检索结果-内蒙古大学图书馆

临床肝胆病杂志 2002年第4期18卷 232-234页

作者：李曼妮章芳苏先狮中南大学湘雅二医院肝病研究中心湖南长沙410011

建立真核表达重组体 pCDNA3 1(+) -PA的稳定转染细胞株。以人胚肝组织总RNA为模板通过RT-PCR获取全长PAcDNA。先将该序列克隆到 pGEM -TEasy载体 ,再亚克隆转入pCDNA3 1(+) ,限制性内切酶消化及DNA序列分析鉴定重组体构建正确后 ,用脂... 详细信息

建立真核表达重组体 pCDNA3 1(+) -PA的稳定转染细胞株。以人胚肝组织总RNA为模板通过RT-PCR获取全长PAcDNA。先将该序列克隆到 pGEM -TEasy载体 ,再亚克隆转入pCDNA3 1(+) ,限制性内切酶消化及DNA序列分析鉴定重组体构建正确后 ,用脂质体转染技术把它导入Hela细胞 ,经G4 18筛选建立稳定转染细胞株 ,真核表达重组体 pCDNA3 1(+) -PA构建成功 ,稳定转染细胞株中有PAcDNA表达。

关键词：稳定转染细胞株前白蛋白 cDNA克隆基因工程慢性肝病

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利用PiggyBac转座子技术构建NLRC5基因过表达BEAS-2B细胞系及其功能研究

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空军军医大学学报 2025年第4期46卷 526-532页

作者：孙丹妮刘欣悦饶子凡杜岚张湘琳刘梓谕侯诗源沈星刘蓉蓉吴兴安空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室空军军医大学基础医学院学员五大队

目的利用PiggyBac转座系统构建稳定表达NLRC5的BEAS-2B细胞系，为后续针对病毒抗原提呈功能的研究提供有力的工具。方法根据NLRC5基因信息扩增目的基因蛋白编码序列，构建目的基因NLRC5的转座子质粒，将辅助质粒和转座子质粒共转染至B... 详细信息

目的利用PiggyBac转座系统构建稳定表达NLRC5的BEAS-2B细胞系，为后续针对病毒抗原提呈功能的研究提供有力的工具。方法根据NLRC5基因信息扩增目的基因蛋白编码序列，构建目的基因NLRC5的转座子质粒，将辅助质粒和转座子质粒共转染至BEAS-2B细胞。嘌呤霉素筛选稳定转导的细胞后进行单克隆化，最后对获取的单克隆细胞在分子水平上进行过表达验证。结果成功构建一株NLRC5过表达的BEAS-2B细胞，且该细胞系可维持正常细胞活性与增殖能力。结论通过PiggyBac转座子技术实现了NLRC5的过表达，进而提高了MHC-Ⅰ分子基因的表达。通过对该基因的过表达从而研究NLRC5对MHC-Ⅰ抗原肽提呈途径的调控机制，为理解抗病毒免疫的复杂机制以及开发新的治疗策略提供有力支持。

关键词： NLRC5 PiggyBac转座子基因过表达稳定转染细胞株

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犬PD-1、PD-L1胞外区真核表达及稳转细胞株的筛选

犬PD-1、PD-L1胞外区真核表达及稳转细胞株的筛选

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作者：李丹郑州大学

学位级别：硕士

程序性死亡受体1(Programed cell death 1,PD-1)作为表达于T细胞表面的免疫检查点分子之一,通过与其配体-1(ligands of programmed death-1,PD-L1)相互作用进而介导相关抑制信号通路激活,发挥重要的免疫调节及平衡作用。在慢性病毒感染... 详细信息

