检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：孟迪吉林大学

学位级别：硕士

目的:通过测定正常孕妇与子痫前期(preeclampsia,PE)患者线粒体自噬蛋白BCL2腺病毒E1B19k Da相互作用蛋白3(Bcl-2 and adenovirus E1B19k Da interacting protein3,bnip3)在血清及胎盘中的表达水平,同时测量胎儿多普勒脐动脉(umbilical artery,UA)的相关血流动力力学指标,探究bnip3的表达与疾病发生的关系及其与胎儿脐动脉血流参数对评估胎儿状况的价值。方法:根据纳入标准,从2021年4月至2022年11月就诊于吉林大学白求恩第二医院并住院行剖宫产的孕妇中,选取无合并症正常妊娠及子痫前期的孕妇各24例。收集终止妊娠前孕妇外周静脉血进行离心并取其上清液后分装至Ep管中,-80℃保存。剖宫产胎盘娩出后,在非出血、钙化及坏死部位,取2块大小约1.0cm×1.0cm×1.0cm的胎盘组织,用生理盐水冲洗胎盘组织并用无菌纱布将其水分吸干,一块放置于10%的福尔马林溶液中,一块放置于液氮过夜后转移至-80℃冰箱冻存。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中bnip3的浓度;蛋白印迹法(Western-Blot)及免疫组化检测胎盘组织中bnip3蛋白的表达水平。应用Voluson E10的腹部超声检查方法,获取并比较两组胎儿脐动脉血流动力学参数,主要包括脐动脉的搏动指数(pulsation index,PI)、阻力指数(resistance index,RI)和收缩期峰值血流速度/舒张末期血流速度(peak systolic flow velocity/end diastolic flow velocity,S/D)。根据结果并结合入组患者的临床相关资料,应用Graph Pad Prism 9.2.0及SPSS27.0进行统计学分析。结果:1.通过ELISA实验结果统计分析发现,子痫前期组与正常对照组相比血清bnip3的浓度降低,差异有显著统计学意义(P<0.0001)。2.通过Western-Blot实验结果统计分析发现,子痫前期组胎盘组织中bnip3蛋白的表达较正常对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。3.通过免疫组化染色结果分析发现,bnip3在合体滋养层细胞可见明显表达,细胞滋养细胞层仅有微弱的表达。在正常对照组中呈高表达,子痫前期组中则呈低表达。子痫前期组中胎盘组织bnip3的表达较正常对照组降低,差异有显著统计学意义(P<0.01)。4.通过腹部彩色超声多普勒测量胎儿脐动脉血流动力学指标,结果统计分析发现子痫前期组PI、RI、S/D等脐动脉血流参数较正常组升高,PI差异有显著统计学意义(P<0.01),RI、S/D差异有统计学意义(P<0.05)。5.通过相关性分析发现,血清bnip3浓度与胎盘组织bnip3蛋白相对表达水平呈正相关。胎儿脐动脉血流动力学参数PI、RI、S/D与新生儿Apgar评分、新生儿体质量呈负相关。血清bnip3浓度及胎盘组织bnip3蛋白相对表达水平与孕妇血压呈负相关,脐动脉血流动力学参数PI、RI、S/D与孕妇血压呈正相关。外周血清bnip3的浓度与脐动脉PI、RI、S/D呈负相关。以上均具有统计学意义(P<0.05)。胎盘组织bnip3蛋白相对表达水平与脐动脉血流动力学参数PI、RI、S/D相关性无统计学意义(P>0.05)。结论:1.血清及胎盘组织中bnip3表达具有相关性,其在子痫前期患者中表达水平降低可能与线粒体自噬功能紊乱、疾病的发生发展有关。针对bnip3的研究有望为临床诊断、治疗PE提供理论依据及潜在的治疗靶点,但其具体分子机制还需进一步探讨。2.胎儿脐动脉血流动力学指标与新生儿体质量、新生儿Apgar评分具有相关性,对PE患者胎儿状况的评估具有一定的价值,在一定程度上可预测妊娠结局,为临床干预及终止妊娠时机的选择提供依据。3.线粒体自噬蛋白bnip3的表达水平是否与胎儿脐动脉血流动力学之间存在相关性尚不明确,仍需进一步的研究。

关键词：子痫前期 bnip3 线粒体自噬胎儿多普勒超声脐动脉多普勒

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bnip3表达变化与脑缺血损伤关系的研究

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中国神经免疫学和神经病学杂志 2016年第4期23卷 256-260,276页

