检索结果-内蒙古大学图书馆

标记免疫分析与临床 2004年第2期11卷 107-109,115页

作者：刘暘郑敏浙江大学医学院附属第二医院杭州310009

血管内皮细胞生长因子-A(vascularendothe lialgrowthfactor-A ,VEGF -A)是70年代末期发现的一种肿瘤细胞分泌的具有多种功能的细胞因子,它是VEGF家族中最早的成员,是正常血管发生和血管形成所必需的。除了增加微血管的通透性外,VEGF -... 详细信息

血管内皮细胞生长因子-A(vascularendothe lialgrowthfactor-A ,VEGF -A)是70年代末期发现的一种肿瘤细胞分泌的具有多种功能的细胞因子,它是VEGF家族中最早的成员,是正常血管发生和血管形成所必需的。除了增加微血管的通透性外,VEGF -A还可刺激内皮细胞迁移分化,保护它们避免凋亡和衰老。　　1　VEGF -A结构VEGF家族包括VEGF -A、B、C、D、E和胎盘生长因子(PLGF) ,目前研究较多的是VEGF -A。PLGF主要表达在胎盘,在病理性血管形成过程中,它可促进VEGF -A活化。VEGF -A是一种高度保守的由二硫键相连的二聚体糖蛋白,由两条反向平行的链组成,分子量34- 45kD。基因位于第6号染色体短臂上,其编码区包含8个外显子。VEGF -A1 65缺乏外显子6编码区,VEGF -A1 2 1 缺乏外显子7编码区。　　2　VEGF -A受体VEGF -A对血管内皮细胞具有选择性,因为其两个跨膜酪氨酸激酶受体VEGFR - 1及VEG FR - 2选择性表达在内皮细胞表面。VEGFR - 1和VEGFR - 2均含有7个免疫球蛋白样细胞外区和一个激酶...

关键词：血管内皮细胞生长因子a 自身免疫性疾病血管内皮细胞生长因子a受体生物学作用

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BMP9通过Wnt/β-catenin和VEGFa信号诱导前脂肪细胞成骨分化

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中国细胞生物学学报 2025年第1期47卷 8-17页

作者：王景江刘洋重庆医科大学附属第二医院骨科重庆400010

该文旨在研究Wnt/β-catenin信号通路和血管内皮细胞生长因子a(VEGFa)在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导前脂肪细胞成骨分化中的作用。通过BMP9重组腺病毒(Ad BMP9)感染前脂肪细胞,利用Western blot检测β-catenin和VEGFa的蛋白表达水平,荧... 详细信息

该文旨在研究Wnt/β-catenin信号通路和血管内皮细胞生长因子a(VEGFa)在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导前脂肪细胞成骨分化中的作用。通过BMP9重组腺病毒(Ad BMP9)感染前脂肪细胞,利用Western blot检测β-catenin和VEGFa的蛋白表达水平,荧光素酶报告质粒检测Wnt/β-catenin信号活化程度。在过表达或沉默β-catenin及VEGFa后,用AdBMP9感染细胞,通过活性测定和染色检测成骨早期标志物碱性磷酸酶(ALP)的活性,利用Western blot检测成骨晚期标志物骨桥素(OPN)、骨钙素(OC)以及成骨转录因子Runt相关转录因子2(Runx2)的蛋白表达情况,茜素红染色检测钙盐沉积情况,Micro-CT和H&E染色检测前脂肪细胞在裸鼠皮下异位成骨情况。结果发现BMP9能上调前脂肪细胞中β-catenin和VEGFa的蛋白水平,并增加β-catenin/Tcf4转录活性;激活Wnt/β-catenin信号或过表达VEGFa能促进BMP9介导的ALP活性、OPN及OC蛋白表达和钙盐沉积;过表达β-catenin和VEGFa能促进BMP9诱导的前脂肪细胞裸鼠皮下异位成骨;过表达β-catenin和VEGFa均增加了BMP9诱导的成骨转录因子Runx2的活性,而沉默VEGFa抑制了BMP9上调β-catenin/Tcf4转录活性的作用。这些结果表明Wnt/β-catenin和VEGFa信号在BMP9诱导前脂肪细胞成骨分化的过程中起着至关重要的调控作用。

关键词：骨形态发生蛋白9 前脂肪细胞 Wnt/β-catenin信号血管内皮细胞生长因子a 成骨分化

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VEGFA/VEGFR2在小鼠肝多房棘球蚴组织血管生成中的表达及作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2020年第6期38卷 673-681页

