检索结果-内蒙古大学图书馆

食品科学 2013年第13期34卷 314-318页

作者：何圣发陈红兵武涌李欣佟平高金燕南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学中德联合研究院江西南昌330047 南昌大学生命科学与食品工程学院食品系江西南昌330047

食物过敏原构象性表位的预测是过敏原研究的重要任务之一。目前构象性表位预测的方法主要包括基于氨基酸性质预测构象性表位,该方法单独应用较少,常与其他技术相结合使用;基于蛋白质一级结构预测构象性表位,该方法目前还不成熟,有待研究... 详细信息

食物过敏原构象性表位的预测是过敏原研究的重要任务之一。目前构象性表位预测的方法主要包括基于氨基酸性质预测构象性表位,该方法单独应用较少,常与其他技术相结合使用;基于蛋白质一级结构预测构象性表位,该方法目前还不成熟,有待研究;基于蛋白质三级结构预测构象性表位,操作简单易行,但不能针对某个表位进行预测;利用噬菌体展示技术结合各种生物信息软件预测构象性表位,能快速地对目标表位进行预测,应用前景广阔。总之,表位预测具有工作简单、易操作、速度快及经济价廉等特点,具有重要的应用价值。

关键词：食物过敏构象性表位表位预测

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牛乳β-乳球蛋白构象性表位定位及结构特征研究

牛乳β-乳球蛋白构象性表位定位及结构特征研究

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作者：武涌南昌大学

学位级别：硕士

牛乳过敏是严重食物过敏之一,其中在1岁新生儿的发生率可以达到2.2%到2.8%。牛乳中含有20多种蛋白,其中β-乳球蛋白是牛乳中主要过敏原之一,约82%的牛乳过敏患者对β-乳球蛋白过敏。另外,过敏原表位包括线性和构象性表位,它们是过敏反... 详细信息

牛乳过敏是严重食物过敏之一,其中在1岁新生儿的发生率可以达到2.2%到2.8%。牛乳中含有20多种蛋白,其中β-乳球蛋白是牛乳中主要过敏原之一,约82%的牛乳过敏患者对β-乳球蛋白过敏。另外,过敏原表位包括线性和构象性表位,它们是过敏反应的物质基础。相对于线性表位,人们对构象性表位的认知严重不足。毫无疑问,牛乳β-乳球蛋白构象性表位的研究具有重要意义。本论文工作包括抗牛乳β-乳球蛋白特异性IgE的纯化,噬菌体展示技术淘选特异性模拟肽,生物信息学模拟构象性表位、构象性表位氨基酸的结构特征。研究的主要方法结果及结论如下： 1.以牛乳过敏患者的血清为样品,通过Sepharose4B亲和柱和Protein G亲和柱,逐步纯化患者血清中特异性IgE抗体,建立了两步法纯化抗牛乳β-乳球蛋白特异性IgE的方法。选择ELISA法检测纯化后IgE的纯度,所得特异性抗体纯度较高,而ELISA结果同时显示IgE抗体经纯化后仍然保持了与牛乳β-乳球蛋白较高的结合能力。 2.采用亲和淘选的方式,以纯化的抗牛乳β-乳球蛋白特异性IgE为靶分子,经过3轮淘选,随机挑选32个克隆子,进行测序鉴定,得到了三个模拟肽的核苷酸序列,推导的相应氨基酸序列为DYSEHKE,TIPGQGP,NQKLSNL. 3.将牛乳β-乳球蛋白的结构和模拟肽序列输入到网络服务器Pepitope中,通过比对模拟肽的参数,成功地将模拟肽转换成了牛乳β-乳球蛋白的3个构象性表位,它们分别是A:Leu87-Asn88-Asn90-Lys91-Glu108-Ser110,B:Ile2-The4-Pro113-Gln115-Pro144和C:Thr18-Tyr20-Glu44-Glu45-Lys47-Glu55-Glul57,其可信度依次为A>B>C。 4.利用生物信息学软件DNAStar以及SOPMA网络服务器,分析了3个牛乳β-乳球蛋白构象性表位氨基酸结构特征,它们主要是极性氨基酸。与预测的牛乳β-乳球蛋白的亲水性、表面可及性以及抗原性对照,发现3个构象性表位的18个氨基酸中,4个氨基酸处于亲水性区域中,2个位于表面可及性区域中,7个在抗原性区域中。与预测的牛乳β-乳球蛋白二级结构为参照,构象性表位氨基酸所在的的区域分布为：α-螺旋7个氨基酸,折叠区域6个氨基酸,无规则卷曲区域5个氨基酸。但通过模拟肽在牛乳β-乳球蛋白三维结构中定位出的3个构象性表位,它们分布则为：折叠区域有8个氨基酸,转角区域有2个氨基酸,无规则卷曲区域有8个氨基酸。

