检索结果-内蒙古大学图书馆

中国糖尿病杂志 2020年第5期28卷 366-372页

作者：买尔哈巴迪力木拉提·阿不来提杨新玲贾玉敏耿飞飞新疆医科大学第一附属医院综合内四科乌鲁木齐830054 新疆维吾尔自治区人民医院急救中心新疆医科大学第二附属医院神经内科

目的筛选及鉴定肥胖大鼠海马区的差异蛋白表达。方法将24只SD大鼠随机分为单纯肥胖组(Ob,n=14)及正常对照组(NC,n=10)。予高脂高糖饮食制备单纯肥胖大鼠模型,采用相对和绝对定量同位素标记技术(iTRAQ)联合二维液相色谱-串联质谱(2D-LC-M... 详细信息

目的筛选及鉴定肥胖大鼠海马区的差异蛋白表达。方法将24只SD大鼠随机分为单纯肥胖组(Ob,n=14)及正常对照组(NC,n=10)。予高脂高糖饮食制备单纯肥胖大鼠模型,采用相对和绝对定量同位素标记技术(iTRAQ)联合二维液相色谱-串联质谱(2D-LC-MS/MS)法鉴定肥胖大鼠海马区差异蛋白表达,对所获蛋白行生物信息学分析,Western blot法对筛选的部分差异蛋白进行验证。结果成功建立单纯肥胖大鼠模型,共鉴定出310种差异蛋白表达。于KEGG数据库检索筛选出26个差异蛋白显著富集的代谢通路。选取位于蛋白功能相互作用网络交叉点的4种差异蛋白行Western blot验证,发现蛋白表达水平与质谱结果一致。结论采用iTRAQ结合2D-LC-MS/MS技术,能有效筛选肥胖大鼠海马区差异蛋白表达,为研究肥胖对中枢神经系统损伤机制提供依据。

关键词：肥胖差异蛋白组学相对和绝对定量同位素标记技术双向液相色谱与串联质谱

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双酚A染毒与肾虚模型小鼠睾丸差异蛋白相关性的iTRAQ技术研究

引用

时珍国医国药 2020年第9期31卷 2298-2303页

作者：贾瑊马静李颖祺张肖倩张学学陈昌波董海军空军军医大学西京医院陕西西安710032 陕西中医药大学基础医学院陕西咸阳712046 陕西省中医院陕西西安710001

目的筛选双酚A染毒与氢化可的松诱导的肾阳虚和肾阴虚模型小鼠睾丸表达的差异蛋白,并比较相关性。方法随机将6周龄小鼠分为4组,每组10只,BPA组小鼠腹腔注射BPA溶液100mg/(kg·d),连续7d;肾阳虚组小鼠腹腔注射氢化可的松溶液25 mg/(k... 详细信息

目的筛选双酚A染毒与氢化可的松诱导的肾阳虚和肾阴虚模型小鼠睾丸表达的差异蛋白,并比较相关性。方法随机将6周龄小鼠分为4组,每组10只,BPA组小鼠腹腔注射BPA溶液100mg/(kg·d),连续7d;肾阳虚组小鼠腹腔注射氢化可的松溶液25 mg/(kg·d),连续10d;肾阴虚组小鼠腹腔注射氢化可的松溶液50mg/(kg·d),连续7d;空白对照组小鼠腹腔注射生理盐水0.2 ml/d,连续7d。提取睾丸总蛋白,利用iTRAQ技术进行质谱检测,生物信息学方法分析BPA组与肾阳虚和肾阴虚组小鼠睾丸表达的差异蛋白,并进行比较;采用Western Blot检测筛选出与精子生成密切相关的Apoa1及Mea1在各组小鼠睾丸的表达。结果筛选出小鼠睾丸表达的差异蛋白258个,肾阳虚组58个、肾阴虚组136个、BPA组64个;参与了23种生物过程,位于16种细胞组分,具有17种分子功能。3模型组共表达的差异蛋白15个,上调的有Ighg1、Orm1,下调的有Mea1、Beta-2-microglobulin、Ephx1、Atp5j、Apoa1、Acox3、Stil、Svs5、Svs2、Svs4、Svs3a、Svs1、Svs6,且组间比较无显著性差异(P>0.05);Western Blot显示Apoa1和Mea1在3模型组小鼠睾丸表达均明显低于正常对照组(P<0.05),Apoa1表达在3模型组间无显著差异(P>0.05),而BPA组Mea1表达显著低于肾阳虚和肾阴虚组(P<0.05),肾阳虚与肾阴虚组间无显著差异(P>0.05)。结论BPA染毒和肾虚引起的生殖障碍模型具有共同表达的差异蛋白,如Apoa1、Mea1等蛋白会直接影响雄激素合成、精子获能及受精过程,导致生精障碍。这一结论为比较研究BPA染毒和肾虚引起的雄性不育机制提供理论基础,而且为补肾药物防治BPA染毒导致的雄性不育提供了实验依据。

