检索结果-内蒙古大学图书馆

中华新生儿科杂志（中英文） 2024年第1期39卷 38-44页

作者：罗先琼范弯弯王宁陈娟马健广东省妇幼保健院遗传代谢与内分泌科广州511442 广州医科大学研究生院广州510180 广东省妇幼保健院转化医学中心广州511442

目的探讨碳酸酐酶9(carbonic anhydrase 9,CA9)对低氧诱导未足月胎儿视网膜微血管内皮细胞(retinal microvascular endothelial cell,RMEC)增殖的影响。方法获取广东省妇幼保健院自然流产未足月胎儿眼球,分离视网膜并得到RMEC,使用CD34... 详细信息

目的探讨碳酸酐酶9(carbonic anhydrase 9,CA9)对低氧诱导未足月胎儿视网膜微血管内皮细胞(retinal microvascular endothelial cell,RMEC)增殖的影响。方法获取广东省妇幼保健院自然流产未足月胎儿眼球,分离视网膜并得到RMEC,使用CD34进行内皮细胞鉴定。将得到的胎儿RMEC及购买的成人RMEC置于常氧及低氧培养箱(1%O_(2)+5%CO_(2)+94%N2)培养,使用实时荧光定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法检测CA9的差异表达。使用小干扰RNA技术敲降CA9基因后,CCK-8法检测细胞增殖情况,加入CA9抑制剂U-104后CCK-8法检测细胞活率。结果成功提取原代RMEC,第三代细胞CD34免疫荧光染色阳性细胞计数近100%。未足月胎儿及成人RMEC低氧组CA9 mRNA表达量均高于常氧组(胎儿67.80±10.31比1.00±0.04,P<0.001;成人1.72±0.22比1.00±0.02,P=0.014);蛋白质印迹法检测可见未足月胎儿RMEC低氧组CA9表达量明显升高,与CA9 mRNA表达量相对应。在未足月胎儿RMEC转染siCA920 nM时,敲降效率可达95%(P<0.001)。CCK-8法检测敲降CA9基因48 h后对未足月胎儿RMEC增殖的影响,可见siCA9组OD值低于阴性对照siNC组(0.57±0.05比0.90±0.03,P<0.001)。加入100μM CA9抑制剂U-104,低氧+100μM U-104组未足月胎儿RMEC细胞活率低于低氧组(99.16%±3.82%比119.10%±1.72%,P=0.002)。结论在低氧诱导模型中,CA9在成人及未足月胎儿的RMEC表达不同,抑制CA9可抑制未足月胎儿RMEC增殖。

关键词：早产儿视网膜病碳酸酐酶9 视网膜微血管内皮细胞低氧细胞增殖

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miR-1-3p调控ANXA2表达对高糖诱导的视网膜微血管内皮细胞新生血管生成的影响

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眼科新进展 2023年第12期43卷 952-957页

作者：巨朝娟许寅聪李康宁石笑楠熊朝晖戴明明河北医科大学第一医院眼科河北省石家庄市050031

目的探讨微小RNA-1-3p(miR-1-3p)/膜联蛋白A2(ANXA2)分子轴在高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)新生血管生成过程中的作用机制。方法体外培养HRMECs并采用高糖(HG)处理细胞建立细胞损伤模型。HRMECs分组处理:Con组(含体积分数... 详细信息

