检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2025年第4期56卷 1854-1864页

作者：曹丽艳孔祥雨袁聪段月月马国祥施磊张宇万颖李想通王娅婷杜煜郑海学王琦中国农业科学院都市农业研究所成都610213 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730030

猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus, SADS-CoV)是一种蝙蝠来源的新型猪肠道冠状病毒,可引起新生仔猪腹泻、呕吐、脱水而死亡。SADS-CoV核衣壳蛋白(N)是病毒复制中最保守的结构蛋白,具有良好的抗原性... 详细信息

猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus, SADS-CoV)是一种蝙蝠来源的新型猪肠道冠状病毒,可引起新生仔猪腹泻、呕吐、脱水而死亡。SADS-CoV核衣壳蛋白(N)是病毒复制中最保守的结构蛋白,具有良好的抗原性。前期研究获得的5株抗SADS-CoV N蛋白的单克隆抗体(1C10、4B10、6G1、6F3和6E8),其中6E8与SADS-CoV的反应性最强。在本研究中,利用pET32a作为表达载体构建N蛋白的截短及缺失突变体质粒,经诱导表达后,用6E8进行抗原抗体反应。Western blot结果表明,6E8识别的抗原表位为69-QKGQRK-74。同源性分析结果显示,该表位在不同SADS-CoV毒株和蝙蝠冠状病毒HKU2中完全一致;在猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猫感染性腹膜炎病毒(FIPV)中发现相似的表位(VKGQRK),仅有一个氨基酸的差异;而在其他冠状病毒中同源性较低。特异性试验中,6E8不能与猪流行性腹泻冠状病毒(PEDV)和TGEV发生发应,尽管6E8识别表位与TGEV仅有一个氨基酸的差异,这说明69-Q是6E8识别表位的关键氨基酸。进一步试验发现,当6E8与SADS-CoV孵育后再感染Huh7细胞,能增强SADS-CoV的感染,出现抗体依赖性增强(antibody-dependent enhancement, ADE)现象。总之,SADS-CoV N蛋白新型B细胞表位的鉴定,将为设计SADS-CoV新型疫苗和开发表位相关的诊断试剂提供新的见解。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒 N蛋白 6E8单克隆抗体表位鉴定

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猪急性腹泻综合征冠状病毒病的研究进展

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养殖与饲料 2025年第2期24卷 56-62页

作者：刘巧玲黄二素周怡张森叶丽何小莉陈慧艳简文辉贵州省玉屏侗族自治县动物疫病预防控制中心贵州玉屏554000 贵州省六盘水市水城区动物疫病预防控制中心贵州水城553600 贵州省开阳县生态移民服务中心贵州开阳550300 天津市动物疫病预防控制中心天津300402 贵州省毕节市畜牧站贵州毕节551700 贵州省普安县农业农村局贵州普安561500 贵州省玉屏侗族自治县动物卫生监督所贵州玉屏554000 贵州省玉屏侗族自治县兽药饲料监察站贵州玉屏554000

猪急性腹泻综合征冠状病毒病是2017年新发现的一种由猪肠道α冠状病毒(第5种猪冠状病毒)感染致哺乳仔猪急性腹泻和死亡的传染病,死亡率高达90%。猪肠道α冠状病毒(porcine enteric alphacoronavirus,PEAV)也称猪急性腹泻综合征冠状病毒(... 详细信息

猪急性腹泻综合征冠状病毒病是2017年新发现的一种由猪肠道α冠状病毒(第5种猪冠状病毒)感染致哺乳仔猪急性腹泻和死亡的传染病,死亡率高达90%。猪肠道α冠状病毒(porcine enteric alphacoronavirus,PEAV)也称猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus, SADS-CoV)或猪肠道甲型冠状病毒(Swine enteric alphacoronavirus, SeA-CoV),该病毒细胞嗜性较强,可侵袭多种啮齿动物源和原代人肠细胞和肺细胞,存在人兽共患病传播风险。目前尚无针对该病毒的商业化疫苗和抗病毒药物。本文通过对猪急性腹泻综合征冠状病毒病的病原学、流行病学、临床症状、病理变化、检测方法及防治策略等方面进行综述,以期为后续相关研究提供参考。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒病猪急性腹泻综合征冠状病毒病原学流行病学临床症状病理变化检测方法防治策略

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猪急性腹泻综合征冠状病毒链特异性SYBR Green实时荧光定量PCR方法的建立及应用

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病毒学报 2025年第2期 533-540页

作者：黄拓欣李程李汶洁吴珺陈凝雪孙媛华南农业大学动物科学学院畜禽健康养殖与疾病防控研究室

为对猪急性腹泻综合征冠状病毒（Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV）复制过程中基因组正负链RNA进行定量检测，以实现更好地了解SADS-CoV的复制和转录机制。本研究根据SADS-CoV N基因序列，通过生物学软件SnapGene和... 详细信息