关键词：牛乳过敏噬菌体展示牛乳β-乳球蛋白 IgE 构象性表位表位

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丙型肝炎病毒构象性表位与乙型肝炎病毒S基因嵌合表达质粒的构建及其表达

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中国病毒病杂志 2014年第1期4卷 20-25页

作者：徐扬高婷婷秦照玲鞠鹤鹏赵平戚中田上海第二军医大学微生物学教研室上海市生物防护重点实验室上海200433

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)构象性表位AR3与乙型肝炎病毒S抗原(HBs)嵌合的真核表达质粒,并在293T细胞中表达鉴定。方法采用重叠拼接PCR法,将HCV AR3表位的基因插入pSVB-24H质粒中,构建pSVB-24H-AR3重组质粒;再用PCR法扩增出全长的AR3-S... 详细信息

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)构象性表位AR3与乙型肝炎病毒S抗原(HBs)嵌合的真核表达质粒,并在293T细胞中表达鉴定。方法采用重叠拼接PCR法,将HCV AR3表位的基因插入pSVB-24H质粒中,构建pSVB-24H-AR3重组质粒;再用PCR法扩增出全长的AR3-S嵌合基因,将其克隆到pCMV-HA载体中,构建pCMV-HA-AR3-S真核表达质粒。脂质体和PEI转染法导入293T细胞,Western blot和ELISA法分别检测重组蛋白的表达及分泌情况。结果 PCR法分别扩增出pSVB-24H部分载体、HCV AR3及HBs部分基因共3条基因片段;利用两步重叠拼接PCR,扩增得到1 118bp的三片段拼接产物,双酶切鉴定重组质粒pSVB-24H-AR3位置正确,测序分析表明插入序列及开放读码框正确,但细胞表达产物难以被抗-HBs识别;将完整的1 128bp的AR3-S基因插入带HA标签的表达载体中,酶切鉴定和测序分析表明重组质粒pCMV-HA-AR3-S构建正确,Western blot结果显示重组AR3-S蛋白可与HA抗体特异性反应;ELISA结果也显示细胞内能检测到较高水平的AR3-S重组蛋白。结论成功构建pSVB-24H-AR3和pCMV-HA-AR3-S嵌合表达质粒并在细胞中表达,为后续开展基于HBs的病毒样HCV颗粒疫苗研究提供了实验依据。

关键词：丙型肝炎病毒构象性表位乙型肝炎病毒 S抗原嵌合基因

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食物致敏原表位定位技术的研究进展

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食品科学 2021年第7期42卷 292-300页

作者：胡永芯李欣程剑锋马鑫孟轩夷陈红兵武涌南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学食品学院江西南昌330047 南昌大学中德联合研究院江西南昌330047

食物致敏原是引起食物过敏的元凶,多为蛋白质。抗原表位是在抗原分子中与抗体反应或被抗原受体识别,并引发机体免疫应答的特殊化学基团。从表位水平认识食物致敏原,能揭示食物过敏的物质基础,为解决食物过敏问题提供精准的靶标。本文基... 详细信息

食物致敏原是引起食物过敏的元凶,多为蛋白质。抗原表位是在抗原分子中与抗体反应或被抗原受体识别,并引发机体免疫应答的特殊化学基团。从表位水平认识食物致敏原,能揭示食物过敏的物质基础,为解决食物过敏问题提供精准的靶标。本文基于表位结构和定位方法的不同,介绍了食物致敏原表位定位技术的发展,并进一步展望了致敏原表位信息对于改进食物过敏鉴定技术和低致敏食物加工方法的应用前景。

关键词：食物致敏原表位定位 T细胞表位 B细胞表位线性表位构象性表位

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牛乳乳清中主要过敏原的B细胞表位定位

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食品科学 2022年第20期43卷 148-156页

作者：胡永芯谭宏凯胡巍熊子奕袁娟丽潘丽娜汪家琦李欣南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学食品学院江西南昌330047 南昌大学药学院江西南昌330047 澳优乳业(中国)有限公司湖南长沙410005

