检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：蒋依琳天津医科大学

学位级别：硕士

目的:视网膜新生血管是多种视网膜疾病的共同临床表现,血管内皮细胞增殖在其中扮演重要角色。现行激光光凝及抗血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）治疗可在一定程度阻止疾病进展,但治疗存在局限性,长期使用抗... 详细信息

目的:视网膜新生血管是多种视网膜疾病的共同临床表现,血管内皮细胞增殖在其中扮演重要角色。现行激光光凝及抗血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）治疗可在一定程度阻止疾病进展,但治疗存在局限性,长期使用抗VEGF药物可诱发视网膜萎缩。色素上皮衍生因子（Pigment Epithelial Derived Factor,PEDF）是内源性抗新生血管因子,同时具有抗炎和神经保护作用。然而,其在外源性给药途径中易降解从而不易充分发挥治疗作用。间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）分泌的小细胞外囊泡（small Extracellular Vesicles,sEVs）已被发现在多种眼部及全身疾病治疗中发挥良好作用,同时,其药物载体作用近年来受到广泛关注。因此,我们构建装载PEDF的MSCs-sEVs,以期增强PEDF的体内稳定性并实现PEDF与sEVs的协同治疗作用。我们通过探索不同载药方式对sEVs载药量的影响、探究该种制剂对视网膜微血管内皮细胞增殖及迁移能力的改变,全面了解装载PEDF的sEVs的制备方法及功能。本研究有望为视网膜新生血管性疾病的治疗提供新型安全有效的生物医学工程产品。方法:第一部分PEDF慢病毒转染间充质干细胞的定量蛋白质组学研究以三株不同脐带来源的正常人脐带间充质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）为对照组,以三株PEDF慢病毒转染对照组同源hUCMSCs为实验组,对照组及实验组细胞均为P5代,提取细胞蛋白,采用非数据依赖采集模式采集数据进行质谱的定量检测。第二部分构建装载PEDF的间充质干细胞sEVs采用慢病毒转染方式及超声方式构建载药sEVs。分离大鼠骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）,收集P3-P5细胞上清,差速超速离心法获取BMSCs-sEVs,利用电镜、粒径及WB对sEVs进行鉴定。构建PEDF慢病毒及对照慢病毒并对病毒滴度进行测试。以感染复数（multiplicity of infection,MOI）值为10、20、40的慢病毒转染BMSCs,流式细胞仪测定感染效率,RT-qPCR检测最佳MOI值转染细胞PEDF mRNA表达水平,收集转染后细胞sEVs,ELISA检测其内PEDF水平。收集正常BMSCs-sEVs,超声方式制备载药sEVs并对sEVs进行电镜及粒径检测。ELISA检测sEVs内PEDF水平。第三部分装载PEDF的间充质干细胞sEVs对视网膜微血管内皮细胞功能的影响利用超声方式构建的载药sEVs进行实验。使用不同浓度VEGF诱导rRMECs细胞生长,选择最佳VEGF刺激浓度。利用MTT增殖实验、Transwell迁移实验检测载药sEVs对VEGF诱导的细胞增殖及迁移的抑制作用。结果:1、PEDF慢病毒转染hUCMSCs蛋白组学结果:共鉴定出5361个可定量蛋白,其中差异蛋白共432个（差异倍数>1.5,P<0.05）。GO分析结果显示差异蛋白主要参与纤维蛋白溶解、细胞外结构构建等多种生物学进程;Reactome信号通路显著性富集分析表明,差异蛋白主要涉及IGFBPs调节的IGF运输和摄取、蛋白质翻译后修饰磷酸化等信号通路。2、BMSCs的提取与sEVs鉴定:成功分离BMSCs,镜下呈梭形。sEVs电镜显示其具有茶杯样、圆饼状外观,粒径大多分布在114.0±4.0nm处,WB显示sEVs表达CD9、CD63。3、慢病毒转染方式构建装载PEDF的BMSCs-sEVs:PEDF慢病毒滴度为2.35×10～7TU/ml,对照慢病毒滴度为1.95×10～8TU/ml。慢病毒最佳MOI值为10,PEDF慢病毒转染效率可达60.2%。RT-qPCR检测结果显示,PEDF-BMSCs中PEDF mRNA显著上调,差异有统计学意义（t=35.92,P<0.0001）,ELISA检测该方式构建载药sEVs内PEDF水平:0.15±0.02 ng/ml(0.01±0.00 ng/1010粒子)。4、超声方式构建装载PEDF的BMSCs-sEVs:载药组及对照组sEVs经超声处理后可保持结构完整,粒径分布符合sEVs经典粒径分布特点。ELISA检测该种方式构建载药sEVs内PEDF水平可达70.00±5.60 ng/ml(41.67±3.33ng/1010粒子)。5、最佳VEGF刺激浓度:5ng/ml。6、超声方式构建装载PEDF的BMSCs-sEVs可成功抑制VEGF诱导的rRMECs细胞增殖和迁移,且其抑制作用显著高于单纯sEVs及相同PEDF浓度蛋白纯品。结论:1、PEDF慢病毒转

