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上海中医药大学学报 2022年第5期36卷 39-45页

作者：胡耀廷肖传光陈文杰王如锋杨莉赵淑娟上海中医药大学中药研究所国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点研究室教育部中药标准化重点研究室上海市中药复方重点实验室上海201203

目的:将胆固醇生物转化成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮。方法:PCR扩增中华大蟾蜍来源的3β羟基类固醇脱氢酶基因(Bg-HSD3B7)、细胞色素P450还原酶基因(Bg-CPR)、大鼠来源的细胞色素P450酶基因(Rn-CYP7A1),生物信息学网站ExPASy、TMHMM预测理... 详细信息

目的:将胆固醇生物转化成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮。方法:PCR扩增中华大蟾蜍来源的3β羟基类固醇脱氢酶基因(Bg-HSD3B7)、细胞色素P450还原酶基因(Bg-CPR)、大鼠来源的细胞色素P450酶基因(Rn-CYP7A1),生物信息学网站ExPASy、TMHMM预测理化性质,采用不同的构建组合方式构建工程菌;以胆固醇为底物进行全细胞催化,高效液相色谱检测是否产生7-α羟基胆固醇中间产物和7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮终产物。结果:克隆并以单顺反子方式构建到pETM6载体,获得带有3个基因Rn-CYP7A1、Bg-CPR、Bg-HSD3B7的大肠杆菌工程菌BL21(DE3),该工程菌可以全细胞催化方式将胆固醇转化生成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮,且没有中间产物。结论:克隆得到中华大蟾蜍来源的Bg-HSD3B7基因、Bg-CPR基因、大鼠来源的Rn-CYP7A1基因,构建了具有全细胞催化功能的工程大肠杆菌,可以催化胆固醇转化生成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮。

关键词：中华大蟾蜍胆固醇工程菌 3β羟基类固醇脱氢酶细胞色素P450还原酶

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生、制何首乌水提物改善MCD饲料诱导小鼠非酒精性脂肪性肝炎的研究

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中国中药杂志 2020年第19期45卷 4732-4739页

作者：胡菲菲郝占霞张少波盛雨辰季莉莉上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室中药新资源与质量标准综合评价国家中医药管理局重点研究室上海市复方中药重点实验室上海201203 上海中医药大学创新中药研究院药物安全评价研究中心上海201203

该研究观察生何首乌和制何首乌水提物对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的改善作用及其初步机制。采用蛋氨酸胆碱缺乏饲料(methionine-choline-deficient diet,MCD)喂养小鼠6周进行造模,开始造模2周后小鼠灌胃5... 详细信息

该研究观察生何首乌和制何首乌水提物对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的改善作用及其初步机制。采用蛋氨酸胆碱缺乏饲料(methionine-choline-deficient diet,MCD)喂养小鼠6周进行造模,开始造模2周后小鼠灌胃50,100,200 mg·kg^-1的生何首乌水提物(Polygoni Multiflori Radix water extract,PMRWE)或制何首乌水提物(Polygoni Multiflori Radix Praeparata water extract,PMRPWE),连续给药4周。6周后结束实验,过程中持续监测小鼠体质量变化并记录;检测血清生化指标谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)与谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的活力;进行肝脏病理切片染色观察以及NAFLD活动性评分(NAFLD activity score,NAS)的计算;检测肝组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,甘油三酯(triglyceride,TG)和游离脂肪酸(non-esterified fatty acids,NEFA)的含量,并进行肝组织油红O染色观察;应用荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)法检测肝组织中β氧化相关分子mRNA的表达。结果显示,100,200 mg·kg^-1的PMRWE及50,100,200 mg·kg^-1的PMRPWE能够改善MCD诱导NASH病变中的肝损伤;100,200 mg·kg^-1的PMRWE及50,100,200 mg·kg^-1的PMRPWE能够减少MCD诱导NASH病变中肝脏的脂质堆积;不同剂量的PMRPWE均能够逆转MCD诱导NASH病变中肝组织中下降的β氧化相关分子mRNA的水平。以上研究表明,PMRPWE与PMRWE能够通过促进肝脏脂肪酸β氧化,减少肝脏脂质累积,减轻肝脏损伤,从而发挥改善NASH的作用,且PMRPWE的作用明显优于PMRWE。