作者：黄广海何云凌邸瑶赵彤任长虹范明朱玲玲吴丽颖吴奎武军事医学科学院基础医学研究所认知科学研究室 100850 低氧适应转化医学北京市重点实验室 100053

目的观察大鼠永久性大脑中动脉闭塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)不同时间点脑损伤情况、Bcl-2/腺病毒E1B19kD相互作用蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B-19kDa-interacting protein 3,bnip3)及线粒体自噬相关蛋白的表达,探讨bnip3与脑缺血损伤程度的关系。方法将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组,即pMCAO 0h组)、pMCAO 3h组、9h组和24h组,每组12只。分别采用TTC染色检测大鼠脑梗死体积、透射电镜观察线粒体形态变化、Western blot检测bnip3及相关蛋白表达。结果 (1)各组大鼠脑梗死体积变化:sham组TTC染色显示无梗死发生,其余3组均存在脑梗死区。pMCAO 3h、9h、24h组矫正脑梗死体积〔分别为(12.12±2.15)%、(37.00±4.24)%和(51.82±4.39)%〕均明显高于sham组(均P<0.01),且随缺血时间延长而矫正脑梗死体积增加(四组间两两比较,均P<0.01)。(2)各组大鼠脑组织中线粒体形态变化:sham组透射电镜可以观察到完整的双层线粒体膜结构;pMCAO 3h和9h组观察到典型的线粒体自噬现象:具有双层膜结构的线粒体自噬溶酶体;pMCAO 24h组线粒体受损严重,嵴消失,膜破损,线粒体肿胀加剧,未观察到线粒体自噬现象。(3)各组bnip3和线粒体自噬相关蛋白表达:与sham组比较,pMCAO 3h和9h组bnip3和自噬诱导分子Beclin-1表达增加,自噬标记分子LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高,接头蛋白P62和线粒体标记分子热休克蛋白60(heat shockprotein-60,HSP60)、线粒体外膜易位酶(translocase of outer mitochondrial membrane 20,TOM20)表达下降(均P<0.01);与pMCAO 9h组比较,pMCAO 24h组bnip3和Beclin-1表达下降,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低,P62和TOM20、HSP60表达增加(均P<0.01)。结论 bnip3很可能在脑缺血早期通过促进线粒体自噬来发挥对脑缺血损伤的保护作用。

关键词：脑缺血 bnip3 线粒体自噬

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HIF-1α enhances autophagy to alleviate apoptosis in marginal cells in the stria vascular in neonatal rats under hypoxia

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International Journal of Biochemistry and Cell Biology 2022年 149卷 106259页

作者： Huang, Sihan Zhao, Yanyun Liu, Jun Department of Otorhinolaryngology Renji Hospital School of Medicine Shanghai Jiaotong University Shanghai China

In the cochlea, various factors, such as noise, aging, and inflammation, induce hypoxia, resulting in the up-regulation of hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α). The role of HIF-1α in hypoxic marginal cells (MCs) of the stria vascularis is unknown. This study examined HIF-1α-mediated autophagy in MCs of neonatal rats and its mechanism of action. We found that an increase in HIF-1α expression was associated with autophagy and apoptosis. Treatment with PX478, a specific inhibitor of HIF-1α, decreased the HIF-1α level, and the degree of autophagy decreased in hypoxic and apoptotic MCs. By contrast, treatment with DMOG, an activator of HIF-1α, increased autophagy and decreased apoptosis. Both PX478 and DMOG had no effect on the apoptotic rate after treatment with 3-methyladenine, an inhibitor of autophagy, indicating that HIF-1α promoted autophagy to protect MCs from hypoxia-induced apoptosis. Lastly, we silenced bnip3(Bcl-2/adenovirus E1B 19-kDa interacting protein) in MCs to identify the mechanism of action. Our results show that the HIF-1α–bnip3 pathway mediates the anti-apoptotic effects through an increase in autophagy. © 2022 Elsevier Ltd

关键词： Apoptosis Autophagy bnip3 Cochlea HIF-1α Hypoxia

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A new trick for an old dog? Myocardial-specific roles for prostaglandins as mediators of ischemic injury and repair

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AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY-HEART AND CIRCULATORY PHYSIOLOGY 2021年第6期320卷 H2169-H2184页

作者： Martens, Matthew D. Fernando, Amy S. Gordon, Joseph W. Univ Manitoba Rady Fac Hlth Sci Dept Human Anat & Cell Sci Winnipeg MB Canada Univ Manitoba Coll Nursing Rady Fac Hlth Sci Winnipeg MB Canada Childrens Hosp Res Inst Manitoba Diabet Res Envisioned & Accomplished Manitoba DRE Winnipeg MB Canada

The small lipid-derived paracrine signaling molecules known as prostaglandins have been recognized for their ability to modulate many facets of cardiovascular physiology since their initial discovery more than 85 years ago. Although the role of prostaglandins in the vasculature has gained significant attention across time, a handful of historical studies have also directly implicated the cardiomyocyte in both prostaglandin synthesis and release. Recently, our understanding of how prostaglandin receptor modulation impacts and contributes to myocardial structure and function has gained attention while leaving most other components of myocardial prostaglandin metabolism and signaling unexplored. This mini-review highlights both the key historical studies that underpin modern prostaglandin research in the heart, while concurrently presenting the latest findings related to how prostaglandin metabolism and signaling impact myocardial injury and repair.