采用噬菌体展示技术结合生物信息学定位牛乳α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的B细胞表位,分析不同类型表位之间的氨基酸组成和空间分布规律。结果表明,某些线性表位是构象性表位的组成部分,IgE与IgG表位存在共同区域。本研究得到的表位是牛乳... 详细信息

采用噬菌体展示技术结合生物信息学定位牛乳α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的B细胞表位,分析不同类型表位之间的氨基酸组成和空间分布规律。结果表明,某些线性表位是构象性表位的组成部分,IgE与IgG表位存在共同区域。本研究得到的表位是牛乳过敏诊断和预后的候选生物标志物,也可用于指导于低致敏性乳制品的开发。

关键词：乳白蛋白 β-乳球蛋白线性表位构象性表位噬菌体展示技术

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HPV-58型E7蛋白抗原模拟表位的筛选及分析

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云南大学学报（自然科学版） 2014年第6期36卷 920-927页

作者：李燕博杨自腾马岚清华大学生命科学学院北京100084 清华大学深圳研究生院生命健康学部广东深圳518055 深圳大学生命科学学院广东深圳518060

利用该实验室成熟的噬菌体随机十二肽库筛选平台,对HPV-58型E7蛋白单克隆抗体株4C4a、6C7a进行3轮亲和筛选,得到2组、各8个阳性噬菌体克隆.阳性噬菌体氨基酸序列用以模拟单抗(靶蛋白)特异性识别的HPV-58型E7蛋白的抗原表位.将测得的阳... 详细信息

利用该实验室成熟的噬菌体随机十二肽库筛选平台,对HPV-58型E7蛋白单克隆抗体株4C4a、6C7a进行3轮亲和筛选,得到2组、各8个阳性噬菌体克隆.阳性噬菌体氨基酸序列用以模拟单抗(靶蛋白)特异性识别的HPV-58型E7蛋白的抗原表位.将测得的阳性噬菌体多肽序列及HPV-58型E7蛋白氨基酸序列进行生物信息学分析后,进行线性序列比对及构象性表位预测及分析.构象性表位的预测借力于Epi Search Server和Pepitope Server,对构象性表位匹配及簇的寻找提供有力支持,也为早期诊断及研制多肽疫苗提供参考.

关键词： HPV-58型E7蛋白噬菌体肽库模拟表位生物信息学构象性表位簇

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登革病毒包膜EDⅢ蛋白中和抗体结合表位筛选与鉴定

登革病毒包膜EDⅢ蛋白中和抗体结合表位筛选与鉴定

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作者：易海粟南方医科大学

学位级别：硕士

登革热(Dengue fever,DF)是由登革病毒(Dengue virus,DENV)感染所引起的一种虫媒传染性疾病,轻者主要引起无症状感染或者产生轻微的症状,严重者可导致发生登革出血热(Dengue hemorrhagic fever,DHF)和登革休克综合征(Dengue shock syndr... 详细信息