程序性死亡受体1(Programed cell death 1,PD-1)作为表达于T细胞表面的免疫检查点分子之一,通过与其配体-1(ligands of programmed death-1,PD-L1)相互作用进而介导相关抑制信号通路激活,发挥重要的免疫调节及平衡作用。在慢性病毒感染或肿瘤疾病等特殊生理条件下,PD-1/PD-L1信号通路的过度激活可引发机体出现T细胞增殖、活化抑制,以及影响细胞因子分泌等作用,从而导致T细胞免疫功能出现抑制或耗竭等。现有研究表明,以PD-1/PD-L1为靶点的特异性抗体或小分子阻断制剂能够有效的恢复T细胞免疫功能的抑制或耗竭。特别是其在肿瘤治疗当中的成功临床应用,使其逐渐成为肿瘤治疗领域内的热门靶点之一。犬作为人重要的伴侣动物之一,在人类的生活中扮演着不可或缺的角色,而犬肿瘤已经为威胁其生命的因素之一。现有研究证明犬PD-1/PD-L1通路与犬肿瘤疾病所导致的T细胞免疫功能耗竭密切相关,阻断PD-1/PD-L1通路可能成为犬肿瘤治疗的新策略。因此本研究以犬PD-1/PD-L1相互作用的胞外区为主要研究对象,通过构建真核表达系统,筛选出稳定转染细胞系,并表达纯化具有免疫学原性的犬PD-1和PD-L1胞外区真核表达重组蛋白,为犬PD-1及PD-L1单克隆抗体制备,以及研究二者相互作用等研究奠定基础。本研究首先构建含有Kozak序列和Gluc分泌型信号肽的载体pc DNA3.1/MycHis(+)A-Gluc,通过分子生物学技术,克隆犬PD-1和PD-L1胞外区蛋白的DNA序列,并分别插入到相应真核表达载体中,构建真核重组表达载体pc DNA3.1/MycHis(+)A-Gluc-PD-1和pc DNA3.1/Myc-His(+)A-Gluc-PD-L1。将上述构建的真核重组表达载体分别转染至真核细胞CHO-K1中,Western blot初步验证蛋白表达情况并优化转染条件,筛选瞬时转染阳性细胞株。然后,利用G418对筛选获得的瞬转细胞株进行有限稀释及克隆,分别获得表达犬PD-1和PD-L1胞外区蛋白的稳定细胞株。进一步,将所获得的稳定株传代60次后,分别利用半定量PCR技术、CCK8等技术对筛选细胞株外源基因拷贝数、生长曲线,以及细胞活性进行检测,以进一步确认外源基因在所获得细胞株中的稳定表达。最终,利用所筛选得到的稳定细胞株分别表达目的蛋白并纯化,纯化产物经Western blot方法进行免疫学原性分析。结果显示,分别获得了序列大小为432 bp编码犬PD-1胞外区蛋白的基因和序列大小为660 bp的PD-L1胞外区蛋白的基因。成功构建了含有Kozak序列和Gluc分泌型信号肽的犬PD-1和PD-L1真核重组表达载体pc DNA3.1/MycHis(+)A-Gluc-PD-1、pc DNA3.1/Myc-His(+)A-Gluc-PD-L1。瞬时转染后,Western blot结果显示两种转染细胞株成功表达犬PD-1及PD-L1胞外区蛋白。进一步,利用G418对瞬时转染细胞株进行加压筛选,通过有限稀释成功筛选获得表达犬PD-1、PD-L1胞外区蛋白的稳定转染细胞株CHO-K1/PD-1(细胞编号为CCTCC NO:C202138)和CHO-K1/PD-L1(细胞编号为CCTCC NO:C202139)。传代60次后,所筛选的两株细胞仍含有较高目的基因拷贝数,以及良好的生长活性。说明所获得细胞株具有良好的稳定性和活性。最终,利用亲和层析技术分别对两株是筛选细胞的培养上清进行纯化。其中,犬PD-1胞外区蛋白产率约为7 mg/L,犬PD-L1胞外区蛋白产率约为2.8 mg/L。Western blot结果进一步表明,所获得重组蛋白分别能被对应的商品化抗体所识别,具备良好的免疫原性。本研究成功筛选出稳定表达犬PD-1及PD-L1胞外区的细胞株,并通过真核表达的方式纯化获得了具有良好免疫学原性的犬PD-1、PD-L1胞外区重组蛋白。这为犬PD-1及PD-L1单克隆抗体制备,以及二者相互作用机制等研究奠定基础。

