检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：唐铁龙四川大学

学位级别：博士

目的缺血再灌注损伤(Ischemic reperfusion injury，IRI)是导致急性肾功能衰竭的主要原因之一，也是移植肾功能延迟恢复重要的非抗原依赖性因素，并可增加慢性移植物肾病发病的危险指数。目前国内外针对IRI的防治措施包括缺血前干预... 详细信息

目的缺血再灌注损伤(Ischemic reperfusion injury，IRI)是导致急性肾功能衰竭的主要原因之一，也是移植肾功能延迟恢复重要的非抗原依赖性因素，并可增加慢性移植物肾病发病的危险指数。目前国内外针对IRI的防治措施包括缺血前干预(缺血预适应、药物预处理、缩短缺血时间等)和缺血后干预(低温保存，灌注液灌洗，低温灌注、控制灌注压灌注、乏氧血灌注等)，但是仍旧无法彻底防治IRI。多数药物是针对IRI的某一特定环节发挥作用，缺血预适应受到缺血不可预见性的限制，乏氧、低温、低压灌注存在操作复杂、不易控制的缺点。2003年，Zhao等在大鼠心脏IRI模型上证实了在缺血后再灌注之前进行反复短暂的血流阻断干预处理(缺血后适应)可以减轻IRI。随后的研究进一步证实了缺血后适应对狗、大鼠和兔的心脏和大鼠肝脏IRI的保护作用。本课题在建立大鼠肾脏热IRI模型的基础上，进一步研究缺血后适应对大鼠肾脏热IRI的防治效果和作用机制。方法 1．健康Wistar大鼠用于建立大鼠肾脏热叫模型和缺血后适应模型

关键词：肾脏缺血再灌注损伤缺血后适应凋亡过氧化损伤腺苷

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肺栓塞缺血—再灌注损伤及防治的影像学实验研究

肺栓塞缺血—再灌注损伤及防治的影像学实验研究

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作者：李建军首都医科大学

学位级别：博士

目的建立一种良好的适合进行影像学实验研究的肺栓塞缺血-再灌注损伤动物模型。材料与方法健康杂种犬20只，雌性10只，雄性10只，体重17-20 Kg，平均18.565±0.806 Kg。采用Seldingcr技术穿刺右颈内静脉，置鞘... 详细信息

目的建立一种良好的适合进行影像学实验研究的肺栓塞缺血-再灌注损伤动物模型。材料与方法健康杂种犬20只，雌性10只，雄性10只，体重17-20 Kg，平均18.565±0.806 Kg。采用Seldingcr技术穿刺右颈内静脉，置鞘，经鞘置入Swan-Ganz导管，用其球囊栓塞犬的右肺下叶动脉4小时，然后再撤除球囊，使血流再灌注4小时，制成肺栓塞缺血-再灌注损伤模型。最后通过股静脉注射氯化钾处死犬，于胸骨正中迅速开胸，将心肺取出，并把肺组织送检病理和电镜检查。结果成功制作犬的闭胸式活体肺栓塞缺血-再灌注损伤模型20只，病理和电镜扫描显示符合缺血-再灌注损伤的变化，即渗透性肺水肿。结论犬的闭胸式活体肺栓塞缺血-再灌注损伤模型可真实模拟肺栓塞缺血再灌注损伤的病理生理过程，是一种良好的适合进行影像学实验研究的动物模型。目的探讨肺栓塞缺血-再灌注损伤的发病机制；研究氧自由基清除剂伊达拉奉能否防治肺栓塞缺血-再灌注损伤及其疗效；对肺栓塞缺血-再灌注损伤进行影像学评价。材料与方法健康杂种犬20只，雌性10只，雄性10只，体重17-20 Kg，平均18.565±0.806 Kg。采用Seldinger技术穿刺右颈内静脉，置鞘，经鞘置入Swan-Ganz导管，用其球囊栓塞犬的右肺下叶动脉4小时，然后再撤除球囊，使血流再灌注4小时，制成肺栓塞缺血-再灌注损伤模型。实验分为4组，每组5只犬，分别为：第一组为对照组，缺血时和再灌注时均不使用伊达拉奉；第二组为缺血组，即缺血时使用伊达拉奉，再灌注时不使用；第三组为再灌注组，即缺血时不使用伊达拉奉，再灌注时使用；第四组为缺血再灌注组，即缺血时和再灌注时均使用伊达拉奉。每组又分为缺血前、缺血4小时和再灌注4小时三个时间点。给药时间为缺血即刻和再灌注即刻；给药途径为静脉快速滴注；用量为3mg/Kg，药物溶解于100ml生理盐水中。在正常、栓塞即刻和再灌注4小时三个时间点进行主肺动脉造影；在缺血前、缺血4小时和再灌注4小时三个时间点进行肺部薄层和高分辨率CT平扫及CT灌注扫描，应用perfusion3软件测量右下叶局部肺实质的血流量(blood flow，BF)、血容量(blood volume，BV)和平均通过时间(mean transit time，MTT)。同时抽取股静脉血制作血清送检谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌苷(Cr)和尿素氮(BUN)，测定血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)，并抽取股动脉血送检血气分析；监测主肺动脉压。最后通过股静脉注射氯化钾处死犬，于胸骨正中迅速开胸，将心肺取出，把肺、心、肝、肾、小肠组织送检病理，并把肺组织送检电镜，取双下叶部分肺组织测肺湿干重比。结果 1.再灌注4小时CT主要表现为右侧下叶的肺水肿； 2.右肺CT灌注扫描组间比较显示缺血前和缺血4小时对照组、缺血组、缺血再灌注组和再灌注组各组间的BF、BV、MTT均无统计学差异；再灌注4小时缺血再灌注组与再灌注组间的BF和MTT无统计学差异，余各组间BF和MTT均有显著性差异，而BV各组间均无统计学差异；组内比较对照组和栓塞组内缺血前和再灌注4小时间的BF、MTT有显著性差异，BV无统计学差异；缺血再灌注组和再灌注组内的BF、MTF、BV均无统计学差异。左肺CT灌注扫描组间比较和组内比较各组间的：BF、 BV、MTT均无统计学差异。 3．缺血前、缺血即刻和再灌注4小时肺动脉造影未见特异性异常征象。 4．肝功能检查组间比较显示缺血前和缺血4小时各组间的ALT、AST均无统计学差异，再灌注4小时对照组内的ALT、AST显著高于其它三组。组内比较显示对照组内再灌注4小时的ALT、AST明显升高，而其它三组三个时间点的ALT、AST均无统计学差异。肾功能无论组间比较还是组内比较均无统计学差异。 5．免疫学检查组间比较显示缺血前和缺血4小时各组间的SOD，MDA，TNF-α均无统计学差异；再灌注4小时各组间的SOD，MDA，TNF-α均有显著性差异。组内比较显示各组内三个时间点的SOD，MDA，TNF-α均有显著性差异，但缺血再灌注组和再灌注组内再灌注4小时间的SOD均高于缺血前、缺血4小时的值，MDA、TNF-α均低于缺血前、缺血4小时的值。结论 1．再灌注是引起肺栓塞缺血-再灌注损伤的一个主要因素，单纯的缺血不会导致损伤； 2．氧自由基是导致肺栓塞缺血-再灌注损伤的一个重要因素； 3．伊达拉奉是一种氧自由基清除剂，可减轻肺栓塞缺血-再灌注损伤的程度； 4．一侧肺栓塞缺血