关键词： bnip3 heart prostaglandin

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丁苯酞后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠XIAP、bnip3表达的影响

丁苯酞后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠XIAP、BNIP3表达的影响

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作者：邱振方华北理工大学

学位级别：硕士

目的通过观察不同剂量丁苯酞(dl-3N-Butylphthalide,NBP)后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血灶周围皮质区、缺血侧海马CA1区XIAP、bnip3表达的影响,探讨NBP脑保护作用机制以及XIAP、bnip3表达与NBP是否存在剂量依赖关系。方法选用清洁... 详细信息

目的通过观察不同剂量丁苯酞(dl-3N-Butylphthalide,NBP)后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血灶周围皮质区、缺血侧海马CA1区XIAP、bnip3表达的影响,探讨NBP脑保护作用机制以及XIAP、bnip3表达与NBP是否存在剂量依赖关系。方法选用清洁级雄性SD大鼠160只,随机分为假手术组(n=16)、缺血再灌注组(n=36)、NBP低剂量(2mg/kg)组(n=36)、NBP中剂量(4mg/kg)组(n=36)和NBP高剂量(6mg/kg)组(n=36),缺血再灌注组与NBP各剂量组又分为缺血2h再灌注6h、12h、24h、48h、72h共5个观察时间点。用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,NBP各剂量组采用腹腔注射的方式在缺血2小时后立即给药。各组于再灌注24h时间点分别取5只大鼠行TTC染色,缺血再灌注组与NBP各剂量组于每个观察时间点均取5只大鼠用于HE染色、TUNEL染色及免疫组化染色。比较各组大鼠的神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经元结构变化及XIAP、bnip3阳性细胞表达。按照免疫组化结果,比较缺血再灌注组与NBP各剂量组XIAP、bnip3阳性细胞表达峰值时间点的XIAPm RNA、bnip3m RNA表达量。结果1神经功能缺损评分结果假手术组大鼠均活动自如。随再灌注时间延长,缺血再灌注组与NBP各剂量组神经功能缺损评分呈先升后降趋势,但NBP各剂量组神经功能缺损评分于再灌注各时间点均小于缺血再灌注组,差异有统计学意义(P<0.05);NBP低、中、高剂量组间比较,评分依次减小,差异有统计学意义(P<0.05)。2 TTC染色结果假手术组脑组织未见缺血灶?缺血再灌注组与NBP各剂量组比较,缺血再灌注组梗死灶最为明显;NBP低、中、高剂量组间比较,梗死灶体积依次减小,差异有统计学意义(P<0.05)。3 HE染色结果假手术组未见病理组织学改变。缺血再灌注组缺血灶周围皮质区、缺血侧海马CA1区细胞结构紊乱模糊,形态异常,核固缩,胞浆嗜酸性,随再灌注时间延长逐渐呈现为空泡状,核碎裂,细胞间质明显疏松。NBP各剂量组随时间变化呈现出与缺血再灌注组相似的变化趋势,但相同时间点,NBP各剂量组比缺血再灌注组神经元结构破坏减轻,以NBP高剂量组神经元结构损害最轻微。4 TUNEL染色结果假手术组偶见凋亡阳性神经元表达。缺血再灌注组、NBP各剂量组的凋亡阳性细胞数与假手术组比较明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。缺血再灌注组凋亡阳性细胞表达呈现出先升后降趋势,于再灌注24h数量最多;NBP各剂量组有类似的表达趋势。相同时间点,NBP各剂量组较缺血再灌注组凋亡细胞数减少,NBP各剂量组间比较,以NBP高剂量组凋亡阳性细胞数最少,差异有统计学意义(P<0.05)。5免疫组化结果假手术组可见XIAP、bnip3阳性细胞散在性表达。缺血再灌注组、NBP各剂量组各时间点XIAP、bnip3阳性细胞高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。随再灌注时间延长,缺血再灌注组XIAP阳性细胞先增多而后减少,于再灌注12h表达量最多;NBP各剂量组变化趋势与之类似。相同时间点,NBP各剂量组较缺血再灌注组XIAP阳性细胞数多,以NBP高剂量组阳性细胞数最多,差异有统计学意义(P<0.05)。随再灌注时间延长,缺血再灌注组bnip3阳性细胞数呈现出先升后降趋势,于再灌注24h表达量最高;NBP各剂量组与之有相同的变化趋势。相同时间点,NBP各剂量组较缺血再灌注组bnip3阳性细胞数减少,且以NBP高剂量组bnip3阳性细胞数最少,差异有统计学意义(P<0.05)。6 PCR结果XIAP阳性细胞表达峰值时间点为再灌注12h,在此时间点不同组XIAPm RNA的表达结果比较:缺血再灌注组、NBP各剂量组与假手术组比较,在缺血灶周围皮质区、缺血侧海马区XIAPm RNA表达量均增多(P<0.05);NBP各剂量组与缺血再灌注组比较,XIAPm RNA表达量增加(P<0.05);随NBP剂量增加,XIAPm RNA表达有增高的趋势,NBP各剂量组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。bnip3阳性细胞表达峰值时间点为再灌注24h,在此时间点不同组bnip3m RNA表达结果比较:缺血再灌注组、NBP各剂量组与假手术组比较,在缺血灶周围皮质区、缺血侧海马区bnip3 m RNA表达量均增多(P<0.05);NBP各剂量组与缺血再灌注组比较,bnip3m RNA表达量减少(P<0.05);随NBP剂量增加,bnip3m RNA表达有减少的趋势,NBP各剂量组间比较,差异仍有统计学意义(P<0.05)。结论1 NBP后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠具有保护作用,表现在大鼠神经功能缺损评分减小、脑组织梗死体积减小、