关键词：犬 PD-1 PD-L1 胞外区稳定转染细胞株

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雌二醇依赖性细胞稳定转染克隆株的研究

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中国兽药杂志 2014年第9期48卷 18-22页

作者：李云曾东平曾振灵广东腾骏动物药业股份有限公司广东中山528437 华南农业大学兽医学院广东省兽药研制与安全评价重点实验室广州510642

利用已经构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的表达载体和一个含有鸡溶菌酶基因超敏感位点4(hypersensitivity site 4)的载体pBS-HS4,采用Polybrene的方法进行稳定共转染T47D细胞得到稳定转染细胞株,结果得到了87株稳定转染细胞... 详细信息

利用已经构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的表达载体和一个含有鸡溶菌酶基因超敏感位点4(hypersensitivity site 4)的载体pBS-HS4,采用Polybrene的方法进行稳定共转染T47D细胞得到稳定转染细胞株,结果得到了87株稳定转染细胞株。用10-9mol/L 17β-雌二醇诱导筛选,结果标号为EGFP-T47D 74的克隆细胞株在诱导后72 h及96 h表现出非常强的诱导荧光,而且诱导倍数较大,为3.63倍。结果表明,试验筛选出的稳定转染重组细胞株可供进一步建立细胞表达系统来筛选EEDCs。

关键词： EGFP 表达载体稳定转染细胞株

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猪β防御素2转基因小鼠和猪的制备与抗病性评价

猪β防御素2转基因小鼠和猪的制备与抗病性评价

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作者：杨希华中农业大学

学位级别：博士

细菌耐药性问题严重的威胁着人类和动物的健康。为了减缓细菌耐药性的发展和传播,需要减少抗菌药物的使用。猪β防御素2(PBD-2)大量表达于上皮细胞中,是猪体内的重要防御素。体外实验中,PBD-2对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均呈现出良好... 详细信息

细菌耐药性问题严重的威胁着人类和动物的健康。为了减缓细菌耐药性的发展和传播,需要减少抗菌药物的使用。猪β防御素2(PBD-2)大量表达于上皮细胞中,是猪体内的重要防御素。体外实验中,PBD-2对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均呈现出良好的杀菌活性,且对猪红细胞的溶血活性低。本研究分别制备PBD-2转基因猪肾细胞株、小鼠和猪并评估其对致病菌感染的抗性,为抗病动物的培育奠定基础。1.在猪肾细胞过表达PBD-2能增加细胞的抗菌活性为了研究在细胞中增加表达防御素的影响,本实验利用脂质体将PBD-2表达质粒pcCAG-PBD2转染入猪肾细胞(PK-15)中。用G418筛选出稳定转染的细胞,再通过间接免疫荧光法检测PBD-2蛋白的过表达。取稳定转染细胞的培养上清做抑菌圈实验发现明显可见的抑菌圈,然而细胞裂解液未见抑菌圈。这些结果进一步证实了防御素需要经过翻译后加工才能具有抗菌活性。***-2转基因小鼠对鼠伤寒沙门氏菌感染的抗性尽管PBD-2在体外实验中呈现出高效的杀菌活性,但是由于缺乏合适的体内模型,PBD-2体内的生物学功能少有研究。本研究通过显微注射的方法,构建了表达PBD-2的转基因小鼠,并比较转基因小鼠和同窝野生型小鼠对鼠伤寒沙门氏菌感染的敏感性。结果显示,感染鼠伤寒沙门氏菌后野生型小鼠全部死亡,死亡率为100%,而转基因小鼠有43%存活。PBD-2转基因小鼠小肠末端内鼠伤寒沙门氏菌载菌量显著小于野生型小鼠小肠末端内的载菌量。实验结果证明在小鼠体内表达PBD-2能增强其细菌感染的抵抗力,同时也表明PBD-2在宿主防御中起着重要的作用。***-2转基因猪对胸膜肺炎放线杆菌感染的抗性为了研究在猪体内过表达一种防御素是否能增强机体的抗病力,本实验通过手工克隆的方法获得了过表达PBD-2的转基因猪,并比较转基因猪和野生型猪对传染性胸膜肺炎放线杆菌感染的抗性。与野生型猪相比,PBD-2转基因猪感染传染性胸膜肺炎放线杆菌后,临床症状较轻,肺部损伤区域较少,肺组织内载菌量少。因此,在猪体内过表达PBD-2能增强对细菌感染的抗性。***-2调节LPS诱导的炎性反应本实验发现PBD-2能抑制LPS在小鼠体内或RAW264.7中诱导的促炎性因子TNF-α和IL-6的产生。PBD-2也能抑制LPS诱导的NF-kB启动子的激活和NF-kB p65的磷酸化。但是,PBD-2本身并不影响TNF-α和IL-6的产生、NF-kB启动子的激活或NF-kB p65的磷酸化。进一步研究发现,PBD-2能够与LPS结合,但是LPS的内毒素活性并没有显著变化。实验结果表达PBD-2能抑制LPS诱导的炎性因子的产生。

