检索结果-内蒙古大学图书馆

遗传 2011年第9期33卷 989-995页

作者：倪丽菊陶凌云柏熊胡建华高诚谢建云上海实验动物研究中心上海201203 上海市实验动物质量监督检验站上海201203 上海西普尔-必凯实验动物有限公司上海201203

根据生物素与链霉亲和素的亲和原理,利用磁珠富集法筛选东方田鼠(Microtus fortis)微卫星分子标记。链霉亲和素磁珠捕获生物素标记的微卫星探针,然后与连有接头的单链限制性酶切片段复性结合,获得含有微卫星的单链片段,PCR扩增形成双链... 详细信息

根据生物素与链霉亲和素的亲和原理,利用磁珠富集法筛选东方田鼠(Microtus fortis)微卫星分子标记。链霉亲和素磁珠捕获生物素标记的微卫星探针,然后与连有接头的单链限制性酶切片段复性结合,获得含有微卫星的单链片段,PCR扩增形成双链,连接T载体并转化感受态细胞,得到东方田鼠微卫星富集文库。随机挑选70个阳性克隆,经测序分析,获得微卫星序列92个。设计合成27对微卫星引物并成功筛选出21对可用引物,取其中10对引物,荧光标记后对3个人工驯养及野生东方田鼠种群进行遗传多样性分析。结果显示,文章所构建的东方田鼠微卫星文库的阳性克隆率较高,初步筛选的10个微卫星标记均为具有高度多态性的微卫星标记。在3个东方田鼠种群中,野生湖南种群的观测等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)和多态信息含量(PIC)均最高,人工驯养的湖南种群次之,人工驯养的宁夏种群最低。

关键词：东方田鼠磁珠富集微卫星标记遗传多样性

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3种条件性致病菌三重PCR检测方法的建立及初步应用

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中国畜牧兽医 2015年第6期42卷 1389-1395页

作者：冯洁谢建云胡建华高诚上海实验动物研究中心上海市实验动物质量监督检验站上海201203

本研究旨在建立一种能同时检测金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,***）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa,***）、肺炎克雷伯杆菌（Klebsiella pneumoniae,***）的三重PCR检测方法。根据金黄色葡萄球菌nuc基因、绿脓杆菌toxR基... 详细信息

本研究旨在建立一种能同时检测金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,***）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa,***）、肺炎克雷伯杆菌（Klebsiella pneumoniae,***）的三重PCR检测方法。根据金黄色葡萄球菌nuc基因、绿脓杆菌toxR基因、肺炎克雷伯杆菌PhoE基因设计并合成引物,在单一PCR条件基础上优化建立三重PCR反应条件,并进行特异性、敏感性和重复性分析及与细菌分离培养的比对试验。结果显示,3对引物均能特异性扩增出目的条带,大小分别为484、278和368bp。最佳退火温度在56~59℃之间,引物浓度均为0.2μmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,Mg2＋浓度为2.5mmol/L。3种细菌间无交叉反应。对支气管鲍特杆菌等其他8种实验动物常见致病菌均无交叉反应。最低能同时检测到10-5 ng/μL的细菌基因组DNA。3次重复结果一致,表明建立的三重PCR方法重复性好。同时采用细菌分离培养法和三重PCR方法对30份实验小鼠样本进行检测,对比结果显示三重PCR方法检出率略高于细菌分离培养法,细菌分离培养法呈阳性的样品,三重PCR方法均能检出。结果表明,本试验建立的三重PCR检测方法具有特异、敏感、高效等优点,为实验动物细菌快速检测和流行病学调查提供了技术支持。

关键词：三重PCR 金黄色葡萄球菌绿脓杆菌肺炎克雷伯杆菌

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培养法和 PCR法用于实验大、小鼠细菌检测的比较分析

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中国比较医学杂志 2015年第8期25卷 23-26页

作者：冯洁谢建云冯丽萍魏晓锋高诚上海实验动物研究中心上海市实验动物质量监督检验站上海201203

目的比较培养法和PCR法对实验大、小鼠的细菌检测效果。方法分别采用传统细菌分离培养结合生化鉴定方法和PCR方法,对78只SPF级大鼠和422只SPF级小鼠进行检测,对两种方法的检测结果进行比较分析。结果 78只SPF级大鼠均未检测出阳性。422... 详细信息

目的比较培养法和PCR法对实验大、小鼠的细菌检测效果。方法分别采用传统细菌分离培养结合生化鉴定方法和PCR方法,对78只SPF级大鼠和422只SPF级小鼠进行检测,对两种方法的检测结果进行比较分析。结果 78只SPF级大鼠均未检测出阳性。422只SPF级小鼠,培养法检测阳性率7.11%(30/422),其中金黄色葡萄球菌10只,绿脓杆菌22只,肺炎克雷伯杆菌2只。PCR法检测阳性率7.58%(32/422),其中金黄色葡萄球菌10只,绿脓杆菌25只,肺炎克雷伯杆菌2只。结论 PCR法的敏感性高于培养法,操作简便、快捷,适用于实验动物细菌的快速诊断和大规模的质量筛查。