关键词：色素上皮衍生因子间充质干细胞小细胞外囊泡视网膜微血管内皮细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

Gpr124在糖尿病视网膜病变微血管内皮细胞中的作用研究

Gpr124在糖尿病视网膜病变微血管内皮细胞中的作用研究

引用

作者：王玉雯中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

研究背景和意义:糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)是常见的致盲性眼病,它最典型的病理变化是视网膜微血管病变。持续的高血糖状态通过复杂的病理生理机制损伤内皮细胞,导致视网膜严重缺血缺氧,多种调控血管生成的因子上调,血... 详细信息

研究背景和意义: 糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)是常见的致盲性眼病,它最典型的病理变化是视网膜微血管病变。持续的高血糖状态通过复杂的病理生理机制损伤内皮细胞,导致视网膜严重缺血缺氧,多种调控血管生成的因子上调,血管内皮细胞的增殖迁移出芽,进一步引起新生血管的形成。新生血管如果不及时治疗,可能会导致新生血管性青光眼、玻璃体积血以及牵引性视网膜脱落等严重并发症,最终引起严重的视力丧失。因此,DR的预防与治疗的核心在于控制病理性新生血管的形成。在视网膜新生血管的形成机制中,多种因子共同参与调控过程,而目前研究普遍认为,血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)在这一过程中起着核心调控作用,是推动新生血管形成的关键因素。抗VEGF药物虽然已经在临床上得到广泛应用,但其在治疗新生血管方面仍存在局限性,无法完全消除新生血管,并且药效持续时间较短,需要频繁注射以维持疗效。因此,积极寻找新的靶分子,并开发出更为有效的药物来控制病理性新生血管的形成,对于延缓DR的进展、保护患者的视觉功能具有至关重要的意义。近期研究发现,G蛋白偶联受体124(G protein-coupled receptor 124,Gpr124)在大脑血管的内皮细胞中广泛表达,并且在血管生成过程中扮演了重要角色。在小鼠的发育阶段,Gpr124表达上调并参与脑血管新生的精细调控。此外,研究还发现,内皮细胞中Gpr124的缺失会进一步影响脑血管性疾病中内皮细胞间的紧密连接。由此可见,Gpr124在中枢神经系统(Central Nervous System,CNS)血管发育以及血管相关疾病中发挥了重要的调控作用。视网膜作为CNS的延伸部分,使我们有理由推测Gpr124在视网膜内皮细胞中有所表达,并可能积极参与DR微血管病变过程。基于这一推测,我们进一步假设Gpr124在DR微血管内皮细胞病理性新生血管形成过程中,可能发挥着至关重要的调控作用。这一假设为我们深入探索DR的发病机制提供了新的视角和研究方向。研究目的: 1、探索Gpr124在DR患者纤维血管膜(Fibrovascular membranes,FVM)中的表达定位以及DR模型鼠视网膜中的表达变化。 2、明确Gpr124在原代人视网膜微血管内皮细胞(Human Retinal Microvascular Endothelial Cell,HRMEC)增殖、迁移以及管腔形成的调控作用及可能的分子机制。研究方法: 1、通过收集DR晚期患者的视网膜前增殖纤维血管膜,行免疫荧光染色(Immunofluorescence,IF),观察Gpr124表达以及定位。 2、采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)腹腔注射以及高脂肪饲料(脂肪含量45%)进行喂养,构建2型糖尿病小鼠模型;正常饮食的小鼠腹腔注射柠檬酸/柠檬酸钠溶液作为对照组,在糖尿病发病后第4、8、16、24周监测小鼠血糖和体重。 3、取发病后第24周作为观测时间,STZ组以及对照组小鼠处死后将视网膜制成全视网膜铺片和冰冻、石蜡切片,并且提取视网膜蛋白,进行IF、苏木精—伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining,HE)、蛋白印迹分析(Western Blot,WB)等实验,观察糖尿病小鼠造模后视网膜微血管病变以及Gpr124的表达变化。 4、体外培养HRMEC,培养基中加入适宜浓度葡萄糖后,用细胞计数试剂盒(Cell counting kit 8,CCK8)检测细胞活力以及5-乙炔-2-脱氧尿苷荧光标记法(5-ethynyl-2-deox-yuridine,EdU)检测细胞增殖能力;IF观察Gpr124表达定位,WB观察Gpr124表达变化。 5、病毒敲低HREMC的Gpr124表达,用EdU检测细胞增殖数目和增值百分率变化,细胞迁移能力变化由划痕迁移实验和细胞小室迁移实验(Transwell)检测,体外细胞血管形成能力变化由基质胶(Matrigel)小管成形实验检测。 6、敲低Gpr124表达后,WB检测血管β-连环蛋白(β-catenin)、内皮生长因子A(Vascular Endothelial Growth Factor A,VEGFA)、基质金属蛋白酶9(Matrix Metalloproteinase-9,MMP9)以及紧密连接蛋白1(Zonula occludens-1,ZO-1)在HRMEC中的相对蛋白表达水平变化。研究结果: 1、Gpr124在DR患者病理性增殖FVM的新生血管内皮细胞中表达; 2、在造模成功24周后的DR小鼠的视网膜中发现Gpr124的蛋白水平对比对照组显著升高; 3、在高糖