作者：姜慧娇桂显伟郭黎姣杨雄峰王小义陈雪玲吴向未石河子大学医学院第一附属医院石河子832000 石河子大学医学院免疫学教研室石河子832000

目的检测多房棘球蚴感染后小鼠肝脏和肝细胞血管内皮细胞生长因子a(VEGFA)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的mRNA水平及蛋白水平,探讨VEGFA/VEGFR2在多房棘球蚴组织血管生成中的作用。方法将20只雌性C57BL/6小鼠随机分为实验组和... 详细信息

目的检测多房棘球蚴感染后小鼠肝脏和肝细胞血管内皮细胞生长因子a(VEGFA)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的mRNA水平及蛋白水平,探讨VEGFA/VEGFR2在多房棘球蚴组织血管生成中的作用。方法将20只雌性C57BL/6小鼠随机分为实验组和对照组(10只/组),实验组小鼠采用肝被膜注射法建立多房棘球蚴感染模型,对照组注射等量生理盐水。于感染后第0、16、37、58、81、105天,收集各组小鼠全血,分离血清。第120天安乐死小鼠后,开腹观察多房棘球蚴生长情况,取小鼠多房棘球蚴组织、多房棘球蚴周围肝组织、对照组小鼠正常肝组织。HE染色观察多房棘球蚴组织血管生成情况,免疫组化法检测各组织中VEGFA、VEGFR2表达及分布。取肝细胞和原头节进行体外培养,36个培养皿均分为共培养组(肝细胞+原头节)、肝细胞组、原头节组,分别于培养后1、2、3 d后取各组上清、肝细胞和原头节。qRT-PCR、蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测正常肝组织、多房棘球蚴组织、多房棘球蚴周围4 mm处肝组织、原头节和肝细胞中VEGFA、VEGFR2 mRNA水平和蛋白水平。ELISA检测外周血中VEGFA的含量、正常肝组织、多房棘球蚴组织、多房棘球蚴周围肝组织、共培养组上清、肝细胞组上清和原头节组上清中VEGFA蛋白水平。采用SPSS 20.0软件进行统计学分析。结果qRT-PCR检测结果显示,正常肝组织、多房棘球蚴周围肝组织、多房棘球蚴组织VEGFA mRNA相对转录水平分别为1.033±0.102、1.222±0.501、0.276±0.092,多房棘球蚴组织的转录水平低于正常肝组织与多房棘球蚴周围肝组织(P<0.05);VEGFR2 mRNA相对转录水平分别为1.042±0.071、1.836±0.062、0.226±0.077,多房棘球蚴周围肝组织的转录水平高于正常肝组织(P<0.01),多房棘球蚴组织的转录水平低于正常肝组织与多房棘球蚴周围肝组织(P<0.01)。Western blotting分析结果显示,多房棘球蚴组织蛋白样品中未检出GAPDH、VEGFA和VEGFR2目的蛋白。多房棘球蚴周围肝组织、正常肝组织中,VEGFA蛋白相对表达量分别为0.920±0.961、0.816±0.129;VEGFR2蛋白相对表达量分别为1.439±0.160、0.515±0.222,二者差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示,正常肝组织、多房棘球蚴周围肝组织、多房棘球蚴组织VEGFA含量分别为(6.581±0.722)、(6.363±0.638)、(0.670±0.105)pg。免疫组化检测结果显示,正常肝组织、多房棘球蚴周围肝组织、多房棘球蚴组织VEGFA评分分别为3.552±0.683、3.355±0.807、9.450±1.292,多房棘球蚴组织VEGFA表达高于正常肝组织和多房棘球蚴周围肝组织(P<0.05)。正常肝组织、多房棘球蚴周围肝组织、多房棘球蚴组织VEGFR2评分分别为0.361±0.547、4.093±1.042、5.275±1.003,多房棘球蚴周围肝组织、多房棘球蚴组织VEGFR2的表达均高于正常肝组织(P<0.01)。ELISA检测结果显示,实验组小鼠第0、16、37、58、81、105天外周血VEGFA含量分别为(73.233±7.651)、(156.925±5.111)、(176.571±40.343)、(204.212±9.601)、(201.335±24.161)和(185.745±37.902)pg/ml,对照组分别为(70.355±24.751)、(56.144±14.736)、(81.094±13.753)、(76.172±5.689)、(64.393±19.060)和(70.871±23.966)pg/ml,实验组小鼠外周血VEGFA含量高于对照组(P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,体外培养第2天,共培养组VEGFA、VEGFR2 mRNA相对转录水平分别为9.380±1.165和2.764±0.871,肝细胞组分别为1.028±0.252和1.062±0.201,共培养组VEGFA、VEGFR2转录水平均高于相应肝细胞组(P<0.05)。Western blotting结果显示,体外培养第2天,共培养组VEGFA、VEGFR2蛋白相对表达水平分别为1.500±0.148和1.540±0.079,肝细胞组分别为1.322±0.050和0.303±0.003,原头节组高于肝细胞组(P<0.01)。ELISA检测结果显示,肝细胞组上清第1、2、3天VEGFA含量分别为(24.923±1.427)、(151.760±4.282)、(223.033±10.06