为对猪急性腹泻综合征冠状病毒（Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV）复制过程中基因组正负链RNA进行定量检测，以实现更好地了解SADS-CoV的复制和转录机制。本研究根据SADS-CoV N基因序列，通过生物学软件SnapGene和Primer Premier 6.0设计含有非病毒核苷酸标签序列的链特异性引物，建立了针对SADS-CoV N基因不同链RNA的链特异性实时荧光定量PCR(Strand-specific real-time fluorescence quantitative PCR,ssRT-qPCR)检测方法，并对其敏感性、重复性、特异性进行评估，同时对不同剂量SADS-CoV感染细胞后病毒复制过程中N基因的正负链RNA的拷贝数进行了定量检测。结果表明，以重组质粒标准品构建的标准曲线在10～2拷贝/μL～10～8拷贝/μL范围内具有良好的线性关系，对正负链的检测下限为10拷贝/μL，能够特异性的区分病毒复制过程中产生的正负链，具有较高的特异性、灵敏性和重复性。SADS-CoV感染IPI-2I细胞后，其病毒正负链含量水平呈现持续增加。以MOI=1感染细胞48h后，其病毒正负链拷贝数可分别达到1.8×10～8拷贝/μL和5.6×10～4拷贝/μL。本研究成功建立了SADS-CoV N基因链特异性SYBR Green实时荧光定量检测法，可区分和定量SADS-CoV在复制过程中产生的不同链RNA，为后续病毒的复制转录调控机理和相关抗病毒机制的研究提供了有效检测手段。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒链特异性检测实时荧光定量PCR

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猪急性腹泻综合征冠状病毒M蛋白的结构预测及抗原表位分析

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现代畜牧兽医 2025年第04期 19-23页

作者：林广宇辽宁省农业农村发展服务中心

研究旨在系统揭示猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS-CoV）M蛋白的分子特征，为相关疫苗设计及抗病毒药物研发提供参考。试验基于生物信息学方法，系统解析SADS-CoV M蛋白的结构与免疫功能特性。结果显示：SADS-CoV M蛋白由228个氨基酸组... 详细信息

研究旨在系统揭示猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS-CoV）M蛋白的分子特征，为相关疫苗设计及抗病毒药物研发提供参考。试验基于生物信息学方法，系统解析SADS-CoV M蛋白的结构与免疫功能特性。结果显示：SADS-CoV M蛋白由228个氨基酸组成，含3个跨膜结构域，无信号肽，具有疏水稳定性。SADS-CoV M蛋白二级结构以α-螺旋（32.89%）和无规则卷曲（38.60%）为主；三级结构预测与SARS-CoV-2 M蛋白相似性为34.31%。根据三级结构进行B细胞表位预测分析，筛选出4个高概率B细胞表位（第13～23位、第65～73位、第80～88位、第188～195位），提示潜在免疫干预靶点。研究表明，SARS-CoV-2 M蛋白分子稳定，免疫原性强，为新型疫苗研发提供了分子基础。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒 M蛋白生物信息学抗原表位

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猪急性腹泻综合征冠状病毒微滴数字PCR技术的建立和应用

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病毒学报 2023年第5期39卷 1385-1394页

作者：陈可欣曾若雪裘慧金晨晨陈小金董志珍宋厚辉张晓峰帅江冰浙江农林大学动物科技学院·动物医学院杭州311300 浙江省检验检疫科学技术研究院杭州310016 天津海关动植物与食品检测技术天津300461

猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)是近年来在我国新发现的一种会引起猪严重腹泻的冠状病毒,本文旨在建立一种特异性强、重复性好、灵敏度高的SADS-CoV微滴式数字聚合酶链式反应(Digital d... 详细信息

猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)是近年来在我国新发现的一种会引起猪严重腹泻的冠状病毒,本文旨在建立一种特异性强、重复性好、灵敏度高的SADS-CoV微滴式数字聚合酶链式反应(Digital droplet PCR,ddPCR)检测方法。采用SADS-CoV的N基因作为本研究的靶基因,根据其基因序列设计特异性引物及探针。通过优化反应体系中的反应条件,分析方法特异性、敏感性和稳定性,并对临床样本和猪源产制品进行检测验证,建立了猪急性腹泻综合征冠状病毒微滴数字PCR体系。本方法确定最佳引物浓度为500 nmol/L,最佳探针浓度为250 nmol/L,且在58℃反应条件下,ddPCR检测结果最优。本方法与其他常见猪源性病毒无交叉反应,特异性强;本方法重复性好,批间与批内变异系数均小于10%。本ddPCR方法在动态范围内最低检测限为3.85拷贝/反应,比荧光定量PCR(qPCR)高10倍以上。采用qPCR和ddPCR分别对90份样品进行检测,ddPCR方法阳性检出率为13.33%(12/90)优于qPCR阳性检出率11.11%(10/90)。本文首次建立了单重SADS-CoV ddPCR检测方法,其有更优的可靠性以及抗干扰性,为定量检测动物组织、饲料、血清和粪便等样品中SADS-CoV提供了新的、稳定的技术手段。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒微滴数字PCR 定量检测方法