关键词：糖尿病视网膜病变 G蛋白偶联受体124 视网膜微血管内皮细胞血管内皮生长因子A β-连环蛋白

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

右归丸对高糖缺氧条件下大鼠视网膜微血管内皮细胞mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的干预作用研究

右归丸对高糖缺氧条件下大鼠视网膜微血管内皮细胞mTOR/HIF-1α/V...

引用

作者：胡婷婷甘肃中医药大学

学位级别：硕士

目的:基于视网膜新生血管生成相关的mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路,探讨右归丸治疗增殖性糖尿病视网膜病变的作用靶点和分子机制,为中医药防治糖尿病视网膜病变提供新的思路与科学依据。方法:选择大鼠视网膜微血管内皮细胞,通过在培养基中... 详细信息

目的:基于视网膜新生血管生成相关的mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路,探讨右归丸治疗增殖性糖尿病视网膜病变的作用靶点和分子机制,为中医药防治糖尿病视网膜病变提供新的思路与科学依据。方法:选择大鼠视网膜微血管内皮细胞,通过在培养基中同时加入33mmol/L的葡萄糖和100μmol/L的CoCl2,将内皮细胞培养96h,建立体外高糖缺氧细胞模型,模拟PDR过度增殖的病理状态。将内皮细胞按不同培养条件分为正常组、模型组、右归丸药物血清高、中、低剂量组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和细胞划痕法分别观察右归丸药物血清对模型细胞增殖和迁移的影响;采用RT-PCR法检测各组细胞mTORmRNA、4EBP1mRNA、HIF-1αmRNA、VEGFmRNA基因表达水平;Western blot法检测各组细胞p-mTOR、p-4EBP1、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平。结果:1.在大鼠视网膜微血管内皮细胞培养基中加入33mmol/L的葡萄糖和100umol/L的CoCl2培养96h,可成功模拟出PDR内皮细胞过度增殖的病理状态。***检测细胞增殖结果:24h时,模型组OD值低于正常组,差异有统计学意义（p<0.005）;右归丸药物血清高、中剂量组OD值高于模型组,差异有统计学意义（p<0.005）。48h时,正常组、模型组、高、中、低剂量组之间差异无统计学意义（p>0.005）。96h时,模型组OD值高于正常组,差异有统计学意义（p<0.005）;右归丸药物血清高、中剂量组OD值低于模型组,差异有统计学意义（p<0.005）。细胞划痕检测迁移结果:48h时,模型组迁移率低于正常组,差异有统计学意义（p<0.005）;右归丸高剂量组迁移率高于模型组,差异有统计学意义（p<0.005）。96h时,模型组迁移率高于正常组,差异有统计学意义（p<0.005）;右归丸高、中剂量组迁移率低于模型组,差异有统计学意义（p<0.005）。***-PCR法检测基因表达结果:与正常组比较,模型组mTOR、4EBP1、HIF-1α、VEGFmRNA基因表达均明显升高（p<0.005）。与模型组比较,右归丸各浓度组mTOR、4EBP1、HIF-1α、VEGFmRNA基因表达均有不同程度降低（p<0.005）,且随着右归丸药物浓度的增加,各基因表达水平越低。Western blot法检测蛋白表达结果:与正常组比较,模型组p-mTOR、p-4EBP1、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平均明显升高（p<0.005）。与模型组比较,右归丸各浓度组p-mTOR、p-4EBP1、HIF-1α、VEGF蛋白表达均有不同程度降低（p<0.005）,且随着右归丸药物浓度的增加,各蛋白表达水平越低。结论:右归丸药物血清能够通过抑制大鼠视网膜微血管内皮细胞增殖和迁移,从而抑制视网膜新生血管的生成。其机制可能与调控mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路中相关基因与蛋白的表达有关。