关键词：猪β防御素2 稳定转染细胞株转基因小鼠转基因猪抗病力

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新型融合蛋白PTD-GRB2-SH2和乳腺癌Ras信号转导的相关研究

新型融合蛋白PTD-GRB2-SH2和乳腺癌Ras信号转导的相关研究

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作者：蔡忠良第四军医大学

学位级别：硕士

生长因子受体连接蛋白2（Grb2）是由一个中央的SH2结构域和两个两端的SH3结构域组成，一端通过SH2结构域激活受体酪氨酸激酶（RTK），另一端通过SH3结构域结合鸟嘌呤核苷酸交换因子（SOS），进一步激活下游通路信号分子，启动MAPK级联... 详细信息

生长因子受体连接蛋白2（Grb2）是由一个中央的SH2结构域和两个两端的SH3结构域组成，一端通过SH2结构域激活受体酪氨酸激酶（RTK），另一端通过SH3结构域结合鸟嘌呤核苷酸交换因子（SOS），进一步激活下游通路信号分子，启动MAPK级联反应，参与到肿瘤信号转导过程中。本实验从Ras信号通路中的重要分子Grb2的SH2结构域切入，以基因到蛋白水平两种不同层次的干预方式为结合点，重点阐明Grb2-SH2结构域在乳腺癌细胞中的功能和地位，并采取基因重组的方法构建含有Grb2－SH2结构域和PTD结构域的融合蛋白，构建好的融合蛋白通过PTD结构域穿膜进入到细胞内，根据SH2结构域结合底物的活性竞争结合底物分子的机制影响乳腺癌的增殖信号转导过程，从而达到干预肿瘤细胞生物学行为的目的。实验主要分为三部分： 1.构建含有Grb2的SH2结构域的原核融合蛋白载体pET-16b-PTD-Grb2–SH2及其突变体对照载体，通过酶切、DNA电泳及质粒测序鉴定分子量和序列均正确无误后，用IPTG诱导原核蛋白表达，并经过镍柱纯化获取原核融合蛋白pET-16b-PTD-GRB2-SH2，SDS-PAGE凝胶分析此纯化蛋白确有表达并且分子量与预期一致。 2.将纯化好的蛋白及其突变体对照蛋白加到培养的乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231细胞中，通过MTT实验、Transwell肿瘤迁徙实验、流式细胞凋亡检测和EdU增殖实验证明原核融合蛋白PTD-GRB2-SH2对乳腺癌细胞系MCF7和MDA-MB-231细胞的增殖以及迁移能力都有一定的抑制作用，但对凋亡有促进作用。 3.应用Gateway系统构建含有Grb2的SH2结构域的真核融合蛋白载体plenti-PTD-Grb2–SH2及其突变体对照载体，通过酶切、DNA电泳及质粒测序鉴定分子量与序列正确无误后，利用三种慢病毒包装质粒转染后收取含病毒颗粒的上清，感染T淋巴瘤细胞系Jurkat细胞，用药物Blasticidin筛选稳定转染细胞株，Western blotting检测该基因修饰的Jurkat细胞能产生和分泌目的蛋白，从而证明真核融合蛋白表达载体构建完成。

