检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：殷芳群南京农业大学

学位级别：硕士

水稻黄单胞菌包含两个致病变种Xanthomonas orzae ***(Xoo)和*** ***肠(Xoc),在水稻上分别引起白叶枯病和细菌性条斑病。为了阐明可扩散性信号分子(diffusible signal factor,DSF)调控的两个鞭毛基因flgD和flgE以及天冬酰胺合成酶基因(a... 详细信息

水稻黄单胞菌包含两个致病变种Xanthomonas orzae ***(Xoo)和*** ***肠(Xoc),在水稻上分别引起白叶枯病和细菌性条斑病。为了阐明可扩散性信号分子(diffusible signal factor,DSF)调控的两个鞭毛基因flgD和flgE以及天冬酰胺合成酶基因(asparagine synthetase B,asnB)对水稻细菌性条斑病菌Rs105在致病性等方面的影响。在本研究中,我们克隆了flgD、flgE和asnB基因,并对其进行序列分析。用同源重组的方法构建相应基因的缺失突变株,明确了这三个基因对水稻细菌性条斑病菌在运动性,致病性和生长能力等方面的影响,以此来推知基因的功能;并进一步证明了DSF通过调控flgD、flgE和asnB基因得表达,从而影响条斑病菌的致病性等表型。为深入认识DSF对细菌性条斑病菌相关基因的调控提供了科学依据。 (一)采用PCR的方法从Rs105基因组中克隆到flgD和flgE基因,并证实这两个基因在基因组中均为单拷贝。用同源重组法构建缺失突变体,测定突变体及其互补菌株的菌体形态、运动性、致病性及过敏性反应等表型,用反转录PCR(RT-PCR)的方法验证Rs105和ΔrpF(rpfF基因的缺失突变体,不产生DSF)中flgD、flgE表达量的差异。PCR和Southern杂交结果显示,flgD、flgE基因被成功敲除。与野生型相比,突变体的鞭毛产生能力丧失,游动性和趋化性能力减弱,接种水稻叶片显示其致病性部分减弱,基因互补可使其恢复。生长能力和对烟草叶片的致敏性无明显改变。RT-PCR结果显示,flgD、flgE基因在ΔrpfF中的转录水平明显降低。这表明：FlgD、FlgE是水稻细菌性条斑病菌鞭毛形成所必需的因子;进一步证明了DSF通过调控flgD、flgE基因表达,从而影响条斑病菌的致病性等表型。 (二)从Rs105基因组中克隆到asnB基因,并证实这个基因在基因组中为单拷贝。用同源重组法构建缺失突变体,测定突变体及其互补菌株的菌体形态、运动性、致病性和过敏性反应、在水稻叶片中的繁殖能力以及在添加不同氮源的MMX基本培养基里的生长能力等表型,用反转录PCR(RT-PCR)的方法验证Rs105和ΔrpfF(rpfF基因的缺失突变体,不产生DSF)中asnB表达量的差异。PCR和Southern杂交结果显示,asnB基因被成功敲除。与野生型相比,突变体接种水稻叶片显示其致病性基本丧失,基因互补可使其恢复。asnB基因的缺失严重影响了细菌性条斑病菌的生长,添加外源天冬酰胺可使其生长情况恢复。鞭毛产生能力,游动性和趋化性能力,降解胞外蛋白酶、纤维素酶的能力以及对烟草叶片的致敏性等无明显改变。RT-PCR结果显示,asnB基因在ΔrpfF中的转录水平明显降低。试验表明：asnB基因是细菌性条斑病菌正常生长所必需的,其突变可使细菌丧失致病性;进一步证明了DSF通过调控asnB基因表达,从而影响条斑病菌的致病性等表型。

关键词：水稻细菌性条斑病菌鞭毛基因 asnB基因 DSF 致病性

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水稻细菌性条斑病菌dsp基因的研究

水稻细菌性条斑病菌dsp基因的研究

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作者：李光永南京农业大学

学位级别：硕士

通过两并交配将水稻细菌性条斑菌(Xanthomonas oryzae ***)RS105基因文库中的1152个克隆、水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***)JXOIII基因文库中的1175个克隆李补了细菌性条斑病菌的化学诱变dsp基因突变体M12.筛选到细菌性条斑病菌... 详细信息