关键词：丁苯酞后处理缺血再灌注损伤 XIAP bnip3

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低氧条件下bnip3对表皮细胞迁移的影响及其机制研究

低氧条件下BNIP3对表皮细胞迁移的影响及其机制研究

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作者：张均辉第三军医大学

学位级别：硕士

研究背景创面愈合是在多种组织和细胞协同作用下共同完成的精密调控的过程。再上皮化是创面愈合进程中早期启动的生物学事件,在重建皮肤机械屏障的完整性中发挥重要作用,而表皮细胞迁移是贯穿于这一过程的关键步骤,已成为创面愈合研究... 详细信息

研究背景创面愈合是在多种组织和细胞协同作用下共同完成的精密调控的过程。再上皮化是创面愈合进程中早期启动的生物学事件,在重建皮肤机械屏障的完整性中发挥重要作用,而表皮细胞迁移是贯穿于这一过程的关键步骤,已成为创面愈合研究的焦点。但低氧微环境对创面愈合过程中皮肤表皮细胞迁移是否具有调控作用及其分子调控机制,迄今均未完全阐明。bnip3（Bcl-2 nineteen-kilodalton interacting protein 3）是仅含有非典型BH3结构域的Bcl-2蛋白质家族的成员之一,是一种低氧反应蛋白。大量文献证实bnip3参与细胞增殖、凋亡、自噬、分化等生物学行为的调节,并且在肿瘤的发生发展,心肌肥大与萎缩,脑缺血缺氧损害等多种疾病过程中发挥重要作用。bnip3分布在人表皮细胞中,并参与调控其分化并维持其自稳态。但bnip3对表皮细胞迁移是否具有调控作用,目前尚无相关文献报道。创面形成后,多种信号通路激活并动员创面修复细胞,加速创面再上皮化进程。黏着斑激酶（FAK）是分布于细胞质中的一种酪氨酸蛋白激酶,在整合素家族调控细胞运动中发挥核心作用,主要通过397号位点的酪氨酸自磷酸化而激活。大量文献资料表明FAK参与创面愈合过程中表皮细胞迁移的调控。特异性的整合素单克隆抗体的应用可下调FAK的活化水平并抑制表皮细胞迁移;FAK缺失的小鼠创面愈合明显延迟,这与FAK的活化受阻密切相关。在多种肿瘤中,FAK信号转到途径及其下游信号参与调节肌动蛋白细胞骨架的聚合、解聚及重排等细胞迁移相关的关键环节,而bnip3可以调节细胞肌动蛋白骨架的重构。因此我们推测,FAK可能参与了bnip3对表皮细胞迁移的调控。在多种哺乳动物细胞的研究中发现bnip3可通过其BH3结构域竞争Bcl-2与Beclin-1的结合位点破坏Bcl-2/Beclin-1的稳定结合,从而启动自噬（Autophagy）。自噬是真核细胞中高度保守的一种溶酶体降解途径,在维持机体的稳态中发挥重要作用。功能学上,自噬参与调控多种生理及病理过程,如生长发育、炎症反应、肿瘤的发生与侵袭转移等。近年来,表皮细胞自噬的生物学意义也受到了广泛关注。某些具有生物活性的物质或理化因素可诱导表皮细胞自噬;自噬参与调控表皮细胞分化;自噬可减少紫外线照射引起的表皮细胞损伤,促进其存活。然而,自噬对表皮细胞迁移的影响尚缺乏研究证据。因此,本研究提出低氧条件下bnip3通过调节fak或自噬进而调控创面愈合过程中表皮细胞迁移的假设,通过检测低氧条件下bnip3对表皮细胞迁移的影响,并探讨其对表皮细胞fak及自噬的调节,从而明确bnip3调节表皮细胞迁移的作用机制。研究方法1.建立体外低氧培养的小鼠原代表皮细胞模型,模拟创面低氧微环境,观察低氧（2%O2:3h、6h、9h）处理前后表皮细胞运动性和迁移及bnip3蛋白表达的变化规律;2.通过sirna转染技术构建bnip3下调的小鼠原代表皮细胞模型并进行低氧处理（2%O2:6h）,wb检测sirna转染的有效性;在活细胞工作站下观察bnip3下调对表皮细胞运动性的影响;体外片层细胞划痕实验模拟创面愈合过程,观察bnip3下调对表皮细胞迁移的影响,从而明确低氧条件下bnip3对表皮细胞迁移的调控作用;3.通过wb检测低氧（2%O2:3h、6h、9h）处理前后表皮细胞中p-fak表达及自噬的变化;并检测低氧条件下bnip3下调对表皮细胞fak及自噬的影响;通过tae226选择性抑制fak的活化检测低氧条件下fak对表皮细胞运动性及迁移的调控;最后,在常氧条件下用雷帕霉素激活自噬,检测自噬对表皮细胞运动性及迁移的影响,从而初步明确低氧条件下bnip3调控表皮细胞迁移的可能作用机理。结果1.低氧促进小鼠原代表皮细胞的运动性及迁移,并显著上调bnip3的表达,且随低氧处理时间延长呈上升趋势,这与表皮细胞运动性随低氧处理时间变化的规律基本契合;2.应用靶向bnip3的sirna序列下调bnip3,通过单个细胞运动性检测（活细胞工作站观察）及体外细胞划痕实验,我们发现bnip3的下调可有效地逆转低氧对表皮细胞运动性及迁移的促进作用,说明bnip3参与调控低氧促进的表皮细胞迁移;3.低氧处理促进fak的活化,并使自噬标志物lc3-ii、p62显著上调;低氧条件下用sirna转染下调bnip3可显著抑制fak信号通路的激活,并且抑制fak的活性可逆转低氧表皮细胞迁移的促进作用,说明fak信号通路参与了低氧条件下bnip3介导的表皮细胞迁移;低氧条件下下调bnip3可显著抑制LC3-II的上调,说明低氧条件下bnip3对表皮细胞自噬具有调控作用;但尽管常氧条件下雷帕霉素可显著抑制表皮细胞迁移,雷帕霉素模拟的自噬与低氧处理诱导的自噬不尽相同,要明确bnip3是否通过自噬调节表皮细