关键词：右归丸视网膜微血管内皮细胞糖尿病视网膜病变信号通路

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

银杏内酯B对高糖低氧诱导视网膜微血管内皮细胞损伤的保护作用及机制

银杏内酯B对高糖低氧诱导视网膜微血管内皮细胞损伤的保护作用及...

引用

作者：陈泰弘广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究以人视网膜微血管内皮细胞（human retinal microvascular endothelial cells,HRMEC）为研究对象,建立高糖低氧诱导HRMEC视网膜微血管内皮细胞损伤模型,然后通过从细胞凋亡、氧化应激和微血管内皮炎性反应的角度,探讨银杏内... 详细信息

目的:本研究以人视网膜微血管内皮细胞（human retinal microvascular endothelial cells,HRMEC）为研究对象,建立高糖低氧诱导HRMEC视网膜微血管内皮细胞损伤模型,然后通过从细胞凋亡、氧化应激和微血管内皮炎性反应的角度,探讨银杏内酯B（Ginkgolide B,GKB）对高糖低氧所致HRMEC视网膜微血管内皮细胞损伤的保护作用和潜在机制的研究,为糖尿病尤其糖尿病眼病的临床协同用药进行了积极的探索。方法:采用乳酸脱氢酶LDH释放实验筛选高糖低氧的最佳作用条件。高糖低氧诱导HR-MEC细胞损伤模型建立成功后,采用CCK-8法筛选GKB处理的最佳作用条件。细胞随机分为正常对照组、高糖低氧模型组、溶媒对照组、GKB处理组和胰岛素样生长因子-1刺激组。CCK-8法检测HRMEC视网膜微血管内皮细胞活力;ELISA方法检测HRMEC视网膜微血管内皮细胞的肿瘤坏死因子-α（tumor necr-osis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1,MCP-1）、细胞间粘附分子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）和血管壁细胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）分泌的影响;单核细胞粘附实验检测HRMEC视网膜微血管内皮细胞对单核细胞粘附的粘附能力;ROS、NO和SOD分析试剂盒分别检测HRMEC视网膜微血管内皮细胞ROS聚集、NO和SOD活性;流式细胞术检测HRMEC视网膜微血管内皮细胞凋亡;NF-κB活性试剂盒检测HRMEC视网膜微血管内皮细胞的NF-κB活性;Western blot检测HRMEC视网膜微血管内皮细胞因子cleaved caspase-3/caspase-3、p-P65/P65、p-IKKβ/IKKβ、p-IκBα/IκBα、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-m TOR/m TOR的表达。结果:30 m M葡萄糖处理细胞48 h后,1%O2的低氧环境继续培养4 h,作为本实验的高糖/低氧细胞损伤模型作用条件。60μg/ml GKB处理HRMEC视网膜微血管内皮细胞48 h,作为本实验GKB的作用条件。与正常对照组比较,模型组细胞活力显著降低,细胞凋亡显著增加,TNF-α、IL-8、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1的分泌显著升高,细胞粘附能力增加;与模型组相比,GKB处理组细胞活力显著升高,细胞凋亡显著降低,TNF-α、IL-8、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1的分泌水平部分回落,细胞粘附能力显著降低。此外,模型组细胞中NF-κB活性升高,p-P65、p-IKKβ、p-IκBα表达升高,p-Akt、p-PI3K和p-m-TOR表达降低;经GKB处理后细胞中NF-κB活性降低,p-P65、p-IKKβ、p-IκBα表达降低,p-PI3K、p-Akt和p-m TOR表达升高;本实验进一步采用Akt激动剂人胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）做功能修复实验及协同用药实验,发现IGF-1可进一步协同GKB促进对PI3K/Akt/m TOR信号通路的活性,并且,IGF-1可进一步协同GKB抑制NF-κB信号通路的活性和抑制过氧化应激。结论:GKB发挥HRMEC保护作用可能通过促进PI3K/Akt/m TOR信号通路的激活、抑制NF-κB信号通路的活性和抑制过氧化应激,抵抗高糖低氧诱导的HRMEC凋亡、炎性和过氧化应激反应发生实现。