关键词：生何首乌水提物制何首乌水提物非酒精性脂肪性肝炎 β氧化

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野黄芩素改善高糖诱导小胶质细胞活化引起的血脑屏障功能障碍

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中国药理学通报 2020年第11期36卷 1542-1547页

作者：王梦娜梅茜钰陆宾徐红上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室中药标准化教育部重点实验室中药新资源与质量标准综合评价国家中医药管理局重点研究室上海201203

目的研究野黄芩素(scutellarein)对高糖诱导的小胶质细胞活化引起的血脑屏障功能障碍的改善。方法将神经小胶质细胞BV-2与小鼠脑血管内皮细胞bEnd.3共培养,建立血脑屏障细胞模型。跨内皮电阻实验和细胞渗漏实验检测内皮细胞屏障的损伤情... 详细信息

目的研究野黄芩素(scutellarein)对高糖诱导的小胶质细胞活化引起的血脑屏障功能障碍的改善。方法将神经小胶质细胞BV-2与小鼠脑血管内皮细胞bEnd.3共培养,建立血脑屏障细胞模型。跨内皮电阻实验和细胞渗漏实验检测内皮细胞屏障的损伤情况;酶联免疫吸附法测定BV2细胞上清中TNF-α的含量;免疫印迹法检测bEnd.3细胞中紧密连接蛋白,包括occludin、claudin1、claudin5和claudin19的表达。结果用高糖诱导活化BV-2细胞或用TNF-α直接刺激bEnd.3细胞都会损伤bEnd.3细胞构成的细胞屏障,野黄芩素可逆转这种损伤。野黄芩素可以减少高糖诱导活化的BV-2细胞中TNF-α的分泌。TNF-α可以降低bEnd.3细胞中紧密连接蛋白claudin1、claudin5和claudin19的表达,野黄芩素能够逆转TNF-α降低的claudin1和claudin19蛋白表达。结论野黄芩素可以阻断高糖诱导的神经小胶质细胞活化,减少炎性因子TNF-α的释放,缓解高糖诱导激活神经小胶质细胞和TNF-α直接刺激脑血管内皮细胞所导致的血脑屏障破损。

关键词：野黄芩素血脑屏障高糖脑血管内皮细胞bEnd.3 神经小胶质细胞BV-2 TNF-α

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三七中黄酮糖基转移酶的筛选与鉴定

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上海中医药大学学报 2021年第6期35卷 73-81页

作者：聂锋侯茂奇赵嘉宁王如锋赵淑娟上海中医药大学中药研究所中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室中药标准化教育部重点研究室上海市中药复方重点实验室上海201203

目的:将前期克隆得到21条三七来源的糖基转移酶基因,构建到pCold表达载体,以实现重组蛋白的可溶性表达,并筛选、鉴定其在体外对黄酮类化合物的催化功能。方法:对21条糖基转移酶基因进行系统进化树分析;利用同源重组的方法将其克隆到pCol... 详细信息

目的:将前期克隆得到21条三七来源的糖基转移酶基因,构建到pCold表达载体,以实现重组蛋白的可溶性表达,并筛选、鉴定其在体外对黄酮类化合物的催化功能。方法:对21条糖基转移酶基因进行系统进化树分析;利用同源重组的方法将其克隆到pCold表达载体上,并在大肠杆菌中表达重组蛋白。低温诱导重组蛋白表达,以黄酮类化合物为糖基受体底物,UDP-葡萄糖为糖基供体,采用高效液相色谱法(HPLC)检测酶促反应产物。结果:分别以山柰酚和芹菜素为底物,重组蛋白PnUGT82参与反应后,可检测到山柰酚7-O葡萄糖苷和芹菜素7-O葡萄糖苷,而阴性对照组未检测到对应的糖苷产物。结论:筛选得到1条三七来源的糖基转移酶PnUGT82,能够催化黄酮类化合物,在体外将UDP-葡萄糖上的葡萄糖基团转移到山柰酚或芹菜素7位羟基,形成相应的黄酮7-O糖苷化产物。