关键词：肺栓塞缺血再灌注损伤伊达拉奉 CT灌注成像

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缺血后处理减轻骨骼肌缺血/再灌注损伤的分子机制研究

缺血后处理减轻骨骼肌缺血/再灌注损伤的分子机制研究

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作者：郭晓笋山东大学

学位级别：博士

骨骼肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤常见于溶栓、Fogarty导管取栓、断肢再植、四肢大血管损伤等恢复血流后,是临床亟待解决的重要问题。调动机体内源性保护机制,是减轻I/R损伤最有效的措施。1986年Murry提出缺血预处理&qu... 详细信息

骨骼肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤常见于溶栓、Fogarty导管取栓、断肢再植、四肢大血管损伤等恢复血流后,是临床亟待解决的重要问题。调动机体内源性保护机制,是减轻I/R损伤最有效的措施。1986年Murry提出缺血预处理"ischemic preconditioning (IPC)"的概念。IPC多次短暂的缺血再灌注增强对其之后的较长时间的缺血的耐受性,减轻I/R损伤,已经被成功的应用于临床和实验工作。然而,由于缺血时间不可预测,限制其临床的应用。2003年Zhao提出了缺血后处理的概念(ischemic postconditioning, I-postC),即在再灌注前立刻给予一次或多次短暂重复心肌I/R,能减轻心肌后续长时间再灌注损伤的现象,该现象在小鼠、大鼠、兔、猪心脏缺血和缺血/再灌注模型上被证实,存在于人类心脏血管重建术后；也存在于脊髓、脑、肠、肝、肺等多种器官组织。这种保护现象可以被短暂的缺氧后处理(hypoxic postconditioning, H-postC)所模拟,具有重要的临床应用价值。外科医生可以在择期手术或者急诊手术时进行I-postC,并且I-postC作为“损伤后策略”易于应用于缺血组织。I-postC的保护机制涉及控制灌注条件、减轻微循环功能障碍、稳定细胞内环境、减轻细胞内钙超载和调动机体内源性应激蛋白(热休克蛋白、自由基清除酶、金属硫蛋白等)的合成上调,阐明其机制具有十分重要的意义。微循环直接影响组织器官血氧供应及存活状态。微循环功能障碍是I/R的损伤性表现,也是加重实质细胞I/R损伤的重要因素,改善微循环功能是减轻组织I/R损伤的关键环节和重要机制。但尚未有研究直接证实I-postC对微循环的影响。钙网蛋白(calreticulin, CRT)是内质网(endoplasmic reticulum, ER)/肌浆网内主要的钙结合蛋白,通过协助蛋白质折叠、维持细胞钙稳态参与细胞凋亡调控。钙信号途径是I/R诱导细胞凋亡的关键途径。细胞内钙离子参与调节I/R损伤。最近的研究结果表明,钙调神经磷酸酶(calcineurin, CaN)及其许多CaN依赖的途径的功能都依赖ER内Ca2+稳态和ER相关的Ca2+的结合伴侣。CaN又称蛋白磷酸酶2B(protein phosphatases 2B, PP2B),是目前发现的唯一受Ca2+/钙调素(calmodulin, CaM)调节的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶。CaN是一个包含A(CnA)和B(CnB)亚基的的异源二聚体。CaN在多种细胞过程(包括细胞凋亡、胚胎发育、心脏的生理及代谢调控和癌症)中起着重要作用。环孢素A(cyclosporin A, CsA)与内源性cyclophilin形成复合物,可阻断CaN催化作用,从而抑制细胞因子的转录。既往主要关注CaN在心肌肥大中的作用,近年来发现,CaN参与缺血再灌注损伤,但其作用尚有争议。我们前期研究表明CaN参与I-postC保护心肌作用。基于上述,本工作旨在证实I-postC对于骨骼肌I/R损伤的保护涉及改善微循环的微血管保护和CaN介导的骨骼肌细胞直接保护两个方面。为证实该假说,本工作首先在大鼠后肢I/R损伤模型上证实I-postC对骨骼肌I/R损伤的保护作用及其微血管保护机制；进一步在体外分离培养的大鼠后肢骨骼肌细胞H/R模型上,研究I-postC/ H-postC对骨骼肌细胞H/R损伤的保护作用以及CaN介导H-postC骨骼肌细胞保护分子机制。主要实验方法和结果如下：一、缺血后处理减轻大鼠骨骼肌缺血/再灌注损伤本部分实验旨在观察I-postC/H-postC对骨骼肌I/R或H/R损伤的保护作用。整体实验：健康雄性Wistar大鼠随机分为I/R组、I-postC组、IPC组及假手术组。观察各组血流动力学变化,骨骼肌湿干重比值(wet/dry weight ratio, W/D)测定,骨骼肌组织丙二醛(malondialdehyde, MDA)变化,血浆乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)浓度及骨骼肌形态及超微结构变化。骨骼肌细胞实验：原代培养乳鼠骨骼肌细胞,随机分为(hypoxia/reoxygenation, H/R)组、H-postC组、缺氧预处理(hypoxic preconditioning, HPC)组、正常对照组(CON)。观察各组细胞凋亡率及细胞存活率变化。Western blot分析葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78, GRP78)、CRT以及CaN表达变化。结果显示：①整体实验：I-postC减轻I/R对心功

