检索结果-内蒙古大学图书馆

基于重组酶介导等温核酸扩增技术快速检测食品中骆驼源性成分的方法建立及评价

中国乳品工业 2025年第2期53卷 75-80页

作者：周臣清张娟綦艳赵玲黄宝莹杨纯佳广东产品质量监督检验研究院广东省食品生物危害因素监测工程技术研究中心广东佛山528300

文章开发一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase Aided Amplification,RAA)的方法,实现对食品中骆驼源性成分快速检测。针对骆驼细胞色素B(Cytochrome b,Cyt b)基因设计特异性引物,对建立的RAA体系优化其反应扩增条件,评估其... 详细信息

文章开发一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase Aided Amplification,RAA)的方法,实现对食品中骆驼源性成分快速检测。针对骆驼细胞色素B(Cytochrome b,Cyt b)基因设计特异性引物,对建立的RAA体系优化其反应扩增条件,评估其特异性和灵敏度,并用建立的RAA法与GB/T 38164标准方法分别对24份市售骆驼制品进行检测并比对结果。结果表明,本研究建立的RAA法特异性强,乳及乳制品检出限为1.0%,肉及肉制品检出限为0.1%,且2种方法对24份骆驼乳肉及其制品检测结果一致。因此,本研究开发的RAA方法具有快速、特异性强、灵敏度高、操作简单等优点,市场应用前景广阔。

关键词：重组酶介导等温核酸扩增技术骆驼源性成分细胞色素B基因快速检测

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逆转录重组酶介导等温核酸扩增技术在呼吸道合胞病毒检测中的应用

逆转录重组酶介导等温核酸扩增技术在呼吸道合胞病毒检测中的应用

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作者：齐菊菊河北医科大学

学位级别：硕士

目的:在全球范围内,呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是一种引起婴幼儿下呼吸道感染常见的病毒病原体,给社会造成了巨大的医疗和经济负担。重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase Aided Amplification,RAA)是具有我... 详细信息

目的:在全球范围内,呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是一种引起婴幼儿下呼吸道感染常见的病毒病原体,给社会造成了巨大的医疗和经济负担。重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase Aided Amplification,RAA)是具有我国自主知识产权的等温核酸快速检测技术。RAA扩增产物的检测可分为荧光法和侧流层析试纸条法(Lateral Flow Dipstick,LFD)。本研究旨在建立两种方法实现呼吸道合胞病毒的快速检测,一种为含有内参的双重实时荧光逆转录重组酶介导等温核酸扩增技术(IC-rtRAA),另一种是将RAA技术与LFD相结合的LFD-rtRAA技术。评价该两种检测方法的灵敏度和特异性,并分别应用于临床标本的检测,进行临床标本检测效能的评价。方法:本研究从美国国立生物技术信息中心(NCBI)中下载RSV病毒的全基因序列,并利用Vector NTI软件进行序列比对,找出其保守区(靶基因区)。***-rtRAA检测方法:根据RAA引物探针设计原则,并针对比对出的保守区设计引物和探针数条,随后筛选出最优的引物探针组合。在本实验中,首先建立了单重实时荧光逆转录重组酶介导等温核酸扩增技术(Singleplex-rtRAA),随后在此基础上加入内参,建立了含有内参的双重实时荧光逆转录重组酶介导等温核酸扩增技术(IC-rtRAA)。***-rtRAA检测方法:根据RAA-LFD引物探针的设计原则,设计了适用于LFD-rtRAA法的引物探针,并进行相应的修饰,建立了LFD-rtRAA检测方法。用含有靶基因的重组质粒标准品对此两种方法进行灵敏度的评价;用其他常见呼吸道病毒进行特异性的评价;分别利用已建立好的IC-rtRAA检测方法和LFD-rtRAA检测方法与文献报道的RT-qPCR方法同时检测278份临床标本,计算Kappa值,进行检测结果一致性比较,评估该两种方法的临床检测效能。结果:***-rtRAA法的分析灵敏度为5.0拷贝/反应,未与其他常见呼吸道病毒发生交叉反应,特异性良好。采用该方法检测278例临床标本,结果与RSV RT-qPCR分析结果完全一致。***-rtRAA法可检测到的最低RSV质粒浓度为10拷贝/反应,未与其他常见呼吸道病毒发生交叉反应,特异性良好。采用该方法检测278例临床标本,结果与IC-rtRAA法和RSV RT-qPCR分析结果完全一致。结论:本研究建立的两种RAA检测方法在快速检测RSV方面具有很大的应用潜力,简便快速且具有较高的灵敏度和特异性,为呼吸道合胞病毒的检测提供了新工具。IC-rtRAA检测方法中内参的引入,保证了检测结果的准确性,有利于其在临床上的应用,且内参设计中所采取的策略对基于RAA的检测技术的实际应用具有一定的参考价值。LFD-rtRAA检测方法更适用于经济欠发达地区或现场快速检测。