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猪急性腹泻综合征冠状病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其抗体序列的分析

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畜牧兽医学报 2023年第6期54卷 2487-2497页

作者：曹丽艳孔祥雨李想通索学鹏段月月袁聪施磊张宇马国祥郑海学王琦中国农业科学院都市农业研究所成都610213 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730046

猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)目前尚未有商品化诊断试剂盒,为填补行业空白,本研究制备了抗SADS-CoV核衣壳(N)蛋白单克隆抗体并对其序列进行了分析。利用原核表达系统表达SADS-CoV N... 详细信息

猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)目前尚未有商品化诊断试剂盒,为填补行业空白,本研究制备了抗SADS-CoV核衣壳(N)蛋白单克隆抗体并对其序列进行了分析。利用原核表达系统表达SADS-CoV N蛋白并进行纯化,纯化的N蛋白作为免疫源免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选及亚克隆,获得5株能够稳定分泌抗SADS-CoV N蛋白的杂交瘤细胞株,将其命名为1C10、4B10、6G1、6F3和6E8;此外,利用套式PCR扩增技术获得了抗体可变区基因序列。间接免疫荧光试验(IFA)结果表明,5株单抗特异性识别Huh7细胞感染的SADS-CoV。ELISA结果表明,5株单抗与纯化的SADS-CoV N蛋白具有良好的反应性,但是,与SADS-CoV反应性分析发现,只有6E8的反应性较好,其余四株均不反应。Western blot结果表明,5株单抗均能特异性识别纯化的以及SADS-CoV感染表达的N蛋白。亚类分型鉴定结果表明,1C10、4B10、6G1和6F3重链为IgG1型,6E8为IgG2a型,它们的轻链为Kappa型。截短表达分析表明,5株单抗识别N蛋白的区域为1-142 aa。总之,本研究制备的抗SADS-CoV N蛋白单克隆抗体为SADS-CoV新型诊断方法的开发以及SADS-CoV N蛋白功能及结构的研究提供了有用的工具。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒 N蛋白单克隆抗体抗体序列分析

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猪急性腹泻综合征冠状病毒膜蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2022年第1期52卷 62-69页

作者：段月月孔祥雨袁聪索学鹏王琦郑海学曹丽艳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 中国农业科学院都市农业研究所四川成都610000

为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)抗膜蛋白(M)多克隆抗体,本研究以SADSCoV GDS04分离株cDNA为模板扩增M基因片段,并将其克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,构建重组质粒p GEX-6p-1-M。测序正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受... 详细信息

为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)抗膜蛋白(M)多克隆抗体,本研究以SADSCoV GDS04分离株cDNA为模板扩增M基因片段,并将其克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,构建重组质粒p GEX-6p-1-M。测序正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,所获得的重组蛋白主要以包涵体形式存在,采用切胶纯化方式进行蛋白纯化。纯化后的M蛋白混合弗氏佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠,经过4次免疫,获得鼠抗M蛋白的多克隆抗体。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹试验(Western-blot)及间接免疫荧光试验(IFA)验证鼠抗M多克隆抗体的反应原性。ELISA结果显示,抗体效价能达到1∶12 800。Western-blot结果显示,制备的多克隆抗体可以识别重组M蛋白和SADS-CoV感染Huh7细胞表达的M蛋白。IFA结果显示,制备的多克隆抗体可以特异性识别SADS-CoV。以上结果表明,重组的M蛋白不仅具有良好的免疫原性,还具有良好的反应性,为后续SADS-CoV诊断方法的建立及M蛋白生物学功能的研究奠定了基础。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒 M蛋白原核表达多克隆抗体

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猪急性腹泻综合征冠状病毒S蛋白多克隆抗体的制备及在检测该病毒感染中的应用

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中国预防兽医学报 2024年第5期46卷 499-504页

作者：刘大凯韩郁茹张记宇张燎原冯廷帅杨小曼曾苗苗时洪艳秦毅斌石达冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 广西兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和... 详细信息