关键词：银杏内酯B 糖尿病视网膜病变视网膜微血管内皮细胞凋亡炎性反应 NF-κB信号通路氧化应激 PI3K/Akt/mTOR信号通路

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

右归丸药物血清对高糖缺氧条件下大鼠视网膜微血管内皮细胞增殖及迁移的影响

引用

中华中医药杂志 2019年第4期34卷 1444-1447页

作者：杨敏罗向霞康莉王振甘肃中医药大学兰州730000 甘肃省中医院兰州730050 庆阳市中医医院甘肃庆阳745000

目的:观察右归丸药物血清对高糖缺氧条件下SD大鼠视网膜微血管内皮细胞增殖及迁移的影响。方法:采用33mmol/L的葡萄糖和100μmol/L的CoCl2同时附加于培养基中培养细胞,以建立体外高糖缺氧的细胞模型,以此为研究对象,分别采用四甲基偶氮... 详细信息

目的:观察右归丸药物血清对高糖缺氧条件下SD大鼠视网膜微血管内皮细胞增殖及迁移的影响。方法:采用33mmol/L的葡萄糖和100μmol/L的CoCl2同时附加于培养基中培养细胞,以建立体外高糖缺氧的细胞模型,以此为研究对象,分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和Transwell小室法观察不同剂量的右归丸药物血清对模型细胞增殖和迁移的影响。结果:第1天时,右归丸药物血清中剂量组对高糖缺氧抑制细胞增殖起保护作用(P<0.05);第2天时,空白对照组、模型组、右归丸药物血清各剂量组对细胞的增殖作用差异无统计学意义;第4天时,右归丸药物血清高、中剂量组对高糖缺氧引起的细胞增殖起抑制作用(P<0.05)。第2天时,右归丸药物血清中、高剂量组均能降低高糖缺氧对细胞迁移的抑制作用(P<0.003);第4天时,右归丸药物血清低、中、高3个剂量组均能够抑制高糖缺氧对细胞迁移的促进作用(P<0.003)。结论:右归丸药物血清可抑制高糖缺氧条件下SD大鼠视网膜微血管内皮细胞增殖及迁移,减少视网膜新生血管的生成,为右归丸治疗糖尿病视网膜病变提供了科学依据。

关键词：右归丸视网膜微血管内皮细胞增殖迁移

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

右归丸药物血清对高糖缺氧条件下大鼠视网膜微血管内皮细胞VEGF、VEGFR-2、PI3K、Akt基因及蛋白表达的影响

引用

中华中医药杂志 2019年第4期34卷 1675-1678页

作者：罗向霞杨敏邰银萍张定华甘肃省中医院兰州730050 甘肃中医药大学兰州730000

目的:观察右归丸药物血清对高糖缺氧条件下SD大鼠视网膜微血管内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)基因及蛋白表达的影响。方法:采用33mmol/L的葡萄糖和100μmol/L... 详细信息

