检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：高立杰河北农业大学

学位级别：硕士

黄金梨(Pyrus pyrifolia ***)属砂梨系统,为我国主栽品种之一。黄金梨果实质优味美,但其货架期短,采摘后在常温条件下贮存易失水、黑心及腐烂,极大地影响了其采后品质。本研究以黄金梨果实为材料,依据已经公布的黄金梨果实Pp ACO1基因序... 详细信息

黄金梨(Pyrus pyrifolia ***)属砂梨系统,为我国主栽品种之一。黄金梨果实质优味美,但其货架期短,采摘后在常温条件下贮存易失水、黑心及腐烂,极大地影响了其采后品质。本研究以黄金梨果实为材料,依据已经公布的黄金梨果实Pp ACO1基因序列(基因登录号:JN807390),从黄金梨果实中克隆得到Pp ACO1基因,并以其作为目的片段,采用较为常用的植物表达载体p BI121构建了Ca MV35S::Pp ACO1过量表达载体;同时以从拟南芥生物资源中心(Arabidopsis Biological Resource Center,ABRC)购入的At ACO2基因缺失拟南芥为材料,用三引物法验证其突变体的纯合性,并用得到的ataco2纯合突变体拟南芥(以下简称ataco2突变体)为试材,以哥伦比亚野生型拟南芥(以下简称Col-0)为对照,研究了ataco2突变体与Col-0的表型及生理差异。黄金梨ACC氧化酶基因过量表达载体的构建及其拟南芥突变体的验证为研究黄金梨ACC氧化酶基因功能奠定基础,并为利用分子生物学手段改良黄金梨果实的耐贮性、改善其采后品质提供参考依据。主要研究结果如下:1设计并合成正向引物ACO1-F和反向引物ACO1-R,用RT-PCR的方法从黄金梨果实的c DNA中克隆得到Pp ACO1基因编码区全长。2设计并合成分别带有XbaⅠ和SacⅠ酶切连接位点的正向引物ACO1-EF和反向引物ACO1-ER,以Pp ACO1基因全长为模板扩增得到目的片段,并用TA克隆将该片段克隆到p MD19-T载体上。用XbaⅠ和SacⅠ将目的片段从T载体克隆产物上切下,并用T4 DNA连接酶将其连接到用XbaⅠ和SacⅠ双酶切的植物双元表达载体p BI121的Ca MV35S启动子下游。通过PCR及双酶切鉴定其正确性,将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞,通过测序及序列比对证明Pp ACO1基因已成功插入,Ca MV35S::Pp ACO1重组过量表达载体构建成功。2从ABRC购入拟南芥At ACO1、At ACO2基因T-DNA插入突变体,用三引物法验证得到了拟南芥At ACO2基因T-DNA插入纯合突变体。3 Col-0与ataco2突变体的表型研究表明,At ACO2基因的缺失延缓了种子萌发、减弱了“三重反应”、使莲座叶直径显著减小、推迟开花且使花期延长。4通过研究Col-0与ataco2突变体中超氧物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化物酶(Peroxidase,POD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、多酚氧化酶(Polyphenoloxidase,PPO)、脂氧合酶(linoleate:oxygen oxidoreductase,LOX)五种酶的活性发现,ataco2突变体叶片中SOD的活性显著升高和PPO的活性显著降低;花中POD和CAT以及LOX的活性显著降低;果实中POD和CAT的活性显著升高,SOD和PPO的活性显著降低。

关键词：黄金梨 ACC氧化酶基因过量表达载体拟南芥 T-DNA插入

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栽培草莓果实中特异表达的bHLH78基因的克隆及过量表达载体构建

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分子植物育种 2014年第3期12卷 456-465页

作者：豆玉娟曹飞马跃李贺刘月学张志宏沈阳农业大学园艺学院沈阳110866

根据二倍体野生森林草莓(Fragaria vesca)预测的bHLH78-like基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术从八倍体栽培凤梨草莓(Fragaria×ananassa)品种‘幸香’果实中克隆出FabHLH78基因全长CDS。测序和分析结果表明,FabHLH78基因的CD... 详细信息