关键词：培养法 PCR法实验动物细菌

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小鼠肝炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第8期28卷 841-843页

作者：周洁赵莉胡建华高诚上海实验动物研究中心上海市实验动物质量监督检验站中国科学院上海药物研究所上海201203

目的:制备并鉴定小鼠肝炎病毒(MHV)N蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:以Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的重组N蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤进行融合,用间接ELISA方法筛选分泌N蛋白mAb... 详细信息

目的:制备并鉴定小鼠肝炎病毒(MHV)N蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:以Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的重组N蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤进行融合,用间接ELISA方法筛选分泌N蛋白mAb的杂交瘤细胞系。并用Western blot和IFA方法对所获得的mAb进行鉴定。结果:共获得4株稳定分泌抗N蛋白mAb的杂交瘤细胞系,其亚类鉴定2株为IgG2a,1株为IgG2b,1株为IgG1,轻链均为κ型。经鉴定4株mAb均能与重组N蛋白发生特异性反应。结论:成功获得了特异性抗MHV N蛋白的mAb,为进一步研究N蛋白的结构功能及建立诊断学方法奠定了基础。

关键词：小鼠肝炎病毒重组N蛋白单克隆抗体

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啮齿柠檬酸杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2017年第5期39卷 393-397页

作者：冯洁谢建云张泉魏晓锋胡建华高诚扬州大学兽医学院江苏扬州225009 上海实验动物研究中心上海市实验动物质量监督检验站上海201203

为建立快速检测啮齿柠檬酸杆菌(***)esp B基因的方法,本研究根据Gen Bank中登录的*** esp B基因序列设计1对特异性引物,建立了*** SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。结果显示,在102拷贝/μL^108拷贝/μL浓度范围内标准曲线循环阈值与... 详细信息

为建立快速检测啮齿柠檬酸杆菌(***)esp B基因的方法,本研究根据Gen Bank中登录的*** esp B基因序列设计1对特异性引物,建立了*** SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。结果显示,在102拷贝/μL^108拷贝/μL浓度范围内标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系。该方法仅对***进行特异性扩增,而对牛棒状杆菌、鼠伤寒沙门菌、嗜肺巴斯德杆菌、支气管鲍特杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌扩增结果均为阴性,具有良好的特异性。其检测灵敏度可达24拷贝/μL。组内和组间试验变异系数均小于1%,重复性良好。临床样品初步应用结果显示,荧光定量PCR阳性检出率为56.36%(31/55),常规PCR阳性检出率为30.91%(17/55),二者符合率为74.55%。本研究建立的*** SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法为实验动物***的检测和流行病学调查提供了技术支撑。

关键词：啮齿柠檬酸杆菌 SYBR Green I 荧光定量PCR

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肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立及初步应用

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中国动物传染病学报 2019年第4期27卷 50-55页

作者：冯洁张泉钱淼谢建云胡建华高诚高崧扬州大学兽医学院扬州225009 上海实验动物研究中心上海市实验动物质量监督检验站上海201203

根据肝螺杆菌fla B基因保守区域设计一组特异性引物,经过条件优化、特异性和敏感性分析,成功建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法仅能检测出肝螺杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增。检出肝螺杆菌最低模板量为86... 详细信息

根据肝螺杆菌fla B基因保守区域设计一组特异性引物,经过条件优化、特异性和敏感性分析,成功建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法仅能检测出肝螺杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增。检出肝螺杆菌最低模板量为86.9fg/L,是普通PCR所需模板量的1/10。本研究建立的LAMP快速检测方法具备操作简单、特异性好、灵敏度高的优点,结果易于观察,对仪器设备要求低,适宜推广应用。

关键词：肝螺杆菌环介导等温扩增检测

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实验大鼠和小鼠多种细菌PCR检测与分析

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中国比较医学杂志 2018年第10期28卷 89-93,116页

作者：冯洁谢建云魏晓锋冯丽萍张泉高诚扬州大学兽医学院扬州225009 上海实验动物研究中心上海市实验动物质量监督检验站上海201203

目的调查上海市实验动物生产设施大鼠、小鼠细菌携带状况。方法比较国内外实验动物细菌监测方案,选取螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌作为检测项目,分别于2014年和2016年收集样品共计848... 详细信息

目的调查上海市实验动物生产设施大鼠、小鼠细菌携带状况。方法比较国内外实验动物细菌监测方案,选取螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌作为检测项目,分别于2014年和2016年收集样品共计848份,采用PCR方法对上述6种病原体进行检测。结果 SPF级设施均无金黄色葡萄球菌污染,清洁级设施2014年无肺炎克雷伯杆菌污染,其它病原体在不同级别设施内均有不同程度的污染,所有清洁级设施均存在螺杆菌和牛棒状杆菌污染。螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌和牛棒状杆菌在不同级别动物上均检出阳性。螺杆菌、绿脓杆菌阳性率呈下降趋势,而啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、肺炎克雷伯杆菌阳性率则呈上升趋势。结论本研究全面、系统地分析了上海地区实验大鼠、小鼠细菌携带状况,为提高实验动物质量和饲养管理水平起促进作用,为我国实验动物国家标准的修订和完善提供依据和参考。