关键词：三七黄酮糖基转移酶重组蛋白催化功能

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bZIP转录因子的生物学功能及其在中药材品质改良中的应用前景

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上海中医药大学学报 2021年第2期35卷 1-7页

作者：李航郑小宇王如锋赵淑娟上海中医药大学中药研究所国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点研究室教育部中药标准化研究中心上海市复方中药重点研究室上海201203

植物来源中药材的品质与药用植物的生长及次生代谢密切相关。bZIP转录因子作为基因表达的关键调控因子,在植物生长发育、生物及非生物胁迫应答、次生代谢过程中发挥重要作用,对提高药用植物抗性、促进有效成分积累具有重要意义和价值。... 详细信息

植物来源中药材的品质与药用植物的生长及次生代谢密切相关。bZIP转录因子作为基因表达的关键调控因子,在植物生长发育、生物及非生物胁迫应答、次生代谢过程中发挥重要作用,对提高药用植物抗性、促进有效成分积累具有重要意义和价值。已证实通过调控bZIP转录因子的表达可有效提高青蒿、人参、丹参等中药材的品质。在阐明bZIP转录因子生物学功能的基础上,探讨其对药用植物品质(形态特征、抗逆反应、次生代谢)的影响,展望其在中药材品质改良中的应用前景,为深入探究bZIP转录因子在药用植物生长发育及有效成分积累中的作用提供参考,为优质中药材的培育和生产提供依据。

关键词： bZIP 生物学功能药用植物胁迫反应次生代谢

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中药黄芪皂苷类成分生物合成研究进展

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上海中医药大学学报 2021年第5期35卷 80-88,96页

作者：肖亦菽王如锋赵淑娟上海中医药大学中药研究所中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203

作为常用中药,黄芪具有补气升阳、固表利水、托毒排脓等功效。黄芪皂苷类化合物是其主要活性成分,具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节、代谢调节、器官保护等药理作用。从黄芪皂苷的化学结构与药理活性、生物合成途径与代谢调控、生物转化与合... 详细信息

作为常用中药,黄芪具有补气升阳、固表利水、托毒排脓等功效。黄芪皂苷类化合物是其主要活性成分,具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节、代谢调节、器官保护等药理作用。从黄芪皂苷的化学结构与药理活性、生物合成途径与代谢调控、生物转化与合成生物学等方面进行综述,并对其生物合成前景进行展望,以期为应用生物技术实现黄芪皂苷的规模化生产提供参考。

关键词：黄芪皂苷生物合成生物转化综述

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蜡菊亭抑制MITF/PGC-1α轴介导的MGC-803细胞线粒体有氧磷酸化

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上海中医药大学学报 2021年第5期35卷 61-66页

作者：梁晓晖余明珠王萍张德高石海莲吴晓俊上海市复方中药重点实验室教育部中药标准化重点实验室国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点研究室上海中药标准化研究中心上海中医药大学中药研究所上海201203 上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院药剂科/药物临床试验机构办公室上海202150

目的:考察蜡菊亭对人胃癌MGC-803细胞线粒体有氧磷酸化的影响,并探讨其分子机制。方法:①将细胞分为对照组和蜡菊亭不同浓度(10、20、40μmol/L)组,分别给予相应干预。药物作用24、48 h后,试剂盒检测线粒体有氧磷酸化相关指标。②将细... 详细信息

