检索结果-内蒙古大学图书馆

双价、三价种子特异性表达载体的构建及表达PHB合成相关基因的转基因油菜的获得

科学通报 2000年第5期45卷 516-521页

作者：叶梁李枞宋艳茹中国科学院植物研究所北京100093

分离了种子特异性启动子和质体导肽序列，利用已经克隆的合成聚羟基丁酸酯的３个关键酶基因，分别构建了含有种子特异性启动子的嵌合ｐｈｂＣ（编码ＰＨＢ合酶）、ｐｈｂＢ（编码依赖ＮＡＤＰＨ的乙酰－ＣｏＡ还原酶）的二价及嵌合Ｐｈ... 详细信息

分离了种子特异性启动子和质体导肽序列，利用已经克隆的合成聚羟基丁酸酯的３个关键酶基因，分别构建了含有种子特异性启动子的嵌合ｐｈｂＣ（编码ＰＨＢ合酶）、ｐｈｂＢ（编码依赖ＮＡＤＰＨ的乙酰－ＣｏＡ还原酶）的二价及嵌合ＰｈｂＣ、ｐｈｂＡ（编码３－酮硫裂解酶）、ｐｈｂＢ的三价表达载体，并由导肽将基因表达产物定位于质体．经根瘤农杆菌介导获得转基因油菜，并进行了ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴ－ＰＣＲ－ＤＮＡ杂交等分子检测．

关键词：种子特异性表达载体转基因油菜 PHB 构建 PCR

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拟南芥种子特异性表达载体的构建及其在种子休眠研究中的应用

拟南芥种子特异性表达载体的构建及其在种子休眠研究中的应用

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作者：陈凤莹中国科学院研究生院

学位级别：硕士

调控种子休眠的基因往往都具有多种功能，当研究这些基因与休眠的关系时，由35S启动子驱动的基因组成型表达会产生成熟度不同的种子，进而导致无法精确研究基因在种子休眠调控中的作用。为了避免基因多重功能的干扰，构建种子特异性表... 详细信息

调控种子休眠的基因往往都具有多种功能，当研究这些基因与休眠的关系时，由35S启动子驱动的基因组成型表达会产生成熟度不同的种子，进而导致无法精确研究基因在种子休眠调控中的作用。为了避免基因多重功能的干扰，构建种子特异性表达的载体是一个有效的途径。At4g28520编码12S种子储藏蛋白，特异地在种子中高量表达，利用该基因的启动子（命名为12S启动子）构建种子特异性表达载体，改造的载体分别命名为12S-pLeela和12S-pJawoh18-RNAi。通过分析12S::GUS转基因株系的GUS染色结果和GUS表达量，证明12S种子特异性表达载体是在种子发育后期、胚胎特异性表达的载体。\n 为验证所构建的12S种子特异性表达载体的有效性，将5个候选基因(H2B-2、FT即FLOWERINGLOCUST、At3g63040即FES、Atlg05510和MAF即MADSAFFECTINGFLOWERING4)分别构建到12S种子特异性表达载体上，转化拟南芥Arabidopsisthaliana，并获得T2代单拷贝纯和株系。通过分析转基因种子的休眠表型，发现12S::FT转基因种子的休眠程度较野生型更深，推测FT具有促进种子休眠的功能。休眠程度最深的12S::FT转基因株系6-3的种子在储藏7周时仍不能萌发。然而经过4℃层积处理后，其萌发率达到95％以上，表明6-3的低萌发率不是由于种子失活引起的。进一步分析结果显示，与野生型种子相比，12S::FT转基因种子的萌发对赤霉素合成抑制剂(PAC)更敏感，且敏感程度与各株系的休眠程度相吻合，表明FT对种子休眠的调控可能与GA途径有关。与野生型相比，12S::FT转基因种子的萌发对ABA的敏感性无显著差异，表明FT对种子休眠的调控可能与ABA途径无关。\n 通过分析12S::FES转基因种子和12S-RNAi-FES转基因种子的休眠表型，发现FES具有抑制休眠的功能。通过对FES蛋白生物信息学分析发现该蛋白没有任何保守结构域，仅与拟南芥的另一个亚种Arabidopsislyrata中的一个未知功能的蛋白有82％的序列相似性，而在其他物种中同源蛋白的相似性均低于30％。此外，分析发现该蛋白具有一个跨膜域，并且其N端前70个氨基酸可能为信号肽。将该可能的信号肽的编码序列构建于CFP的N端，瞬时转化小烟草，观察发现该蛋白可能定位于细胞膜上。

