检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：叶建强王萍邵红霞秦爱建田晓彦王伟康 225009 江苏省扬州市邗江区大学南路88号

本发明提供了一种血清4型禽腺病毒双单抗夹心ELISA抗原检测试剂盒，其中包括：包被抗FAdV‑4纤突蛋白蛋白单克隆抗体（捕获抗原的抗体）的酶标板、酶标记抗FAdV‑4纤突蛋白单克隆抗体（检测抗体）。捕获抗体和检测抗体分别针对FAdV‑4纤突... 详细信息

标准号: CN108414750A

本发明提供了一种血清4型禽腺病毒双单抗夹心ELISA抗原检测试剂盒，其中包括：包被抗FAdV‑4纤突蛋白蛋白单克隆抗体（捕获抗原的抗体）的酶标板、酶标记抗FAdV‑4纤突蛋白单克隆抗体（检测抗体）。捕获抗体和检测抗体分别针对FAdV‑4纤突蛋白2种不同的抗原决定簇：包被在酶标板的抗FAdV‑4纤突蛋白单克隆抗体和酶标记抗FAdV‑4纤突蛋白单克隆抗体。本发明试剂盒操作简便、快速，能特异性检测出4型禽腺病毒，而与流感病毒（AIV）、马立克病毒（MDV）、血清8型禽腺病毒（FAdV‑8）、禽网状内皮组织增生症病毒（REV）、禽白血病病毒（ALV）、传染性法氏囊病毒（IBDV）以及SPF鸡肝组织研磨液等均不反应。该方法所需成本低廉，经济效益显著、应用前景广泛。

关键词：纤突蛋白单克隆抗体禽腺病毒检测抗体酶标板酶标记包被禽网状内皮组织增生症病毒传染性法氏囊病毒蛋白单克隆抗体抗原检测试剂盒禽白血病病毒流感病毒抗原决定簇特异性检测夹心ELISA 捕获抗体捕获抗原发明试剂血清4型肝组织研磨液血清单抗抗体病毒应用

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基于F2蛋白的检测血清4型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒

基于F2蛋白的检测血清4型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒

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作者：叶建强王伟康邵红霞秦爱建田晓彦梁广成万志敏 225009 江苏省扬州市邗江区大学南路88号

本发明公开了一种基于F2蛋白的检测血清4型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，包括包被有纤突蛋白基因F2表达产物的ELISA酶标板，阳性阴性对照，HRP标记的兔抗鸡二抗，样品稀释液、显色液以及洗涤液。本发明建立的FAdV‑4抗体的间接ELISA... 详细信息

标准号: CN107607717A

本发明公开了一种基于F2蛋白的检测血清4型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，包括包被有纤突蛋白基因F2表达产物的ELISA酶标板，阳性阴性对照，HRP标记的兔抗鸡二抗，样品稀释液、显色液以及洗涤液。本发明建立的FAdV‑4抗体的间接ELISA试剂盒能特异性的检测出FAdV‑4抗体，而与抗流感病毒血清(AIV)、抗马立克病毒血清(MDV)、抗新城疫病毒血清(NDV)、抗禽网状内皮组织增生症病毒血清(REV)以及SPF鸡血清不反应(图6)。因此，该试剂盒具有良好FAdV‑4的特异性，能用于FAdV‑4感染及免疫状况流行病学调查。

关键词：血清试剂盒抗体间接ELISA 禽网状内皮组织增生症病毒流行病学调查抗流感病毒新城疫病毒样品稀释液表达产物病毒血清免疫状况禽腺病毒纤突蛋白阳性阴性血清4型酶标板兔抗鸡洗涤液显色液检测包被二抗蛋白感染基因

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REV感染对SPF雏鸡miRNA及其靶基因mRNA表达的影响