关键词：创面愈合低氧 bnip3 FAK 表皮细胞迁移自噬

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NBI-ME对早期食管鳞状细胞癌及癌前病变的诊断价值及bnip3/Beclin-1在食管癌发生过程中表达的研究

NBI-ME对早期食管鳞状细胞癌及癌前病变的诊断价值及BNIP3/Beclin...

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作者：靳晓彩河北医科大学

学位级别：硕士

食管癌是人类常见的消化道肿瘤,发生淋巴结转移较早,多数患者确诊时已为中晚期,预后极差,5年生存率不足20%,而局限于粘膜层及粘膜下层的早期食管癌治疗后5年生存率可超过95%,可见食管癌早诊断、早治疗意义重大。但是早期食管癌病变不明... 详细信息

食管癌是人类常见的消化道肿瘤,发生淋巴结转移较早,多数患者确诊时已为中晚期,预后极差,5年生存率不足20%,而局限于粘膜层及粘膜下层的早期食管癌治疗后5年生存率可超过95%,可见食管癌早诊断、早治疗意义重大。但是早期食管癌病变不明显,诊断较困难,普通白光内镜下极易漏诊,漏诊率可高达40%。随着内镜技术的发展,应用卢戈氏碘染色结合粉红色征(lugol chromoendoscopy with pink-color sign,LCE-PS)的方法大大提高了早期食管癌的检出率,但是碘染色存在很多弊端(如引起患者胸骨后疼痛、烧心等),而窄带成像技术(narrow band imaging,NBI)则避免了化学染料带来的问题,而且能够增加粘膜上皮和粘膜下血管的对比度和清晰度。日本学者井上晴洋应用放大内镜(magnifying endoscopy,ME)通过观察食管上皮乳头内毛细血管袢(intrapapillary capillary loops,IPCL))的变化来判断食管病变的良恶性、病变的范围及浸润深度,并最早提出了IPCL分型。目前应用NBI-ME观察IPCL形态已成为早期食管癌及癌前病变诊断的研究热点,关于NBI-ME是否能取代碘染色的话题备受争议,所以探讨NBI-ME对早期食管癌及癌前病变的诊断价值具有重要意义。食管癌的发生发展是一个复杂的、多基因突变、多步骤的过程,寻找敏感、特异的指标是早期诊断、判断预后和获得长期生存的有效方法。自上世纪70年代末,人们便开始将肿瘤与细胞自噬联系了起来,逐渐认识到肿瘤细胞的自噬能力降低。自噬的形成和调节是一个极其复杂、多步骤的过程,目前已知HIF-1α/bnip3/Beclin-1是低氧条件下发生自噬上调的一条重要信号通路,生理条件下,Beclin-1通过BH3结构域与Bcl-XL、Bcl-2相互作用;但是在缺氧状态下,活化的HIF-1α通过激活bnip3引起Beclin-1与Bcl-XL和Bcl-2解离,释放Beclin-l激活自噬。研究发现自噬与消化道肿瘤的发展密切相关,探讨bnip3/Beclin-1在食管癌发生过程中的表达可能对指导临床工作可能具有重要价值。本实验分为两部2分，第一部分探讨ME-NBI对早期食管鳞状细胞癌及癌前病变的诊断价值,第二部分研究bnip3/Beclin-1在食管癌发生过程中的表达。第一部分ME-NBI对早期食管鳞状细胞癌及癌前病变的诊断价值目的:探讨NBI-ME在早期食管鳞状细胞癌及癌前病变中的诊断价值及IPCL分型与病理诊断的一致性。方法:将2015年3月至2016年1月在河北医科大学第二医院内镜中心行上消化道内镜检查的35例(39处病变)食管粘膜病变者先后行NBI-ME、卢戈氏碘染色法观察病变形态,分别做出内镜下诊断,并对病变部位靶向活检或EMR/ESD送病理,比较2种染色方法对病灶的诊断价值,并比较I P C L分型与病理诊断的一致性。结果:1 39处病变均被NBI及碘染色发现,经组织病理学证实,炎症7例,低级别上皮内瘤变10例,高级别上皮内瘤变14例,食管癌8例。NBI-ME和LCE-PS对食管癌及癌前病变的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为95.4%和86.4%,66.7%和80%,81%和87.5%,81%和87.5%,均无显著性差异(P>0.05)。2食管炎及低级别上皮内瘤变的IPCL主要呈III型,为92.3%,高级别上皮内瘤变的IPCL主要呈IV型,为69.2%,浸润性食管癌的IPCL主要呈V型,为61.2%。IPCL分型和病理诊断之间的关系的一致性分析:Kappa值为0.615。结论:1 NBI-ME对早期食管鳞状细胞癌及癌前病变的诊断价值与碘染色相当,不适合用碘染色的患者可应用NBI-ME。2 NBI-ME观察IPCL分型与病理诊断具有较好的一致性,有助于判断食管癌浸润深度,协助选择合适的治疗方案。第二部分bnip3/Beclin-1在食管癌发生过程中表达的研究目的:HIF-1α/bnip3/Beclin-1是低氧条件下发生自噬上调的一条重要信号通路,探讨bnip3/Beclin-1在食管癌发生过程中的表达。方法:应用免疫组化法检测24例上皮内瘤变、8例浸润性食管癌及10例正常食管组织中bnip3、Beclin-1的表达情况,分析bnip3/Beclin-1在食管癌发生发展中的变化。结果:1免疫组化结果显示bnip3的表达主要位于细胞浆,部分表达于细胞核,正常组织及浸润性食管癌组织中bnip3表达为浅黄色,而上皮内瘤变组织中表达明显增加,呈棕黄色。正常对照组中bnip3的积分光密度值(integrated optical density,IOD)为21653.38±2493.79,上皮内瘤变组中bnip的IOD值为36020.

关键词：早期食管癌窄带成像内镜放大内镜碘染色 IPCL分型信号通路自噬相关基因 bnip3 Beclin-1

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基于锰诱导的帕金森综合征大鼠脑线粒体自噬及其相关蛋白bnip3的表达

基于锰诱导的帕金森综合征大鼠脑线粒体自噬及其相关蛋白BNIP3的...

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作者：莫瑞康广西医科大学

学位级别：硕士

目的:研究基于锰诱导的帕金森综合征大鼠脑黑质结构线粒体自噬情况及其相关蛋白bnip3、LC3、Drp1、FOXO3、HIF-1的表达变化,探讨新的锰致帕金森综合征发病机制。方法:健康雄性SD大鼠64只,随机分为对照组和三个剂量的染锰组:低锰组、中... 详细信息