关键词：多房棘球蚴血管内皮细胞生长因子a 血管内皮细胞生长因子受体2 血管生成

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血管紧张素（1—7）对胆管结扎诱导的肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用

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中华肝脏病杂志 2013年第12期21卷 907-913页

作者：宁佐伟张文雍李洋蔡双明张莉莉李旭南方医科大学南方医院急诊科广州510515

目的探讨血管紧张素（1-7）（Ang（1—7））对胆管结扎所致肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用及相应的分子机制。方法将18只Wistar雄性大鼠随机分为假手术（SHAM）组，胆总管结扎（BDL）组和Ang（1—7）治疗组。假手术组：行开腹术再... 详细信息

目的探讨血管紧张素（1-7）（Ang（1—7））对胆管结扎所致肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用及相应的分子机制。方法将18只Wistar雄性大鼠随机分为假手术（SHAM）组，胆总管结扎（BDL）组和Ang（1—7）治疗组。假手术组：行开腹术再关腹，在腹腔埋注射泵，以25μg·kg-1·h-1。的速度持续注射等渗盐水；BDL组：开腹结扎胆总管建立肝纤维化模型，同时在腹腔埋注射泵，以25μg·kg-1·h-2的速度持续注射等渗盐水；Ang（1—7）治疗组：BDL建立肝纤维化模型，同时在腹腔埋注射泵，以25μg·kg-1·h-1的速度持续注射Ang（1—7）。4周后宰杀动物，取肝组织，行苏木素一伊红染色，进行肝纤维化评分；Masson胶原染色，测定胶原的表达；利用免疫组织化学，免疫印迹（Westernblot），组织免疫荧光检测血管生成的标志：血管性血友病因子（vwF），血管内皮细胞生长因子a（vEGFA），血小板一内皮细胞黏附分子CD31的表达。根据资料不同采用One-wayANOVA检验、LSD法、Welch法、Durmett’s T3法、t检验或相关性分析。结果研究结果显示：在BDL组中，与SHAM组相比，肝纤维化评分（4．83±0．75对比0．00±0．00，Ｐ=0．000）、胶原面积（87．27±5．33对比0．98±0．11，P=0．000）、免疫组织化学检测vWF的表达（灰度值3．11±0．3对比1．00±0．07，Ｐ=0．000）、VEGFA的表达（灰度值8．38±1．64对比1．00±0．08，Ｐ=0．003）、CD31的表达（灰度值3．05±0．44对比1．00±0．12，P=0．000），Westernblot检测vWF的表达（灰度值0．380±0．008对比0．270±0．007，P=0．000）、VEGFA的表达（灰度值0．270±0．005对比0．120±0．002，P=0．007）、CD31的表达（灰度值0．350±0．008对比0．060±0。004，P=0．000）均明显增高，差异有统计学意义护值均〈0．01）；免疫荧光检测BDL组肝组织vWF、VEGFA、CD31阳性表达细胞较SHAM组明显增多。与BDL组相比，Ang（1—7）治疗组中肝纤维化评分（2．50±0．55对比4．83±0．75，P=0．000）、胶原面积（24．46±3．45对比87．27±5．33，P=0．000）、免疫组织化学检测vWF的表达（灰度值1．60±0．06对比3．11±0．30，P=0．000）、VEGFA的表达（灰度值4．68±0．58对比8．38±．64，P=0．037）、CD31的表达（灰度值1．42±0．12对比3．05±0．44，P=0．009），Westernblot检测vWF的表达（灰度值0．190±0．007对比0．380±0．008，P=0．000）、vEGFA的表达（灰度值0．120±0．006对比0．270±0．005，P=0．000）、CD31的表达（灰度值0．130±0．006对比0．350±0．008，P=0．000）均显著下降，差异有统计学意义（P值均〈0．01）；免疫荧光检测Ang（1-7）治疗组vWF、VEGFA、CD31阳性表达的细胞较BDL组明显减少；各分组中VEGFA的表达与vwF表达呈现显著正相关关系（r=0．956，P=0．000）。结论Ang（1—7）可抑制BDL诱导肝纤维化大鼠肝窦血管生成。