登革热(Dengue fever,DF)是由登革病毒(Dengue virus,DENV)感染所引起的一种虫媒传染性疾病,轻者主要引起无症状感染或者产生轻微的症状,严重者可导致发生登革出血热(Dengue hemorrhagic fever,DHF)和登革休克综合征(Dengue shock syndrome,DSS)。WHO2014年2月发布的报告称登革热为全球蔓延最快的病媒传播疾病,发病数量在过去50年间增加了约30倍。已构成美洲、东南亚、西太平洋地区的严重的健康问题和经济负担。2014年,登革热在我国南方(主要是广东省)再次发生大流行,仅广东省累积报告登革热病例超过45000例,再次敲响了防治登革热的警钟。在目前尚无登革特异性治疗药物批准的情况下,登革疫苗的研发愈发重要。目前有数个登革疫苗正在进行临床试验,仅有一种疫苗通过Ⅲ期临床试验,但此疫苗对不同血清型登革病毒保护性差异较大,尤其对2型登革病毒几乎无保护作用。鉴于登革病毒多种血清型及其致病机制的复杂性,尤其二次感染异型登革病毒所产生的抗体增强作用(ADE)更是成为疫苗研发的重要掣肘。登革病毒属于黄病毒家族,为有包膜的单正链RNA病毒,包括四种不同的血清型,基因组长度约llkb,编码三种结构蛋白(C,衣壳蛋白；M,膜蛋白；E,包膜蛋白)及7种非结构蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5)。其中,由于E蛋白暴露在病毒表面,是诱导登革病毒中和抗体产生的主要蛋白,也是与疫苗研究相关的主要蛋白；非结构蛋白参与登革病毒生活周期的重要环节,相关研究主要用于体外诊断试剂的研发上。E蛋白含有3个功能区,I区(EDI)位于中心；Ⅱ区(EDⅡ)位于侧面,含融合环；Ⅲ区(EDⅢ)呈免疫球蛋白样折叠,被认为能够与细胞表面受体结合及中和抗体的主要靶点,登革热疫苗研究的靶标也多集中于EDⅢ蛋白。研究表明,从感染登革病毒患者体内分离的登革病毒抗体中含有交叉反应性及型特异性EDⅢ抗体,且抗登革病毒诸多成分的抗体中,EDⅢ抗体在Vero细胞感染模型中具有最强的中和活性。重组EDⅢ蛋白鼠源单抗亦具有体内外中和作用。已经证实去除登革病毒感染患者恢复期血清中EDⅢ抗体并不改变该血清的中和作用及ADE作用,可能原因为患者血清中抗EDⅢ抗体含量低,在整个血清保护作用中占的比例较低。但是如能够促进患者体内EDⅢ抗体的产生并达到有效浓度,EDⅢ抗体很可能具有强大的中和保护作用,因而具备作为治疗性抗体的潜能。而患者体内EDⅢ抗体产生较少的直接原因可能是作为登革病毒多种抗原成份之一的EDⅢ蛋白在自然感染的抗原竞争中处于劣势,从而不能诱导有效的抗体反应。因此解析EDⅢ蛋白中和表位,进而制备亚单位疫苗避免多种成份的抗原竞争仍是重要的疫苗研发策略,亦是本研究的切入点。在本实验室前期工作中,用DENV1-4 EDⅢ重组蛋白免疫小鼠制备了一批EDⅢ蛋白鼠源性单克隆抗体,并用免疫学方法对其进行了鉴定。本研究的思路是,在与四种血清型EDⅢ蛋白均发生交叉反应的单抗中,以体外微中和实验方法(Enzyme-linked immune spot-based micro-neutralization test, ELISPOT-MNT),鉴定出2株单抗对不同血清型登革病毒具有较好的体外中和作用,单抗克隆号为2811A35和2D73A7,再从噬菌体展示肽库中筛选其可能的抗原结合表位,寻找具有四型登革病毒交叉保护性抗体结合EDⅢ蛋白的表位特征,并为进一步探索其结构与功能之间的关系提供参考。一、登革病毒EDⅢ蛋白单克隆抗体交叉中和活性的鉴定由于登革病毒多种血清型及致病机制的复杂性,理想的疫苗应诱导出针对四种登革血清型的交叉中和抗体,理想的靶点为存在于4种血清型病毒的保守表位,因此本部分内容旨在寻找对四种血清型登革病毒具交叉保护作用的单抗。我们从实验室前期制备的27株能与四种血清型登革病毒EDⅢ蛋白反应的交叉反应性单抗中,运用ELISPOT-MNT微中和实验方法,鉴定出2株对不同血清型登革病毒具有较好保护作用的单抗。本章工作将单抗分别与四种血清型登革病毒孵育后感染LLC-MK2细胞,通过斑点显色的方法,检测并计数被感染细胞的数量。结果显示单抗与病毒孵育后能明显降低病毒对细胞的感染,随着单抗浓度的增加,被感染的细胞数明显减少,直到能完全保护细胞不被感染。其中,单抗2B11A35对1、2、3型登革病毒有较好的中和活性,50%抑制浓度(IC50)均小于1.5μg/ml,但是对4型登革病毒中和活性较差,IC50>80μg/ml;单抗2D73A7对2、3型登革病毒有较好的中和活性,IC50<3.5μg/ml,对4型登革病毒中和活性次之,IC50<8μg/ml,对1型登革病毒的中和活性最差,IC50>200μg/ml。本部分内容鉴定出

关键词：登革病毒包膜蛋白3 交叉中和抗体噬菌体展示肽库构象性表位

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乳清主要致敏原B细胞表位定位研究

乳清主要致敏原B细胞表位定位研究

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作者：胡永芯南昌大学

学位级别：硕士

牛乳及乳制品具有较高的营养价值,但也是WHO/FAO认定的导致食物过敏的最常见原因之一。β一乳球蛋白和α-乳白蛋白是牛乳乳清蛋白中含量最多、致敏性最强的组分。表位是指能与抗体反应或被抗原受体识别,并引发机体产生免疫应答的位于抗... 详细信息