REV感染对SPF雏鸡miRNA及其靶基因mRNA表达的影响

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作者：于志强东北农业大学

学位级别：博士

禽网状内皮组织增生病(reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REVs)引起的禽类的一种传染性致瘤性疾病。REV主要引起患禽的生长迟缓综合征、免疫抑制及慢性肿瘤。该病毒自1958年首次被... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REVs)引起的禽类的一种传染性致瘤性疾病。REV主要引起患禽的生长迟缓综合征、免疫抑制及慢性肿瘤。该病毒自1958年首次被分离出来以后,在世界许多国家和地区均有RE发生或流行的报道,我国于1986年在南京首次分离出该病毒。REV主要感染鸡、火鸡、鸭、孔雀、鹌鹑、鹧鸪、雉和珍珠鸡等,其中对REV最易感的动物是火鸡,而鸡是实验室主要研究对象。该病毒的主要传播方式为水平传播,其他传播方式还有垂直传播、虫媒传播以及环境污染物传播等。该病毒的广泛传播会造成多种病毒疫苗免疫失效以及降低动物机体免疫机能从而使其他生物性致病因素,尤其是其他病毒更易感染,进而造成多种病毒的混合感染,导致病鸡大量死亡,给养禽业带来巨大损失。本研究以SPF雏鸡为研究对象,在成功建立SPF雏鸡网状内皮组织增生病病毒感染动物模型的基础上,采用高通量测序以及实时荧光定量PCR检测方法,通过对REV感染SPF雏鸡法氏囊组织中差异表达的miRNA以及其相关靶基因mRNA表达等主要指标动态变化的检测,并结合REV感染SPF雏鸡临诊症状,较全面系统的研究了患RE的SPF雏鸡上述被检指标的动态变化及其对细胞凋亡和肿瘤发生、发展的影响。旨在揭示REV感染SPF雏鸡对miRNA表达的影响,同时研究REV对感染雏鸡法氏囊细胞凋亡及肿瘤相关基因表达的作用,研究主要结果如下:***感染SPF雏鸡疾病模型的建立本研究通过腹腔注射途径,使1日SPF龄雏鸡感染REV,并经感染雏鸡临诊症状的分析、眼观病理变化的观察以及PCR检测等多种手段对雏鸡是否成功感染REV进行判断。结果发现,腹腔注射REV病毒液后,实验雏鸡较相应对照雏鸡精神状态萎靡,背羽凌乱且稀少、进食量明显减少,体重较同日龄的对照鸡显著减轻,表现出典型的生长抑制综合征的症状;剖检实验雏鸡可发现,其法氏囊和胸腺等免疫器官体积明显缩小;然后,再通过PCR对实验雏鸡法氏囊组织进行病毒检测,结果在实验雏鸡法氏囊中成功扩增出REV的特异性保守序列LTR,而同日龄的对照雏鸡则未扩增出该基因。以上各项被检指标均证明通过对易感动物SFP雏鸡进行腹腔注射REV液后,可成功复制出RE雏鸡模型。2.实时荧光定量PCR检测REV方法的建立及其应用迄今为止,已经报道了多种对REV的检测方法,主要包括普通PCR、实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附试验、间接免疫荧光以及环介导等温扩增技术等方法。这些检测方法各有其优势,但也有不足之处。本研究根据REV的LTR基因保守序列建立了荧光定量PCR检测方法,通过优化发现其最适退火温度为57℃,相关系数为R2=0.996753,回归方程:y=32.311-3.142x。应用上述建立的实时荧光定量PCR检测方法,对REV感染SPF雏鸡后第21天和第28天患病雏鸡胸腺、脾脏和法氏囊中病毒含量进行检测。研究发现,在REV感染SPF雏鸡后第21天和第28天患病雏鸡在胸腺、脾脏囊和法氏囊中均可检测到病毒的LTR基因;同时,法氏囊中病毒含量显著高于胸腺和脾脏,而胸腺和脾脏中病毒含量未见统计学差异。***感染SPF雏鸡法氏囊细胞的miRNA高通量测定本研究通过高通量检测技术,对REV感染SPF雏鸡后第21天和28天,其法氏囊中miRNA表达量进行检测,通过数据质量分析发现,检测的各组样品序列长度为0.597G-0.776G,错误率均为0.01%,四组数据中Q20均高于98%,Q30均高于97%,均高于行业标准。GC含量均在50%左右,不会影响测序的进行。对测序数据进行过滤,去除了基因组中影响数据质量的结果后得到的clean reads占总reads的85%以上,并且map到参考基因组的clean reads占总reads的82%以上,以上均说明本次测序结果数据质量良好,可信度较高。对map上的clean reads进行差异表达分析,发现SPF雏鸡感染REV后第21天有63个miRNA表达量发生显著变化,其中有30个miRNA表达量上调,有33个表达量下调;在REV感染SPF雏鸡后第28天有25个miRNA表达量发生显著变化,其中有8个miRNA表达量上调,有17个miRNA表达量下调。4.高通量测序结果验证应用荧光定量PCR方法对高通量测序结果进行验证性检测,分别随机选取了REV感染SPF雏鸡后第21天和第28天的10个上调和下调的差异表达miRNA,并检测了其表达量,并通过相关性分析对比发现,REV感染后第21天和28天实时荧光定量PCR检测的10个差异表达miRNA表达量与高通量测序结果表达量呈正相关,其相关性系数分别为:R2=0.9633和0.9796。证明高通量测序结果准