根据二倍体野生森林草莓(Fragaria vesca)预测的bHLH78-like基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术从八倍体栽培凤梨草莓(Fragaria×ananassa)品种‘幸香’果实中克隆出FabHLH78基因全长CDS。测序和分析结果表明,FabHLH78基因的CDS全长1 653 bp,编码550个氨基酸残基,在线软件Compute pI/Mw分析编码的蛋白质理论分子量约为59.6 kD、等电点(pI)6.17,经软件DNAMAN分析,核酸序列和氨基酸序列与二倍体草莓FvbHLH78-like基因的一致性分别为98.31%和96.55%。利用半定量PCR检测FabHLH78基因在草莓根、匍匐茎、叶、果实中的表达情况,发现其只在果实中特异表达;实时定量RT-PCR结果显示随着果实发育FabHLH78基因表达量逐渐增加。FabHLH78全长CDS被整合到植物表达载体pRI101-AN上,构建出FabHLH78基因的过量表达载体pRI101-bHLH78,为进一步验证FabHLH78基因的功能奠定了基础。

关键词： bHLH78 草莓基因克隆实时定量PCR 过量表达载体

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甘蓝型油菜G蛋白β亚基过量表达载体和RNA干扰载体的构建及遗传转化

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四川大学学报（自然科学版） 2013年第4期50卷 856-862页

作者：张艺琼刘洋王茂林四川大学生命科学学院成都610064

构建了含甘蓝型油菜G蛋白β亚基BnGB1基因的过量表达载体pFGC5941-BnGB1和RNA干扰(RNAi)载体pFGC5941-Ri-BnGB1,将构建的两个载体分别经根癌农杆菌介导,转化甘蓝型油菜"R197"下胚轴外植体,经过外植体的预培养、共培养以及选... 详细信息

构建了含甘蓝型油菜G蛋白β亚基BnGB1基因的过量表达载体pFGC5941-BnGB1和RNA干扰(RNAi)载体pFGC5941-Ri-BnGB1,将构建的两个载体分别经根癌农杆菌介导,转化甘蓝型油菜"R197"下胚轴外植体,经过外植体的预培养、共培养以及选择培养后,获得再生植株24株.经PCR鉴定,其中有1株为BnGB1基因过量表达转基因植株,2株为BnGB1基因RNA干扰转基因植株.RT-PCR结果显示,相对于野生型"R197"油菜,过表达转基因植株中的BnGB1基因的表达量提高,而RNA干扰转基因植株中BnGB1基因的表达量降低.

关键词：甘蓝型油菜G蛋白β亚基过量表达载体 RNA干扰载体

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牡丹PsSERK干扰表达载体的构建及其功能初步研究

牡丹PsSERK干扰表达载体的构建及其功能初步研究

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作者：李小娟河南农业大学

学位级别：硕士

牡丹（Paeonia suffruticosa）是我国的传统名花,也是著名的观赏与药用植物。本课题组在牡丹组织培养,体细胞胚发生过程中发现非胚性愈伤组织向胚性愈伤组织转化困难,同时存在胚性细胞与非胚性细胞共存的现共。因此,提高非胚性愈伤组织... 详细信息