关键词：重组酶介导等温核酸扩增技术呼吸道合胞病毒内参侧流层析试纸条

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用重组酶介导等温核酸扩增技术检测烟曲霉

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临床检验杂志 2015年第3期33卷 214-218页

作者：廖新辉易浔飞崔智慧兰小鹏第二军医大学福州总医院临床医学院福州350025 南京军区福州总医院检验科福州350025

目的建立检测烟曲霉的重组酶介导等温核酸扩增技术（RPA）方法。方法筛选针对烟曲霉ITS1-2靶DNA序列的特异性引物。建立RPA快速检测烟曲霉方法并进行条件优化。分析RPA特异性和敏感性并与Taq PCR结果进行比较。结果RPA检测烟曲霉的优化... 详细信息

目的建立检测烟曲霉的重组酶介导等温核酸扩增技术（RPA）方法。方法筛选针对烟曲霉ITS1-2靶DNA序列的特异性引物。建立RPA快速检测烟曲霉方法并进行条件优化。分析RPA特异性和敏感性并与Taq PCR结果进行比较。结果RPA检测烟曲霉的优化条件为：引物长度：18-30 bp;产物长度：200-700 bp;扩增温度：37-42℃,最低在27℃也可实现扩增;扩增时间：15-40 min,15 min即可达到凝胶电泳可检测的产物量;只需简单的恒温加热设备。RPA和Taq PCR可检测到的最低DNA浓度均为100 ng/m L。RPA仅对烟曲霉有特异性扩增,对黄曲霉、土曲霉、黑曲霉、构巢曲霉、中国红酵母均无交叉扩增反应。结论建立的针对烟曲霉ITS1-ITS2靶DNA序列的RPA检测方法,可以快速、特异、灵敏地鉴定和检测烟曲霉。

关键词：重组酶介导等温核酸扩增技术转录间隔区1-2 烟曲霉

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基于RAA-CRISPR/Cas12a建立牛病毒性腹泻病毒的可视化快速检测方法及其初步应用

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中国兽医科学 2025年第3期55卷 321-329页

作者：热则古丽·艾科拜尔张亚平刘浩然杨莉马雪连姚刚史慧君付强新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830000 新疆草食动物新药研究与创制自治区重点实验室新疆乌鲁木齐830000

为建立一种基于重组酶介导的扩增技术(RAA)和CRISPR/Cas12a相结合的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)可视化检测方法。参考GenBank中BVDV 5’UTR基因设计RAA反应的特异性引物和探针,进一步优化RAA-CRISPR/Cas12a反... 详细信息

为建立一种基于重组酶介导的扩增技术(RAA)和CRISPR/Cas12a相结合的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)可视化检测方法。参考GenBank中BVDV 5’UTR基因设计RAA反应的特异性引物和探针,进一步优化RAA-CRISPR/Cas12a反应条件,通过测定灵敏度、特异性和重复性来评估RAA-CRISPR/Cas12a检测方法。分别使用PCR和RAA-CRISPR/Cas12a对251份犊牛腹泻样品进行了BVDV阳性检测。结果表明,RAA-CRISPR/Cas12a检测方法检测BVDV的最低检测限为3 copies/μL,检测时间为30 min。在对比不同拷贝数阳性样品进行多批次检验后,批内和批间变异系数皆小于5%。用该方法在检测其他牛常见病原微生物时结果均呈阴性,特异性良好。在临床样本检测中,BVDV的PCR阳性检出率为6.37%;同时使用RAA-CRISPR/Cas12a检测时,阳性检出率为29.48%,阳性检出率为PCR的4.63倍。本研究建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a的BVDV可视化快速检测方法,对犊牛腹泻的防控具有重要意义。