关键词：肝硬化肝窦血管生成血管紧张素(1-7) 血管内皮细胞生长因子a 血管性血友病因子 CD31

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骨骺损伤修复过程中骺板形态及VEGF表达的变化

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中华骨科杂志 2012年第6期32卷 570-575页

作者：吕学敏胡浩鲁明郭源北京积水潭医院小儿骨科 100035

目的探讨大鼠骨骺损伤修复过程中骺板形态结构及骺板内血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的变化。方法取4-5周龄SD大鼠30只，制作胫骨近端骨骺损伤动物模型。随机分为五组，每组6只，分别于术后2、... 详细信息

目的探讨大鼠骨骺损伤修复过程中骺板形态结构及骺板内血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的变化。方法取4-5周龄SD大鼠30只，制作胫骨近端骨骺损伤动物模型。随机分为五组，每组6只，分别于术后2、4、6、10、21天处死，取双侧胫骨。测量双侧胫骨长度，计算实验侧长度和对照侧长度比值。行双侧胫骨X线摄片、Micro CT扫描，观察骺板大体形态及骺板内骨桥形成情况。通过组织切片HE染色及免疫组织化学染色，观察骺板内软骨细胞变化及VEGF表达。结果双侧肢体长度于术后第4天出现差异，第10天差异最大，第21天肢体长度差异缩小。术后第6天开始骺板内逐渐出现纤细骨质，终至骨桥形成。HE染色提示伤后早期出现静止区软骨细胞聚集成团，细胞规律性排列丧失、分化加速。免疫组织化学染色显示术后生长板内出现VEGF高反应区，阳性表达区逐渐扩大，跨越骺板全层，直后血管长入、骨化。结论骨骺损伤修复过程中，骺板形态早中期表现为干骺端肥大，肢体短缩，骺板内纤细骨质形成；随修复进展，骺板内VEGF表达反应性增强，出现贯通骺板的表达带，与骨桥形成相关。

关键词：骨骺血管内皮细胞生长因子a 创伤和损伤

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siRNAs对原代人脐静脉内皮细胞血管生成的影响

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中国临床药理学杂志 2022年第9期38卷 904-907页

作者：陈佳扬黎权辉岑柏宏陈章浦杨伶庞建新付卫明季爱民南方医科大学药学院南方医科大学第七附属医院药学科广州医科大学附属肿瘤医院放疗科

目的研究siRNA单独或多重沉默原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中血管内皮细胞生长因子a（VEGFA）及血管内皮细胞生长因子受体1/2/3（VEGFR1/2/3）表达对其血管生成的影响。方法 HUVECs分为空白对照组，阴性对照组与实验组。空白对照组... 详细信息

目的研究siRNA单独或多重沉默原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中血管内皮细胞生长因子a（VEGFA）及血管内皮细胞生长因子受体1/2/3（VEGFR1/2/3）表达对其血管生成的影响。方法 HUVECs分为空白对照组，阴性对照组与实验组。空白对照组不给予转染，阴性对照组转染100 nmol·L-1siNC,实验组分为4组并分别转染100 nmol·L-1siVEGFA及siVEGFR1/2/3。以反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测siRNAs的沉默效率。HUVECs分为空白对照组，阴性对照组，沉默单靶点组和多靶点组，空白对照组不给予转染，阴性对照组转染100 nmol·L-1siNC,沉默单靶点组分为4组并分别转染100 nmol·L-1siVEGFA及siVEGFR1/2/3,沉默多靶点组分为4组并分别转染100 nmol·L-1siVEGFA+siVEGFR1、siVEGFA+siVEGFR2、siVEGFA+siVEGFR3及siVEGFR1+siVEGFR2+siVEGFR3,以小管形成实验检测各组HUVECs小管形成情况。结果 siVEGFA组、siVEGFR1组、siVEGFR2组与siVEGFR3组沉默效率分别为（85.67±10.50）%,（71.67±7.02）%,（89.00±11.36）%与（90.00±3.60）%,与空白及阴性对照组相比，差异均有统计学意义（均P<0.01）。siVEGFA组血管总长度、分支管长度和血管交叉点分别为（32.67±3.79）%,（22.67±2.08）%及（25.33±6.43）%,在沉默单靶点组中抑制血管生成能力最强（均P<0.05）;siVEGFA+siVEGFR3组血管总长度、分支管长度和血管交叉点分别为（28.33±5.51）%,（10.00±2.65）%,（8.33±2.31）%,siVEGFR1+siVEGFR2+siVEGFR3组分别为（27.00±4.00）%,（9.33±2.89）%,（10.00±3.60）%,在沉默多靶点组中抑制血管生成能力最强（均P<0.05）。结论 siRNAs沉默VEGF通路中单靶点的表达，可有效抑制HUVECs诱导的血管生成；同时沉默多靶点的表达，其抑制血管生成的功效更强。