牡丹（Paeonia suffruticosa）是我国的传统名花,也是著名的观赏与药用植物。本课题组在牡丹组织培养,体细胞胚发生过程中发现非胚性愈伤组织向胚性愈伤组织转化困难,同时存在胚性细胞与非胚性细胞共存的现共。因此,提高非胚性愈伤组织向胚性愈伤组织转化率已成为建立牡丹体胚再生体系中亟待解决的问题。目前研究认为体细胞胚胎发生相关类受体蛋白激酶（somatic embryogenesis receptor-like kinase,SERK）基因在植物愈伤组织诱导中起重要作用,能显著提高植物的胚性愈伤组织发生率,可以作为植物胚性愈伤组织发生早期的分子标记之一。本研究在课题组前期工作的基础上,以牡丹品种‘凤丹白’试管苗叶柄诱导形成的愈伤组织为材料,首先优化了牡丹愈伤组织遗传转化体系,利用CRISPR/Cas9系统构建了PsSERK干扰表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化体系分别将PsSERK基因过量表达载体和干扰表达载体转入牡丹愈伤组织中,测定了相关激素、酶活指标,并采用实时荧光定量PCR技术对不同载体的PsSERK表达情况进行了分析,为探究PsSERK基因在牡丹体胚发生过程中的调控机理及其功能提供依据。主要研究及结果如下:1.农杆菌介导的牡丹遗传转化体系的优化在对牡丹愈伤组织进行转基因预实验时,试验不同浓度的抑菌剂（Cef、Cb）的除菌效果,并对生长状况进行统计。结果发现,在农杆菌介导的牡丹愈伤组织遗传转化体系中,对农杆菌LBA4404除菌效果较好的是Cb,且适宜浓度为200 mg·L-1。***干扰表达载体的构建根据PsSERK基因编码区全长cDNA序列,设计靶点,靶点通过Bbs I位点克隆到psgR-Cas9-At载体骨架中,形成中间克隆载体PsSERK-psgR-Cas9-At,分析psgR-Cas9-At和pCAMBIA1300的酶切位点,通过Hind III、Kpn I酶切位点进行双酶切,连接,形成重组质粒。成功构建PsSERK干扰表达载体pCAMBIA1300-PsSERK-psgR-Cas9-At。采用冻融法将构建好的干扰表达载体转入农杆菌LBA4404中。3.农杆菌介导的牡丹愈伤组织遗传转化利用优化的农杆菌介导的遗传转化方法,分别将PsSERK过表达载体和干扰表达载体转入牡丹愈伤组织中。采用GUS基因组织化学染色法进行,试验结果成功检测到GUS瞬时表达活性,愈伤组织碎块呈蓝色,初步表明PsSERK过量表达载体转入牡丹愈伤组织中。以转基因牡丹愈伤组织cDNA为模板做PCR扩增得到与预期大小一致的条带,而阴性对照没有条带,初步表明PsSERK干扰表达载体成功转入牡丹愈伤组织中。***基因功能的初步分析首先分别将PsSERK基因过表达和干扰表达载体转入牡丹愈伤组织,以添加外源细胞分裂素类物质6-BA(0.5 mg·L-1)、TDZ(0.1 mg·L-1)的未转基因愈伤组织（对照）为研究对共,分别在0,5,10,15,20,25,30,35,40,45 d采集上述三处理的愈伤组织,进行相关的激素（ABA、GA3、IAA）,酶活性（POD、SOD、APX、CAT）等指标的测定以及实时荧光定量,试验结果表明,三种处理的牡丹愈伤组织的PsSERK基因表达量由高到低排序依次是:过量>未转基因（对照）>干扰,且均在30 d达到最高值。PsSERK基因在牡丹体胚发生过程中的酶代谢和激素表达上都有重要作用,推测在培养的20-25 d可能开始出现胚性细胞,25-35d可能出现大量胚性细胞。同时将PsSERK干扰表达载体转入模式植物拟南芥,结果表明,PsSERK基因干扰表达使得拟南芥根系发育不良,短小,植株表现出生长缓慢,开花延迟特征,对拟南芥的生长和花期有很大影响。

关键词：牡丹愈伤组织 PsSERK基因 CRISPR/Cas9 过量表达载体干扰表达载体实时荧光定量PCR

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甘蓝型油菜BnD11基因过量表达载体的构建及遗传转化

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四川大学学报（自然科学版） 2011年第6期48卷 1415-1420页

作者：王志君王景娜李帅高勇王茂林四川大学生命科学学院成都610064

构建了BnD11过量表达载体pFGC5941-BnD11,转化甘蓝型油菜"1821"品系获得转基因植株.半定量RT-PCR分析显示转基因植株中BnD11基因的表达量有显著提高,盐胁迫实验结果初步显示,转基因油菜抗性得到提高.