关键词：牛病毒性腹泻病毒重组酶介导等温核酸扩增技术 CRISPR/Cas12a 检测

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重组酶介导等温核酸扩增结合核酸试纸条即时检测猪流行性腹泻病毒方法的建立

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病毒学报 2024年第5期40卷 1054-1061页

作者：易玮婕李嘉豪赵伊然单衍可刘斐南京农业大学动物医学院单分子纳米实验室南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所南京210014

本文旨在建立一种基于重组酶介导等温扩增技术(Recombinase aided amplification,RAA)结合核酸试纸条的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)可视化检测方法,以应用于养殖场内部实现现场快速检测。选择PEDV N基因保... 详细信息

本文旨在建立一种基于重组酶介导等温扩增技术(Recombinase aided amplification,RAA)结合核酸试纸条的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)可视化检测方法,以应用于养殖场内部实现现场快速检测。选择PEDV N基因保守序列为模板,设计特异性引物及荧光探针,对引物进行对比筛选,对反应条件、引物浓度、探针浓度进行优化,并对其特异性、敏感性和重复性进行评价。将建立的检测方法应用于临床样品,并与荧光定量PCR方法进行比较。结果表明:建立的方法在38℃恒温10 min扩增反应以及5 min侧流向层析后,即可完成检测,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪德尔塔冠状病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒均无交叉反应,最低检测限可达101拷贝/μL。应用该方法检测20份阴性和20份阳性,共40份临床样本,检测结果与荧光定量PCR方法保持一致。本研究建立的RAA结合核酸试纸条的方法具有特异性好、灵敏度高、耗时短、仪器设备简便等优点,适用于基层现场快速检测。

关键词：猪流行性腹泻病毒重组酶介导等温核酸扩增技术现场快速检测

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基于CRISPR-Cas12a蛋白的副溶血弧菌及tdh基因检测分析

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疾病监测 2022年第3期37卷 390-395页

作者：卢盼李哲李臻鹏赵文轩肖文静张天姿陈家良阚飙逄波中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的将重组酶介导等温核酸扩增技术(RAA)与成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统相结合,建立一种快速检测并分型副溶血弧菌的检测方法。方法通过纯化CRISPR相关蛋白Cas12a,设计和合成RAA引物、crRNA和单链DNA报告分子,建立副溶血... 详细信息

目的将重组酶介导等温核酸扩增技术(RAA)与成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统相结合,建立一种快速检测并分型副溶血弧菌的检测方法。方法通过纯化CRISPR相关蛋白Cas12a,设计和合成RAA引物、crRNA和单链DNA报告分子,建立副溶血弧菌的荧光和试纸条检测方法。采用煮沸法提取细菌核酸,经RAA扩增后产物加入CRISPR-Cas12a检测系统,测试该方法的灵敏性和特异性。结果本研究检测了110株副溶血弧菌和121株其他肠道致泻性细菌,符合率为99.1%,最低检测菌量为10^(3) CFU/mL,CRISPR-Cas12a最低检测核酸浓度为77.5 pmol/L,灵敏性高于琼脂糖凝胶电泳法。对于50株携带tdh和12株不携带tdh的副溶血弧菌,仅1株tdh+副溶血弧菌未被鉴定出,鉴定成功率为98.4%。结论本研究建立的CRISPR-RAA检测系统可快速、简单地检测副溶血弧菌及tdh基因,且有较强的特异性和灵敏性。

关键词：成簇的规律间隔短回文重复序列重组酶介导等温核酸扩增技术副溶血弧菌分子检测

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基于RAA-CRISPR/Cas12a建立牛肠道病毒的可视化快速检测方法与初步应用