目的探讨微小RNA-1-3p(miR-1-3p)/膜联蛋白A2(ANXA2)分子轴在高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)新生血管生成过程中的作用机制。方法体外培养HRMECs并采用高糖(HG)处理细胞建立细胞损伤模型。HRMECs分组处理:Con组(含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养)、HG组(25 mmol·L^(-1)D-葡萄糖培养)、HG+miR-NC组(转染miR-NC)、HG+miR-1-3p组(转染miR-1-3p mimics)、HG+sh-NC组(转染sh-NC)、HG+sh-ANXA2组(转染sh-ANXA2)、HG+miR-1-3p+pcDNA组(转染miR-1-3p mimics+pcDNA)、HG+miR-1-3p+pcDNA-ANXA2组(转染miR-1-3p mimics+pcDNA-ANXA2)。转染48 h后收集细胞,采用25 mmol·L^(-1)的D-葡萄糖培养基培养HRMECs 24 h。采用MTT、Transwell小室实验分别检测细胞活力、迁移细胞数。管腔形成实验检测管腔形成数。双荧光素酶报告实验检测miR-1-3p与ANXA2的靶向关系。Western blot检测VEGF、MMP-2蛋白水平。结果与Con组比较,HG组miR-1-3p表达水平降低,ANXA2 mRNA及蛋白水平均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与Con组比较,HG组细胞活力升高,迁移细胞数、管腔形成数增多,VEGF、MMP-2蛋白水平升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-1-3p组细胞活力降低,迁移细胞数、管腔形成数减少,VEGF、MMP-2蛋白水平降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与HG+sh-NC组比较,HG+sh-ANXA2组细胞活力降低,迁移细胞数、管腔形成数减少,VEGF、MMP-2蛋白水平降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与HG+miR-1-3p+pcDNA组比较,HG+miR-1-3p+pcDNA-ANXA2组细胞活力升高,迁移细胞数、管腔形成数增多,VEGF、MMP-2蛋白水平升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 miR-1-3p过表达可通过靶向调控ANXA2表达抑制HRMECs的增殖、迁移及新生血管生成。

关键词：微小RNA-1-3p 膜联蛋白A2 高糖视网膜微血管内皮细胞新生血管细胞增殖细胞迁移

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树鼩视网膜微血管内皮细胞永生化细胞株的建立及鉴定

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中国实验动物学报 2023年第4期31卷 471-477页

作者：霍姝汭邱敏王文广陆彩霞罕园园代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 昆明医科大学昆明650031

目的建立树鼩视网膜来源的微血管内皮细胞的体外分离培养技术以及永生化细胞株,为体外利用树鼩视网膜微血管内皮细胞开展相关研究提供新的实验材料。方法利用Ⅱ型胶原酶、分散酶和DNaseⅠ酶消化法分离培养出原代视网膜微血管内皮细胞,... 详细信息

目的建立树鼩视网膜来源的微血管内皮细胞的体外分离培养技术以及永生化细胞株,为体外利用树鼩视网膜微血管内皮细胞开展相关研究提供新的实验材料。方法利用Ⅱ型胶原酶、分散酶和DNaseⅠ酶消化法分离培养出原代视网膜微血管内皮细胞,利用差速消化法纯化内皮细胞,然后利用携带SV40T基因的慢病毒转染细胞,再挑取单克隆后进行传代培养。对传至50代以上的细胞进行形态学观察、免疫荧光鉴定以及核型鉴定。结果采用混合酶消化法能够分离获得微血管内皮细胞,纯化后的细胞呈不规则多角形和梭形。经慢病毒转染后的细胞传代培养后细胞形态一致,到第50代时细胞形态结构仍较好。细胞免疫荧光结果显示标志性蛋白VWF、CD34、Claudin1、ZO-1和永生化SV40T表达阳性。生长曲线结果显示:细胞生长旺盛,第2~4天时处于对数生长期,第4天进入平台期。细胞核型结果显示:染色体数与树鼩染色体相同,即所获取的细胞为永生化的树鼩视网膜微血管内皮细胞。结论成功建立的树鼩视网膜微血管内皮细胞永生化细胞株具有较好的形态结构与功能,为视网膜病变及眼科相关疾病的研究提供了新的实验材料。

关键词：树鼩视网膜微血管内皮细胞分离培养永生化细胞株

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补阳还五汤对高糖环境下miR-21介导的人视网膜微血管内皮细胞自噬的影响

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眼科新进展 2022年第11期42卷 858-862页

作者：石颖陈子扬陈凯铭胡艳红胡俊陈胜福建中医药大学福建省福州市350122 福建省中医药科学院综合门诊部福建省福州市350003 福建中医药大学附属第二人民医院眼科福建省福州市350003

目的观察补阳还五汤对高糖环境下miR-21介导的人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)自噬的影响,以期为DR自噬调控机制及药物治疗提供依据。方法HRCECs随机分5组,即正常对照组、高糖组、补阳还五汤组、miR-21 mimic组、miR-21 mimic+补阳还五... 详细信息