通过两并交配将水稻细菌性条斑菌(Xanthomonas oryzae ***)RS105基因文库中的1152个克隆、水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***)JXOIII基因文库中的1175个克隆李补了细菌性条斑病菌的化学诱变dsp基因突变体M12.筛选到细菌性条斑病菌基因文库中的I34、P35,及白叶枯病菌基因文库中的ZO3、Z54等4个克隆恢复突变体M12的菌落形态,其中的P35还是时恢复了M12的致病性.这4个克隆对其它5个dsp基因突变体:M13、M17、M19、M21和M23的互补分析得到了同样的结果.表明P35携带了要克隆的细菌性条斑病菌的dsp基因,而I34、Z03和Z54的具体功能不清楚.以Z03作探针进行的Southern杂交表明,Z03、Z54与I34间存在序列同源性,而与P35无同源性.采用交叉消化法构建了P35的EcoR I和Kpn I 酶切物理图谱.通过对P35进行亚克隆及功能互补分析推断细菌性条斑病菌dsp基因位于12.7Kb的片段上.

关键词：水稻细菌性条斑病菌水稻白叶枯病菌基因文库互补 dsp基因克隆

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在小檗碱作用下水稻细菌性条斑病菌生理及转录反应分析

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植物保护学报 2020年第5期47卷 1005-1018页

作者：杨平黎芳靖罗嫚林纬袁高庆黎起秦广西大学农学院南宁530004

为探究小檗碱对水稻细菌性条斑病菌Xanthomonas oryzae pv. oryzicola的抑菌机制,测定小檗碱对水稻细菌性条斑病菌GX13菌株的毒力、致病因子、细胞结构和能量代谢的影响,并利用Illumina-HiSeq高通量测序技术分析小檗碱对水稻细菌性条斑... 详细信息

为探究小檗碱对水稻细菌性条斑病菌Xanthomonas oryzae pv. oryzicola的抑菌机制,测定小檗碱对水稻细菌性条斑病菌GX13菌株的毒力、致病因子、细胞结构和能量代谢的影响,并利用Illumina-HiSeq高通量测序技术分析小檗碱对水稻细菌性条斑病菌菌体基因表达的影响。结果表明:经15μg/mL小檗碱处理后,GX13菌株侵染水稻品种玉丝占后引起水稻细菌性条斑病的病情指数为6.70,低于对照组;每1×108CFU菌体胞外多糖产量为1.58μg,显著低于对照的2.42μg;纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等胞外酶活性均低于对照组;与能量代谢相关的苹果酸脱氢酶(MDH)活性为1.42 U/g prot,低于对照组,而丙酮酸和三磷酸腺苷含量升高,分别为1.71μmol/mL和379.49μmol/g prot,均高于对照组。同时,细菌的生物膜形成受到抑制,细胞结构受到破坏。转录反应分析发现,与II型分泌系统相关的xpsD、xpsF和xpsM等基因、与III型分泌系统相关的hrcC、hrcJ、hrcN和hrcQ等基因、与胞外多糖分泌相关的gumF和gumI基因,以及与细胞结构与功能相关的murD、lpxA、lpxH、lpxL、fabG和fabZ等基因均下调表达。此外,与丙酮酸代谢途径相关的ppc、aceF和lpdA等基因也下调表达,但与氧化磷酸化途径相关的NADH脱氢酶和ATP合成酶编码基因以及与趋化性相关的编码基因均显著上调表达。表明小檗碱对GX13菌株的抑菌作用与其影响病菌的细胞结构和能量代谢相关,小檗碱通过影响病菌II型分泌系统和III型分泌系统的功能、生物膜的形成以及胞外多糖的合成,从而影响病菌的致病力。与此同时,水稻细菌性条斑病菌借助强化氧化磷酸化功能,启动与趋化性相关的基因上调表达来抵御小檗碱对自身的损害。

关键词：小檗碱水稻细菌性条斑病菌细胞结构生理转录组

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水稻白叶枯病菌和水稻细菌性条斑病菌的实时荧光PCR快速检测鉴定

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微生物学报 2003年第5期43卷 626-634页

作者：廖晓兰朱水芳赵文军罗宽漆艳香湖南农业大学植物保护学院长沙410128 国家质检总局动植物检疫实验所北京100029

成功建立了水稻白叶枯菌与水稻细菌性条斑病菌快速检测鉴定的实时荧光PCR方法。根据含铁细胞接受子基因设计两菌的通用引物PSRGF PSRGR(扩增一个 1 5 2bpDNA片段 )和特异性探针 (Baiprobe和Tiaoprobe) ,并对 1 3种细菌和 1种植原体进行... 详细信息