关键词：原代人脐静脉内皮细胞血管内皮细胞生长因子a 血管内皮细胞生长因子受体小干扰RNA 血管生成

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丹参注射液对lewis肺癌生长转移及其MMP-9和VEGF表达的影响

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中华肿瘤防治杂志 2009年第19期16卷 1463-1465页

作者：陈良良黄建飞梁华浙江中医药大学附属第一医院肿瘤科浙江杭州310006

目的:观察丹参注射液对荷lewis肺癌生长转移及基质金属蛋白酶9(matrix met-alloproteinase-9,MMP-9)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。方法:将荷lewis肺癌小鼠,分别腹腔注射丹参注射液(5、10、20、40和80g/kg)、环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)和生理盐水,检测小鼠移植瘤的质量和肺转移灶数及MMP-9和VEGF的值。结果:丹参1组(5g/kg,抑制率为15.01%)对荷瘤小鼠瘤质量有抑制作用,与生理盐水组比较,差异有统计学意义,P<0.05。丹参各剂量组的肺转移灶数目均低于生理盐水组,但差异无统计学意义,P>0.05。丹参2、3组〔(5.43±0.31)%、(5.34±0.80)%〕MMP-9的表达与生理盐水组比较,差异有统计学意义,P<0.05。丹参各剂量组VEGF的表达与生理盐水组比较,差异无统计学意义,P>0.05。结论:极低剂量的丹参注射液对荷瘤小鼠的移植瘤有明显抑制作用。不同剂量的丹参注射液对肺部转移无抑制或促进作用,对VEGF的表达无影响。中低剂量的丹参注射液能降低MMP-9的表达。

关键词：丹参注射液肺肿瘤生长肿瘤转移明胶酶B 血管内皮细胞生长因子a

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扩张型心肌病心肌与血管损伤和修复的机制

扩张型心肌病心肌与血管损伤和修复的机制

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作者：周艳丽南京医科大学

学位级别：博士

背景:骨髓间充质干细胞（MSC）治疗可以改善扩张型心肌病（DCM）的心功能,但干细胞移植后在心脏的分布以及心肌损伤后干细胞向心脏组织归巢现象及其机制仍不清楚。方法:分离培养Sprague-Dawley（SD）大鼠骨髓MSC,流式细胞仪进行鉴定,并... 详细信息

