检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2013年第10期44卷 1637-1644页

作者：马辉边传周王永芬王鲜萍郑宝亮赵绪永郑州牧业工程高等专科学校生物工程系郑州450011 河南大学生命科学学院开封475001

为制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gC蛋白的特异性单克隆抗体,并分析其免疫学特性,以原核表达并纯化的重组gC蛋白为免疫原注射免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合。建立间接ELISA方法筛选分泌gC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得... 详细信息

为制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gC蛋白的特异性单克隆抗体,并分析其免疫学特性,以原核表达并纯化的重组gC蛋白为免疫原注射免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合。建立间接ELISA方法筛选分泌gC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌gC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3D6。3D6的亚类为IgG1型,轻链为κ链;上清、腹水抗体效价分别为6.4×103、1.28×105;Western blot和间接免疫荧光试验表明该单克隆抗体能识别牛gC蛋白。利用3D6细胞株分泌的单克隆抗体建立了检测IBRV的双抗体夹心ELISA方法,结果证明,该方法特异性和敏感性良好,为快速诊断IBRV和研究gC蛋白功能奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gC蛋白单克隆抗体 ELISA

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牛传染性鼻气管炎病毒套式PCR检测方法的建立

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中国兽医学报 2008年第6期28卷 649-651页

作者：邓碧华王凯民唐泰山张常印雷治海南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏出入境检验检疫局动物检疫实验室江苏南京210001

利用套式PCR技术建立一种快速检测牛传染病鼻气管炎病毒(bovine infectious rhinotracheitis virus,IBRV)并能区分野毒株和gB基因缺失疫苗的方法。根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒的gB和gE基因序列,应用pri mer5.0软件设计了gB/BN和gE... 详细信息

利用套式PCR技术建立一种快速检测牛传染病鼻气管炎病毒(bovine infectious rhinotracheitis virus,IBRV)并能区分野毒株和gB基因缺失疫苗的方法。根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒的gB和gE基因序列,应用pri mer5.0软件设计了gB/BN和gE/EN的2套套式PCR引物,分别对IBRV标准株进行PCR扩增,结果表明,这2套引物均能扩增出与设计目的片段大小一致的特异性条带;用此引物对同属的伪狂犬病毒、马立克氏病毒、鸭瘟病毒进行扩增,具有良好的特异性。引物gB/BN和gE/EN的检测灵敏度分别为0.01TCID50和0.1TCID50。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒套式PCR 特异性灵敏性

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牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与抗原反应性分析

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中国兽医学报 2010年第10期30卷 1313-1317页

作者：石建平孟日增马海利牛得料肖成蕊刘晶丁壮吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 吉林出入境检验检疫局吉林长春130062 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因组序列设计合成gB基因的特异性引物,采用PCR方法扩增IBRgB基因,并将其克隆到pMD18-T载体。用DNA Star分析IBR gB基因编码的吸附蛋白抗原性、亲水性和表面展示概率,将gB基因截短成4个片段,用Oligo ... 详细信息

根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因组序列设计合成gB基因的特异性引物,采用PCR方法扩增IBRgB基因,并将其克隆到pMD18-T载体。用DNA Star分析IBR gB基因编码的吸附蛋白抗原性、亲水性和表面展示概率,将gB基因截短成4个片段,用Oligo 6设计4对引物,并以pMD18-T-gB为模板,用PCR方法分别扩增出gB1、gB2、gB3和gB44个基因片段,其大小分别为402、312、306和318 bp,分别定向插入到pGEX-6p-1表达载体中,转入表达菌BL21中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳表明,表达产物以包涵体形式存在,融合蛋白大小约为40 300、39 000、38 700和37 800,与预测值相符。利用GSTrap HP层析柱纯化重组蛋白,经Western-blot和ELISA鉴定4种融合蛋白中gB3和gB4有较好的抗原反应性和特异性。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gB基因截短表达抗原性分析

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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白表位鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 871-874,898页

作者：周跃辉朱远茂任建乐严昊王雪枝马磊史鸿飞薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出... 详细信息