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中国动物传染病学报 2024年

作者：热则古丽·艾科拜尔秦刚陈俊贞李迎新杨莉马雪连姚刚史慧君付强新疆农业大学动物医学学院新疆草食动物新药研究与创制自治区重点实验室新疆巴楚县畜牧兽医站

为建立一种基于重组酶介导的扩增技术（RAA）和CRISPR/Cas12a相结合的牛肠道病毒（BEV）可视化检测方法，本研究基于BEV VP1基因保守区域设计RAA反应的特异性引物和探针，优化RAA-CRISPR/Cas12a检测方法，并验证其特异性、灵敏性和重复... 详细信息

为建立一种基于重组酶介导的扩增技术（RAA）和CRISPR/Cas12a相结合的牛肠道病毒（BEV）可视化检测方法，本研究基于BEV VP1基因保守区域设计RAA反应的特异性引物和探针，优化RAA-CRISPR/Cas12a检测方法，并验证其特异性、灵敏性和重复性。同时使用PCR和RAA-CRISPR/Cas12a检测251份犊牛腹泻样品，分析BEV感染情况，完成PCR和RAA-CRISPR/Cas12a平行对比分析。结果表明，在RAA-CRISPR/Cas12a检测方法中，检测结果为可视化荧光，分析得出BEV的灵敏度为3×100copies/μL，具有良好的特异性和重复性，检测时间为30 min；分布使用PCR和RAA-CRISPR/Cas12a检测251份腹泻样本，BEV阳性检出率分别为9.96%和30.27%。本试验建立的RAA-CRISPR/Cas12a检测方法比PCR方法更加灵敏、高效、稳定，可用于BEV的可视化快速检测，为犊牛腹泻的病原鉴别诊断提供了技术支持。

关键词：牛肠道病毒重组酶介导等温核酸扩增技术 CRISPR/Cas12a

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禽流感RT-RAA侧向流试纸条可视化检测方法的建立

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中国兽医学报 2020年第11期40卷 2159-2163页

作者：王文静李馨月张鹏刘静茹姚姗姗王春光张铁河北农业大学动物医学院河北保定071000

禽流感(AI)是威胁我国养禽业健康发展的重要疫病,为建立该病高效、便捷的检测方法进行本项研究。本试验根据禽流感病毒(AIV)保守基因(NP)序列设计引物和探针,利用反转录重组聚合酶介导恒温扩增(RT-RAA)技术对NP基因进行快速扩增并形成... 详细信息

禽流感(AI)是威胁我国养禽业健康发展的重要疫病,为建立该病高效、便捷的检测方法进行本项研究。本试验根据禽流感病毒(AIV)保守基因(NP)序列设计引物和探针,利用反转录重组聚合酶介导恒温扩增(RT-RAA)技术对NP基因进行快速扩增并形成双标产物,扩增产物通过侧向流试纸条(LFD)进行快速检测,通过对反应时间、温度和引物浓度等条件的优化,建立了1种能够检测禽流感病毒的RT-RAA-LFD检测方法。结果显示,该方法37℃条件下,反应24 min,即可实现NP目的基因片段的有效扩增,且扩增产物可通过侧向流试纸条肉眼观察;特异性良好,与传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性喉气管炎病毒(AILV)、新城疫病毒(NDV)无核酸交叉反应;敏感性达到102 copies/μL,是常规PCR的100倍,临床检测符合率为94.8%。该方法具有特异性强、敏感性高、便捷快速等优点,为田间检测禽流感病毒提供一种可行方法。

关键词：禽流感重组酶介导等温核酸扩增技术侧向流试纸条 NP基因

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基于RAA-CRISPR/Cas12a的猪2型圆环病毒核酸检测方法的建立及应用

基于RAA-CRISPR/Cas12a的猪2型圆环病毒核酸检测方法的建立及应用

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作者：范乐佳山东农业大学

学位级别：硕士

猪圆环病毒病（PCVD）是由猪圆环病毒（PCVs）引起的一系列猪传染性疾病的统称,包括猪繁殖障碍综合症（SMEDI）、断奶仔猪多系统衰竭综合症（PMWS）、皮炎肾病综合症（PNDS）、仔猪先天性震颤（CT）、猪呼吸道综合症（PRDS）和肠炎。猪... 详细信息