成功建立了水稻白叶枯菌与水稻细菌性条斑病菌快速检测鉴定的实时荧光PCR方法。根据含铁细胞接受子基因设计两菌的通用引物PSRGF PSRGR(扩增一个 1 5 2bpDNA片段 )和特异性探针 (Baiprobe和Tiaoprobe) ,并对 1 3种细菌和 1种植原体进行实时荧光PCR。结果表明 ,两个特异性探针能分别特异性检测到目标病原菌产生荧光信号而其它参考菌不产生荧光信号。检测的绝对灵敏度是 3 0 .6fg μL质粒DNA和 1 0 3CFU mL的菌悬浮液 ,相当于 1个细菌细胞的基因 ,比常规PCR电泳检测高约 1 0 0倍 ,相对灵敏度为 1 0 5CFU mL。整个检测过程只需 2h ,完全闭管 ,降低了污染的机会 ,无需PCR后处理。用这两个特异性探针分别对自然感染白叶枯菌和条斑菌的叶片DNA提取液和种子浸泡液进行实时荧光PCR ,结果均可特异性检测到目标菌的存在并完全可将两种病原细菌区分开来 ,且只需 0 3g叶片和 1

关键词：水稻白叶枯病菌水稻细菌性条斑病菌实时荧光PCR 检测

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15种小分子化合物对水稻细菌性条斑病菌Ⅲ型分泌系统抑制作用的研究

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植物病理学报 2023年第3期53卷 424-435页

作者：柳杰朱凯旋王国华张林林晏熙梁向东杭小红姜伯乐杨梅广西大学生命科学与技术学院南宁530004 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004 广西大学化学化工学院南宁530004

Ⅲ型分泌系统(TypeⅢsecretion system,T3SS)是水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae ***,Xoc)的主要致病因子。实验室前期鉴定了一批十字花科黑腐病菌Ⅲ型分泌系统的小分子抑制剂。这些抑制剂对Xoc的T3SS是否具有作用,值得探究。本... 详细信息

Ⅲ型分泌系统(TypeⅢsecretion system,T3SS)是水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae ***,Xoc)的主要致病因子。实验室前期鉴定了一批十字花科黑腐病菌Ⅲ型分泌系统的小分子抑制剂。这些抑制剂对Xoc的T3SS是否具有作用,值得探究。本研究利用Lux和GUS报告基因分别与T3SS相关基因启动子区融合构建Xoc融合报告系统,用报告系统以及定量PCR鉴定对Xoc T3SS有作用的小分子。结果表明,Carmofur、5-Fluorocytosine、A-3和Dealkaline lignin对Xoc T3SS基因表达具有显著抑制作用,A-3和Dealkaline lignin抑制Xoc生长,4种物质均未显著影响Xoc的致病力。为精确检测Xoc的过敏反应(hypersensitive response,HR)及小分子抑制剂的生防作用,本研究利用融合PCR及同源双交换原理构建能在辣椒ECW-10R上激发特异HR的报告菌株GX01/avrBs1。结果显示,GX01/avrBs1可在辣椒ECW-10R上快速激发HR,Dealkaline lignin可显著延迟Xoc在辣椒ECW-10R上的HR,进一步表明Dealkaline lignin抑制Xoc T3SS。

关键词：水稻细菌性条斑病菌 Ⅲ型分泌系统小分子化合物抑制剂

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基于LC-MS-MS技术建立水稻细菌性条斑病菌的蛋白质表达谱的研究

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基因组学与应用生物学 2015年第6期34卷 1239-1244页

作者：朱平川覃宏平付珊岑卫健邹海凡何勇强姜伟亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广西大学南宁530004 广西大学生命科学与技术学院南宁530004

水稻细菌性条斑病菌(*** ***,Xoc)是水稻的主要病原菌之一,其引发的水稻细菌性条斑病可造成水稻严重减产。本文利用Xoc GX01作为实验菌株,通过细菌培养、蛋白提取、纯化获得总蛋白,利用高p H值C18反相色谱作为第一维分离方式,再将收集... 详细信息