关键词：缺血再灌注损伤缺血后处理缺血预处理钙调神经磷酸酶

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激活的小胶质细胞在大鼠视网膜缺血再灌损伤模型中的作用

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眼科新进展 2015年第1期35卷 9-14页

作者：李娟娟李燕汤志伟昆明医科大学第一附属医院眼科云南省昆明市650031 昆明医科大学第一附属医院神经外科云南省昆明市650031

目的探讨活化的小胶质细胞在视网膜缺血再灌注损伤过程中的作用。方法前房灌注法建立视网膜缺血再灌注动物模型,在损伤发生后2 h、12 h、24 h、48 h、72 h,采用免疫组织化学染色方法检测特异性抗原标志物CD68的表达,观察活化小胶质细胞... 详细信息

目的探讨活化的小胶质细胞在视网膜缺血再灌注损伤过程中的作用。方法前房灌注法建立视网膜缺血再灌注动物模型,在损伤发生后2 h、12 h、24 h、48 h、72 h,采用免疫组织化学染色方法检测特异性抗原标志物CD68的表达,观察活化小胶质细胞的分布、活化程度等,同时观察相应时间点的视网膜超微结构变化。结果对照组中视网膜小胶质细胞主要位于神经节细胞层。缺血再灌注损伤后2 h组视网膜小胶质细胞的分布部位、表达量等基本与对照组相同;缺血再灌注损伤后12 h组视网膜中CD68+细胞表达增多,内丛状层可见阳性细胞。缺血再灌注损伤后24 h组CD68+细胞表达明显增多,部分向视网膜外层迁移。缺血再灌注损伤后48 h组进入视网膜外层的CD68+细胞多数出现于视网膜内丛状层、内核层、外丛状层。缺血再灌注损伤后72 h组活化小胶质细胞数量达到最高水平。视网膜超微结构显示:缺血再灌注损伤后12 h组开始出现损伤表现,视网膜神经节细胞间隙扩大、光感受器细胞外节膜盘疏松变形、可见散在小胶质细胞;缺血再灌注损伤后24 h组病变继续加重,小胶质细胞数量明显增多;缺血再灌注损伤后72 h组病变继续加重,视网膜神经节细胞数量明显减少,细胞核膜肿胀溶解,细胞器溶解,大鼠视网膜神经节细胞层内可见凋亡小体、小胶质细胞,证明了小胶质细胞对光感受器的损伤作用。结论视网膜缺血再灌注损伤出现明显小胶质细胞活化,活化的小胶质细胞在视网膜超微结构的损伤中发挥着重要作用。

关键词：视网膜小胶质细胞缺血再灌注损伤 CD68 电镜免疫组织化学

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后肾间充质细胞对大鼠缺血再灌注急性肾小管损伤修复作用的实验研究

后肾间充质细胞对大鼠缺血再灌注急性肾小管损伤修复作用的实验研...

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作者：周剑锋第三军医大学

学位级别：博士

背景:肾脏急性肾小管坏死(Acute tubular necrosis,ATN)是引起肾小管功能损害的常见原因,也是由此而引起肾功能衰竭的主要原因,其修复直接关系到肾脏疾病的病程和预后。急性缺血性肾损害,是急性肾小管坏死的主要病因,常常发生于肾动脉... 详细信息