目的:观察右归丸药物血清对高糖缺氧条件下SD大鼠视网膜微血管内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)基因及蛋白表达的影响。方法:采用33mmol/L的葡萄糖和100μmol/L的CoCl2同时附加于培养基中培养细胞4d,以建立体外高糖缺氧的细胞模型,应用RT-PCR法及Western blot法检测各组右归丸药物血清对模型细胞VEGF、VEGFR-2、PI3K、Akt基因及蛋白表达水平的影响。结果:高糖及高糖缺氧均能导致大鼠视网膜微血管内皮细胞中VEGF、VEGFR-2、PI3K、Akt mRNA的表达量上升(P<0.003),而低、中、高剂量组的右归丸药物血清均可降低此高表达(P<0.003)。高糖缺氧亦可引起模型细胞中VEGF、VEGFR-2、PI3K及Ak蛋白表达增多(P<0.003),而中、高剂量组的右归丸药物血清均可降低此高表达(P<0.003)。结论:右归丸药物血清可能通过降低高糖缺氧条件下SD大鼠视网膜微血管内皮细胞中VEGF、VEGFR-2、PI3K、Akt基因及蛋白表达水平,从而发挥其抑制视网膜微血管内皮细胞增殖及迁移的作用,抑制新生血管生成。

关键词：右归丸药物血清视网膜微血管内皮细胞血管内皮生长因子磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

SFLT-1基因修饰的骨髓间充质干细胞对H2O2损伤视网膜微血管内皮细胞的作用研究

SFLT-1基因修饰的骨髓间充质干细胞对H2O2损伤视网膜微血管内皮细...

引用

作者：崔晓媛福建医科大学

学位级别：硕士

背景:视网膜及脉络膜新生血管性疾病是导致视力损害和失明的主要原因,主要由氧化应激和炎症反应造成,目前主要治疗方法是通过玻璃体腔反复多次注射抗血管内皮生长因子（VEGF）药物,可能会导致眼压升高、眼内炎等,且增加了患者的经济负... 详细信息

背景:视网膜及脉络膜新生血管性疾病是导致视力损害和失明的主要原因,主要由氧化应激和炎症反应造成,目前主要治疗方法是通过玻璃体腔反复多次注射抗血管内皮生长因子（VEGF）药物,可能会导致眼压升高、眼内炎等,且增加了患者的经济负担。大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）可分泌多种神经营养因子,通过旁分泌发挥神经营养及抗氧化损伤的作用。可溶性血管内皮生长因子受体1（SFLT-1）可有效抑制VEGF,阻断新生血管形成。视网膜微血管内皮细胞（RMECs）是视网膜新生血管性疾病发生氧化应激及炎症反应的重要参与者。本研究通过构建SFLT-1过表达的腺病毒感染BMSCs,观察其对氧化损伤RMECs的作用。目的:体外建立BMSCs与人RMECs共培养体系,评估过表达SFLT-1基因的BMSCs对过氧化氢（H2O2）损伤RMECs的影响。方法:体外提取、培养SD大鼠BMSCs,并进行流式鉴定,成骨、成脂及向内皮细胞诱导。使用SFLT1基因过表达的腺病毒感染BMSCs,并进行RT-qPCR、ELISA检测其mRNA与蛋白分泌情况。体外培养人视网膜微血管内皮细胞,并进行vWF鉴定;使用不同浓度的H2O2进行诱导损伤,通过CCK8、TUNEL测定其最佳损伤模型浓度。本实验分为4组:正常内皮细胞组（Normal）、H2O2诱导损伤内皮细胞组（H2O2）、GFP-BMSCs与内皮细胞共培养组（GFP-BMSCs）、SFLT1-BMSCs与内皮细胞共培养组（SFLT1-BMSCs）。共培养24h、48h后,观察各组氧化损伤情况,ELISA检测各组VEGF分泌情况,各组MDA、SOD变化情况,炎症因子TNF-α、IL-1β分泌情况,以及神经营养因子BDNF、CNTF的分泌情况,评估GFP-BMSCs与SFLT1-BMSCs对RMECs的影响。结果:体外成功提取、培养大鼠BMSCs,流式细胞鉴定结果显示CD44、CD90、CD29、CD73为阳性,CD34、CD11b/c、CD45为阴性,符合MSCs定义标准。成脂诱导、成骨诱导、向内皮细胞诱导均成功。成功构建过表达SFLT1基因的腺病毒载体,并以MOI值为400感染BMSCs,检测到BMSCs中SFLT-1 mRNA的表达及SFLT-1蛋白的持续分泌。人RMECs经过vWF免疫荧光鉴定结果为阳性;CCK8、TUNEL观察H2O2诱导RMECs缺氧损伤随药物浓度增加,细胞活力下降,并出现细胞凋亡现象,取最佳诱导浓400μmol/L进行后续实验。共培养24h、48h后,与H2O2损伤组相比,GFP-BMSCs组与SFLT1-BMSCs组RMECs上清液中VEGF分泌量明显下降,细胞内MDA水平下降,SOD水平升高,且SFLT1-BMSCs组较GFP-BMSCs组各指标水平变化更明显。GFP-BMSCs组与SFLT1-BMSCs组RMECs上清液中炎症因子TNF-α和IL-1β水平下降,SFLT1-BMSCs组较GFP-BMSCs组下降水平无差异。神经营养因子CNTF和BDNF分泌增加,且GFP-BMSCs组较SFLT1-BMSCs组增加更明显。结论:SFLT1基因修饰的BMSCs有效降低H2O2诱导RMECs的VEGF、炎症因子及氧化因子的水平,提高神经营养因子与抗氧化因子的水平,且SFLT1与BMSCs的协同作用优于单独BMSCs的作用,均有效保护氧化损伤的视网膜微血管内皮细胞。