目的观察补阳还五汤对高糖环境下miR-21介导的人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)自噬的影响,以期为DR自噬调控机制及药物治疗提供依据。方法HRCECs随机分5组,即正常对照组、高糖组、补阳还五汤组、miR-21 mimic组、miR-21 mimic+补阳还五汤组。除正常对照组外,其余各组细胞于25.0 g·L^(-1)葡萄糖环境中培养,建立高糖损伤模型,补阳还五汤组加用5 g·L^(-1)补阳还五汤水提液干预;miR-21 mimic组孵育转染miR-21 mimic的HRCECs;miR-21 mimic+补阳还五汤组用5 g·L^(-1)补阳还五汤水提液干预转染miR-21 mimic的HRCECs。荧光显微镜下观察转染效率,实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-21的表达,Western blot检测各组细胞中LC3蛋白表达。结果经转染miR-21 mimic后,大部分HRCECs呈绿色荧光,荧光强度为32.708±1.001。实时荧光定量PCR检测结果显示,miR-21 mimic组HRCECs的miR-21相对表达量为106.677±5.787,明显高于高糖组(5.892±0.341)和正常对照组(0.993±0.015),差异均有统计学意义(均为P<0.05)。高糖组和miR-21 mimic组HRCECs中LC3蛋白相对表达量均较正常对照组升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05),且miR-21 mimic组HRCECs中LC3蛋白相对表达量高于高糖组(P=0.001)。补阳还五汤组HRCECs中LC3蛋白相对表达量低于高糖组和miR-21 mimic组(均为P<0.05),与正常对照组比较差异无统计学意义(P=0.197)。miR-21 mimic+补阳还五汤组HRCECs中LC3蛋白相对表达量低于miR-21 mimic组,但高于补阳还五汤组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),与高糖组比较差异无统计学意义(P=0.930)。结论高糖环境下,miR-21介导HRCECs的自噬,补阳还五汤可以下调HRCECs的miR-21表达,进而减少细胞自噬。

关键词：补阳还五汤 miR-21 自噬高糖视网膜微血管内皮细胞

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基于腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路探讨柚皮素对视网膜微血管内皮细胞的损伤机制研究

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实用临床医药杂志 2024年第3期28卷 23-28页

作者：王海潼刘建亮潍坊医学院临床医学院山东潍坊262500 潍坊医学院附属医院山东潍坊261041

目的基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路探讨柚皮素(NAR)对人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)的损伤机制。方法将HRMECs随机分为对照组、高糖(HG)组、HG+NAR组(3 mg/L NAR)、HG+激活剂(AICAR)组(1 mmol/L A... 详细信息

目的基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路探讨柚皮素(NAR)对人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)的损伤机制。方法将HRMECs随机分为对照组、高糖(HG)组、HG+NAR组(3 mg/L NAR)、HG+激活剂(AICAR)组(1 mmol/L AICAR)、HG+NAR+AICAR组(3 mg/L NAR+1 mmol/L AICAR);除对照组向培养基中加入5 mmol/L的D-葡萄糖处理外,其他各组均向培养基中加入30 mmol/L的D-葡萄糖处理。采用CCK-8及Transwell分别检测细胞增殖及迁移情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测自噬因子LC3 mRNA、p62 mRNA表达水平;采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测AMPK/mTOR通路及自噬相关蛋白表达水平。结果与对照组相比,HG组细胞活力,迁移数,IL-1β、IL-6和TNF-α水平,p-AMPK/AMPK,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,LC3 mRNA表达增加,p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与HG组相比,HG+NAR组细胞活力,迁移数,IL-1β、IL-6和TNF-α水平,p-AMPK/AMPK,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,LC3 mRNA表达下降,p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达增加,但HG+AICAR组细胞活力,迁移数,IL-1β、IL-6和TNF-α水平,p-AMPK/AMPK,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达增加,p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与HG+NAR组相比,HG+NAR+AICAR组细胞活力,迁移数,IL-1β、IL-6和TNF-α水平,p-AMPK/AMPK,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,LC3 mRNA表达增加,p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与HG+AICAR组相比,HG+NAR+AICAR组细胞活力,迁移数,IL-1β、IL-6和TNF-α水平,p-AMPK/AMPK,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,LC3 mRNA表达下降,p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NAR可减轻HG诱导的HRMECs损伤,其机制可能与抑制AMPK/mTOR通路介导的自噬有关。