水稻细菌性条斑病菌(*** ***,Xoc)是水稻的主要病原菌之一,其引发的水稻细菌性条斑病可造成水稻严重减产。本文利用Xoc GX01作为实验菌株,通过细菌培养、蛋白提取、纯化获得总蛋白,利用高p H值C18反相色谱作为第一维分离方式,再将收集的馏分通过LC-MS/MS技术得到了总蛋白质表达谱,共鉴定蛋白质1 621个,同时利用生物信息学技术对鉴定蛋白进行基因本体(gene ontology,GO)生物学分类,对生物功能、生物进程以及细胞组件进行了注释。为明确植物病原菌的作用机理和研究植物-病原微生物互作提供了方法学基础。

关键词：水稻细菌性条斑病菌 LC-MS/MS 蛋白质表达谱基因本体

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枯草芽胞杆菌Bs916突变体库的构建和抑制水稻细菌性条斑病菌相关基因的克隆

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中国农业科学 2013年第11期46卷 2232-2239页

作者：周华飞罗楚平王晓宇张荣胜陈志谊南京农业大学植物保护学院江苏省农业科学院植物保护研究所

【目的】采用转座子标签技术构建枯草芽胞杆菌Bs916突变体库,从突变体库中筛选对水稻细菌性条斑病菌抑菌效果发生显著变化的菌株并克隆插入位点的基因,获得生防菌Bs916中与抑制细菌活性可能相关的基因。【方法】携带转座子TnYLB-1的穿... 详细信息

【目的】采用转座子标签技术构建枯草芽胞杆菌Bs916突变体库,从突变体库中筛选对水稻细菌性条斑病菌抑菌效果发生显著变化的菌株并克隆插入位点的基因,获得生防菌Bs916中与抑制细菌活性可能相关的基因。【方法】携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA通过化学转化方法转化至枯草芽胞杆菌Bs916菌株,构建随机插入突变体库。通过平板抑菌试验从突变体库中筛选对水稻细菌性条斑病菌抑菌效果得到显著提高和下降的突变体;并采用PCR和Southern Blot验证转座子是否成功插入到Bs916染色体基因组上,利用反向PCR技术克隆转座子插入位点基因、测序并进行生物信息学分析。【结果】成功构建了枯草芽胞杆菌Bs916的转座子随机插入的突变体库;PCR和Southern Blot结果表明转座子成功的插入到染色体基因组上,约85%突变体以单拷贝形式插入;筛选出30株对水稻细菌性条斑病菌抑制效果发生显著变化的菌株,克隆到21个突变体插入位点的基因序列并测序。生物信息学分析结果表明这些基因与感受态形成、生物膜形成和次生产物代谢相关。【结论】成功构建了Bs916突变体库,克隆到该库中对水稻细菌性条斑病菌抑菌效果显著变化菌株的突变位点基因,这些基因推测可能与枯草芽胞杆菌Bs916中的抑制细菌化合物的合成代谢及调控相关。

关键词：枯草芽胞杆菌突变株水稻细菌性条斑病菌抑菌基因克隆

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炭样小单孢菌产抗生素对水稻细菌性条斑病菌的抗菌作用及其机理

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微生物学通报 2019年第5期46卷 1052-1061页

作者：黄运红任雨涵邹龙倪海燕龙中儿江西师范大学生命科学学院江西南昌330022

【背景】水稻细菌性条斑病菌为水稻细菌性条斑病的病原菌,土壤中分离到的一株具有广谱抗菌活性的炭样小单孢菌JXNU-1,其发酵产物(即抗生素JX)对植物病原菌具有较强的抑菌活性。【目的】研究抗生素JX对水稻细菌性条斑病菌的抗菌作用及其... 详细信息