背景: 肾脏急性肾小管坏死(Acute tubular necrosis,ATN)是引起肾小管功能损害的常见原因,也是由此而引起肾功能衰竭的主要原因,其修复直接关系到肾脏疾病的病程和预后。急性缺血性肾损害,是急性肾小管坏死的主要病因,常常发生于肾动脉硬化、肾移植、大量出血而致休克等情况下。肾脏在发生缺血后,肾小管细胞随之发生坏死凋亡,从基底膜脱落或是分化为间充质表型,而分化后的细胞逐渐伸展并迁移至受损肾小管的基底膜处,并最终在此增殖再生而修复受损的肾小管,这就是传统的肾小管自身修复理论。但是仅仅依靠肾脏自身极其有限的修复作用是远远达不到治疗急性肾小管坏死的效果。而目前,临床上对急性肾功能衰竭的治疗仅仅是维持机体内环境的稳定,被动的等待肾脏自身的小管上皮细胞功能恢复,但由于肾小管上皮细胞的修复再生能力极其有限,从而影响了治疗效果。因此研究新的促进肾小管细胞功能恢复的方法,以提高肾脏疾病的治疗效果、缩短病程是迫切需要解决的问题。最近几年来,后肾间充质细胞(metanephric mesenchymal cells,MMCs)在肾脏修复再生中的作用越来越为肾脏病学者所关注,有研究证实在胚胎后肾间充质中存在有多能干细胞,其源自胚胎,无免疫原性或仅具极低免疫原性,是唯一分化形成肾小管上皮细胞的原始细胞。研究还发现后肾间充质细胞有能力跨越谱系界限形成组织器官功能性细胞,并表达组织器官特异性标志蛋白,这些研究结果都显示后肾间充质细胞在肾脏损伤修复中具有诸多潜在优势,很可能成为肾脏修复再生中功能性肾小管上皮细胞的重要来源,后肾间充质细胞移植治疗很可能成为改善急性肾小管坏死预后的重要方法。目的: 在国外研究基础上,改良分离培养大鼠后肾间充质细胞的方法,观察细胞生物学特性,研究后肾间充质细胞对缺血再灌注大鼠损伤肾脏的防护及修复作用,并探讨其可能机制,为进一步研究后肾间充质细胞移植治疗急性肾小管损伤提供实验依据。方法: 1.在解剖显微镜下显微分离孕13d(E13d)大鼠胚胎,获取胚胎后肾并去除输尿管芽,将胚胎后肾间充质组织以直接接种法进行原代培养,细胞传代纯化后以倒置显微镜观察细胞形态演变,四唑盐比色法(MTT)及5-溴脱氧尿嘧啶核苷法(BrdU)观察细胞增殖及更新能力,流式细胞仪检测细胞表面CD29, CD31, CD34, CD45, CD90, CD166分子的表达,免疫细胞技术检测细胞E-cadherin, Vimentin, Fibronectin等蛋白的表达,同时进行细胞多向诱导分化(脂肪细胞、成骨细胞)实验,分别采用油红O染色及碱性磷酸酶染色观察诱导分化情况。 2.建立大鼠急性缺血再灌注肾损伤动物模型,并随机分为MMCs治疗组(MMCs)、I/R对照组(I/R)及假手术组(Sham),治疗组经下腔静脉给予体外标记的培养未分化的后肾间充质细胞,分别于术后24h、48h、72h、96h处死大鼠检测肾功能(BUN、Scr)及肾脏病理改变,原位末端标记法(TUNEL)检测肾小管上皮细胞凋亡坏死情况,免疫组织化学染色法观察凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax表达水平,荧光显微镜观察标记的MMCs在肾组织中的分布情况。结果: 1.培养的MMCs呈贴壁生长,梭形成纤维细胞样,单个核,核仁大,核浆比大,细胞增殖能力强,具有自我更新能力;流式细胞仪检测结果显示,几乎所有细胞都明显表达CD29、CD90和CD166,几乎所有细胞都不表达CD31、CD34和CD45;免疫细胞化学染色及免疫荧光检测结果显示MMCs明显表达间充质细胞标志蛋白vimentin和fibronectin,而不表达上皮细胞标志蛋白E-cadherin;MMCs在特定诱导条件下具有多向分化能力,可以向脂肪细胞、成骨细胞分化,诱导分化后的脂肪细胞油红O染色呈特异性红色,成骨细胞碱性磷酸酶染色呈阳性,并可形成钙结节。体外培养的MMCs形状均一,性状稳定,可以传多代以上而保持其原有表型不变,说明MMCs具有间充质细胞表型及干细胞特性; 2. MMCs移植治疗后可以明显缓解缺血再灌注后急性肾小管损害所引起的肾功能急剧下降,明显减轻肾脏病理损害及肾小管上皮细胞凋亡坏死。血生化结果显示,MMCs组的大鼠在再灌注48h血清BUN及Scr值达到高峰,在随后的再灌注72h及96h则呈明显下降趋势,而I/R组大鼠在再灌注48h后血清BUN及Scr峰值明显高于治疗组,而且在随后的再灌注72h及96h也无明显下降趋势;肾脏病理检查结果也显示,Sham组大鼠肾脏病理无明显异常,MMCs及I/R组大鼠肾小球无明显病理改变,肾小管均出现肾小管上皮细胞水肿、坏死、脱落、管型形成等病理损害,但MMCs组大鼠肾小管损伤程度积分明显低于同时点I/R组大

关键词：后肾间充质细胞缺血再灌注损伤凋亡急性肾小管坏死

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The role of neutrophil in the cerebral injury of ischemia/reperfused diabetic rats

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中国临床康复 2002年第13期6卷 2020-2021页

作者：王文安任惠民吕传真 XinhuaHospital ShanghaiSecondMedicalUniversityShanghai200092China

Objective To explore the role of neutrophil in focal cerebral injury of ischemia/reperfused diabetic rats. Methods The infarction size in diabetic and non diabetic rats with ischemia for 1h/reperfusion for 24 h was evaluated by 2,3,5 triphenyl tetrazolium chloride (TTC) staining. The magnitude of cerebral neutrophil infiltration was quantified by measuring myeloperoxidase (MPO) activity of brain tissue in all rats with ischemia for 1h/ reperfused various periods by the method of enzymology. Results The infarction size in the ipsilateral hemisphere of diabetic rats were more significant than that in the normal rats (P< 0.05). The activity of myeloperoxidase (MPO) in the former was also higher than that in the latter (P< 0.05). Conclusions Diabetes could exacerbate inflammatory response to cerebral ischemia reperfusion and thereby aggravate cerebral injury of ischemia/reperfusion.