关键词：柚皮素视网膜微血管内皮细胞腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路自噬

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前列腺素E2受体对高糖环境中人视网膜微血管内皮细胞炎症小体活化和细胞损伤作用

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中华眼底病杂志 2021年第8期37卷 623-631页

作者：张忠红姚勇谢田华吴美丽邹健王晓露南京医科大学附属无锡人民医院眼科 214023 东南大学附属中大医院眼科南京210009 南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心 214023

目的观察前列腺素E2(PGE2)4种受体(EP1-4R)对高糖环境中人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)中炎症小体活化和细胞损伤作用。方法将hRMEC分为正常组、高糖组,分别置于含5.5、30.0mmol/L葡萄糖的Dulbecco改良Eagle培养基中培养。采用流式细胞... 详细信息

目的观察前列腺素E2(PGE2)4种受体(EP1-4R)对高糖环境中人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)中炎症小体活化和细胞损伤作用。方法将hRMEC分为正常组、高糖组,分别置于含5.5、30.0mmol/L葡萄糖的Dulbecco改良Eagle培养基中培养。采用流式细胞仪观察高糖组、正常组的细胞凋亡率;酶链免疫吸附试验(ELISA)检测hRMEC细胞培养上清液中PGE2水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞环氧化酶2(COX2)、的蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测hRMEC中HP1-4RmRNA的表达。高糖组细胞培养后72h后,将其再分为对照组、PGE2组、EP1-4激动剂组、PGE2+EPMR1-4抑制剂组、二甲基亚砜组。根据组别,各组给予相应的激动剂或抑制剂继续培养24 h。采用qRT-PCR检测各组细胞核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白(NLRP3)、白细胞介素(IL)-1P前体(pro-IL-1β)mRNA的表达;ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;Western blot检测各组细胞活化的半胱氨酸天冬氨酸酶(Caspase)-1蛋白表达。同时对高糖环境的hRMEC给予IL-1β刺激24h,检测其细胞培养上清液中LDH的活性。结果高糖组ЫШЕС细胞凋亡率、C0X2蛋白表达、PGE2蛋白含量较正常组明显升高,并呈时间依赖性。与正常组比较,高糖组hRMEC中EP1R、ЕР2R、ЕР4蛋R白及mRNA表达水平较正常组升高(P<0.05)。与对照组比较,PG2R组(t=4.627,P<0.01)、ЕР2R激动剂组(3.889、3.583、2.445、3.216,P<0.05);pGE2+EP2R中NLRP3mRNA表达水平明显升高,差异有统计学意义;рго-IL-1β mKNA表达水平有所升高,但差异无统计学意义(PGE2组:t=1.807,P>0.05);EPMR激动剂组:(t=1.807、1.477、0.302、1.926,P>0.05)。与PGE2组比较,PGE2+Ep2R抑制剂组hRMEC中NLRP3 mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(t=2.812,P<0.05);PGE2+EP3R抑制剂组hRMEC中pro-IL-ipmRNA表达水平明显升高,差异有统计学意义(t=4.113,Р<0.01)。PGE2组、ЕР2R激动剂组、ЕР2R激动剂组细胞培养上清液中IL-1β的蛋白含量较对照组明显升高,差异有统计学意义(t=5.155、4.136、4.817,P<0.01);PGE2+EP2R抑制剂组和PGE2+EP4R抑制剂组细胞培养上清液中IL-1β的蛋白含量较PGE2组明显降低,差异有统计学意义(t=1.964、4.765,P<0.05)。PGE2组和EP2R激动剂组hRMEC中活化的Caspase-1蛋白表达较对照组明显增多,差异有统计学意义(P=5.332、4.889,P<0.05);PGE2+EP2R抑制剂组hRMEC中活化的Caspase-1蛋白表达较PGE2组明显降低,差异有统计学意义(t=6.699,P<0.01)。PGE2组和EP2R激动剂组细胞培养上清液中LDH活性较对照组明显升高,差异有统计学意义(t=4.908、4.225,P<0.05);PGE2+EP2R抑制剂组细胞培养上清液中LDH活性较PGE2组明显降低,差异有统计学意义(t=5.301,P<0.01)。与对照组比较,高糖环境hRMEC细胞培养上清液中LDH活性明显升高,差异有统计学意义(t=3.499,P<0.05)。结论PGE2的4种受体对NLRP3及其效应分子均有不同程度活化作用,其中EP2R主要介导了高糖环境下hRMEC的损伤。