背景:骨髓间充质干细胞（MSC）治疗可以改善扩张型心肌病（DCM）的心功能,但干细胞移植后在心脏的分布以及心肌损伤后干细胞向心脏组织归巢现象及其机制仍不清楚。方法:分离培养Sprague-Dawley（SD）大鼠骨髓MSC,流式细胞仪进行鉴定,并用99mTcO4-标记。DCM组大鼠腹腔注射阿霉素（2.5mg/kg/次,3次/周×2周）,对照组用同样的方法注射生理盐水,两组随机抽取8只做超声心动图心功能分析、心肌苏木素-伊红（HE）染色病理分析、心肌SDF-1免疫组织化学和SDF-1实时定量PCR检测。确定模型成功后,将大鼠随机分为:DCM大鼠+核素标记细胞移植组（n=8）;正常对照大鼠+核素标记细胞移植组（n=8）。术后16小时处死大鼠,取心、肺、肝、脾、肾、骨骼肌和外周血,γ计数仪测放射性活度,用各组织与骨骼肌放射性活度的比值来表示99mTcO4-标记的MSC在各脏器的分布。结果:99mTcO4-对MSC标记率为70±11.2%,标记后细胞存活率和细胞功能基本未受到影响。细胞移植16小时后,DCM组干细胞在心脏的分布明显高于对照组（12.98±1.22 vs 10.17±1.45,P＜0.05）。免疫组化测定DCM组心肌SDF-1蛋白的相对表达量明显高于正常组;Realtime PCR测定SDF-1基因在DCM组心肌相对表达量明显高于正常组（0.47±0.12 vs 0.33±0.13,P＜0.05）。结论:干细胞移植后归巢至DCM心脏的数量增多,可能与SDF-1在DCM心肌的表达升高有关。目的：观察扩张型心肌病（DCM）患者外周血可溶性细胞间黏附分子1（sICAM-1）的水平及其与血管功能和心功能的关系。方法：DCM患者65例，正常对照组49例，年龄（50．1±8．1）岁。用酶联免疫吸附法测定两组血清中sICAM．1的水平；用CVProfilorDO 2020（美国HDI公司）无创动脉功能测定仪测定大动脉弹性指数（C1）和小动脉弹性指数（C2）。结果：（1）DCM组外周血sICAM-1的水平显著高于正常对照组（186．1±89．9ng／ml vs 98．8±57．7 ng／ml P<0．0001）；而DCM组C2显著低于正常对照组（3．8±1．8 ml／mmHg×100 vs．5.0±2．2 ml／mmHg×l00，P<0．0001）；两组间C1差异无统计学意义（P >0．05）。（2）随着心功能下降，血清sICAM-1的水平逐渐升高，两者呈等级相关（rs=0．425，P<0．05）；血清sICAM-1与C2呈负相关（r=-0．58，P<0．001）。（3）以C2作为因变量对样本进行多元回归分析显示，sICAM-1是影响C2的重要因素。结论：扩张型心肌病患者随着ICAM-1升高伴有心功能和血管内皮功能的下降。背景：研究显示扩张型心肌病（DCM）不仅有心肌的病变而且有血管损伤，而DCM患者的血管弹性变化、血清中细胞因子的变化和内皮祖细胞的动员情况及其它们的关系尚不清楚。方法：扩张型心肌病患者65例，年龄（50．5±13．9）岁；正常对照组49例，年龄（50．1±8．1）岁。用酶联免疫吸附法测定两组血清中血管内皮细胞生长因子-A、血管内皮细胞生长因子受体2和基质细胞衍生因子1的水平；用CVProfilorDO 2020无创动脉功能测定仪测定大动脉弹性指数（C1）和小动脉弹性指数（C2）；外周循环中内皮祖细胞相对数量通过以下两种方法测定：（1）用流式细胞仪测定外周血中同时表达CD133+和CD34+的细胞百分数，（2）将从外周血中分离的单个核细胞贴壁培养7天后计数内皮祖细胞集落形成数目。结果：（1）扩张型心肌病组C2显著低于正常对照组（3．8±1．8 ml／mmHg100 vs 5．0±2．2 ml／mmHg×100，P<0．0001）；两组间C1差异无统计学意义（P>0．05）。（2）扩张型心肌病组血管内皮细胞生长因子a和基质细胞衍生因子1均显著高于正常对照组（127．6±139．5 pg/ml vs 58．8±42．9，P<0．0001；457．7±281．2 pg／ml vs 236．4±86．1 pg／ml，P<0．0001）；两组间内皮细胞生长因子受体2差异无统计学意义（P>0．05）；扩张型心肌病组外周循环中内皮祖细胞百分数和集落形成数目显著高于正常对照组(2．5±1．5％vs 0．5士0．3％P<0．05：23．5±12．8 vs 10．8±7．4 P<胞集落形成数目呈正相关（r=0．658 P<0．001；r=0．435尸< 0．05）；C2分别与lgVEGF-A和基质细胞衍生因子1呈负相关（r=-0．543 P<

关键词：扩张型心肌病骨髓间充质干细胞归巢基质细胞衍生因子-1 扩张型心肌病动脉顺应性细胞间粘附分子1 心功能扩张型心肌病血管弹性血管内皮细胞生长因子a 内皮祖细胞

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角质细胞中FOXO1基因对正常和糖尿病小鼠牙龈伤口愈合的影响

角质细胞中FOXO1基因对正常和糖尿病小鼠牙龈伤口愈合的影响

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作者：陆永健第二军医大学

学位级别：博士

伤口愈合是有许多生物因子参与其中的一个复杂的生物学过程。同时,伤口愈合也与许多因素相关。其中伤口中血管生成是伤口愈合的关键因素之一。多种信号作用于内皮细胞（EC）后能够引起的血管生成,这个过程中受到许多因子的调控。在这些... 详细信息