关键词：受体酪氨酸激酶生长因子受体连接蛋白2 穿膜结构转导域融合蛋白乳腺癌 Ras信号通路原核表达 Gateway系统慢病毒包装稳定转染细胞株

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赖氨酸特异性去甲基化酶1参与卵巢癌细胞对顺铂敏感性的研究

赖氨酸特异性去甲基化酶1参与卵巢癌细胞对顺铂敏感性的研究

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作者：万晓蕾江苏大学

学位级别：硕士

目的初步研究传统化疗药物顺铂对上皮源性卵巢癌细胞SKOV3中组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(Lysine Specific Demethylase 1,LSD1)蛋白表达量的调节及其对肿瘤细胞形态功能学的影响;运用基因分子克隆技术构建LSD1干扰及过表达的卵巢癌... 详细信息

目的初步研究传统化疗药物顺铂对上皮源性卵巢癌细胞SKOV3中组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(Lysine Specific Demethylase 1,LSD1)蛋白表达量的调节及其对肿瘤细胞形态功能学的影响;运用基因分子克隆技术构建LSD1干扰及过表达的卵巢癌稳定转染细胞株,分别从细胞增殖、迁移和凋亡三方面探讨靶向调控LSD1基因表达在卵巢癌细胞对顺铂敏感性中的作用。方法(1)观察在浓度梯度的顺铂处理下卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、凋亡的形态功能学变化,采用Western blot法检测不同浓度顺铂影响下三大功能学相关指标蛋白水平的改变和LSD1及其特异性反应底物组蛋白H3K4甲基化蛋白表达量的变化情况,并筛选出顺铂作用的最佳浓度,用于后续实验研究。(2)扩增、抽提LSD1干扰和过表达质粒,通过琼脂糖凝胶电泳法测定所提各质粒的纯度和验证碱基量的大小。采用Lipofectamine 2000脂质体转染法进行慢病毒包装,获得两种高滴度的LSD1干扰和过表达慢病毒颗粒,分别感染卵巢癌SKOV3细胞,经嘌呤霉素筛选获得沉默LSD1表达的稳定转染细胞株、经嘌呤霉素和遗传霉素G418筛选获得LSD1过表达的稳定转染细胞株,选择多西环素最适工作浓度并诱导卵巢癌细胞中目的基因序列的表达,运用Western blot法鉴定两种SKOV3体外稳转细胞模型是否成功构建。(3)将LSD1干扰和过表达的SKOV3稳转细胞模型作为研究对象,按多西环素(Dox)诱导/不诱导、顺铂(Cisplatin)处理/不处理分为四组,通过MTT实验和Ed U试剂盒检测肿瘤细胞增殖能力的变化、Transwell小室实验观测肿瘤细胞迁移能力的改变、Annexin V/PI双标法细胞染色并经流式细胞仪上机检测细胞凋亡的情况。此外,进一步通过Western blot法从分子水平检测细胞增殖、迁移、凋亡相关蛋白相对表达量的变化情况,从而探究靶向调控LSD1基因表达在卵巢癌细胞对顺铂敏感性中的作用。结果(1)从形态功能学和蛋白表达水平分析,在顺铂作用下卵巢癌细胞增殖、迁移能力明显减弱、细胞凋亡数量显著增加;肿瘤细胞中LSD1相对表达量以顺铂浓度依赖的方式降低,其特异性反应底物H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量逐渐升高,而H3K4me3无明显变化趋势。(2)实验所构建的慢病毒介导干扰LSD1的卵巢癌稳转细胞株在经多西环素诱导后LSD1相对表达水平降低,而过表达的SKOV3细胞株经诱导后可见LSD1的相对表达水平升高,表明成功干预LSD1基因在卵巢癌细胞SKOV3中的表达。(3)慢病毒沉默LSD1表达的卵巢癌SKOV3细胞株中,干扰LSD1的表达可以抑制细胞增殖、迁移,并促进细胞凋亡;而LSD1过表达细胞株则与之相反,可以促进细胞生长、迁移,抑制细胞的程序性死亡。此外,沉默LSD1的表达可以促进顺铂所诱导的细胞凋亡,增加顺铂对肿瘤细胞的增殖和迁移抑制率;而LSD1的过表达则增加了卵巢癌细胞对顺铂的抵抗作用。结论本研究证实顺铂能够调节SKOV3细胞中LSD1及其甲基化底物H3K4me1、H3K4me2的表达,抑制细胞增殖、迁移能力,并促进细胞凋亡;成功构建靶向干扰和过表达LSD1的两种卵巢癌SKOV3体外稳定转染细胞模型,分别能有效沉默和过表达肿瘤细胞中的靶基因LSD1;靶向干扰LSD1的表达能协同增加顺铂抑制细胞增殖、迁移以及诱导细胞凋亡的能力,能增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,增强顺铂对肿瘤细胞的杀伤力;而LSD1过表达能拮抗顺铂促进细胞凋亡的能力,降低顺铂对癌细胞生长和迁移的抑制率,增加卵巢癌细胞对顺铂的耐受和抵抗。以上的实验研究发现为LSD1的原癌基因性质提供了新的依据。