关键词：特异性表达载体种子休眠拟南芥候选基因

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一种汉逊酵母特异性表达载体的构建及在提高乙肝病毒表面抗原在汉逊酵母表达量的方法

一种汉逊酵母特异性表达载体的构建及在提高乙肝病毒表面抗原在汉...

引用

作者：黄恩启吴常伟李超王力卫刘术敏程英杰陶立峰杨世龙 230088 安徽省合肥市高新区浮山路100号

本发明公开一种汉逊酵母特异性表达载体的构建及在提高乙肝病毒表面抗原在汉逊酵母表达量的方法，属于生物工程技术领域，构建：步骤1，从真核汉逊酵母菌株ATCC34438或其衍生菌种基因组DNA，设计特异性引物，PCR扩增，分别调取MOX基因... 详细信息

标准号: CN105755035A

本发明公开一种汉逊酵母特异性表达载体的构建及在提高乙肝病毒表面抗原在汉逊酵母表达量的方法，属于生物工程技术领域，构建：步骤1，从真核汉逊酵母菌株ATCC34438或其衍生菌种基因组DNA，设计特异性引物，PCR扩增，分别调取MOX基因启动子MOXp和终止子MOX?TT；步骤2，将毕赤酵母表达载体pPICZC上的启动子AOX1和终止子AOX?TT，分别替换成MOX基因启动子MOXp和终止子MOX?TT，即得汉逊酵母表达载体pHPZF1.0。采用本发明所述方法，可以获得的乙型肝炎表面抗原汉逊酵母酵母工程菌株能够以甲醇诱导型方式稳定和高效地表达HBsAg重组蛋白，适用于规模化生产HBsAg重组蛋白。

关键词：汉逊酵母终止子基因启动子表达载体重组蛋白构建生物工程技术领域乙肝病毒表面抗原乙型肝炎表面抗原特异性表达载体酵母工程菌株规模化生产汉逊酵母菌特异性引物基因组DNA 毕赤酵母甲醇诱导表达量启动子调取真核菌种替换

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一种汉逊酵母特异性表达载体的构建及在提高乙肝病毒表面抗原在汉逊酵母表达量的方法

一种汉逊酵母特异性表达载体的构建及在提高乙肝病毒表面抗原在汉...

引用

作者：黄恩启吴常伟李超王力卫刘术敏程英杰陶立峰杨世龙 230088 安徽省合肥市高新区浮山路100号

标准号: CN105755035B

本发明公开一种汉逊酵母特异性表达载体的构建及在提高乙肝病毒表面抗原在汉逊酵母表达量的方法，属于生物工程技术领域，构建：步骤1，从真核汉逊酵母菌株ATCC34438或其衍生菌种基因组DNA，设计特异性引物，PCR扩增，分别调取MOX基因启动子MOXp和终止子MOX‑TT；步骤2，将毕赤酵母表达载体pPICZC上的启动子AOX1和终止子AOX‑TT，分别替换成MOX基因启动子MOXp和终止子MOX‑TT，即得汉逊酵母表达载体pHPZF1.0。采用本发明所述方法，可以获得的乙型肝炎表面抗原汉逊酵母酵母工程菌株能够以甲醇诱导型方式稳定和高效地表达HBsAg重组蛋白，适用于规模化生产HBsAg重组蛋白。

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Lat52介导的特异性表达载体的构建及其鉴定

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首都师范大学学报（自然科学版） 2001年第4期22卷 62-67页