【背景】水稻细菌性条斑病菌为水稻细菌性条斑病的病原菌,土壤中分离到的一株具有广谱抗菌活性的炭样小单孢菌JXNU-1,其发酵产物(即抗生素JX)对植物病原菌具有较强的抑菌活性。【目的】研究抗生素JX对水稻细菌性条斑病菌的抗菌作用及其机理。【方法】采用杯碟法测定抑菌圈大小,二倍稀释法测定最低抑菌浓度、最低杀菌浓度,并且从菌体形态观察、电导率变化、培养液大分子漏出、蛋白质合成、核酸合成和膜电位变化6个方面探究其作用机理。【结果】抗生素JX对水稻细菌性条斑病菌的抑菌圈直径达18.84±0.28mm,最低抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为1.39μg/m L和2.78μg/mL,且杀菌速度很快,作用12 h的杀菌率达100%。在抗生素JX作用下,水稻细菌性条斑病菌的细胞形态发生改变,培养液电导率、膜电位和大分子漏出量均随抗生素浓度增加而增大,但菌体蛋白质含量随着抗生素浓度增加而降低,同时,通过实时荧光定量PCR方法检测发现ef-p表达量下调。【结论】抗生素JX对水稻细菌性条斑病菌具有较强的抗菌作用,推测其抑菌机理是通过抑制菌体蛋白质的生物合成和影响细胞膜完整性而起作用。

关键词：炭样小单孢菌抗生素JX 水稻细菌性条斑病菌抑菌机理

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云南省水稻细菌性条斑病菌的致病型划分和水稻抗性资源的鉴定

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植物病理学报 2020年第2期50卷 218-227页

作者：杨俊王星王彦芳刘棋汪娅婷张晋豪魏兰芳姬广海云南农业大学植物保护学院昆明650201 云南农业大学农科基础实验教学中心昆明650201

为明确云南省水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae ***,Xoc)的致病力分化以及不同类型水稻品种对Xoc的抗感特性,通过针刺接种法将云南省8个稻区采集的86株Xoc菌株,接种于6个携带不同抗性基因的水稻鉴别品种(IRBB4、IRBB5、IRBB14、IR... 详细信息

为明确云南省水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae ***,Xoc)的致病力分化以及不同类型水稻品种对Xoc的抗感特性,通过针刺接种法将云南省8个稻区采集的86株Xoc菌株,接种于6个携带不同抗性基因的水稻鉴别品种(IRBB4、IRBB5、IRBB14、IRBB18、IRBB21和IR24)。根据这些菌株在鉴别品种上的毒力差异进行了UPGMA聚类分析,将其划分为9个致病型(Ⅰ型~Ⅸ型)。其中,Ⅰ型为优势菌群,分布频率为50.5%。对不同稻区的优势菌群进行分析,发现云南省各稻区Xoc的致病型呈多样性分布,以强毒力的Ⅰ型为高频率致病型。选用Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅵ型代表菌株对云南省的80个主栽和区试水稻品种进行抗性评价,对3个致病型表现抗性的材料比例分别为30.0%、35.0%和57.5%。筛选出9个对3种致病型都表现为抗性的品种,其中"Deyou16"和"Changgui2"表现为高抗。研究结果可为云南省防治水稻细菌性条斑病的水稻区域性布局和抗性品种的利用提供理论依据。

关键词：致病型抗性鉴定水稻细菌性条斑病菌

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中南4省水稻细菌性条斑病菌致病型的比较

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华中农业大学学报 2004年第5期23卷 504-506页

作者：刘友勋成国英涂立超孙新城胡明亮李耀洪华中农业大学植物科学技术学院武汉430070

以金刚 30、窄叶青、XM 5、XM 6、M4 1等 5个品种为鉴别品种 ,将来自 4省的 75个细条病菌菌株的毒力划分为 0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ等 7个致病型 ,0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型毒力差异主要呈由弱到强的数量变化 ,占测试株的 89.3% ,其中较... 详细信息

以金刚 30、窄叶青、XM 5、XM 6、M4 1等 5个品种为鉴别品种 ,将来自 4省的 75个细条病菌菌株的毒力划分为 0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ等 7个致病型 ,0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型毒力差异主要呈由弱到强的数量变化 ,占测试株的 89.3% ,其中较强毒力的Ⅲ、Ⅳ型菌占参试菌的 5 4 .7% ;Ⅴ和Ⅵ型间呈交叉反应式的强互作关系 ,占参试菌的 10 .7%。 4省菌株毒力的比较表明 ,福建省以Ⅲ、Ⅳ型菌为主 ;江西省以Ⅲ、Ⅵ型菌为主 ;湖北省以Ⅱ、Ⅲ型菌为主 ;湖南省没表现突出的优势群 ,但较强毒力的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型菌所占比例为 5 5 .6 %。

关键词：水稻细菌性条斑病菌毒力致病型

来源：评论

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