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒 SPF雏鸡 miRNA 高通量测序

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REV Gp90亚单位疫苗联合核酸缓释佐剂对雏鸡的免疫保护作用

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中国兽医学报 2017年第10期37卷 1856-1861页

作者：袁霏王康郭道磊马文杰褚颖郭慧君山东农业大学动物科技学院山东省生物工程与疫病防治重点实验室山东泰安271018 山东省东平县畜牧局兽医站山东东平271500

主要探讨禽网状内皮组织增生症病毒(REV)亚单位疫苗联合CpG-ODN/Poly(I:C)缓释佐剂对雏鸡的免疫保护作用。根据已发表的REV囊膜蛋白Gp90的基因序列,设计引物,从感染REV的细胞中扩增出目的基因,构建原核重组表达载体,在Rosseta(***)菌中... 详细信息

主要探讨禽网状内皮组织增生症病毒(REV)亚单位疫苗联合CpG-ODN/Poly(I:C)缓释佐剂对雏鸡的免疫保护作用。根据已发表的REV囊膜蛋白Gp90的基因序列,设计引物,从感染REV的细胞中扩增出目的基因,构建原核重组表达载体,在Rosseta(***)菌中诱导表达,对表达蛋白进行纯化和Western blot鉴定;制备的重组蛋白与CpG-ODN/Poly(I:C)缓释佐剂联合接种7日龄雏鸡,2次加强免疫后第2周进行REV攻毒,接种后每周检测血清抗体和攻毒后检测REV病毒血症,评价免疫保护效果。结果显示,成功构建重组原核表达质粒,并获得相对分子质量为51 000的重组表达产物,该产物能够与REV单克隆抗体特异性结合;与CpG-ODN/Poly(I:C)缓释佐剂联合接种后能够诱导雏鸡产生较单一免疫Gp90蛋白抗体效价显著增加的血清抗体,经二次加强免疫全部鸡只产生抗体;攻毒后接种雏鸡病毒血症为0%(0/13),而对照组和单一免疫Gp90蛋白组分别为69%(9/13)和15%(2/13)。结果表明,本研究制备的REV Gp90重组蛋白联合CpG-ODN/Poly(I:C)缓释佐剂对雏鸡具有完全的保护力,这为开展REV疫苗防控提供科学数据。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒 Gp90囊膜蛋白 CpG ODN Poly(I:C) 核酸缓释佐剂免疫保护

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禽弱毒疫苗中REV低剂量污染检测方法的比较

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中国兽医学报 2017年第6期37卷 1041-1045页

作者：任志浩栾怀彪李阳王一新崔治中常爽赵鹏山东农业大学动物医学院山东泰安271018

使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗是REV感染途径之一,而通常弱毒疫苗中REV的污染剂量较低,难以检测,本研究对不同方法在检测弱毒疫苗中REV低剂量污染进行了比较研究。将定量好的REV以不同剂量分别人为污染一批商品化... 详细信息

使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗是REV感染途径之一,而通常弱毒疫苗中REV的污染剂量较低,难以检测,本研究对不同方法在检测弱毒疫苗中REV低剂量污染进行了比较研究。将定量好的REV以不同剂量分别人为污染一批商品化新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗,提取核酸后分别以TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测、常规RT-PCR检测以及PCR产物结合核酸斑点杂交检测等不同方法进行检测。结果显示常规RTPCR检测仅可检测到10TCID50/羽份的REV污染,而另外两种方法均检测到1TCID50/羽份的低剂量REV污染。将人为污染1TCID50/羽份和2TCID50/羽份REV的NDV弱毒疫苗各接种10只SPF鸡,定期针对REV抗体及其核酸进行检测,结果显示在免疫污染疫苗后7周内REV抗体全部为阴性,而核酸检测均可以检测到一定比例的阳性,提示通过接种SPF鸡检测弱毒疫苗中REV污染时,仅仅通过抗体判定可能会对一些剂量较低的REV污染造成漏检,通过结合对病原的检测有助于降低漏检率。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒污染 Real-Time RT-PCR 核酸斑点杂交

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2016年鲁北地区鸡群病毒性肿瘤病例的检测分析

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动物医学进展 2017年第12期38卷 123-127页