目的:研究基于锰诱导的帕金森综合征大鼠脑黑质结构线粒体自噬情况及其相关蛋白bnip3、LC3、Drp1、FOXO3、HIF-1的表达变化,探讨新的锰致帕金森综合征发病机制。方法:健康雄性SD大鼠64只,随机分为对照组和三个剂量的染锰组:低锰组、中锰组、高锰组,分别经腹腔注射Mn CI2·4H2O 5、15、25mg/kg·BW,1次/天,5天/周,持续染毒16周,对照组注射等量生理盐水。染毒结束后采用平衡木试验评估大鼠协调平衡运动能力,网格试验评估大鼠全身僵直症状,电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)方法检测大鼠中脑黑质锰含量,免疫荧光染色方法观察黑质酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性细胞表达量,透射电子显微镜(TEM)观察大鼠黑质组织的超微结构,实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测大鼠黑质bnip3、FOXO3、HIF-1m RNA表达变化,蛋白质印迹法(WB)检测大鼠黑质总蛋白中bnip3、LC3、Drp1、FOXO3、HIF-1的表达变化,进一步检测bnip3、LC3在线粒体蛋白和胞浆蛋白中的表达差异,评估bnip3、LC3是否发生线粒体转位。结果:平衡木试验中各染锰组大鼠的过杆总时间与对照组和同组暴露前相比均显著增加(P<0.05);网格试验中各染锰组大鼠在垂直金属网格上的移动延迟时间与对照组和同组暴露前相比均显著延长(P<0.05);免疫荧光染色发现各染锰组大鼠黑质TH免疫阳性细胞数与对照组相比显著减少(P<0.05),呈剂量-效应关系;透射电镜结果显示对照组大鼠黑质神经元核膜完整,胞浆内质网和线粒体等细胞器形态正常,较少见到自噬体。染锰组神经元胞浆中观察到线粒体变形、肿胀、嵴融合,大小不等的自噬泡结构(包括自噬小体、自噬溶酶体、线粒体自噬体),大鼠黑质神经元自噬泡结构平均含量随着染锰剂量增高而增多;WB结果表明,与对照组相比,线粒体自噬相关蛋白bnip3、LC3、FOXO3在各染锰组大鼠黑质总蛋白中表达升高(P<0.05),Drp1在各染锰组大鼠黑质总蛋白中均表达升高,但只有中剂量和高剂量组有统计学意义,HIF-1在各染锰组大鼠黑质总蛋白中表达无统计学差异。进一步分离纯化线粒体蛋白和胞浆蛋白,结果显示与对照组相比,bnip3和LC3在各组染锰大鼠黑质组织线粒体蛋白中可见显著表达(P<0.05),而去线粒体的胞浆蛋白中表达少(P>0.05)。q RT-PCR结果显示,与对照组相比,bnip3、FOXO3m RNA表达均升高,差别有统计学意义(P<0.05);HIF-1m RNA表达与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:腹腔注射染锰16周大鼠出现行为学和典型病理改变,为可靠锰中毒性帕金森综合征模型;锰中毒性帕金森综合征大鼠脑黑质结构bnip3、Drp1表达增多,线粒体自噬增强;bnip3、LC3的线粒体转位,提示bnip3、LC3可能通过蛋白互作作用调节线粒体自噬;转录因子FOXO3对bnip3可能存在调控作用。

关键词：线粒体自噬 bnip3 锰帕金森综合征大鼠

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白藜芦醇对小鼠缺氧性脑损伤的保护作用及机制研究

白藜芦醇对小鼠缺氧性脑损伤的保护作用及机制研究

引用

作者：孙凯吉林大学

学位级别：硕士

背景:临床上,缺氧是多种疾病导致组织病理改变的共同始发因素,也是造成神经系统功能障碍的重要因素。由于疫情的日常化,长时间的佩戴口罩,导致吸入氧减少,动脉血氧分压降低,产生轻微的乏氧现象,严重者会出现明显身体上的不适。此外,高... 详细信息

