光后一定的时间后发生效应。考虑到细胞的介电特性,我们计算了细胞在不同曝光时间（10,20和30分钟）的太赫兹复介电常数,分析结果发现,细胞的介电损耗（复介电常数虚部）随曝光时间的增加而减少,这可能是细胞中一些离子或蛋白质溶度改变而引起。因此我们利用这种变化趋势,调查了细胞复介电常数变化与细胞凋亡的关系,我们对细胞的时域光谱数据进行归一化处理后,结果发现其与流式细胞术检测的细胞凋亡率（曝光后0小时）变化具有很好的匹配性。也证明了太赫兹时域光谱系统是一种可以无损、实时、无标记定量体外检测细胞生理状态的潜在工具。

关键词：太赫兹辐射生物效应凋亡光谱特性研究小鼠脑微血管内皮细胞

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血必净对小鼠脑微血管内皮细胞株增殖的作用

血必净对小鼠脑微血管内皮细胞株增殖的作用

引用

2008全国中西医结合危重病、急救医学学术会议

作者：孙正达汪伟沈蕾边伟祝禾辰复旦大学附属华山医院危重病医学科

目的观察成中成药血必净注射液对体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞株(bEnd.3)增殖活力的影响。探讨其促进内皮损伤修复的药物效应。方法采用小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3,分别给予0、5、25和50 mg/mL血必净刺激12、24和48小时后,应用四... 详细信息

目的观察成中成药血必净注射液对体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞株(bEnd.3)增殖活力的影响。探讨其促进内皮损伤修复的药物效应。方法采用小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3,分别给予0、5、25和50 mg/mL血必净刺激12、24和48小时后,应用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测各组细胞的增殖情况,并应用流式细胞仪检测血必净对细胞周期(增殖指数%=(G2-M)%+S%)的影响。结果与对照组(Omg/mL)相比,血必净5mg组和25mg组在12小时和24小时的MTT和增殖指数均明显升高(p<0.05),两组在48小时的增殖指数也明显升高(p<0.05),而MTT则无显著差异;50mg组的MTT在12小时与对照组相比无显著差异(p>0.05),而在24小时和48小时则显著降低(p<0.05);其增殖指数在12小时和24小时均明显升高(p<0.01),在48小时显著下降(p<0.01)。结论血必净对于体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞在特定药物浓度和时间内具有刺激增殖的作用,提示对内皮细胞的损伤具有一定的修复作用。

关键词：血必净注射液小鼠脑微血管内皮细胞 MTT 细胞周期

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