关键词： LSD1 基因分子克隆卵巢癌细胞系SKOV3 稳定转染细胞株顺铂敏感性

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DDX20基因对胃癌细胞迁移能力的调控作用

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生物技术通讯 2017年第5期28卷 604-609页

作者：刘骏周春艳金丽陈钢肖倩朱焕章复旦大学生命科学学院上海复百澳生物科技有限公司耶鲁大学医学院

目的:基于细胞划痕实验研究DDX20基因对胃癌细胞迁移能力的调控作用。方法:首先采用实时定量PCR检测人胃黏膜细胞GES,胃癌细胞MGC803、SGC7901和MKN74中DDX20基因的表达水平,确定DDX20基因高表达和低表达细胞株;进而针对DDX20基因设计... 详细信息

目的:基于细胞划痕实验研究DDX20基因对胃癌细胞迁移能力的调控作用。方法:首先采用实时定量PCR检测人胃黏膜细胞GES,胃癌细胞MGC803、SGC7901和MKN74中DDX20基因的表达水平,确定DDX20基因高表达和低表达细胞株;进而针对DDX20基因设计并包装过表达及干扰慢病毒,基于实时定量PCR和Western印迹筛选稳定转染细胞株;基于稳定转染细胞株进行细胞划痕实验并采集图片。结果:与正常的胃黏膜细胞GES相比,DDX20基因在MGC803胃癌细胞中表达水平最高,在MKN74胃癌细胞中表达水平次之,在SGC7901胃癌细胞中表达水平最低。转染DDX20过表达慢病毒后,DDX20基因及蛋白表达水平显著增加;转染DDX20干扰慢病毒,特别是sh-RNA-02干扰慢病毒后,DDX20基因及蛋白表达水平显著降低。过表达DDX20基因能显著促进胃癌细胞的迁移,抑制DDX20基因的表达可显著降低胃癌细胞的迁移。结论:DDX20基因是一个肿瘤转移相关基因,通过抑制该基因的表达能有效降低细胞的迁移,为胃癌的临床治疗提供了一个潜在靶点,具有一定的临床应用价值。