关键词： WRKY 过量表达载体抗性半定量RT—PCR MDA

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拟南芥CDR6基因过表达载体构建及过量表达植株筛选鉴定

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安徽农业科学 2015年第13期43卷 63-64,104页

作者：董万春樊婷婷阳立波江海坤张其安方凌倪娇娇管灵霞曹树青合肥工业大学生物与食品工程学院安徽合肥230009 安徽省农业科学院园艺研究所安徽合肥230009

[目的]以拟南芥为材料克隆CDR6基因,构建CDR6基因的过量表达载体并筛选鉴定获得过表达植株。[方法]提取拟南芥mRNA,反转录成c DNA,并以此为模板克隆CDR6基因CDS全长,通过限制性内切酶切割、T4DNA连接酶连接,将CDR6基因CDS全长连接到带有... 详细信息

[目的]以拟南芥为材料克隆CDR6基因,构建CDR6基因的过量表达载体并筛选鉴定获得过表达植株。[方法]提取拟南芥mRNA,反转录成c DNA,并以此为模板克隆CDR6基因CDS全长,通过限制性内切酶切割、T4DNA连接酶连接,将CDR6基因CDS全长连接到带有35S强启动子的p XB094载体上;然后转化至Trans1-T1感受态细胞中,菌落PCR鉴定阳性单克隆并测序确认。将重组质粒转化至根瘤农杆菌GV3101菌株,通过浸花法侵染拟南芥野生型植株,通过抗性筛选和鉴定获得预期的转基因植株。[结果]菌落PCR鉴定和测序结果表明CDR6基因已成功构建至p XB094载体;通过抗性筛选并鉴定获得了过量表达阳性植株。[结论]筛选和鉴定获得的过量表达植株为研究CDR6基因的分子功能奠定了基础。

关键词：拟南芥 CDR6基因过量表达载体转基因植株

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草莓FabHLH3基因克隆表达分析与过量和干涉表达载体构建

草莓FabHLH3基因克隆表达分析与过量和干涉表达载体构建

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中国第八次草莓大会暨第十三届中国草莓文化节

作者：苗立祥张青张豫超杨肖芳蒋桂华浙江省农业科学院园艺研究所杭州310021 临安市农林技术推广中心临安311300

以八倍体凤梨草莓栽培品种'越心'(Fragaria×ananassa ***)为试材,利用RT-PCR技术从果实中克隆出FabHLH3基因全长编码序列,运用生物学软件对该序列进行相关生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR方法对FabHLH3基因在不同... 详细信息

以八倍体凤梨草莓栽培品种'越心'(Fragaria×ananassa ***)为试材,利用RT-PCR技术从果实中克隆出FabHLH3基因全长编码序列,运用生物学软件对该序列进行相关生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR方法对FabHLH3基因在不同组织、不同发育阶段果实及不同光质处理下的表达模式进行研究.测序和分析结果表明,FabHLH3基因的CDS全长2094bp,编码697个氨基酸残基,该蛋白质理论分子量约为77.43kD、等电点(pI)为6.05;经软件DNAMAN分析,核苷酸序列和氨基酸序列与二倍体森林草莓(***)的FvbHLH3基因的一致性为92.04％和90.87％.利用实时荧光定量PCR检测FabHLH3基因在叶、叶柄、花和果实中的表达情况,发现在叶中的表达量最高,随着果实发育FabHLH3基因表达量逐渐增加,在半红期达到最高,红果期开始下降.此外,FabHLH3基因的表达还受到红光和蓝光的诱导.用无缝克隆技术构建了FabHLH3基因的过量表达载体pGreen-FabHLH3和干涉表达载体pGreen-FabHLH3i,为进一步验证FabHL H3基因的功能奠定了基础.