关键词：受体,前列腺素E 视网膜微血管内皮细胞 NLRP3炎症小体

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永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞株及其构建方法与应用

永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞株及其构建方法与应用

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作者：代解杰霍姝汭邱敏陆彩霞王文广李娜孙晓梅罕园园仝品芬 650000 云南省昆明市五华区茭菱路935号

本发明涉一种永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞株及其构建方法与应用。该方法是使用混合酶消化法，采用Ⅱ型胶原酶、分散酶和脱氧核糖核酸酶I从树鼩视网膜组织中分离并通过差速消化法纯化获得原代树鼩视网膜微血管内皮细胞，然后利用携带... 详细信息

标准号: CN115521901B

本发明涉一种永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞株及其构建方法与应用。该方法是使用混合酶消化法，采用Ⅱ型胶原酶、分散酶和脱氧核糖核酸酶I从树鼩视网膜组织中分离并通过差速消化法纯化获得原代树鼩视网膜微血管内皮细胞，然后利用携带SV40T的慢病毒转染原代细胞，胰酶消化后挑选单克隆并经过50代以上的传代，获得永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞；本发明方法获得的细胞能够稳定传代至50代以上，有效维持了树鼩视网膜微血管内皮细胞稳定的生长状态和增殖能力，改善了目前视网膜血管研究只能现用现取的烦琐程序，为眼科相关疾病的研究提供了稳定的视网膜微血管内皮细胞系，真正做到省时、省力、高效、便利。

关键词：视网膜微血管内皮细胞传代永生化脱氧核糖核酸酶I 视网膜微血管消化内皮细胞系视网膜血管视网膜组织生长状态胰酶消化原代细胞增殖能力分散酶混合酶胶原酶慢病毒差速构建省时转染省力眼科细胞携带研究便利疾病应用

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基于正交实验设计补阳还五汤水提液对高糖培养视网膜微血管内皮细胞活性影响

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福建中医药 2023年第11期54卷 55-58页

作者：曹俊昌石颖胡艳红胡俊陈胜福建中医药大学附属第二人民医院福建福州350003

目的基于正交实验筛选高糖损伤模型的最佳葡萄糖干预浓度、补阳还五汤水提液(BYHWT)保护高糖诱导视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)损伤的最佳浓度及最佳作用时间。方法CCK8法检测4.5、5、10、15、20、25 mg/mL葡萄糖浓度和0、5、10、15.625... 详细信息

目的基于正交实验筛选高糖损伤模型的最佳葡萄糖干预浓度、补阳还五汤水提液(BYHWT)保护高糖诱导视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)损伤的最佳浓度及最佳作用时间。方法CCK8法检测4.5、5、10、15、20、25 mg/mL葡萄糖浓度和0、5、10、15.625、31.25、62.5、125、250 mg/mL BYHWT浓度对HRCECs细胞增殖的影响。采用L9(34)正交实验设计以葡萄糖浓度、BYHWT浓度及孵育时间为影响因素,以OD值为评价指标,优选出高糖损伤模型的最佳葡萄糖干预浓度、BYHWT防护高糖损伤HRCECs的最佳浓度及最佳作用时间。根据正交实验优选出的葡萄糖浓度和BYHWT浓度,将HRCECs细胞分为正常组、模型组(优选葡萄糖浓度)与干预组(优选葡萄糖浓度+优选BYHWT浓度),培养24、48、72 h,每日换液1次,CCK8法测定3组细胞不同时间的OD值。结果①与4.5 mg/mL组比较,25 mg/mL葡萄糖浓度干预HRCECs细胞24、48、72 h后OD值均明显降低(P<0.05),提示该浓度可引起细胞损伤。与0 mg/mL组比较,5 mg/mL BYHWT干预24 h,10、15.625 mg/mL BYHWT干预48、72 h后OD值均明显提高(P<0.05),提示该浓度可促进增殖。②筛选正交实验可知,影响细胞增殖活性的主次因素为孵育时间>葡萄糖浓度>BYHWT浓度,选择25 mg/mL葡萄糖浓度建立高糖损伤模型,选择5 mg/mL BYHWT浓度干预细胞,观察细胞增殖活性,筛选干预时间。③与正常组比较,模型组干预24、48、72 h后OD值明显降低(P<0.05);干预组干预24、48 h后OD值明显升高(P<0.05),干预72 h后明显降低(P<0.05)。与模型组比较,干预组干预24、48、72 h后OD值明显升高(P<0.05)。结论25 mg/mL葡萄糖培养的HRCECs细胞可以作为高糖损伤模型,5 mg/mL BYHWT干预24 h可以用于研究其对高糖诱导HRCECs损伤的保护作用。