作者：许冠东蔡民华首都师范大学生物系北京100037

利用含花粉特异性启动子Lat5 2的质粒pLat5 2 7、含细胞毒素A链基因的质粒pGA96 8以及表达质粒载体pGA987,进行酶切连接 ,构建了含有Lat5 2特异性启动子和细胞毒素A链基因的表达载体 .经酶切和PCR进行鉴定 ,证明所构建的重组载体即为... 详细信息

利用含花粉特异性启动子Lat5 2的质粒pLat5 2 7、含细胞毒素A链基因的质粒pGA96 8以及表达质粒载体pGA987,进行酶切连接 ,构建了含有Lat5 2特异性启动子和细胞毒素A链基因的表达载体 .经酶切和PCR进行鉴定 ,证明所构建的重组载体即为实验所需的载体质粒。

关键词： Lat52 特异性表达载体酶切 PCR 花粉生殖发育生殖细胞营养细胞

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花药特异性表达载体及其构建方法

花药特异性表达载体及其构建方法

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作者：孙虎林褚艳霞郑帮郑亚杰张卫 200444 上海市宝山区上大路99号

本发明涉及一种花药特异性表达载体及其构建方法。该表达载体为SEQIDNO1所示的碱基序列。本载体可以在拟南芥花药中特异表达，且表达部位为花药绒毡层。利用该载体表达特点可以为花药绒毡层发育、基因表达模式、基因花药特异性表达及沉... 详细信息

标准号: CN103146747A

本发明涉及一种花药特异性表达载体及其构建方法。该表达载体为SEQIDNO1所示的碱基序列。本载体可以在拟南芥花药中特异表达，且表达部位为花药绒毡层。利用该载体表达特点可以为花药绒毡层发育、基因表达模式、基因花药特异性表达及沉默等生物学研究提供便利。

关键词：花药绒毡层花药特异性表达特异性表达载体花药基因表达模式生物学研究表达载体碱基序列特异表达载体表达拟南芥发育基因

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牛Nramp1巨噬细胞特异性表达载体及其构建方法和应用

牛Nramp1巨噬细胞特异性表达载体及其构建方法和应用

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作者：王爱华李倩靳亚平张涌徐晓彬胡林勇 712100 陕西省杨凌西北农林科技大学动物医学院

本发明涉及了一种牛Nramp1巨噬细胞特异性表达载体及其构建方法和应用。该方法以质粒pIRES2-EGFP为骨架载体，在多克隆位点Sal I与BamH I之间插入牛Nramp1开放阅读框序列，并用Nramp1基因表达调控序列替换掉骨架载体上巨细胞病毒(CMV)... 详细信息

标准号: CN102226200A

本发明涉及了一种牛Nramp1巨噬细胞特异性表达载体及其构建方法和应用。该方法以质粒pIRES2-EGFP为骨架载体，在多克隆位点Sal I与BamH I之间插入牛Nramp1开放阅读框序列，并用Nramp1基因表达调控序列替换掉骨架载体上巨细胞病毒(CMV)启动子序列，从而实现Nramp1基因在吞噬细胞内的特异性表达。本载体可以作为一种转基因载体应用在转基因抗病动物培育中。本发明还指出秦川牛Nramp1开放阅读框序列与GenBank中相应序列(GenBank序列号U12862.1)相似率为99.88％，存在两个碱基差异。

关键词：骨架载体开放阅读基因表达调控序列特异性表达载体巨细胞病毒特异性表达转基因载体碱基差异巨噬细胞吞噬细胞种牛启动子秦川牛相似率序列号转基因质粒克隆基因培育

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一种山羊乳腺组织特异性表达载体pMRPA

一种山羊乳腺组织特异性表达载体pMRPA

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作者：扈荣良徐青张守峰 130062 吉林省长春市西安大路175号

本发明涉及一种高效快速的真核蛋白表达和生产系统，由两部分组成即山羊乳腺组织特异性表达载体和处于稳定泌乳期的山羊乳腺。其中山羊乳腺组织特异性表达载体质粒pMRPA以特定长度的山羊β-酪蛋白启动子序列为主要元件构成；克隆在该载... 详细信息