关键词：糖尿病脑缺血中性白细胞缺血再灌注损伤

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活性氧对抗缺血/再灌注心肌损伤维护细胞内钙稳态的作用和机制研究

活性氧对抗缺血/再灌注心肌损伤维护细胞内钙稳态的作用和机制研究

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作者：吴兰中国科学院大学

学位级别：博士

目的:活性氧(reactive oxygen species，ROS)同时介导损伤和保护两种截然相反效应的确切机制目前尚不清楚。假设之一是低浓度ROS起保护作用，而过量ROS起损伤作用，但该理论尚不能解释众多抗氧化剂失败的案例。间歇性低压低氧(intermitt... 详细信息

目的:活性氧(reactive oxygen species，ROS)同时介导损伤和保护两种截然相反效应的确切机制目前尚不清楚。假设之一是低浓度ROS起保护作用，而过量ROS起损伤作用，但该理论尚不能解释众多抗氧化剂失败的案例。间歇性低压低氧(intermittent hypobaric hypoxia，IHH)被证明具有独特的对抗心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)损伤作用，其重要机制之一就是减轻I/R导致的Ca2+超载及改善整体心脏和心肌细胞的收缩功能。我们新近发现IHH通过增加再灌注初期内源性ROS的释放，继而激活再灌注损伤补救酶(reperfusion injury salvagekinase，RISK)信号通路保护线粒体、改善缺血后心功能和缩小心梗面积，并且该保护作用可被再灌注初期外源性给予适量过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)模拟。但尚不清楚再灌注初期适度增加的ROS对抗I/R心肌损伤的作用是否通过调控心肌细胞内Ca2+稳态水平来实现的？除了RISK通路，生存活化因子增强信号转导通路(survivor activating factor enhancement，SAFE)，主要是酪氨酸激酶2/信号转导与转录活化因子3(Janus kinase2/signal transducers and activators oftranscription3，JAK2/STAT3)也参与心肌保护作用，但尚不清楚JAK2/STAT3信号通路是否参与了ROS介导的心肌保护作用。同时心肌I/R损伤和保护中STAT3的磷酸化与Ca2+稳态的关系尚未明确。针对这些问题，我们采用多学科的研究手段，旨在明确1）不同浓度H2O2预处理(H2O2 preconditioning，H2O2PC)对心肌I/R损伤与保护的作用;2）不同浓度H2O2后处理(H2O2 postconditioning，H2O2PoC)对心肌I/R损伤与保护的作用;3）IHH升高的再灌注初期ROS能否激活STAT3并减轻心肌I/R导致的Ca2+超载;4）复灌初期加入外源性ROS模拟物H2O2是否能模拟IHH激活STAT3并抑制Ca2+超载的作用;5）心肌保护时再灌注初期ROS激活的STAT3是如何抑制Ca2+超载的。研究发现将揭示ROS激活的STAT3参与IHH心肌保护作用的新机制。\n 方法:雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组(Control)和IHH组，IHH组于低压氧舱接受4周相当5000 m高度(PB=404 mmHg，PO2=84 mmHg)的低压低氧处理，每天4h。低氧暴露结束后，分离Control组和IHH组大鼠心脏，利用Langendorff灌流模型，进行30分钟缺血继之45分钟再灌注，记录心功能变化及心肌梗死面积;利用成体大鼠急性分离的心肌细胞进行模拟缺血(20分钟)/再灌注(30分钟)的损伤，用indo-1作为Ca2+的荧光指示剂，检测胞内钙瞬变、胞浆游离钙(cytosolic free Ca2+ concentration，[Ca2+]c)和线粒体游离钙(mitochondria freeCa2+ concentration，[Ca2+]m)的变化，并同步检测其细胞收缩;为研究ROS同时介导损伤和保护两种截然不同的效应的机制及激活的信号通路，利用不同浓度H2O2 PC/PoC模型验证ROS诱导心肌保护作用的浓度依赖关系，并结合在体心脏注射STAT3-small interfering RNA(STAT3-siRNA)和细胞转染short hairpinRNA-STAT3(shSTAT3)、ROS清除剂，JAK2/STAT3抑制剂的使用并进行了Western blotting、线粒体膜电位、肌浆网钙泵(sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase2，SERCA2)活性、免疫荧光和免疫共沉淀分析。\n 结果:IHH保护I/R心肌收缩功能，抑制细胞钙超载和改善细胞收缩。\n 为明确H2O2PC/PoC是否能模拟IHH的心肌保护作用和明确其适宜浓度范围、并明确ROS介导损伤和保护两种截然不同的效应的浓度依存关系，在整体心脏缺血前加入不同浓度H2O2(1，3，10，20，30，100，300μM)，低浓度(1μM)和高浓度(300μM)H2O2PC加重I/R后心肌收缩损伤，而中等浓度H2O2PC(20-30μM)和H2O2PoC(20μM)可以显著减轻I/R所致的心肌收缩损伤。不同浓度的H2O2PC离体心脏组织中抗氧化酶蛋白和钙调控蛋白表达呈现中等浓度(20-30μM)表达水平最高，而低浓度(1μM)及高浓度(300μM)时无明显影响。在心肌细

关键词：活性氧细胞内钙离子浓度缺血再灌注损伤信号转导与转录活化因子3 心肌保护

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葛根素的吸收动力学及对脑缺血损伤的保护作用研究

葛根素的吸收动力学及对脑缺血损伤的保护作用研究

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作者：潘洪平华中科技大学

学位级别：博士

葛根素是一种多羟基黄酮类化合物,是临床治疗心脑血管病的常用药物之一。葛根素是P-gp的底物,这是造成其跨膜透过性低的重要原因之一。该药物口服吸收差,目前主要通过静脉注射给药,但葛根素注射剂具有较为严重的不良反应,临床应用受限... 详细信息