关键词：补阳还五汤高糖视网膜微血管内皮细胞正交实验设计

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碳水化合物反应元件结合蛋白（ChREBP）基因表达对高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞损伤及血管生成反应的影响

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眼科新进展 2025年第6期45卷 435-439页

作者：吴承鼎申海翠顾琳虹周佳王继红江南大学附属医院眼科

目的探讨碳水化合物反应元件结合蛋白（ChREBP）基因表达对高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）损伤及血管生成反应的影响。方法将传至4～6代的hRMEC加入无血清培养基中培养6 h后，分别置于正常浓度葡萄糖(5.6 mmol·L-1)... 详细信息

目的探讨碳水化合物反应元件结合蛋白（ChREBP）基因表达对高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）损伤及血管生成反应的影响。方法将传至4～6代的hRMEC加入无血清培养基中培养6 h后，分别置于正常浓度葡萄糖(5.6 mmol·L-1)、正常浓度葡萄糖+甘露醇(24.4 mmol·L-1)、高浓度葡萄糖(30.0 mmol·L-1)、空白siRNA+高浓度葡萄糖及ChREBP siRNA+高浓度葡萄糖进行处理，分别设为对照组、高渗组、单纯高糖组、空白siRNA组及ChREBP敲低组。细胞转染采用Lipofectamine RNAiMAX,转染时间24 h。采用Western blot分析高糖环境下hRMEC中ChREBP表达情况。TUNEL染色、细胞划痕实验、Transwell迁移实验及成管实验分析细胞凋亡、迁移及毛细血管生成情况。选择ChREBP基因正常表达野生型和ChREBP基因敲除突变型小鼠构建相关动物模型，在显微镜下计数小鼠视网膜新生血管发芽数量。结果高糖刺激30 min后hRMEC中ChREBP蛋白相对表达量均显著高于刺激15 min、1 h、2 h、3 h后（均为P<0.05）,同时高糖刺激2 h后hRMEC中TXNIP蛋白相对表达量均显著高于刺激15 min、30 min、1 h、3 h后（均为P<0.05）。高糖状态下ChREBP敲低组hRMEC中TXNIP及NLRP3蛋白相对表达量均显著低于空白siRNA组及单纯高糖组（均为P<0.05）。TUNEL染色、细胞划痕实验及毛细血管成管实验结果显示，ChREBP敲低组hRMEC中相对凋亡率、相对细胞覆盖面积百分比和相对迁移细胞数量百分比均显著低于空白siRNA组及单纯高糖组，而环状结构数量均显著低于空白siRNA组、单纯高糖组及高渗组（均为P<0.05）。ChREBP敲低组hRMEC中p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR相对表达水平均显著低于空白siRNA组及单纯高糖组（均为P<0.05）。ChREBP基因敲除突变型小鼠视网膜新生血管发芽数为（22.81±4.03）个，显著少于ChREBP基因正常表达野生型的（64.35±11.69）个（P<0.05）。结论 ChREBP基因可通过调节高糖状态下hRMEC细胞凋亡、迁移、成管及视网膜新生血管发育而影响糖尿病视网膜病变的发生与发展，这可作为该病潜在的治疗靶点。

关键词：碳水化合物反应元件结合蛋白糖尿病视网膜病变视网膜微血管内皮细胞

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永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞株及其构建方法与应用

永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞株及其构建方法与应用

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作者：代解杰霍姝汭邱敏陆彩霞王文广李娜孙晓梅罕园园仝品芬 650000 云南省昆明市五华区茭菱路935号

标准号: CN115521901A

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