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基于tmt标记定量蛋白质组学技术研究中药复方益糖康治疗糖尿病肾脏疾病的作用机制

中国实验方剂学杂志 2025年

作者：李凌谊于嘉祥张瀚文石岩王一霖吴怡程玥凤郑广新张文顺辽宁中医药大学辽宁省中医药研究院/辽宁中医药大学附属第二医院

目的：观察中药复方益糖康（YTK）对糖尿病肾脏疾病（DKD）的治疗效果，并进一步研究其作用机制。方法：选取16周龄雄性SPF级db/db小鼠45只，随机分为模型组、YTK高剂量组、YTK中剂量组、YTK低剂量组、非奈利酮组；另取db/m小鼠9只作为... 详细信息

目的：观察中药复方益糖康（YTK）对糖尿病肾脏疾病（DKD）的治疗效果，并进一步研究其作用机制。方法：选取16周龄雄性SPF级db/db小鼠45只，随机分为模型组、YTK高剂量组、YTK中剂量组、YTK低剂量组、非奈利酮组；另取db/m小鼠9只作为空白组。各治疗组按照相应剂量灌胃，持续给药8周后进行取材。通过各组小鼠尿液、血清相应指标，脾、胰腺、肾脏组织病理变化的结果作为DKD模型评价及YTK的疗效评价，运用tmt标记定量蛋白质组学技术筛选其可能的作用机制，选取LAMP2A、LC3-II和NLRP3蛋白进行免疫荧光检测以验证tmt组学结果。结果：与空白组相比，模型组尿液UACR、NGAL，血清NGAL，血清Cre-s、UA和UREA含量均显著升高，肾组织出现明显的病理变化，与DKD相似，是良好的DKD模型。经YTK干预后，上述指标及病理变化均有明显改善。通过tmt标记定量蛋白质组学技术筛选提示：YTK是通过调控自噬、氨基酰-tRNA生物合成、半胱氨酸和甲硫氨酸代谢等通路发挥作用的。免疫荧光检测自噬相关蛋白结果提示：与空白组相比，模型组LAMP2A、LC3-II蛋白表达量显著下降，NLRP3蛋白表达量显著升高，经YTK干预后，LAMP2A、LC3-II蛋白表达量显著升高，NLRP3蛋白表达量显著下降。结论：YTK能有效改善血糖指标、降低蛋白尿、延缓DKD进程，其作用与调控自噬有关，但调控自噬的具体机制有待于进一步深入探讨。

关键词：益糖康糖尿病肾脏疾病 tmt标记定量蛋白质组学自噬

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T10脊髓损伤后T10~L2脊髓组织中差异表达蛋白的生物信息学分析

引用

湖南中医药大学学报 2022年第8期42卷 1289-1299页

作者：唐丽亚瞿启睿吴霞龙轶映许明张泓刘琼艾坤周璐湖南中医药大学湖南长沙410208 长沙医学院湖南长沙410219 郴州市第一人民医院湖南郴州423000

目的利用tmt标记定量蛋白质组学技术筛选出T10脊髓损伤后T10~L2脊髓组织的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs)并对其进行生物信息学分析,以期挖掘出T10脊髓损伤后膀胱颈功能障碍(bladder neck dysfunction,BND)的潜... 详细信息

目的利用tmt标记定量蛋白质组学技术筛选出T10脊髓损伤后T10~L2脊髓组织的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs)并对其进行生物信息学分析,以期挖掘出T10脊髓损伤后膀胱颈功能障碍(bladder neck dysfunction,BND)的潜在治疗靶点。方法40只大鼠采用随机数字表法分为假手术组(12只)和造模组(28)只,造模组28只大鼠采用Hassan Shaker脊髓横断法制备T10脊髓损伤模型,从符合要求的模型大鼠中随机抽取12只作为模型组。所有大鼠行尿流动力学检测和HE染色,采用tmt检测出T10~L2脊髓组织中表达的蛋白质,将差异倍数(fold change,FC)>1.2或<1/1.2、P<0.05、unique peptide≥2的蛋白质定义为DEPs,使用KOBAS 3.0对DEPs进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。利用STRING及Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,利用cytoHubba插件及DEPs的度(Degree)值筛选出排名前35位的关键DEPs,并通过GluGO插件对35个关键DEPs所参与的生物过程进行分析。结果与假手术组相比,模型组大鼠漏尿点压力和最大膀胱容量明显增大(P<0.01);HE染色结果显示,模型组膀胱颈组织中出现炎细胞浸润,平滑肌壁增厚;模型组T10~L2脊髓组织出现神经元崩解,坏死后空洞形成,神经胶质细胞增生。tmt结果显示,在T10~L2脊髓组织中共筛选出了151个DEPs,其中84个蛋白上调、67个蛋白下调;KEGG分析发现151个DEPs,主要参与趋化因子信号通路、NOD-样受体信号通路、细胞坏死、细胞凋亡、多巴胺能神经突触和谷氨酸能突触等16条信号通路。35个关键DEPs主要参与了巨噬细胞活化、神经胶质细胞的激活、小胶质细胞的激活和神经炎症反应等生物过程。结论T10脊髓损伤后,T10~L2脊髓组织中C1qa、Clu、Snca、Pycard、Glul、Capn1、Ctsz和Ctsd可能是降低脊髓继发性损伤风险的潜在治疗靶点;T10~L2脊髓组织中多巴胺能突触和谷氨酸能突触信号途径可能成为治疗T10脊髓损伤后BND的新方向。

关键词：脊髓损伤 T10~L2脊髓组织膀胱颈功能障碍 tmt标记定量蛋白质组学生物信息学差异表达蛋白多巴胺能突触谷氨酸能突触

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