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗g D蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1G3)。间接免疫荧光结果表明:MAb与IBRV呈阳性反应,中和试验测定其腹水中和效价为1∶32。利用肽扫描技术原核表达GST融合短肽对MAb 1G3识别的抗原表位进行筛选鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为259EESKGYE265。蛋白序列分析表明该抗原表位在IBRV各分离株及牛疱疹病毒5型(Bo HV-5)中均保守。本研究为IBRV的糖蛋白g D的结构和免疫学特性及IBRV致病性的深入研究奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白单克隆抗体表位鉴定

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牛传染性鼻气管炎病毒VP8蛋白表位鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 225-228页

作者：杨婷周跃辉朱远茂宋文凤马磊薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为I... 详细信息

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为IgG1/κ。间接免疫荧光试验表明,2株MAb与IBRV呈特异性反应。利用肽扫描技术对MAb进行抗原表位鉴定,结果表明MAb3C2的抗原表位为^(138)PHRSLLERTA^(147),MAb1F5的抗原表位为^(183)GGGQEPG^(189),2株MAb针对的抗原表位在不同的IBRV分离株中高度保守。本研究为VP8蛋白的结构与功能的进一步分析及IBRV的检测奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 VP8蛋白单克隆抗体抗原表位

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牛传染性鼻气管炎病毒和牛副流感病毒3型的双重荧光PCR方法的建立及应用

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中国兽医科学 2024年第4期54卷 485-491页

作者：龚宏毅汤承岳华西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室四川成都610041

为建立同时检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛副流感病毒3型(BPIV3)的方法,通过对引物和探针筛选、反应体系和条件优化,成功建立了检测IBRV和BPIV3的双重荧光定量PCR方法。该方法只能特异性地检出IBRV和BPIV3,而对其他无关病原均不能... 详细信息

为建立同时检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛副流感病毒3型(BPIV3)的方法,通过对引物和探针筛选、反应体系和条件优化,成功建立了检测IBRV和BPIV3的双重荧光定量PCR方法。该方法只能特异性地检出IBRV和BPIV3,而对其他无关病原均不能检出;批内和批间变异系数均小于3%;对IBRV和BPIV3质粒标准品的检测下限分别为15.2 copies/μL和18.3 copies/μL。用建立的方法对采自四川、重庆、河北、安徽和吉林这5个地区的143份肉牛呼吸道疾病综合征(BRDC)样本以及四川省和青海省的59份牦牛BRDC样本进行检测,结果显示,肉牛样本中IBRV和BPIV3的阳性率分别为42.66%和39.86%,混感率为22.38%;牦牛样本中IBRV和BPIV3的阳性率分别为44.07%和30.51%,混感率为18.64%。上述结果表明,本研究建立的双重荧光定量PCR方法具有特异性和稳定性好、灵敏度高的特点,适用于临床上对IBRV和BPIV3的快速检测,临床样本的检测结果丰富了国内IBRV和BPIV3的流行病学资料。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒牛副流感病毒3型双重荧光定量PCR 混合感染

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牛传染性鼻气管炎病毒gC结构蛋白的真核表达及其反应原性分析

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中国生物制品学杂志 2018年第12期31卷 1333-1335,1339页

作者：张帆刘行波倪宏波黑龙江八一农垦大学动物科技学院

目的真核表达牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gC结构蛋白,并对其反应原性进行鉴定。方法以GenBank中登录的IBRV基因序列合成gC基因全长,构建重组真核表达质粒p CDNA4-gCHis,并进行双酶切鉴定。将... 详细信息

目的真核表达牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gC结构蛋白,并对其反应原性进行鉴定。方法以GenBank中登录的IBRV基因序列合成gC基因全长,构建重组真核表达质粒p CDNA4-gCHis,并进行双酶切鉴定。将鉴定正确的质粒转染MDBK细胞,收集上清,镍柱纯化带有His标签的重组gC蛋白,经Dot blot和间接免疫荧光法鉴定其反应原性。结果质粒p CDNA4-gC-His经双酶切鉴定证明构建正确,表达的重组gC蛋白相对分子质量约54 000,纯化后的浓度为0. 03 mg/mL,可与IBRV免疫的兔多抗发生反应。结论成功构建了真核表达质粒pCDNA4-gC-His,并能在MDBK细胞系中正确表达,表达的蛋白与天然IBRV gC蛋白具有相同的反应原性,为后续免疫学诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gc蛋白真核表达反应原性