关键词：草莓遗传育种 FabHLH3基因基因克隆过量表达载体干涉表达载体

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烟草香气相关基因DXS基因和CHS基因的功能分析

烟草香气相关基因DXS基因和CHS基因的功能分析

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作者：李尊强中国农业科学院

学位级别：硕士

烟草香气是衡量烟叶品质的一个重要指标，随着卷烟工业的发展，降焦减害和香气不足的矛盾日益突出，提高烟草香气品质成为育种工作的目标之一。苯丙氨酸代谢途径和非甲羟戊酸（MEP）途径中产生的多酚类物质和萜烯类物质是烟草中重要的... 详细信息

烟草香气是衡量烟叶品质的一个重要指标，随着卷烟工业的发展，降焦减害和香气不足的矛盾日益突出，提高烟草香气品质成为育种工作的目标之一。苯丙氨酸代谢途径和非甲羟戊酸（MEP）途径中产生的多酚类物质和萜烯类物质是烟草中重要的香气前体物质。查尔酮合成酶（CHS）基因和1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶（DXS）基因分别是这两种代谢途径中的关键基因，它们的过量表达、沉默抑或基因突变均可以直接或者间接的影响植物的苯丙氨酸代谢途径和MEP途径，影响烟草香气前体物质的形成，进而影响烟草香气。因此本文以特香型烟草品种“大白筋599”为材料，从基因特异性调控的角度研究CHS基因和DXS基因功能，为后续尝试研究香气物质形成的分子机制以及高香气育种奠定了基础。本文主要结果如下：（1）CHS、DXS基因的分离和定位。利用PCR技术从烟草品种“大白筋599”cDNA中分离出CHS基因（AF311783.1）和DXS基因（EU650419.1），并将DXS基因（去除终止密码子TAA）与绿色荧光蛋白（GFP）基因重组构建亚细胞定位表达载体，对DXS基因进行亚细胞定位，将其定位在了叶绿体中。（2）DXS基因干扰表达载体和CHS基因过量表达载体、干扰表达载体的构建及其遗传转化。利用酶切法成功构建了DXS基因的干扰表达载体，CHS基因的过量表达载体，采用Gateway法成功构建了CHS基因的干扰表达载体，并利用农杆菌介导法对烟草进行遗传转化。利用PCR检测和GUS染色分析初步鉴定转基因烟草植株，RT-PCR检测结果表明，获得DXS基因沉默烟草植株12株，CHS基因过量表达植株13株，CHS基因沉默植株24株。（3）对转基因烟草植株和对照植株生理生化特性的研究。结果表明，DXS基因沉默表达的植株在苗期出现叶色变浅变黄，与对照植株相比，转基因植株叶片内总叶绿素含量减少了45.3%，类胡萝卜素含量减少了40.2%，证明DXS基因在MEP途径中对香气前体物质的形成有重要作用；CHS基因过量表达或沉默烟草植株的形态特征和生长发育正常，但CHS基因过量表达植株中4CL和C4H酶活性较对照植株均有所提高，而CHS基因沉默植株中这两种酶的活性下降。（4）利用高效液相色谱（HPLC）技术定量分析转CHS基因烟草中多酚物质含量。通过对超声波提取多酚物质条件的优化，确定了超声波的最适提取温度为55℃，最适宜的提取时间是25min；多酚物质含量测定结果显示，CHS基因过量表达植株叶片中多酚物质含量提高，CHS基因沉默植株叶片中多酚物质含量下降，表明CHS基因的过量表达促进了多酚物质在烟草植株中的合成和积累，CHS基因的沉默使得多酚物质在烟草植株中的合成受阻。证明CHS基因在苯丙氨酸代谢途径中对烟草香气前体物质形成有重要作用。