猪圆环病毒病（PCVD）是由猪圆环病毒（PCVs）引起的一系列猪传染性疾病的统称,包括猪繁殖障碍综合症（SMEDI）、断奶仔猪多系统衰竭综合症（PMWS）、皮炎肾病综合症（PNDS）、仔猪先天性震颤（CT）、猪呼吸道综合症（PRDS）和肠炎。猪圆环病毒2型（PCV2）作为猪圆环病毒病的主要病原,该病毒的传播给养猪业造成了重大经济损失。PCV2的快速检测对于该病的净化具有重要的意义,目前大多数PCV2的检测方法具有较高的灵敏性和良好的特异性,但这些方法往往需要复杂的操作步骤和繁琐的样品处理过程,同时也依赖于特定的实验仪器以及专业的操作人员。因此,目前的检测方法无法满足现场对PCV2快速准确地检测。所以,建立一种操作简单、对人员和设备要求低、可以实地进行检测、反应快速灵敏且特异性良好的检测方法对于PCV2的防控具有重要价值。CRISPR/Cas系统的研究为病原的现场快速检测提供了一种新思路,该系统是几乎所有的细菌实现获得性免疫的方式,其中的CRISPR/Cas12a系统可以在识别靶标序列后切割靶序列并具有对非特异性ss DNA的切割活性,利用CRISPR/Cas12a系统的这种特性,在检测体系中加入ss DNA报告分子可以实现对病原的可视化检测。RAA（重组酶介导等温核酸扩增技术）是一种利用重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶在恒温条件（如37°C）下扩增DNA的方法,在实地进行检测具有优势,不需要大型仪器且操作简单。目前,已将等温扩增技术与CRISPR/Cas系统相结合用于检测PCV3、ASFV、PRRSV等,但还没有用于对PCV2的检测。本研究通过将RAA与CRISPR/Cas12a系统相结合,用RAA进行PCV2核酸的扩增后再进行CRISPR/Cas12a的检测,检测结果可以通过蓝光照射或试纸条来判读,该方法可以在脱离大型仪器的情况下现场完成对PCV2的快速核酸检测。研究结果如下:（1）成功表达纯化了As Cas12蛋白,并证明了其具有切割活性。在IPTG浓度为0.5 m M,温度为30°C,180 r/min的诱导条件下诱导2.5 h后成功诱导出所需蛋白,并通过Ni-NTA树脂和MBP标签纯化柱纯化出了As Cas12a蛋白。经过检测试验证明了其具有切割活性。（2）成功设计出针对PCV2并适用于As Cas12a的g RNA。在分析筛选了PCV2的保守序列后,根据As Cas12a所识别的PAM序列找到了Protospacer序列并设计了g RNA,检测结果证明设计的g RNA满足检测条件。（3）成功设计出针对PCV2检测靶序列的RAA引物。根据RAA引物设计原则,针对检测的PCV2靶序列设计了4对引物,通过等温扩增以及显色试验筛选出最佳的1对引物,该引物可以扩增出PCV2的检测靶序列用于检测且扩增效率高。（4）成功建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a检测PCV2的方法并进行了反应体系的优化。研究中比较了一管反应与两管反应的优劣,结果显示一管反应速度快且操作简单;用不同浓度的蛋白和不同浓度的g RNA做正交实验选择体系中最适的蛋白和g RNA的浓度,结果显示体系中最佳的As Cas12a蛋白和g RNA的浓度分别为100 n M和200 n M;通过反应中各个时间段的荧光信号值或不同反应时间试纸条的检测结果,确定了该方法中荧光检测和试纸条检测都可以在30 min以内得到准确检测结果。（5）检验并证明了所建立的检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。将PCV2与PCV3、PRV、PRRSV、CSFV、ASFV的阳性质粒通过该检测方法检测后只有PCV2的检测结果显示为阳性,表明该检测方法特异性良好;检测1010～10～0copies/μL的含有检测靶序列的PCR产物,结果显示该检测方法可检测PCV2的下限为10 copies/μL,比PCR检测PCV2方法的灵敏性高1000倍;多批次检验不同拷贝数阳性样品后,批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%,证明该检测方法具有良好的重复性。（6）检验并证明了所建立的检测方法可以用于临床上对PCV2的检测。利用该检测方法对采集的病理样品进行PCV2检测,得到的检测结果与PCR检测PCV2的结果进行比较。52份样品中,用该方法检测结果为14例阳性和38例阴性,用PCR方法检测结果为13例阳性和39例阴性,一致性为98%,表明该方法满足临床检测PCV2的条件。综上所述,本研究建立了一种基于RAA-CRISPR/Cas12a核酸检测PCV2的方法,可以在无需大型仪器的恒温条件（37°C）下对PCV2进行检测,该方法特异性好、灵敏性高、操作简单、要求较低、耗时短,为PCV2的检测提供了一种新的技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型重组酶介导等温核酸扩增技术 CRISPR/Cas12a 检测方法