作者：徐晴晴孙培褚仁忠王文秀王金良肖跃强王艳魏凤莫玲苗立中山东省滨州畜牧兽医研究院山东省滨州畜禽蜂胶疫苗研究开发推广中心山东滨州256600 滨州经济技术开发区农村工作部山东滨州256600 阳信县畜牧兽医局山东滨州256600 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

为了解鸡马立克病病毒(MDV)、禽白血病病毒(ALV)和禽网状内皮组织增生症病毒(REV)在鲁北地区鸡群中的感染情况,对来自21个鸡群的送检病例进行了病原核酸的PCR检测。结果显示,MDV阳性率为28.5%,ALV-J阳性率为23.8%,REV阳性率为14.3%,肿... 详细信息

为了解鸡马立克病病毒(MDV)、禽白血病病毒(ALV)和禽网状内皮组织增生症病毒(REV)在鲁北地区鸡群中的感染情况,对来自21个鸡群的送检病例进行了病原核酸的PCR检测。结果显示,MDV阳性率为28.5%,ALV-J阳性率为23.8%,REV阳性率为14.3%,肿瘤病毒的二重感染率为28.6%。结果表明,3种肿瘤病毒在鲁北地区蛋鸡和地方品种鸡群中的感染严重,病毒的混合感染较多。因此,做好MD的疫苗防护,对ALV-J及REV的感染状况要进行定期检测,控制好养殖环境,尽量避免3种肿瘤病毒的继发感染。

关键词：鸡马立克病病毒禽白血病病毒禽网状内皮组织增生症病毒 PCR检测

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表达外源基因的REV病毒的构建、拯救及其特性研究

表达外源基因的REV病毒的构建、拯救及其特性研究

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作者：周晓祥扬州大学

学位级别：硕士

禽网状内皮组织增生症病毒(REV)属于反转录病毒科禽类C反转录病毒。REV主要引起以网状内皮细胞增生为主要特征的一组综合征,包括急性网状细胞增生症、矮小综合征和淋巴组织及其它组织的慢性肿瘤增生性疾病。反转录病毒作为外源基因表达... 详细信息

禽网状内皮组织增生症病毒(REV)属于反转录病毒科禽类C反转录病毒。REV主要引起以网状内皮细胞增生为主要特征的一组综合征,包括急性网状细胞增生症、矮小综合征和淋巴组织及其它组织的慢性肿瘤增生性疾病。反转录病毒作为外源基因表达及传递载体已有大量研究报道,而REV能否作为外源基因表达载体鲜有报道。本研究首先在REV病毒基因组Env基因的N端插入绿色荧光蛋白基因EGFP,构建并拯救出表达EGFP的REV病毒的基础上,将H9流感病毒HA上部分抗原表位插入Env基因的N端,拯救出表达HA抗原表位蛋白的REV病毒,并进行相关病毒特性研究。1、表达绿色荧光蛋白的REV病毒的构建与拯救为尝试REV能否作为病毒载体表达外源基因,并探究外源基因插入位点,本研究利用重组酶ExnaseTMⅡ克隆技术以及反向遗传操作技术,首先将外源基因EGFP插入REV病毒基因组Env基因N端构建外源基因与Env蛋白融合表达的REV传染性克隆,命名为rREV-EGFP-Env。将rREV-EGFP-Env传染性克隆转染DF1细胞进行了病毒拯救,并通过荧光证明获得了表达EGFP-Env的重组REV病毒。研究结果表明,REV基因组Env基因N端能作为外源基因插入位点用来进行外源基因与Env蛋白的融合表达。这为进一步开发REV作为病毒疫苗载体表达外源基因提供了可能。同时,能够表达EGFP-Env的重组REV病毒的获得可以准确有效的跟踪REV病毒的复制,为研究REV的致病机理和组织嗜性提供有力工具和生物材料。2、表达H9流感病毒HA抗原表位蛋白的REV病毒拯救及其特性为了进一步探究REV作为病毒疫苗载体表达外源基因的可能性,将H9流感病毒HA部分抗原表位插入REV病毒基因组Env基因N端,成功构建HA抗原表位与Env蛋白融合表达的REV传染性克隆,命名为rREV-HAep-Env。将rREV-HAep-Env转染DF1进行了病毒拯救,并通过PCR、IFA和Western blot分析证明获得了表达HAep-Env的重组REV,命名为REV-HA。体外生长曲线测定表明,REV-HA在DF1细胞上的生长特性与REV野毒类似。鸡感染性试验发现,在感染七周内REV组和REV-HA组的鸡体重变化情况类似。抗体检测发现,感染后第二周,REV组和REV-HA组均能产生REV抗体,到第三周抗体水平达到高峰。在感染后第七周,进行了 H9流感病毒的攻毒试验。棉拭排毒测定发现,在感染后第二天,REV-HA组的排毒量明显低于REV组和PBS组。这些结果表明,融合表达H9流感病毒HA抗原表位的REV-HA具有与REV野毒类似生物学特性,同时提示REV作为病毒疫苗载体表达外源基因的可行性。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒外源基因与Env融合病毒拯救鉴定生物学特性