关键词：转基因烟草亚细胞定位过量表达载体 RNAi载体 HPLC

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玉米转录因子ZmPTF1基因的克隆及穗发芽相关基因特异性表达分析

玉米转录因子ZmPTF1基因的克隆及穗发芽相关基因特异性表达分析

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作者：高剑瑞四川农业大学

学位级别：硕士

bHLH转录因子家族是一类植物中重要的转录因子,研究表明bHLH转录因子在植物生长过程中参与多种生物学过程,如光应答,植物激素应答,防卫反应,种了发育与萌发等。ZmPTF1是玉米中bHLH转录因子家族中的一员,有实验证实bHLH转录因子ZmPTF1通... 详细信息

bHLH转录因子家族是一类植物中重要的转录因子,研究表明bHLH转录因子在植物生长过程中参与多种生物学过程,如光应答,植物激素应答,防卫反应,种了发育与萌发等。ZmPTF1是玉米中bHLH转录因子家族中的一员,有实验证实bHLH转录因子ZmPTF1通过调控果糖-1,6-二磷酸盐酶,蔗糖磷酸盐合酶(SPS1),转化酶(Ivrl和Ivr2b)和蔗糖合酶(SUS1,SUS2,Sh1B)等在低磷酸盐情况下的表达参与了糖分配,从而调控植物对磷耐受性,在植物磷耐受中起重要作用,且参与调节根毛的发育。穗发芽的发生与各种植物激素如脱落酸、赤霉素等有关,且与影响植物激素合成的因素如糖类、NO以及各种酶蛋白等相关。在种子发育过程中相关基因的表达变化可能会造成穗发芽现象的发生。在研究玉米穗发芽过程中,对具有弱休眠性自交系A318单株籽粒在胚胎形成过程中15、20、25天取材,在35天种子开始进入成熟期进行鉴定后,对穗发芽利正常籽粒植株的胚进行了基因差异表达分析。发现的ZmPTF1在穗发芽的玉米胚中是下调表达的,且有其他上调和下调表达的相关基因,推测它们与穗发芽的发生有一定的相关性。为进一步了解ZmPTF1在玉米穗发芽过程中的角色,在本文中我们针对ZmPTF1及其相关基因做了一系列的研究,主要研究结果如下 1.利用普通玉米自交系A318克隆得到ZmPTF1,其阅读框包括1446bp碱基,由481个氨基酸组成,该转录因子为疏水性蛋白。 2.构建了PET32a-ZmPTF1表达载体,转入BL21和Rosetta2表达菌株中,都得到了大约50.7KD的蛋白。 3.采用DNA重组技术,将ZmPTF1编码阅读框(ORF)正确插入至表达载体PRI101-AN相应位点,构建了植物双元表达载体PRI101-ZmPTF1。为进一步转化农杆菌和烟草,鉴定ZmPTF1在穗发芽过程中的功能奠定了基础。 4.用实时荧光定量PCR方法分析了ZmPTF1转录因子及其他穗发芽相关基因：休眠/生长素相关蛋白、磷酸乙醇胺氮甲基转移酶、类脱水素、LEA胚胎后期丰富蛋白及亚硝酸盐还原酶和WRKY转录因子在不同时间不同组织中的特异性表达情况。经过对表达数据的方差检验得出这七个基因在胚或胚乳中授粉后20天、25天是特异性表达的,因此可以推测穗发芽现象有可能是在授粉后20天时期受到外部环境诱导导致内部干相关基因特异性表达而引起的。分析结果显示WRKY转录因子和bHLH转录因子都参与了相关的糖类代谢和转运,从而影响了ABA和GA的代谢途径使得玉米发生穗发芽。休眠/生长素相关蛋白可能在ZmPTF1转录因子作用后期对胚轴的发育产生作用或休眠解除过程及穗发芽过程中起作用。类脱水素和LEA胚胎后期发育蛋白参与逆境情况下的调控,可能在穗发芽后期发挥作用。亚硝酸盐还原酶存胚乳和胚中后期的表达变化趋势与bHLH转录因子相似,可能是与NO解除休眠参与萌发有关。综上所述,本研究通过对ZmPTF1转录因子的克隆、原核表达和真核表达载体构建,以及对ZmPTF1转录因子及相关基因的组织特异性表达进行了分析,得出了穗发芽容易在授粉后20天受环境影响而发生。同时对其他特征特性有了初步的认识,为下一步遗传转化和基因功能验证奠定了基础。