目的:考察蜡菊亭对人胃癌MGC-803细胞线粒体有氧磷酸化的影响,并探讨其分子机制。方法:①将细胞分为对照组和蜡菊亭不同浓度(10、20、40μmol/L)组,分别给予相应干预。药物作用24、48 h后,试剂盒检测线粒体有氧磷酸化相关指标。②将细胞分为对照组和蜡菊亭(20μmol/L)组,分别给予相应干预。药物作用12、24 h后,PCR检测过氧化物酶体增殖物活化受体γ共刺激因子-1α(PGC-1α)、黑色素细胞诱导转录因子(MITF)m RNA表达,Western blot检测PGC-1α蛋白表达。③将细胞分为对照组、蜡菊亭(20μmol/L)组、PGC-1α激动剂(10μmol/L)组、蜡菊亭+激动剂联用组,各组分别给予相应干预,处理细胞24 h后,CCK-8法检测各组细胞活力。结果:①与对照组相比,药物干预24 h后,蜡菊亭20μmol/L组细胞基础呼吸和质子渗漏均受到抑制(P<0.05,P<0.01),蜡菊亭40μmol/L组细胞基础呼吸、最大呼吸、质子渗漏、ATP生成和备用呼吸能力均受到抑制(P<0.05,P<0.01);药物干预48 h后,蜡菊亭各浓度组细胞的基础呼吸、最大呼吸、质子渗漏和备用呼吸能力均受到抑制(P<0.05,P<0.01),蜡菊亭20、40μmol/L组细胞ATP生成亦明显降低(P<0.01)。②蜡菊亭(20μmol/L)干预12、24 h后能够显著下调MGC-803细胞PGC-1α的m RNA和蛋白表达(P<0.01)以及MITF m RNA表达(P<0.01)。③蜡菊亭(20μmol/L)能够显著降低MGC-803细胞活力(P<0.01),但该作用可被PGC-1α激动剂拮抗,蜡菊亭+激动剂组的细胞活力明显高于蜡菊亭组(P<0.01)。结论:蜡菊亭可能通过抑制MITF/PGC-1α轴,降低MGC-803细胞的线粒体有氧磷酸化,进而抑制肿瘤细胞活力。

关键词：蜡菊亭胃癌线粒体有氧磷酸化细胞活力 PGC-1α

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长链非编码RNA作为川楝子急性肝毒性血清生物标志物的研究

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现代中药研究与实践 2021年第5期35卷 32-37页

作者：杨睿李萍张伟李函杨凡陆宾季莉莉上海市浦东新区光明中医医院上海201399 上海市浦东新区卫生健康委员会监督所上海200135 上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室中药新资源与质量标准综合评价国家中医药管理局重点研究室上海市复方中药重点实验室上海201203

目的基于长链非编码RNA(LncRNA)寻找可以指征川楝子急性肝毒性的血清生物标志物。方法C57BL/6小鼠给药川楝素(10 mg/kg),给药6 h、12 h后取血,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活力,取肝组织观察病理切片变化,分析药物诱导... 详细信息

目的基于长链非编码RNA(LncRNA)寻找可以指征川楝子急性肝毒性的血清生物标志物。方法C57BL/6小鼠给药川楝素(10 mg/kg),给药6 h、12 h后取血,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活力,取肝组织观察病理切片变化,分析药物诱导的急性肝损伤。利用高通量LncRNA基因芯片检测动物血清中LncRNA的变化情况,并通过实时定量PCR(RT-PCR)验证显著变化LncRNA变化,得到候选血清LncRNA生物标志物。通过ROC曲线分析候选LncRNA的诊断价值。结果川楝素(10 mg/kg)在单次给药12 h后能明显升高小鼠血清中ALT与AST酶的活力,病理结果显示其能造成显著肝毒性。6 h组能够显著提高血清AST活力。通过LncRNA基因芯片筛选出显著变化超过15倍的LncRNA 13个。RT-PCR实验发现AK017411、AK003718、XLOC_019815这3个LncRNA的变化与基因芯片一致、呈时效关系、有统计学意义,且其在ROC曲线分析中显示出不逊色于ALT、AST的诊断价值。结论AK017411、AK003718、XLOC_019815可以作为指征川楝子诱导急性肝毒性的血清生物标志物。