背景:临床上,缺氧是多种疾病导致组织病理改变的共同始发因素,也是造成神经系统功能障碍的重要因素。由于疫情的日常化,长时间的佩戴口罩,导致吸入氧减少,动脉血氧分压降低,产生轻微的乏氧现象,严重者会出现明显身体上的不适。此外,高原游已成为近年来大家向往的旅游热点地区。当高原平均海拔在4000米以上时,就会出现空气稀薄,含氧量低的状况,而脑组织是机体对缺氧最为敏感的靶器官,在缺氧环境中很容易受到“伤害”。脑缺氧损伤过程中,缺氧诱导因子HIF-1α起到关键的作用。在正常状态下,被脯氨酰羟化酶调控的缺氧诱导因子HIF-1α不表达或低表达。当组织细胞缺氧时,脯氨酰羟化酶调控被抑制,下游的HIF-1α进入细胞核与HIF-1β相结合并进一步激活下游基因,调控包EPO、NOS等多种靶基因以应对缺氧环境。bnip3作为缺氧诱导因子HIF-1α下游直接的靶分子,在缺氧状态下同样可以被诱导表达上调。近年来的研究显示,bnip3在调控自噬体-溶酶体融合过程中发挥了关键作用。还有报道显示,bnip3是线粒体自噬途径中的受体,可以直接与LC3相结合并诱导细胞自噬的发生。白藜芦醇具有抗炎、抗氧化、抗癌、心血管保护等多种功能。虽然有足够的证据表明白藜芦醇在许多相关的功能和途径中发挥作用,但白藜芦醇对缺氧暴露引起的脑损伤的作用机制还需要进一步的探索。目的:本研究旨在研究白藜芦醇对小鼠间接性缺氧导致的脑损伤的保护作用机制,为临床治疗缺氧性脑损伤提供理论依据。方法:利用CQY-1型小动物缺氧检测系统建立小鼠间歇性缺氧模型。初始氧含量为21.21%,当氧含量降至15%时,将小鼠取出,连续进行7天建立的小鼠间歇性缺氧模型。分为对照组、缺氧组、白藜芦醇组、缺氧+白藜芦醇组。1.比较各组小鼠体重差异。2.利用软件观察小鼠缺氧耐受能力。3.利用软件比较小鼠呼吸频率。4.利用软件分析比较小鼠心率变化。5.利用ELISA试剂盒检测小鼠血清抗氧化酶水平差异。***染色观察小鼠脾脏形态和脑部海马组织形态改变。*** blot方法检测缺氧标志性蛋白HIF-1α的表达情况。*** blot方法检测bnip3、Beclin1、LC3、p62等自噬通路相关蛋白表达情况。结果:1.小鼠体重变化分析。与对照组小鼠体重相比较,在缺氧1-3天,小鼠体重变化不大,但随着缺氧时间延长,缺氧组小鼠体重有所降低。与缺氧组相比,缺氧+白藜芦醇组小鼠的体重略有增加。2.小鼠缺氧耐受时间差异。在缺氧的第1-3天,缺氧组小鼠的缺氧耐受时长逐渐降低,第4-7天,缺氧耐受时长与前3天相比有所增加,且相对稳定。与缺氧组相比,缺氧+白藜芦醇组小鼠的缺氧耐受时长明显增加。3.小鼠呼吸频率差异。随着缺氧天数的增加,缺氧组小鼠在缺氧过程中的呼吸频率逐渐增大。与缺氧组相比,缺氧+白藜芦醇组小鼠的呼吸频率有所减少。4.小鼠心率差异。随着缺氧天数的增加,缺氧组小鼠的心率逐渐降低。