葛根素是一种多羟基黄酮类化合物,是临床治疗心脑血管病的常用药物之一。葛根素是P-gp的底物,这是造成其跨膜透过性低的重要原因之一。该药物口服吸收差,目前主要通过静脉注射给药,但葛根素注射剂具有较为严重的不良反应,临床应用受限。为了解决其口服生物利用度低的问题,有必要对P-gp抑制剂促进葛根素口服吸收的生物因素进行研究。但是传统的P-gp抑制剂如普罗帕酮、维拉帕米等具有严重的毒副作用(如心脏毒性),为寻求高效、低毒的P-gp抑制剂和有效地提高葛根素的口服吸收利用率,本论文对槲皮素(一种葛根素的结构类似物和P-gp抑制剂)影响葛根素的肠道吸收作用进行了系统研究。此外,还考察了其对葛根素跨膜分布于脑组织的影响,并初步探讨了葛根素保护缺血脑损伤的作用机制。利用大鼠离体肠囊外翻模型,观察槲皮素对葛根素从外翻肠囊黏膜侧到浆膜侧跨膜转运量的变化(吸收作用)和由浆膜侧向黏膜侧进行转运的量变过程(外排作用),并对组间计量资料进行统计学处理和分析。结果发现：①在缺乏P-gp抑制剂影响下,十二指肠、空肠和回肠段对葛根素的透膜吸收作用无明显差异,由于回肠的P-gp表达量最多,故选择回肠段作为评价不同P-gp抑制剂对小肠吸收葛根素和外排葛根素的影响；②吸收试验表明,维拉帕米和槲皮素于药后10min均可明显提高单位面积的葛根素累积吸收量(P<0.01),且各药物组对葛根素的吸收量均随时间延长而明显增加,作用一直延至药后120min。槲皮素高剂量对葛根素的透膜吸收作用明显强于阳性组维拉帕米,药后40min—120min两组比较均有显著意义(P<0.05),槲皮素对葛根素的促吸收作用具有一定的量效关系；③外排试验表明,从0-120min各组的浆膜侧葛根素浓度均随时间延长而明显减少,药后30min各药物组在各取样时间点均可明显增加浆膜侧的葛根素含量,抑制P-gp120min后,阳性组对单位面积葛根素外排剩余量提高率为138.79%,槲皮素高、中、低剂量组的提高率分别为219.06%、107.29%和60.43%。槲皮素高剂量的外排抑制作用强于维拉帕米(P<0.01),槲皮素对葛根素的外排抑制作用具有一定的量效关系；④葡萄糖吸收试验表明,0→120min内,肠浆膜侧内液具有明显的逆浓度差聚集葡萄糖的作用,均达3倍以上,证明所用的实验肠段具备组织完整性和生理活性。上述研究结果表明,槲皮素具有通过抑制P-gp而促进葛根素的肠道吸收作用。采用大鼠在体回肠单向灌流模型和重量法,进一步计算和表征葛根素的吸收百分率Pa%、吸收速率常数Ka值和表观吸收系数Peff值等相关肠道吸收速率和渗透性参数,结果发现：①葛根素在肠灌流液中6h内保持良好的稳定性,提示实验时程内进行葛根素含量测定其质量稳定可控；②各实验组的灌流出口液葛根素浓度与灌流进口液葛根素浓度之比(Cout／Cin)在取样的135min内基本保持一致,各组的组内净水流量NWF值均无显著差异,提示取样前的灌流平衡时间可使肠道的药物吸收及水分吸收达到平衡状态；③维拉帕米和槲皮素均可显著提高Ka、Peff和Pa%值(P<0.01),槲皮素高剂量的作用强于维拉帕米(P<0.01),槲皮素的作用具有一定的量效关系；④根据灌流液校正密度计算所得的Pa%、Ka、Peff值对于低吸收率药物,影响较大,为减少实验结果的系统误差,有必要对灌流进出液的密度进行修正。上述研究结果表明,槲皮素具有通过抑制P-gp而提高葛根素的肠道吸收速率和渗透性的作用。以小鼠整体动物实验结合前述的体外法和原位实验模型法对葛根素的肠道吸收作用进行初步体内评价。结果发现：①灌胃给予葛根素后其血药浓度经时变化规律符合二室模型,t1／2Ka=5.565±5.094min,Ka=0.152±0.084min-1；②与阴性组比较,维拉帕米和槲皮素组均具有明显增大吸收分数F值和显著增加AUC值的作用,分别将AUC(0-t)提高了33.03%和156.46%,将AUC(0-∞)提高了37.04%和164.27%,还分别将AUC(0-Tmax)提高了38.57%和110.28%,槲皮素组的AUC(0-t)、AUC(0-∞)和AUC(0-Tmax)均明显高于维拉帕米组(P<0.01)；③槲皮素组对MRT(0-t)和MRT(0-∞)分别提高了23.60%和40.24%,作用强于维拉帕米组；④槲皮素组的Tmax与阴性组比较无显著意义,两者均大于维拉帕米组；⑤维拉帕米组和槲皮素组将Cmax分别提高了48.39%和50.26%(P<0.01)；⑥统计矩所得参数与房室模型的相应参数相近,差异均无显著性意义。上述研究结果表明,葛根素口服吸收比较快,维拉帕米和槲皮素通过抑制P-gp均可明显提高葛根素的AUC值,槲皮素还可延长MRT值。以大鼠整体动

关键词： P-糖蛋白葛根素槲皮素维拉帕米离体外翻小肠模型在体小肠单向灌流模型小鼠体内法大鼠体内法药物肠道吸收吸收动力学药物动力学脑组织分布急性脑缺血缺血再灌注损伤热休克蛋白70 Fas蛋白