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禽网状内皮组织增生症病毒env蛋白的表达及其在ELISA方法中的应用

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畜牧兽医学报 2009年第10期40卷 1521-1525页

作者：张文娟裴宗飞牛钟相山东农业大学动物科技学院泰安271018

以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具... 详细信息

以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性,相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA方法(Ienv-ELISA)。经应用表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,与IFA及iREV-ELISA结果相比其准确率均超过90%。该方法为检测REV抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒 REV env蛋白原核表达间接ELISA

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一种用于诊断FAdV/MDV/ALV/REV4重PCR检测试剂盒

一种用于诊断FAdV/MDV/ALV/REV4重PCR检测试剂盒

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作者：朱小甫吴旭锦 712000 陕西省咸阳市西咸新区沣西新城统一大道一号

本发明属于公开了一种用于诊断FAdV/MDV/ALV/REV 4重PCR检测试剂盒，主要用于鉴别Ⅰ群禽腺病毒、马立克氏病病毒、鸡淋巴细胞白血病病毒与禽网状内皮组织增生症病毒4重聚合酶链式反应，包括裂解液、扩增反应混合液、阴性对照物和阳性对... 详细信息

标准号: CN106521037A

本发明属于公开了一种用于诊断FAdV/MDV/ALV/REV 4重PCR检测试剂盒，主要用于鉴别Ⅰ群禽腺病毒、马立克氏病病毒、鸡淋巴细胞白血病病毒与禽网状内皮组织增生症病毒4重聚合酶链式反应，包括裂解液、扩增反应混合液、阴性对照物和阳性对照物。本发明针对Ⅰ群禽腺病毒、马立克氏病病毒、鸡淋巴细胞白血病病毒与禽网状内皮组织增生症病毒基因组设计4对引物，建立了4重聚合酶链式反应诊断方法并组装成用于鉴别4重聚合酶链式反应诊断试剂盒，该试剂盒检测快速、灵敏，特异性好，能一次检测4种引起禽肝脾肿大的病毒性疾病，结果直观准确，省时省力，大大降低诊断费用，适用于大范围禽肿瘤性疾病的普查诊断。

关键词：聚合酶链式反应禽网状内皮组织增生症病毒诊断淋巴细胞白血病马立克氏病病毒禽腺病毒鉴别禽肿瘤性疾病病毒病毒性疾病试剂盒检测阳性对照物阴性对照物诊断试剂盒扩增反应一次检测对引物混合液基因组裂解液禽肝省力省时灵敏组装直观

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2014年我国鸡群中禽网状内皮组织增生症血清学调查

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中国预防兽医学报 2015年第8期37卷 641-643页

作者：杨卫铮韩雪张倩刘玉良刘洋孙晓东王传彬中国动物疫病预防控制中心北京102618

为了解我国鸡群中禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的感染状况,本研究于2014年在全国30个省份采集了来自28个父母代(含)以上种鸡场、56个商品代场和59个散养鸡群的共计5 814份血清样品,采用ELISA方法对REV抗体水平进行了检测。结果显示,... 详细信息

为了解我国鸡群中禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的感染状况,本研究于2014年在全国30个省份采集了来自28个父母代(含)以上种鸡场、56个商品代场和59个散养鸡群的共计5 814份血清样品,采用ELISA方法对REV抗体水平进行了检测。结果显示,有27个省份存在REV抗体阳性,表明REV的感染在我国具有较为广泛的地理分布。在所有受检血清样品中,有734份样品呈现REV抗体阳性,平均阳性率为12.6%(734/5 814)。种鸡场、商品代场和散养鸡群的REV抗体阳性率分别为9.3%(437/4 685)、21.6%(178/824)和39.0%(119/305),表明REV感染率呈现出从种鸡场到散养户逐级升高的趋势。本研究调查结果为我国家禽的REV防控工作提供参考。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒阳性率种鸡场商品代场散养鸡群

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