关键词：骨髓间充质干细胞视网膜微血管内皮细胞 SFLT1 H2O2

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

大麻二醇激活FOXO3a下调高糖条件下视网膜微血管内皮细胞表达VEGF

大麻二醇激活FOXO3a下调高糖条件下视网膜微血管内皮细胞表达VEGF

引用

作者：张婵南华大学

学位级别：硕士

目的:观察大麻二醇(CBD)对高糖条件下人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,并初步探讨其机制。方法:体外培养HRCECs并分为6组:P0组(空白对照):仅加入等体培养基;P1组(溶剂对照组):加入0.5%乙醇作为溶剂对照... 详细信息

目的:观察大麻二醇(CBD)对高糖条件下人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,并初步探讨其机制。方法:体外培养HRCECs并分为6组:P0组(空白对照):仅加入等体培养基;P1组(溶剂对照组):加入0.5%乙醇作为溶剂对照;P2组(低糖对照组)+0.5%乙醇:葡萄糖的浓度为5.5mmol/l+0.5%乙醇;P3组(高糖对照组):葡萄糖浓度为22mmol/l+0.5%乙醇;P4组:P3+1μmol/l CBD;P5组:P3+10μmol/l CBD。CBD处理结束后,采用MTT检测细胞增殖变化;实时定量PCR和Western blot分别检测VEGF mRNA和蛋白的表达。同时采用Western blot检测核转录因子FOXO3a磷酸化以及FOXM1蛋白表达,并采用免疫荧光检测FOXO3a的核转位。最后采用染色质共沉淀技术检测FOXO3a和FOXM1与VEGF启动子区域的结合。结果:***结果显示,在相同的时间点,高糖组细胞增值率明显高于低糖组和对照组,分别加入1μmol/L和10μmol/L CBD处理后,与高糖组相比,细胞活性明显降低。差异有统计学意义。2.P1溶剂对照组和P2低糖组细胞VEGF mRNA表达无明显变化;而P3高糖组VEGF mRNA表达明显增高。给予CBD处理后,P4和P5组VEGF表达水平明显降低。此外,Western blot结果也显示VEGF蛋白表达水平与mRNA类似。*** blot结果显示,P0空白组和P1溶剂对照组细胞中FOXO3a第253位丝氨酸(Ser253)磷酸化水平较低,P2低糖组和10P3高糖组均有不同程度的增高。而加入1μmol/L和10μmol/L CBD后,Ser253磷酸化水平随之减少。免疫荧光结果也显示,P0组细胞中FOXO3a主要在细胞核中表达,而在高糖和低糖条件下,细胞核中FOXO3a含量有所减少,而细胞浆中FOXO3a明显增多。给予CBD处理后,进一步促进FOXO3a转位至细胞核内。此外,CBD作用后,FOXM1蛋白表达水平明显降低。4.染色质共沉淀结果显示,P0组中FOXO3a和VEGF的结合水平较高,高糖条件下FOXO3a和VEGF的结合水平低于P0组,而经不同浓度CBD处理后,FOXO3a-DNA复合体的水平明显增多。与FOXO3a相反,CBD处理后,FOXM1-DNA复合体的水平明显低于高糖处理组。结论:1.大麻二醇可抑制高糖条件下视网膜微血管内皮细胞增殖;2.大麻二醇影响核转录因子FOXO3a和FOXM1与VEGF启动子结合,最终抑制VEGF表达。