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预处理、后处理和Ang-（1-7）对肥厚心肌缺血/再灌注损伤的影响

预处理、后处理和Ang-（1-7）对肥厚心肌缺血/再灌注损伤的影响

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作者：彭龙云中山大学

学位级别：博士

缺血性心脏病是威胁人类健康的主要心血管疾病，而心肌梗死又常常是其严重的、致命性的结局。溶栓药物的不断开发、心血管介入技术以及冠状动脉旁路移植术的长足进步为心肌梗死的再灌注治疗提供了多种有效的方法，降低了心肌梗死的死亡... 详细信息

缺血性心脏病是威胁人类健康的主要心血管疾病，而心肌梗死又常常是其严重的、致命性的结局。溶栓药物的不断开发、心血管介入技术以及冠状动脉旁路移植术的长足进步为心肌梗死的再灌注治疗提供了多种有效的方法，降低了心肌梗死的死亡率，改善了病人的预后。然而，在再灌注治疗的过程中，再灌注本身也会带来心肌损伤，即再灌注损伤。这也是制约接受再灌注治疗的心肌梗死病人预后进一步改善的重要因素。因此，如何防治心肌缺血/再灌注损伤至今仍是心血管研究领域的重要课题。缺血预处理(preconditioning)由Murry及其同事于1986年首先提出，是一种对抗缺血、缺血/再灌注损伤的内源性保护形式，可以降低心脏缺血、缺血/再灌注心律失常的发生率和严重程度，减少缺血/再灌注所致心肌细胞凋亡，减小心肌梗死的面积，促进心脏功能的恢复。缺血后处理(postconditioning)是近年来才提出的另外一种内源性心脏保护形式，是指在心脏较长时间缺血后再灌注时，首先给予心脏数次短时间的再灌注/缺血循环，然后才给予心脏充分的再灌注。目前研究显示，缺血后处理与缺血预处理对心肌缺血/再灌注具有相似的保护作用。尽管缺血预处理、缺血后处理对于正常心脏的缺血/再灌注损伤具有较强的保护作用。然而，缺血预处理、缺血后处理的保护机制与Ang-(1-7)的保护机制显然不尽相同。血管紧张素转化酶抑制剂或血管紧张素Ⅱ受体阻断剂能够增强缺血预处理的心肌保护作用或降低缺血预处理保护作用产生的阈值。缺血预处理或缺血后处理与Ang-(1-7)联合应用是否会产生相加或协同效应?这一问题也值得研究。我们通过制作大鼠腹主动脉缩窄致心肌肥厚模型，并在此基础上利用Langendorff装置建立心肌肥厚大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤模型，分别给予缺血预处理、缺血后处理、Ang-(1-7)单独或联合处理，探讨缺血预处理、缺血后处理和Ang-(1-7)对肥厚心肌缺血/再灌注损伤的影响及其相关机制，同时探讨缺血预处理或缺血后处理与Ang-(1-7)联合应用对肥厚心肌缺血/再灌注损伤的影响。本研究包括四个部分：第一部分：缺血预处理对心肌肥厚大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的作用。第二部分：缺血后处理对心肌肥厚大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的作用。第三部分：血管紧张素-(1-7)对心肌肥厚大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响及其机制。第四部分：缺血预处理或缺血后处理与血管紧张素-(1-7)联合应用对肥厚心肌缺血/再灌注损伤的影响。第一部分缺血预处理对心肌肥厚大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的作用目的探讨缺血预处理对心肌肥厚大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的作用。方法通过手术缩窄腹主动脉，制作大鼠心肌肥厚模型，然后利用Langendorff装置进行心肌肥厚大鼠离体心脏缺血30min/再灌注60min。结果缺血/再灌注30min后，各组离体心脏CF、HR、LVSP均有明显降低(P＜0.01)，LDH、CK的释放明显增多(P＜0.01)。与缺血/再灌注对照组相比，缺血预处理组心脏CF、LVSP、HR均有显著提高(P＜0.01)，CK、LDH释放减少(P＜0.01)，心肌梗死范围减小(44.2％±1.1％vs21.5％±1.1％，P＜0.01)，心肌Akt、GSK-3β磷酸化水平增高(P＜0.01，P＜0.05)。Wortmannin能够抑制缺血预处理所致的Akt、GSK-3β磷酸化，但只能部分消除缺血预处理的心脏保护效应。结论缺血预处理能够减轻心肌肥厚大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤，PI3K/Akt/GSK-3β信号通路参与介导缺血预处理对离体缺血/再灌注心肌肥厚大鼠心脏的保护作用。第二部分缺血后处理对心肌肥厚大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的作用目的探讨缺血后处理对心肌肥厚大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的作用。方法通过手术缩窄腹主动脉，制作大鼠心肌肥厚模型，然后利用Langendorff装置进行心肌肥厚大鼠离体心脏缺血30min/再灌注60min。观察离体缺血/再灌注心脏LVSP、HR、CF的变化和CK、LDH的释放，并在离体心脏灌流结束时用TTC染色法测定心肌梗死范围，利用Western-blot技术检测心肌Akt、GSK-3β的蛋白表达和磷酸化状态。结果与缺血/再灌注对照组相比，缺血后处理组心脏LVSP、CF、HR显著

关键词：心肌肥厚缺血再灌注损伤缺血预处理血管紧张素蛋白激酶B

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阻断腺苷A<,2A>受体对小鼠大脑中动脉缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制探讨

阻断腺苷A<,2A>受体对小鼠大脑中动脉缺血/再灌注损伤的保护作用...