伤口愈合是有许多生物因子参与其中的一个复杂的生物学过程。同时,伤口愈合也与许多因素相关。其中伤口中血管生成是伤口愈合的关键因素之一。多种信号作用于内皮细胞（EC）后能够引起的血管生成,这个过程中受到许多因子的调控。在这些因子中,VEGF是最有效的血管生成因子之一。角质细胞和巨噬细胞是VEGF主要来源。FOXO1属于叉头转录因子的大家族,它参与体内的许多生物过程,包括细胞周期停滞,DNA修复,凋亡,抗氧化应激和葡萄糖代谢。我们实验室的近期研究表明,在角质细胞中特异性敲除FOXO1,能干扰正常皮肤和粘膜伤口中上皮形成。由于角质细胞是生长因子VEGF的主要来源,角质细胞中的FOXO1活性可能影响结缔组织愈合。此外,上皮-间质转化（EMT）是另一个可能影响结缔组织愈合的因素,此过程有助于胚胎发生,组织重塑,纤维化和转移性恶性肿瘤。它是一个受调控编排的系列事件,在此期间上皮细胞失去许多其上皮特异性特征并获得间充质细胞典型的特征。糖尿病是一个普遍的健康问题,它能产生很多相关的并发症,伤口愈合减缓是其中之一。其表现为炎症反应增强,肉芽组织形成受损,生长因子减少和血管生成受阻等,这些因素都是影响伤口愈合的重要因素,有些研究发现,在糖尿病伤口中敲除FOXO1能够挽救糖尿病对伤口愈合的负面影响,表现出促进了伤口中上皮再形成。所以,基于以上的这些观点。本实验的中心假设是,在角质细胞中特异性敲除FOXO1,能够显著影响正常和糖尿病患者牙龈结缔组织愈合,其过程与刺激血管生成和EMT介质的调节有关。本研究目的:1),研究正常和糖尿病小鼠牙龈上皮及结缔组织愈合情况,评估在角化细胞中特异性敲除FOXO1对伤口愈合的影响;2)在正常和糖尿病小鼠牙龈及结缔组织伤口愈合过程中,确定FOXO1是否参与调节角化细胞的活性,调节血管发生;3)评价特异性敲除FOXO1的角质细胞对正常和糖尿病牙龈及结缔组织伤口愈合过程中的上皮-间质转化（EMT）的影响。方法:体内实验:动物模型使用Cre-loxp技术,使***小鼠和floxed FOXO1L/L小鼠杂交后得到上皮角质细胞中特异敲除FOXO1基因实验小鼠:实验组(***+.Foxo1L/L)以及对照组(***-.Foxo1L/L)小鼠。对于EMT研究,使用他莫昔芬诱导的K14CreERT-ROSA26杂交小鼠。糖尿病小鼠模型使用STZ（50mg/kg）连续5天腹腔注射,诱导I型糖尿病。小鼠维持高血糖10天后进行牙龈创口手术。创口位于右侧第一磨牙近中邻面中上腭区牙龈,创口为直径为1毫米的全厚伤口。在创伤后的第4天,第7天处死小鼠,收取伤口样本。组织学样本,经固定,脱钙,切片后,用苏木精和曙红（H&E）和Masson三色（MT）进行染色,对伤口样本的组织学形态进行测量。对于EMT研究,采用冰冻切片染色后行组织学形态进行测量;体内试验:分别用特异性抗体抗FOXO1,CD31,α-SMA,VEGFA和Ki67对组织的相应蛋白进行免疫荧光染色,使用荧光显微镜进行定量分析;使用TUNEL法和Ki67双染色方法对细胞组织内的细胞凋亡进行测量和分析研究。体外实验:用人类永生牙龈角质细胞（HIGK）和小鼠表皮角化细胞（MPEK）,实验组与ON-TARGET plus SMART pool siRNA抗人FOXO1进行转染,对照组与siRNA（ON-TARGET plus Non-targeting Control Pool）进行转染,对细胞内的FOXO1和VEGF-A蛋白水平进行检测;在荧光素酶报告实验中,HIGK细胞和MPEK细胞在实验组中用FOXO1,FOXO1-AAA质粒进行转染,pCDNA3.1对照质粒作为对照质粒。转染后利用双荧光素酶报告基因检测VEGF-A报告子的活性。基因阵列分析,用正常人表皮角质细胞（NHEK）细胞在低糖（5mM d-glucose）和高糖（25 mM d-glucose）培养基中培养5天,用FOXO1或scrambled siRNA转染相应的细胞,然后,使用提取总RNA。采用基因芯片人类基因1.0 ST阵列进行RNA分析。结果:体内实验结果:实验组小鼠(***+.Foxo1L/L)与对照组小鼠(***-.Foxo1L/L)比较,上皮中的FOXO1表达降低,在结缔组织中则没有明显的差异;在正常血糖情况下,***+.Foxo1L/L小鼠结缔组织愈合延迟,在第四天和第七天时结缔组边缘之间的间隙增加（P<0.05）;伤口中的肉芽组织和胶原产生均减少。但是在糖尿病组中,***+.Foxo1L/L与***-.Foxo1L/L小鼠没有明显的差异;***+.Foxo1L/L在结缔组织中成纤维细胞密度在血糖正常的伤口中降低56%（P<0.05）,但是在