与缺氧组相比,缺氧+白藜芦醇组小鼠的心率明显提升。5.小鼠血清抗氧化酶水平差异。随着缺氧天数的增加,缺氧组小鼠的抗氧化酶水平增强。与缺氧组相比,缺氧+白藜芦醇组小鼠的抗氧化酶水平进一步增强。6.小鼠脾脏和组织形态分析。小鼠的脾脏形态在缺氧第2天显著大于缺氧第1天和缺氧第7天。小鼠脑组织形态无显著差异。HE结果显示,随着缺氧天数的增加,缺氧组小鼠的海马区神经细胞受损。与缺氧组相比,缺氧+白藜芦醇组小鼠的缺氧标志性蛋白HIF-1α、P53表达水平显著下调。7.小鼠脑组织缺氧标志蛋白表达水平分析。与对照组相比,缺氧7天的小鼠缺氧标志性蛋白HIF-1α、P53表达水平显著上调。与缺氧组相比,缺氧+白藜芦醇组小鼠的缺氧标志性蛋白HIF-1α、P53表达水平显著下调。*** blot检测间歇性缺氧对小鼠脑组织中bnip3及其介导的自噬相关蛋白表达。与对照组相比,缺氧组中bnip3、Beclin1、LC3II/I表达水平显著上调,p62表达下调。白藜芦醇预处理可以显著逆转上述蛋白表达水平。结论:1.小动物缺氧检测系统可以建立稳定的小鼠间歇性缺氧模型,并能实时监测小鼠缺氧过程中的氧含量、缺氧耐受能力、呼吸频率、心率等变化。2.白藜芦醇对小鼠缺氧性脑损伤修复具有保护作用。3.白藜芦醇通过抑制HIF-1α/bnip3介导的自噬信号通路促进小鼠缺氧性脑损伤修复。

关键词：白藜芦醇缺氧性脑损伤 HIF1α bnip3 自噬

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自噬及自噬相关分子在神经退行性疾病中的研究进展

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中国实验动物学报 2024年第9期32卷 1221-1221页

自噬是细胞内清除异常蛋白质或受损细胞器的重要途径之一,正常情况下,细胞自噬主要清除衰老的细胞器以及蛋白酶体系统难以清除的大分子蛋白,对维持细胞内能量和物质代谢的稳态起到重要作用。细胞内受损的细胞器主要通过选择性自噬降解,... 详细信息

自噬是细胞内清除异常蛋白质或受损细胞器的重要途径之一,正常情况下,细胞自噬主要清除衰老的细胞器以及蛋白酶体系统难以清除的大分子蛋白,对维持细胞内能量和物质代谢的稳态起到重要作用。细胞内受损的细胞器主要通过选择性自噬降解,神经元中异常的线粒体主要经线粒体自噬清除,包括以下多种途径:PINK1-Parkin通路以及心磷脂、bnip3L、FUNDC1、FKBP8等跨膜蛋白介导的非PINK1-Parkin通路。

关键词：线粒体自噬 bnip3 细胞自噬神经退行性疾病 PINK1 大分子蛋白心磷脂 Parkin

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