关键词：双酚A 肾虚睾丸差异蛋白小鼠相对和绝对定量同位素标记技术

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超聚硒植物壶瓶碎米荠硒耐受转录组和蛋白组研究

超聚硒植物壶瓶碎米荠硒耐受转录组和蛋白组研究

引用

作者：周毅峰华中农业大学

学位级别：博士

硒是动物健康的必需矿物元素和植物的有益元素,对人和动物健康有多方面的重要影响,过量的硒对动物和植物都是有毒的。碘化甲状腺氨酸脱碘酶、硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶和硒蛋白家族蛋白参与维持氧化还原动态平衡、抗氧化作... 详细信息

硒是动物健康的必需矿物元素和植物的有益元素,对人和动物健康有多方面的重要影响,过量的硒对动物和植物都是有毒的。碘化甲状腺氨酸脱碘酶、硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶和硒蛋白家族蛋白参与维持氧化还原动态平衡、抗氧化作用、正常甲状腺激素代谢、预防神经退行性病变和癌症、优化免疫反应、细胞增殖与生存等重要生理过程。硒和硫有相似的化学性质,硒可能利用硫的吸收代谢过程在细胞内完成代谢过程。高浓度硒对一般植物是有毒的,但超聚硒植物能够耐受高浓度的硒,故人类仍是通过食用超聚硒植物富集的有机硒补硒。开发超聚植物及研究其硒富集耐受机制,成为硒研究热点。壶瓶碎米荠是在湖南壶瓶山和恩施渔塘坝发现的碎米荠属超聚植物。由于是一种新发现的植物,对其定名存在争议,其遗传背景研究不够深入,产品研究开发理论基础严重缺乏,产品粗放。基于以上问题,对其进行分子系统发育、硒耐能力、硒积累动态及硒处理条件下普通生理变化的研究,为了解部分遗传信息,进行转录测序,并研究了硒处理条件下的转录组和蛋白组的变化,得到如下结果:1、利用来自武陵山区分属于3个种的11个植物样本的ITS序列进行分子系统发育分析,发现恩施市新塘乡双河渔塘坝、恩施市新塘乡双河炼铁湾、长阳县崩尖子自然保护区吊水崖、五峰县五峰镇栗子坪村黄家河、湖南省石门县壶瓶山国家级自然保护区大洞坪村、宣恩县椿木营乡挖断山村竹山、宣恩县椿木营乡杉坨村唐家坪和宣恩县椿木营乡挖断山村曾家样品聚为一支,可以证明它们是一个种——壶瓶碎米荠(Cardamine hupingshanens ***,***,***&***)。2、壶瓶碎米荠幼苗最大耐硒处理浓度为80,0OOμg.L-1,壶瓶碎米荠硒积累量在8-24小时内迅速增加,24小时后虽然有硒含量增加但增加速度减慢了,处理96小时并未达到中毒程度。不同硒浓度处理1周后,可溶性蛋白、多糖、总游离氨基酸均在60,000μg.L-1硒处理时达到最大,当硒处理超过80,0OOμg.L-1均出现急剧下降。硒的形态主要以硒代胱氨酸(SeCys2)形态存在,在80,000μg.L-1处理时随时间的延长明显增加。3、壶瓶碎米荠叶和根分别得到5.2Gb和4.8Gb转录组数据,叶和根中拼接得到48,989条和78,471条基因,平均GC含量为41.18%。获得NCBI数据库入口 SRA号:SRP097726。iTRAQ定量技术在根和叶中分别鉴定出26273和23357条肽段,其中含硒肽段59条和81条,并找到5条含硒肽段在根和叶中都表达。转录组和蛋白组关联性分析发现其中4个共表达上调基因和1个共表达下调基因,5个表达相反的基因,并发现10个代谢途径对硒共同响应。4、基因和蛋白差异表达分析发现硒可以硒代、硒化和亚硒化形式存在于壶瓶碎米荠的生物分子中,RT-qPCR对相关基因定量分析与RNA Seq测序结果都证实了这个结果。硒处理条件下SUL1A基因表达显著上调说明了硒化作用是植物硒耐受的一个重要机制;Aat和PLR1的表达显著上调硒代半胱氨酸及其衍生物的转氨作用是硒耐受的重要方式;E2、E3、VHA-a2、CTP、CPI等基因表达上调,说明错误折叠和畸形硒蛋白质可通过泛素蛋白酶体和溶酶体蛋白降解途径降解在硒耐受中起重要作用,半胱氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶抑制因子共同上调,可能协调保障了硒蛋白的稳定;GST12、GST-u4分别在根中的表达上调,同时ABCC1和ABCC2表达上调,说明液泡贮藏功能在硒耐受机制中也发挥了重要作用。