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基于RAA-LFD的传染性造血器官坏死病毒可视化检测技术建立与初步应用

基于RAA-LFD的传染性造血器官坏死病毒可视化检测技术建立与初步...

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作者：李迎新新疆农业大学

学位级别：硕士

传染性造血器官坏死病毒(Infectious Hematopoietic Necrosis Virus,IHNV)是弹状病毒科(Rhabdoviridae)诺拉弹状病毒属(Novirhabdovirus),是引起传染性造血器官坏死病的病原体。传染性造血器官坏死病毒主要易感鲑鳟鱼科的鱼类,其中虹鳟... 详细信息

传染性造血器官坏死病毒(Infectious Hematopoietic Necrosis Virus,IHNV)是弹状病毒科(Rhabdoviridae)诺拉弹状病毒属(Novirhabdovirus),是引起传染性造血器官坏死病的病原体。传染性造血器官坏死病毒主要易感鲑鳟鱼科的鱼类,其中虹鳟最易感,近年来虹鳟的养殖业发展迅速,均得益于良种的繁育以及健康的养殖。为保证我国水产养殖业健康可持续发展,防止疫病传播恶化,IHNV的检测和防治显得愈发重要。目前IHNV常用的检测方法繁多,如巢式RT-PCR、ELISA、RT-PCR等,但是存在检测耗时长、对仪器设备的依赖性强、成本高昂等缺点,故难以应用到实时的临床检测当中。重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase Aided Amplification,RAA)是一种新型的等温核酸扩增技术,具有快速、高效等优点。本研究将RAA结合侧流层析试纸条旨在建立一种IHNV的可适用于基础检测、快速、高效的检测技术,并进行初步应用,这对预防和控制IHNV的传播具有重要意义。具体的研究成果如下: 参考GenBank数据库IHNV的N基因的保守序列区域,构建合成至p ET-N-His-TEV载体,构建成质粒p ET-N-His-TEV-U50402质粒标准品,并根据此保守序列设计特异性引物及其特异性探针,建立IHNV的PCR及RAA方法,优化RAA的反应条件,建立完整的RAA-LFD检测体系,完成其灵敏度、特异性和重复性等分析。同时使用PCR和RAA-LFD检测收集的42条虹鳟鱼三种病原含量较高的内脏样品(肝脏、肾脏、脾脏),并分析检测结果。使用建立的两种方法分别对126份待测组织样本进行检测,结果表明PCR检出阳性样本15个,阳性检出率为11.9%;RAA-LFD检出阳性样本24份,阳性检出率为19.05%,提高了检出率7.15%。且RAA-LFD法的灵敏度达到了10～0copies/μL,比PCR法的灵敏度10～4copies/μL高出了10 000倍,整个反应在25 min内即可完成,检测效率提高了400%。将所检测呈阳性结果的样品进行测序,将测序结果与目的序列进行比对。结果表明临床检测呈阳性的样品序列与目标序列相似性均在95%以上。同时将其与NCBI上传的IHNV中N基因序列进行比对,分析其同源性,并构建系统发育进化树。结果表明阳性样品病毒序列与黑龙江报道的病毒毒株序列(MT242597.1)同源性最高。综上,本研究构建的RAA-LFD检测IHNV技术,具有特异性强、灵敏度高、稳定性良好、检测周期端等优点,可用于IHNV的可视化快速检测,为现场IHNV的检测与鉴别提供了技术支持。

关键词：传染性造血器官坏死病毒重组酶介导等温核酸扩增技术侧流层析试纸条聚合酶链式反应

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