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作者：桂莉第三军医大学

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缺血性卒中是一类常见于中老年人的严重疾病，具有发病率高、死亡率高的特点。即使幸存，也大多遗留永久性残疾。它不仅严重威胁人类健康，还给社会和家庭造成巨大的负担。目前治疗急性脑缺血的措施主要包括早期血供的恢复与缺血... 详细信息

缺血性卒中是一类常见于中老年人的严重疾病，具有发病率高、死亡率高的特点。即使幸存，也大多遗留永久性残疾。它不仅严重威胁人类健康，还给社会和家庭造成巨大的负担。目前治疗急性脑缺血的措施主要包括早期血供的恢复与缺血神经元的保护治疗。但恢复血液再灌注促进神经功能恢复的治疗措施具有严格的时间窗限制(<3h)，病人往往因为各种原因错过了最佳的治疗时机。而超过治疗时间窗再恢复血流，不但不能减轻因缺血造成的神经元损伤，反而可能因为再灌注引起的系列病理效应造成更为严重的伤害。而在缺血性脑保护方面，至今尚无确切有效的方法被临床采纳。临床研究未能证实自由基清除剂、钙离子拮抗剂和谷氨酸受体抑制剂等在动物实验证实有效的脑保护药物对脑梗死患者有效。因此探索新的治疗缺血性卒中的方法非常必要。腺苷(Adenosine，ADO)广泛存在于各种组织器官中，调节各种重要的生理功能。在中枢神经系统(central nervous system，CNS)腺苷是一种重要的神经调质，通过与其特异的受体结合参与了多种神经系统疾病的病理生理过程，如Parkinson病、Alzheimer病和睡眠障碍等。目前已明确的腺苷受体有4种亚型，即AiR、A2AR、A2BR和A3R。其中，A1R、A2AR与腺苷的亲和力最强，且在脑内的分布及数量也远远超过其他两种受体。动物实验研究发现在局灶性脑缺血发生后，脑内腺苷水平迅速升高。因此推测腺苷及其受体在缺血性脑损伤的发生中扮演着重要角色。研究表明当腺苷A1R被激活时对脑缺血具有神经保护作用，但激活A1R后严重的外周效应，如镇静、心动过缓、低血压等却限制了它在脑缺血治疗中的应用。近期研究发现，阻断腺苷A2A受体对急性缺血性脑损伤具有显著的神经保护作用，减小脑梗死体积，促进神经功能恢复。但其具体机制仍未明确。对A2A受体的研究发现，无论在生理或缺血状态下腺苷或A2AR模拟剂作用于神经元突触前膜上的A2A受体能增加谷氨酸释放进入突触间隙。此外，腺苷或A2AR模拟剂作用于小胶质细胞上的A2A受体可以促进其增生和活化，促使炎症因子释放增多，从而增强局部炎症反应。因而推测阻断A2A受体对缺血性脑损伤的保护作用机制可能包括：(1)抑制谷氨酸的释放；(2)减轻局部炎症反应而减轻缺血触发的炎性损害。遗憾的是，至今罕有直接证据证明阻断腺苷A2A受体后产生的神经保护作用与抑制了谷氨酸的过度释放有关，更不明确对谷氨酸释放的影响发生在缺血期还是再灌注期。也不明确阻断腺苷A2A受体对局部炎性过程的影响是否减轻缺血性脑损伤。本研究观察A2AR基因敲除对脑缺血及再灌注诱发的脑内氨基酸递质释放的影响，以及对脑缺血/再灌注后脑内炎性反应的调控及其与脑损伤的关系，以探讨阻断腺苷A2A受体对缺血性脑损伤的保护作用机制。方法：引进腺苷A2AR基因敲除(A2AR gene knockout，A2AR/KO)杂合子小鼠交配繁殖，PCR法鉴定A2AR/KO小鼠和野生型(wild-type littermates，A2AR/WT)小鼠。参照Huang等方法制备大脑中动脉局灶缺血模型(middle cerebral artery occlusion，MCAo)。分别测定A2AR/KO小鼠与A2AR/WT小鼠在缺血期与再灌注期神经功能缺损程度；甲酚紫染色(Cresyl violet stain，CV stain)结合图像分析方法测定脑梗死体积，观察A2AR缺失对缺血期及再灌注期脑梗死体积的影响。运用活体微透析技术动态收集两组小鼠在缺血前、缺血中及再灌注后纹状体区细胞外液，并结合改良的高效液相色谱荧光法(high performance liquid chromatography- fluorescence，HPLC-FL)检测微透析液中谷氨酸、天冬氨酸、gamma-aminobutyric acid(GABA)与甘氨酸浓度。免疫组化与免疫荧光染色技术观察腺苷A2AR缺失对缺血/再灌注后梗塞周边区小胶质细胞与星形胶质细胞数量与形态变化的影响。结果： 1.稳定地建立了小鼠MCAo模型，建模成功率为90％，建模后神经功能评分在1-3分的小鼠所占比例为91.1％。经2，3，5-三苯基氯化四氮唑(2，3，5-TriphenyltetrazoliumChloride，TTC)染色或CV染色证实MCAo后评分在1-3分的小鼠在缺血侧MCA供血区脑梗死部位与范围较固定。 2.建立了一种稳定的能同时测定脑组织细胞外液中多种氨基酸的HPLC-FL方法。该方法能在18min内完成样品检测，快速、有效地将样品中谷氨酸、天冬氨酸、GABA、甘氨酸等多种氨基酸类物质分离，出峰好，重复性强、精密度高。 3.脑缺血及再灌注后缺血中心区细胞外液谷氨

关键词：脑梗死谷氨酸阻断腺苷A2A受体缺血再灌注损伤神经保护

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