关键词：川楝子长链非编码RNA 肝毒性生物标志物 ROC曲线分析

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中药复方肾康宁改善慢性肾炎的研究进展

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中医药导报 2021年第9期27卷 146-149页

作者：李函杨睿李小锋盛雨辰卫梦娟季莉莉上海中医药大学/中药研究所/中药标准化教育部重点实验室中药新资源与质量标准综合评价国家中医药管理局重点研究室上海市复方中药重点实验室上海201203 上海中医药大学创新中药研究院药物安全评价研究中心上海201203 上海市浦东新区光明中医医院上海201399 江西普正制药股份有限公司江西井冈山343100

通过查阅和整理国内外相关研究资料,对肾康宁的药物配伍、临床应用、实验研究及毒性等方面进行归纳总结,为肾康宁治疗慢性肾炎的基础研究和临床应用提供参考。肾康宁复方中8味中药相须相使,相辅相成,共同发挥固肾健脾、补中益气、渗湿... 详细信息

通过查阅和整理国内外相关研究资料,对肾康宁的药物配伍、临床应用、实验研究及毒性等方面进行归纳总结,为肾康宁治疗慢性肾炎的基础研究和临床应用提供参考。肾康宁复方中8味中药相须相使,相辅相成,共同发挥固肾健脾、补中益气、渗湿利尿等功效来改善慢性肾炎,且临床应用过程中安全性良好。

关键词：慢性肾炎肾康宁药物配伍临床应用综述

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小豆蔻明对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞葡萄糖摄取能力的影响

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上海中医药大学学报 2021年第4期35卷 54-60页

作者：靳金美邱水平石海莲张德高吴晓俊上海市复方中药重点实验室教育部中药标准化重点实验室国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点研究室上海中医药大学中药研究所上海201203 上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院药剂科/药物临床试验机构办公室上海202150

目的:考察小豆蔻明对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞葡萄糖摄取能力的影响,并探讨其分子机制。方法:将MDA-MB-231细胞分为小豆蔻明不同浓度(0、10、20、40、80μmol/L)组,分别予以相应浓度药物干预24 h。CCK-8法检测细胞活力,2-NBDG法检... 详细信息

目的:考察小豆蔻明对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞葡萄糖摄取能力的影响,并探讨其分子机制。方法:将MDA-MB-231细胞分为小豆蔻明不同浓度(0、10、20、40、80μmol/L)组,分别予以相应浓度药物干预24 h。CCK-8法检测细胞活力,2-NBDG法检测细胞葡萄糖摄取能力,PCR法检测细胞葡萄糖转运体(GLUT)mRNA表达,Western blot法检测细胞GLUT蛋白表达。皮下接种MDA-MB-231细胞构建荷瘤裸鼠模型,小豆蔻明(0.3、1.0、3.0 mg/kg)腹腔注射给药4周后,分离荷瘤小鼠乳腺癌组织,Western blot法检测乳腺癌组织GLUT蛋白表达。结果:小豆蔻明(20、40、80μmol/L)能剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞的活力(P<0.01),且小豆蔻明(20μmol/L)能够显著降低乳腺癌细胞的葡萄糖摄取能力(P<0.05)。进一步研究发现,小豆蔻明(20μmol/L)能够显著下调乳腺癌细胞GLUT3和GLUT4 mRNA表达(P<0.01);小豆蔻明(40μmol/L)能够显著下调乳腺癌细胞GLUT3蛋白表达(P<0.01),小豆蔻明(10、20、40μmol/L)能够显著下调乳腺癌细胞GLUT4蛋白表达(P<0.01),但对GLUT1蛋白表达无明显影响(P>0.05)。小豆蔻明(0.3、1.0、3.0 mg/kg)能够显著降低荷瘤裸鼠乳腺癌组织GLUT1蛋白表达(P<0.01),而小豆蔻明(1.0、3.0 mg/kg)能够显著下调GLUT3蛋白表达(P<0.01)。结论:小豆蔻明可能通过下调GLUT mRNA和蛋白表达,降低人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的活力和葡萄糖摄取能力。

关键词：小豆蔻明乳腺癌细胞活力葡萄糖摄取葡萄糖转运体

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