标准号: CN100360675C

本发明涉及一种高效快速的真核蛋白表达和生产系统，由两部分组成即山羊乳腺组织特异性表达载体和处于稳定泌乳期的山羊乳腺。其中山羊乳腺组织特异性表达载体质粒pMRPA以特定长度的山羊β-酪蛋白启动子序列为主要元件构成；克隆在该载体中的目的基因，以生理盐水溶液形式，并以直接注射的方式导入处于稳定泌乳期的山羊乳腺后，目的基因产物即可在羊奶中表达，且具有表达快速、水平高、持续时间长的特点。

关键词：特异性表达载体山羊乳腺组织稳定泌乳期山羊乳腺目的基因产物生理盐水溶液核蛋白表达目的基因特定长度元件构成酪蛋白启动子羊奶导入质粒山羊注射克隆

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绒山羊VEGF164基因cDNA核苷酸序列及其毛囊特异性表达载体

绒山羊VEGF164基因cDNA核苷酸序列及其毛囊特异性表达载体

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作者：王志钢侯鑫刘俊娥郭旭东鲍文蕾李彬刘东军 010021 内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区大学西路235号

本发明涉及从体外培养的绒山羊胎儿成纤维细胞分离的编码VEGF164蛋白的cDNA的核苷酸序列和与它对应的氨基酸序列及毛囊特异性表达VEGF164蛋白和稳定表达红色荧光蛋白的真核表达载体pCDsRed-KV。其特征在于：绒山羊VEGF164基因cDNA片段... 详细信息

标准号: CN101988066A

本发明涉及从体外培养的绒山羊胎儿成纤维细胞分离的编码VEGF164蛋白的cDNA的核苷酸序列和与它对应的氨基酸序列及毛囊特异性表达VEGF164蛋白和稳定表达红色荧光蛋白的真核表达载体pCDsRed-KV。其特征在于：绒山羊VEGF164基因cDNA片段的核苷酸序列与它对应的氨基酸序列如SEQID NO：1所述和SEQ ID NO：2所述；构建的绒山羊VEGF164基因毛囊特异性表达载体pCDsRed-KV如图9所示。生物信息学分析表明，绒山羊VEGF164蛋白具有VEGF蛋白保守的信号肽序列、功能结构域和活性位点，在细胞内表达后具有VEGF血管内皮生长因子的功能，可以促进细胞生长和毛囊发育，在转基因动物中超表达可以促进绒毛生长。

关键词：绒山羊蛋白氨基酸序列核苷酸序列毛囊血管内皮生长因子生物信息学分析胎儿成纤维细胞特异性表达载体红色荧光蛋白功能结构域特异性表达信号肽序列转基因动物表达载体活性位点毛囊发育绒毛生长体外培养稳定表达细胞生长基因细胞

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一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体/牛成纤维细胞及其方法

一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体/牛成纤维细胞及其方法

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作者：王华岩程祥邓捷马晓玲孟书燕来威锋 712100 陕西省杨凌示范区邰城路3号

一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体/牛成纤维细胞及其方法，构建了一种包含NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体pSP-NRAMP1-HA，以及一种基于该载体的包含NRAMP1基因的秦川牛成纤维细胞系，利用该细胞系作为核供体细胞的方法，为解决秦... 详细信息

标准号: CN102559749A

一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体/牛成纤维细胞及其方法，构建了一种包含NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体pSP-NRAMP1-HA，以及一种基于该载体的包含NRAMP1基因的秦川牛成纤维细胞系，利用该细胞系作为核供体细胞的方法，为解决秦川牛布氏杆菌病的转基因牛提供坚实的基础。本发明通过脂质体转染法将外源性表达载体pSP-NRAMP1-HA导入牛成纤维细胞，经G418筛选获得阳性细胞，经PCR鉴定，证实目的基因NRAMP1整合到牛成纤维细胞的基因组中；最后将整合有NRAMP1基因的牛成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚。

关键词：牛成纤维细胞整合特异性表达载体巨噬细胞秦川牛去核卵母细胞布氏杆菌病纤维细胞系脂质体转染转基因克隆表达载体目的基因阳性细胞转基因牛基因基因组体细胞导入供体筛选证实

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