牛乳及乳制品具有较高的营养价值,但也是WHO/FAO认定的导致食物过敏的最常见原因之一。β一乳球蛋白和α-乳白蛋白是牛乳乳清蛋白中含量最多、致敏性最强的组分。表位是指能与抗体反应或被抗原受体识别,并引发机体产生免疫应答的位于抗原的特殊区域。B细胞通过产生抗体发挥特异性体液免疫功能,同时也通过递呈抗原参与免疫调节。B细胞受体或B细胞分泌的特异性抗体识别的表位称为B细胞表位,可分为线性表位与构象性表位。本论文以乳清主要致敏原α-乳白蛋白和β-乳球蛋白为研究对象,定位B细胞表位,获得的表位数据为解析牛乳过敏的机制和靶向脱敏提供理论数据。本论文分别采用中国婴幼儿和儿童牛乳过敏血清,采用噬菌体展示技术结合多肽芯片技术对乳清主要致敏原(α-乳白蛋白和β-乳球蛋白)的线性和构象性表位进行筛选、鉴定和验证,最后通过KU812嗜碱性粒细胞模型评估不同表位肽体外致敏性。主要的研究方法、结果和结论如下: 1、通过ImmunoCAP结合酶联免疫吸附法对68份牛乳过敏患者血清进行筛选,获得54份sIgE大于0.35 kUA/L且针对α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的sIgE和sIgG水平均较高的血清。根据年龄差异混合为婴幼儿(0-3岁)和儿童(3-12岁)血清池。通过亲和层析柱获得不同血清池的高纯度抗体IgE和IgG。以IgE/IgG为靶分子,对Ph.D.-12噬菌体展示肽库进行亲和淘选。进行四轮淘选后,随机挑选第四轮的噬菌体进行测序,获得对应的氨基酸序列。最后采用生物信息学方法对α-乳白蛋白和β-乳球蛋白进行线性与构象性模拟表位定位,最终获得模拟表位数据如下: (1)α-乳白蛋白的B细胞线性模拟表位集中在AA11-36、AA44-76和AA80-99;α-乳白蛋白的构象性模拟表位为五个,分别为G20E25L115E113K114Q117W118 Y36K5、D64P67N66K58S47N44N45Q65T48I41V42、D63D64Q65P67N66K58S70N71N74I75S76、K 5T4C6E7L3Y36G35T33H32F31和 S22P24L119K5Q117W118F31H32L110A109。 (2)β-乳球蛋白的B细胞线性模拟表位集中在AA15-50和AA85-133;构象性模拟表位为五个,分别为 I12D11K14Q13P48A16L46G17T18Y20、E45G17T18Y20P126 E127V128P153E157E158I162、D28S27H146P144Q115S116N109N88L87、T76K75E51T49P48A16R124 Y99D11I12L10 和 E112P113Q115S116N109N90K91V81I78T76。 2、基于噬菌体展示技术定位的线性模拟表位的氨基酸频率,确定牛乳α-乳白蛋白的高频氨基酸是Lys62、Ser69、Asn71、Ile72和Ile75,β-乳球蛋白的高频氨基酸是Gly17、Ala23、Met24、Ala25、Ser27、Ile29和Val15。 3、采用多肽芯片验证线性表位肽与牛乳过敏患者血清中的特异性IgG、IgE的结合能力,结果表明α-乳白蛋白的IgE关键线性表位为AA21-27,α-乳白蛋白的IgG关键线性表位为AA21-36、AA44-52、AA55-62和AA65-79。β-乳球蛋白的IgE关键线性表位为AA15-29、AA35-54、AA89-99和AA95-103,β-乳球蛋白的IgG关键线性表位为AA25-33和AA95-109。同时,AA21-27和AA95-103分别是α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的IgE/IgG共有表位。 4、基于KU812细胞模型探索14种表位肽诱发致敏状态的嗜碱性粒细胞脱颗粒的能力。采用CCK-8法探究不同浓度的表位肽对细胞增殖的影响,发现在浓度为5 μg/mL时,所有的表位肽均不会影响细胞增殖。收集表位肽刺激后的KU812细胞上清液,检测组胺、β-氨基己糖苷酶、白介素-6的释放量,发现在所有表位肽中,P20最能有效诱导嗜碱性粒细胞脱颗粒。

关键词： α-乳白蛋白 β-乳球蛋白 B细胞表位线性表位构象性表位噬菌体展示技术肽扫描

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