关键词：玉米穗发芽转录因子克隆原核表达过量表达载体特异性表达

来源：评论

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玉米NPR类基因的克隆及功能初步分析

玉米NPR类基因的克隆及功能初步分析

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作者：洪玲安徽农业大学

学位级别：硕士

为适应复杂的环境并抵抗环境中病原菌的侵害，植物在长期进化的过程中自身形成了多种复杂的防御机制。系统获得性抗性（SAR）就是一种重要防御机制。克隆玉米SAR系统的NPR类关键基因，对培育抗病能力强的玉米新品种具有重要意义。本实... 详细信息

为适应复杂的环境并抵抗环境中病原菌的侵害，植物在长期进化的过程中自身形成了多种复杂的防御机制。系统获得性抗性（SAR）就是一种重要防御机制。克隆玉米SAR系统的NPR类关键基因，对培育抗病能力强的玉米新品种具有重要意义。本实验利用玉米全基因组数据库资源和反转录PCR技术，克隆获得了一个玉米NPR类基因，对这个基因的特征及功能进行了分析,获得如下主要结果： 1、该基因全长1434bp，编码477个氨基酸，序列登录NCBI网站，结果发现与已登录的玉米NPR1基因（登录号NM001154115）相似性99%，氨基酸相似性100%，因此，我们将获得的基因命名为ZmNPR1，其蛋白质分子量Mw=53.30kD，等电点pI=5.68； 2、克隆的ZmNPR1与拟南芥和水稻NPR基因家族成员进行了序列比对分析，结果显示ZmNPR1与水稻OsNPR2具有较高的同源性，包含两个保守结构域POZ/BTB位点和Ankyrin repeat锚蛋白重复位点。 3、利用基因枪技术将含有ZmNPR1基因的融合载体导入洋葱表皮细胞，结果显示ZmNPR1主要在细胞核中发挥作用。 4、分别用一定浓度水杨酸、茉莉酸甲酯、玉米矮花叶病毒和玉米小斑病原菌处理玉米叶片，利用半定量PCR技术，分析了这四种处理下ZmNPR1基因和玉米防卫基因PAL（苯丙氨酸解氨酶）表达情况，结果显示，水杨酸和两种病原物的处理可以诱导ZmNPR1基因和PAL基因的表达，而茉莉酸甲酯处理下基因的表达受到抑制。 5、构建了ZmNPR1过量表达载体和RNAi干涉载体并通过原位转化技术导入玉米中，共获得19株干涉植株，对其中10株进行PCR检测，结果均为阳性。 6、对获得的干涉植株体内游离态水杨酸（SA）含量进行测定，结果显示干涉植株水杨酸的含量相比于对照平均下降了51%。上述结果均显示了克隆的ZmNPR1基因与玉米的抗病性相关。SAR是植物抵抗疾病系统的重要组成部分，而NPR类基因是SAR系统中的关键基因，因此，ZmNPR1基因的成功获得，为利用基因工程改造玉米抗病品种提供了一个有价值的目的基因，具有重要的意义。

关键词：玉米系统获得性抗性 ZmNPR1 RT-PCR 过量表达载体 RNAi干涉载体

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