关键词：大麻二醇视网膜微血管内皮细胞血管内皮生长因子 FOXO3a FOXM1

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

胰岛素对人视网膜微血管内皮细胞syndecan-1的表达及细胞通透性和增殖的影响

引用

国际眼科杂志 2018年第8期18卷 1381-1384页

作者：胡永亮王静波周历韩晓霞师凌昊解放军第309医院皮肤科中国北京市100091 解放军第309医院眼科中国北京市100091 93735部队医院五官科中国天津市301700

目的:观察胰岛素对人视网膜微血管内皮细胞syndecan-1的表达及细胞的增殖和通透性的影响。方法:以低浓度(100nmol/L)和高浓度(1000nmol/L)胰岛素分别刺激细胞48h后,采用蛋白印迹和实时定量聚合酶链反应观察syndecan-1蛋白和mRNA的表达... 详细信息

目的:观察胰岛素对人视网膜微血管内皮细胞syndecan-1的表达及细胞的增殖和通透性的影响。方法:以低浓度(100nmol/L)和高浓度(1000nmol/L)胰岛素分别刺激细胞48h后,采用蛋白印迹和实时定量聚合酶链反应观察syndecan-1蛋白和mRNA的表达变化。分别以四甲基偶氮唑蓝法和辣根过氧化物酶法观察细胞的增殖性和通透性。结果:不同浓度的胰岛素刺激后,视网膜微血管内皮细胞syndecan-1蛋白和mRNA的表达均升高,且高浓度胰岛素的作用更显著。胰岛素刺激后,视网膜微血管内皮细胞的增殖水平和通透性均增高,且高浓度胰岛素的作用更强。结论:胰岛素可上调人视网膜微血管内皮细胞syndecan-1的表达、增加细胞的通透性和促进细胞的增殖。

关键词：视网膜微血管内皮细胞 syndecan-1 胰岛素通透性增殖

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

丝裂原激活蛋白激酶信号通路抑制剂对高糖培养视网膜微血管内皮细胞的影响

引用

中国临床药理学杂志 2018年第23期34卷 2731-2734页

作者：白月郭健福建医科大学附属第一医院眼科

目的研究丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号通路抑制剂对高糖培养大鼠视网膜微血管内皮细胞（RMECs）的作用。方法体外培养RMECs,将细胞分为5组:空白组、模型组、SB203580（p38抑制剂）组、U0126（胞外调节蛋白激酶抑制剂）组和SP600125... 详细信息

目的研究丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号通路抑制剂对高糖培养大鼠视网膜微血管内皮细胞（RMECs）的作用。方法体外培养RMECs,将细胞分为5组:空白组、模型组、SB203580（p38抑制剂）组、U0126（胞外调节蛋白激酶抑制剂）组和SP600125（应激活化蛋白激酶抑制剂）组,各抑制剂组加入相应抑制剂10μmol·L-1预孵育1 h后,除空白组外,其他4组高糖处理24 h。以免疫荧光实验检测细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）的表达分布,用实时荧光定量-聚合酶链式反应及免疫印迹法检测PPAR-γmRNA与蛋白的表达水平,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位（MMP）。结果空白组、模型组、SB203580组、U0126组和SP600125组的PPAR-γmRNA表达量比值分别为1. 00±0. 01,0. 79±0. 06,1. 01±0. 04,1. 19±0. 11和0. 73±0. 12;这5组MMP分别为0. 40±0. 02,0. 22±0. 01,0. 41±0. 01,0. 45±0. 01和0. 21±0. 01。模型组与空白组比较,上述指标均显著降低,差异均有统计学意义（均P <0. 05）;SB203580组和U0126组与模型组比较,上述指标均升高,差异均有统计学意义（均P <0. 05）; SP600125组与模型组比较,差异均无统计学意义（均P> 0. 05）;抑制剂组中,U0126组的上述指标升高最显著,差异均有统计学意义（均P <0. 05）。PPAR-γ的蛋白水平变化与mRNA水平变化一致。结论在高糖环境中,抑制剂U0126可上调RMECs的PPAR-γ表达并减轻其线粒体损伤。

关键词：丝裂原激活蛋白激酶视网膜微血管内皮细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ 糖尿病视网膜病变

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：