关键词： FOXO1基因伤口愈合血管生成血管内皮细胞生长因子a 上皮间质转化糖尿病

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磷脂酰肌醇代谢缺陷诱导新生血管退化的机制研究

磷脂酰肌醇代谢缺陷诱导新生血管退化的机制研究

引用

作者：曹乐中国科学院大学

学位级别：博士

脊椎动物血管系统由动脉、静脉以及连接二者的毛细血管组成。血管网络遍布机体各个组织器官并发挥着输送氧气、营养物质以及运输代谢废物等功能。在诸多生理病理进程中，组成血管的内皮细胞通过响应不同的信号刺激引导血管的形成以维持... 详细信息

脊椎动物血管系统由动脉、静脉以及连接二者的毛细血管组成。血管网络遍布机体各个组织器官并发挥着输送氧气、营养物质以及运输代谢废物等功能。在诸多生理病理进程中，组成血管的内皮细胞通过响应不同的信号刺激引导血管的形成以维持机体稳态平衡。脊椎动物发育、生理和病理过程均伴随着大量的血管新生，其中血管内皮细胞生长因子a(VEGFA，vascularendothelialgrowfactorA)被证实是促进血管新生核心因子。VEGFA信号通路在调控血管发育与稳态的过程中特异性与可塑性是血管生物学领域中的重要科学问题。　　本研究发现作为磷脂酰肌醇(PI，phosphatidylinositol)代谢循环中的关键酶，胞苷二磷酸-二酰基甘油合成-2(CDS2，CDP-diacylglycerolsynthase-2)的缺失会导致血管微环境中VEGFA信号通路从经典的促进血管新生转变为诱导新生血管退化。首先，我们在斑马鱼cds2突变体中发现了血管缺陷程度和vegfamRNA表达水平成正比。进一步通过斑马鱼活体成像实验，我们发现在cds2突变体中过表达vegfa基因会诱发由血管内皮细胞凋亡或者逆向迁移介导的血管退化现象。其次，我们构建了内皮细胞特异性诱导敲除Cds2的小鼠，在视网膜血管模型和肿瘤移植血管模型中均证实VEGFA刺激会在内皮细胞CDS2缺失的情况下引发新生血管退化。最后，结合脂类定量和免疫荧光实验，我们发现在CDS2缺失的情况下，磷脂酰肌醇代谢循环中的磷脂酶C-γ(PLCγ，phospholipaseCγ)受到VEGFA信号通路影响，会加速磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2，phosphatidylinositol(4，5)-bisphosphate)的水解，从而导致磷脂酰肌醇三磷酸(PIP3，phosphatidylinositol(3，4，5)-triphosphate)的产生受到阻滞。内皮细胞中PIP3水平的降低引发转录因子FOXO1(ForkheadboxproteinO1)入核，激活下游信号，最终导致新生血管退化。　　本研究揭示了敲除内皮细胞Cds2基因阻断磷脂酰肌醇代谢循环会引发VEGFA功能的多重效应。在小鼠肿瘤移植实验中，我们发现内皮细胞特异性诱导敲除Cds2会促进肿瘤分泌高水平的VEGFA，进而引起新生血管退化、肿瘤生长阻滞。目前，在诸如肿瘤、湿性黄斑病变等血管新生依赖性疾病的临床治疗中往往借助VEGFA中和抗体抑制病灶部位血管新生。本研究提示可以利用这类疾病血管新生微环境中VEGFA高水平的特征，以CDS2为靶点，在病灶部位定点抑制其活性，通过引发血管退化以阻断疾病进程。

关键词：新生血管退化磷脂酰肌醇代谢缺陷血管内皮细胞生长因子a

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