关键词：大鼠小鼠细菌 PCR

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不同生存条件下东方田鼠肝脏基因表达谱分析

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中国实验动物学报 2010年第6期18卷 498-502页

作者：冯洁柏熊沈志敏刘雄伟谢建云胡建华高诚上海实验动物研究中心上海201203 上海市实验动物质量监督检验站上海201203 上海西普尔-必凯实验动物有限公司

目的比较实验室条件下饲养的东方田鼠和野外捕捉东方田鼠肝脏的基因表达差异,寻找可能参与肝脏病变的关键基因。方法以实验室条件饲养的东方田鼠和野外捕捉东方田鼠为研究对象,分别抽提RNA,逆转录成cDNA,体外转录为cRNA并进行片段化;利... 详细信息

目的比较实验室条件下饲养的东方田鼠和野外捕捉东方田鼠肝脏的基因表达差异,寻找可能参与肝脏病变的关键基因。方法以实验室条件饲养的东方田鼠和野外捕捉东方田鼠为研究对象,分别抽提RNA,逆转录成cDNA,体外转录为cRNA并进行片段化;利用表达谱芯片分别进行杂交,扫描后筛选差异基因,并应用real-time PCR方法对部分基因的表达水平进行进一步测定,验证芯片数据的结果。结果实验室饲养东方田鼠肝组织与野外捕捉东方田鼠相比,共有99个基因和41个EST差异表达。其中参与机体代谢的基因占主导,约占35.4%;其次为参与信号通路的基因,约占24.2%;参与细胞周期和免疫的基因分别占6.1%和3.0%。结论利用基因表达谱芯片初步筛选了可能参与东方田鼠脂肪肝形成过程的基因,发现机体代谢通路的基因占主导,肝脏中细胞色素家族基因表达差异明显。

关键词：东方田鼠芯片肝脏细胞色素

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东方田鼠非酒精性脂肪肝模型的建立

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中国实验动物学报 2013年第2期21卷 34-38,F0002页

作者：杨玉琴冯洁柏熊沈志敏刘雄伟高捷谢建云胡建华高诚上海市公共卫生临床中心上海201508 上海市实验动物质量监督检验站上海实验动物研究中心上海201203 上海西普尔-必凯实验动物有限公司

目的建立东方田鼠非酒精性脂肪肝模型,并观察测定其肝指数、病理、血清生化指标的动态变化。方法选取6周龄湖南洞庭湖种群雄性东方田鼠70只,随机分为2组,模型组饲喂高脂肪料,对照组饲喂高纤维料,分别于第2、4、6、8、12周处死,称量体重... 详细信息

目的建立东方田鼠非酒精性脂肪肝模型,并观察测定其肝指数、病理、血清生化指标的动态变化。方法选取6周龄湖南洞庭湖种群雄性东方田鼠70只,随机分为2组,模型组饲喂高脂肪料,对照组饲喂高纤维料,分别于第2、4、6、8、12周处死,称量体重及肝重,计算肝指数,采血检测东方田鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、r-谷氨酰转移酶(r-GT)、胆碱酯酶(CHE)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、葡萄糖(GLU)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL),并取肝脏HE染色后做病理学观察。结果与对照组相比,模型组6周时肝脏出现了典型的脂肪肝特征,肝重和肝指数都明显升高(P<0.05),血清ALT、AST、r-GT、CHE、TC、FFA、GLU和LDL都明显升高(P<0.05),HDL和TG均明显降低(P<0.05)。镜检观察到模型组田鼠肝细胞逐渐呈现弥漫性脂肪变性,6周时大范围出现脂滴,8周时肝内出现弥漫性大脂肪滴,12周后出现炎细胞的浸润。结论采用高脂饲料成功诱发东方田鼠非酒精性脂肪肝,可为研究非酒精性脂肪肝的发病机制和药物干预提供新的模型。

关键词：东方田鼠非酒精性脂肪肝模型

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仙台病毒核蛋白的原核表达及鉴定

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中国动物传染病学报 2010年第4期18卷 32-36页

作者：魏晓锋胡建华高诚上海实验动物研究中心上海市实验动物质量监督检验站上海201203

本研究从一株鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)中扩增获得核蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因,将其克隆入pET32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。将原核表达产物作为免疫原,免疫BALB/C小鼠,制备获得抗NP的特异性多抗,经间接免疫... 详细信息

本研究从一株鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)中扩增获得核蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因,将其克隆入pET32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。将原核表达产物作为免疫原,免疫BALB/C小鼠,制备获得抗NP的特异性多抗,经间接免疫荧光法和Western blot法检测,该表达产物原具有良好的免疫原性。将该产物纯化作为包被抗原,建立了一种检测SeV感染的间接ELISA方法。通过H1N1流感病毒、H9N2流感病毒、新城疫病毒阳性血清进行交叉试验表明:该间接ELISA方法有很好的特异性。这为实验动物仙台病毒抗体的检测提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。

关键词：仙台病毒核蛋白原核表达 ELISA

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