关键词：硒超聚集植物壶瓶碎米荠转录组蛋白组相对和绝对定量同位素标记技术

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基于iTRAQ研究针药结合干预CUMS抑郁模型大鼠前额叶皮质蛋白差异表达

基于iTRAQ研究针药结合干预CUMS抑郁模型大鼠前额叶皮质蛋白差异...

引用

作者：张嘉玲南方医科大学

学位级别：硕士

目的本研究基于相对和绝对定量同位素标记(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation,iTRAQ)技术,筛选针药结合干预慢性不可预见性温和应激(Chronic Unpredictable Mild Stress,CUMS)抑郁模型大鼠前额叶皮质(Prefrontal Cortex,PFC)的差异表达蛋白质,以探讨针药结合快速起效的中枢机制。方法采用CUMS应激造模,即在21天随机给予10种不同的应激刺激,如禁水、禁食、冰水游泳、温水游泳等。21天造模后,给予造模成功的CUMS抑郁大鼠针药结合、电针或帕罗西汀等干预1周。造模前、后和干预1周后,观察各组大鼠体重、糖水偏好实验和旷场实验等行为学测试指标的变化情况。基于iTRAQ技术,筛选正常对照组、模型组和干预组大鼠PFC的差异表达蛋白质,并用蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)对PFC重点差异蛋白进行验证。结果***刺激结束后,模型大鼠出现体重下降、糖水偏好度降低、旷场总活动路程减少等表现(P<0.05),提示造模成功。干预1周后,干预组大鼠行为学指标均较造模后有改善。其中针药结合组大鼠体重、糖水消耗量、糖水偏好度、中央区域停留时间、活动总路程均较模型组显著增加(P<0.05),中央区域停留时间较电针组、帕罗西汀组显著增加(P<0.05),糖水消耗量、糖水偏好度、中央区域停留时间与正常对照组相比无显著差异(P>0.05)。2.应用iTRAQ标记及质谱分析筛选出170个差异蛋白。生物学信息分析结果表明,造模后或干预1周后,CUMS抑郁模型大鼠PFC差异蛋白的基因分子功能主要与结合功能或酶活性相关,主要参与维持神经元结构完整性、信号传导、转运、代谢等过程,参与通路集中于内吞作用通路、多巴胺突触通路、5-HT能神经突触通路等,蛋白相互作用网络以多巴胺代谢和免疫功能调节为中心。***验证结果表明,CUMS抑郁模型大鼠PFC蛋白Bassoon(Protein bassoon)、离子型谷氨酸受体3(Glutamate receptor 3,GluR3)、多巴脱羧酶(Aromatic-L-amino-acid decarboxylase,DDC)和酪氨酸羟化酶(Tyrosine 3-monooxygenase,TH)较正常对照组表达下调,其中Bassoon有显著性差异(P<0.05)。干预1周后,Bassoon、GluR3、DDC和TH表达均上调,其中针药结合组DDC表达显著高于模型组(P<0.05),电针组TH表达显著高于模型组(P<0.05)。结论电针结合帕罗西汀具有快速抗抑郁作用。抑郁症的发生可能与神经元内吞作用减少、兴奋性受体减少和单胺类神经递质合成减少等有关,而电针结合帕罗西汀可能通过调节神经元内吞作用、增加兴奋性受体和促进单胺类神经递质合成而发挥快速抗抑郁作用。因此,多蛋白、多靶点、多因素共同参与了抑郁症的发病和针药结合抗抑郁快速起效过程。

关键词：抑郁相对和绝对定量同位素标记技术慢性不可预见性温和应激 Bassoon 离子型谷氨酸受体3 多巴脱羧酶酪氨酸羟化酶电针结合帕罗西汀

来源：评论

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