关键词：胃癌细胞 DDX20[DEAD(Asp-Glu-Ala-Asp)boxpolypeptide20] 稳定转染细胞株细胞迁移

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DDX20基因对胃癌细胞迁移能力的调控作用

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生物技术进展 2017年第4期7卷 331-337页

作者：刘骏周春艳金丽陈钢肖倩朱焕章复旦大学生命科学院上海200438 上海复百澳生物科技有限公司上海201210 耶鲁大学医学院美国康涅狄格州纽黑文06520

基于细胞划痕实验研究了DDX20基因对胃癌细胞迁移能力的调控作用。首先采用实时定量PCR检测人胃粘膜细胞GES、胃癌细胞MGC803、SGC7901和MKN74中DDX20基因的表达水平,确定DDX20基因高表达和低表达细胞株;进而针对DDX20基因设计、包被过... 详细信息

基于细胞划痕实验研究了DDX20基因对胃癌细胞迁移能力的调控作用。首先采用实时定量PCR检测人胃粘膜细胞GES、胃癌细胞MGC803、SGC7901和MKN74中DDX20基因的表达水平,确定DDX20基因高表达和低表达细胞株;进而针对DDX20基因设计、包被过表达并干扰慢病毒,基于实时定量PCR和Western Blot筛选稳定转染细胞株;基于稳定转染细胞株进行细胞划痕实验并采集图片。结果显示,与正常的胃粘膜细胞GES相比,DDX20基因在MGC803胃癌细胞中表达水平最高、MKN74胃癌细胞中表达水平次之、SGC7901胃癌细胞中表达水平最低。转染DDX20过表达慢病毒后,DDX20基因及蛋白表达水平显著增加;转染DDX20干扰慢病毒后,DDX20基因及蛋白表达水平显著降低,特别是转染干扰组2干扰慢病毒。过表达DDX20基因能显著促进胃癌细胞的迁移,抑制DDX20基因的表达可显著降低胃癌细胞的迁移。结果表明,DDX20基因是一个肿瘤转移相关基因,通过抑制该基因的表达能有效降低肿瘤细胞的迁移,为胃癌的临床治疗提供了一个潜在靶点,具有一定的临床应用价值。

关键词：胃癌细胞 DDX20 稳定转染细胞株细胞迁移

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锌带蛋白(ZNRD1)小干扰RNA对HL-60/VCR细胞耐药性逆转的研究

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沈阳部队医药 2005年第5期18卷 301-304页

作者：朴瑛刘丽梅洪流周凡刘彦琴刘景华白颖沈阳军区总医院血液科 110016 第四军医大学西京医院消化内科

为探讨以锌带蛋白(ZNRD1)基因作为靶分子进行白血病多药耐药基因治疗的可行性,以Western blot检测ZNRD1在白血病细胞中的表达;构建ZNRD1基因的小干扰RNA载体并将其转导入HL-60/VCR细胞,G418筛选稳定转染细胞株;MTT法检测细胞转染前后生... 详细信息

为探讨以锌带蛋白(ZNRD1)基因作为靶分子进行白血病多药耐药基因治疗的可行性,以Western blot检测ZNRD1在白血病细胞中的表达;构建ZNRD1基因的小干扰RNA载体并将其转导入HL-60/VCR细胞,G418筛选稳定转染细胞株;MTT法检测细胞转染前后生长速度和药物敏感性的变化;western blot检测细胞转染前后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和耐药相关蛋白P-gp,MRP的表达变化。结果表明,ZNRD1在HL-60/ VCR细胞中的表达明显高于HL-60细胞;转染后的细胞对长春新碱和阿霉素的敏感性增强,且低表达P-gp 和Bcl-2。结论:该小干扰RNA真核表达载体能在一定程度上逆转白血病细胞的耐药性。

关键词：白血病多药耐药锌带蛋白 RNA干扰 HL-60/VCR 细胞耐药性逆转小干扰RNA ZNRD1基因稳定转染细胞株 blot检测

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