为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达,通过western blot鉴定重组S1-CTD蛋白(rS1-CTD)的表达及反应原性。结果显示,r S1-CTD以包涵体的形式表达,在40 ku处出现特异性条带。诱导表达后的r S1-CTD经不同浓度尿素重悬并超声离心,SDS-PAGE检测后切胶纯化,得到纯化的重组蛋白。利用BCA试剂盒测得蛋白的浓度为33μg/m L。将该重组蛋白乳化后经3次免疫新西兰大白兔,并在3免一周后采血,分离血清获得S1-CTD蛋白PAb。将SADS-Co V感染Vero E6细胞24 h后,以获得的兔PAb为一抗,分别采用western blot和间接免疫荧光试验(IFA)检测该PAb的反应原性。Western blot结果显示,在约250 ku处出现特异性条带,而阴性对照组无该条带;IFA结果显示,SADS-Co V感染的细胞中出现绿色荧光,而阴性对照细胞无绿色荧光。将SADS-Co V感染仔猪的回肠组织制备病理切片,以制备的PAb为一抗,通过免疫组织化学(IHC)检测SADS-Co V的抗原。结果显示,该组织切片中出现棕色阳性信号,而阴性对照仔猪回肠组织切片则无该棕色信号。表明该PAb可与感染SADS-Co V的仔猪回肠组织中的相应抗原发生特异性免疫反应。综上所述,本实验制备的S1-CTD蛋白PAb具有良好的反应原性和免疫原性,可以用于western blot、IFA、IHC检测体内外SADS-Co V的感染,为后续SADS-Co V检测方法的建立及S蛋白生物学功能的研究奠定基础。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒 S蛋白原核表达多克隆抗体初步应用

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猪急性腹泻综合征冠状病毒核衣壳蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2019年第9期49卷 1179-1186页

作者：周芝海谭耀荣郑瑶瑶曾繁文麦凯杰马静云华南农业大学动物科学学院广东广州510642

为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)核衣壳(N)蛋白多克隆抗体,采用PCR方法扩增SADS-CoV/CN/GDGL/2017毒株N基因片段,并对N基因的序列以及N蛋白氨基酸突变位点进行分析。随后,将N基因片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)构建重组... 详细信息

为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)核衣壳(N)蛋白多克隆抗体,采用PCR方法扩增SADS-CoV/CN/GDGL/2017毒株N基因片段,并对N基因的序列以及N蛋白氨基酸突变位点进行分析。随后,将N基因片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化N蛋白,通过免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体。结果表明,扩增的N基因片段和所构建的重组质粒正确无误,成功诱导表达出可溶性重组蛋白SADS-CoV-N,分子质量约为67 ku,最佳诱导时间为6 h。Western-blot以及间接免疫荧光试验结果表明,该多克隆抗体能特异性检测SADS-CoV,证明重组蛋白有良好的免疫原性。本研究为后续建立SADS-CoV快速诊断方法及该病毒致病机制的深入研究奠定基础。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒 N蛋白原核表达多克隆抗体

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猪急性腹泻综合征冠状病毒诱导细胞自噬并增强病毒复制的研究

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中国预防兽医学报 2024年第1期46卷 61-69页

作者：曾苗苗刘大凯张记宇张燎原冯廷帅杨小曼时洪艳张鑫陈建飞石达冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/猪消化道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证... 详细信息

为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证实SADS-CoV可以诱导Vero E6细胞发生自噬。构建pEGFP-LC3的真核表达质粒并经双酶切及测序鉴定正确后转染Vero E6细胞,24 h后以SADS-CoV感染,24 h后经激光共聚焦显微镜观察可见,与阴性对照组细胞相比,感染SADS-CoV的细胞出现绿色荧光的点状聚集。进一步将SADS-CoV(MOI 0.1)感染Vero E6细胞不同时间后通过western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达水平的变化,结果显示,与阴性对照组相比,SADS-CoV感染组LC3-Ⅱ的表达水平升高,LC3-Ⅱ/GAPDH比值呈上升趋势,而p62蛋白表达水平则显著降低(P<0.05),表明SADS-CoV感染能够诱导Vero E6细胞产生完整的自噬应答。为了探究自噬对病毒复制的影响,本研究分别采用自噬抑制剂3-MA和自噬诱导剂Rapamycin处理Vero E6细胞后以SADS-CoV感染,于感染后不同时间收获细胞,通过western blot和病毒滴度(TCID_(50))测定检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与仅感染病毒的对照组相比,采用3-MA处理Vero E6细胞后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)均显著降低(P<0.05),而采用Rapamycin处理后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)则均显著升高(P<0.05)。针对ATG5基因设计3条特异性的ATG5 si RNA(siATG5-1/2/3),将干扰效率较好的siATG5-1转染Vero E6细胞后再以SADS-CoV感染,24 h后检测病毒滴度并利用western blot检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与未转染siATG5的3组阴性细胞相比,转染细胞中SADS-CoV N蛋白的表达水平及病毒滴度均显著降低(P<0.05)。本研究首次表明SADS-CoV感染可以诱导宿主细胞自噬并促进病毒的复制,该结果为深入研究SADS-CoV感染与其致病机理以及防控该病毒的感染奠定了基础。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒自噬病毒复制 LC3-Ⅱ

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