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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的截短表达与活性检测

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中国预防兽医学报 2007年第11期29卷 865-869页

作者：王延辉薛飞朱远茂彭伍平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

经生物学软件DNAStar分析,以牛传染性鼻气管炎病毒(Banha Nu/67)基因组DNA为模板,PCR扩增gD基因943bp的片段,将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导得到部分可溶表达的重组蛋白。用N... 详细信息

经生物学软件DNAStar分析,以牛传染性鼻气管炎病毒(Banha Nu/67)基因组DNA为模板,PCR扩增gD基因943bp的片段,将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导得到部分可溶表达的重组蛋白。用Ni柱亲和层析法在非变性的条件下纯化重组蛋白,纯化的重组蛋白浓度为0.852mg/mL,纯度为85.2%。Westem blot、间接ELISA检测证明纯化的重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gD糖蛋白原核表达活性检测

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牛传染性鼻气管炎病毒gE基因的截短克隆与表达

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中国预防兽医学报 2006年第3期28卷 289-293页

作者：王海燕朱远茂薛飞童光志赵立平相文华韩文瑜中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 吉林大学农学部吉林长春130062

以牛传染性鼻气管炎病毒BarthaNu/67株的DNA作为模板,用PCR扩增gE基因并克隆至pGEM-TEasy载体,再以此质粒作为模板将gE基因分成6个片段,分别插入原核表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行了表达。蛋白电泳结果表明6个片段中有2个片段以可... 详细信息

以牛传染性鼻气管炎病毒BarthaNu/67株的DNA作为模板,用PCR扩增gE基因并克隆至pGEM-TEasy载体,再以此质粒作为模板将gE基因分成6个片段,分别插入原核表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行了表达。蛋白电泳结果表明6个片段中有2个片段以可溶形式表达,1个片段以包涵体形式表达,另外3个片段没有表达。采用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下对两个可溶性片段进行了纯化。经免疫印迹试验,间接ELISA和交叉试验证明,两个纯化的重组蛋白均与牛传染性鼻气管炎阳性血清样品发生反应,而与牛传染性鼻气管炎阴性血清无任何反应,显示其具有良好的抗原性和特异性,可用于牛传染性鼻气管炎gE-ELISA诊断方法的建立。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gE基因克隆表达

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牛传染性鼻气管炎病毒LUX^(TM)新型荧光PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2007年第4期29卷 303-307页

作者：陈茹毕英佐曹永长林志雄赵吟罗琼朱道中广东出入境检验检疫局广东广州510623 华南农业大学动物科学院广东广州510642

本研究针对牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)高度保守的gC基因设计单标记并具有自身荧光淬灭功能的LUX^(TM)引物,建立LUX^(TM)新型实时荧光PCR方法用于快速检测IBRV。该方法对四株IBRV细胞培养物的... 详细信息

本研究针对牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)高度保守的gC基因设计单标记并具有自身荧光淬灭功能的LUX^(TM)引物,建立LUX^(TM)新型实时荧光PCR方法用于快速检测IBRV。该方法对四株IBRV细胞培养物的检测均呈典型阳性反应,而对其它动物疱疹病毒以及健康牛组织DNA和细胞对照的检测结果为阴性,检测时间包括核酸提取仅需1h～2h。试验表明,LUX^(TM)荧光PCR法对IBRV细胞增殖病毒液的检测敏感性可达0.04 TCID_(50),比病毒分离敏感性至少提高10倍;对10倍系列稀释的纯化IBRV核酸样品,LUX^(TM)荧光PCR的检测敏感性比常规PCR可提高10~3倍。将病毒液添加到健康牛精液和血液样品中,该荧光PCR可检测到牛冻存精液中40 TCID_(50)、牛抗凝全血、血清和临床精液中0.04 TCID_(50)的病毒,说明对临床样品的检测有效。本研究所建立的LUX^(TM)荧光PCR方法快速敏感,适合应用于活牛及其遗传物质的进出口检疫、养牛业疾病防控等领域对IBRV的快速检测。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 LUX^TM引物实时荧光PCR 牛疱疹病毒1型

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