检索结果-内蒙古大学图书馆

生命科学研究 2009年第5期13卷 394-398页

作者：马海燕方彧聃张敬之上海交通大学医学院上海市儿童医院上海市医学遗传研究所中国上海200040

慢病毒载体已经广泛应用于动物模型中基因治疗的研究和转基因动物的制备,而准确地测定重组慢病毒的滴度和感染效率是其关键步骤.通过荧光实时定量PCR的方法定量分析重组慢病毒的颗粒数以及病毒的活性滴度,并以GFP报告基因的方法作为对... 详细信息

慢病毒载体已经广泛应用于动物模型中基因治疗的研究和转基因动物的制备,而准确地测定重组慢病毒的滴度和感染效率是其关键步骤.通过荧光实时定量PCR的方法定量分析重组慢病毒的颗粒数以及病毒的活性滴度,并以GFP报告基因的方法作为对照来验证定量PCR方法的准确性.研究结果显示,应用荧光实时定量PCR法与GFP报告基因法测定得到的病毒活性滴度成正相关,而且前者可以更加准确地测定病毒滴度和病毒感染效率.

关键词：慢病毒载体荧光实时定量PCR 病毒滴度整合拷贝数感染效率

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遗传变异的又一来源:拷贝数变异

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生物技术通讯 2009年第3期20卷 396-398页

作者：谭琪曾凡一上海交通大学医学院上海医学遗传研究所上海交通大学附属儿童医院上海200040

人们很早就发现DNA拷贝数变异与特定染色体重组和基因组异常相关这一现象,但最近才知道它与疾病的相关联系。我们对拷贝数变异的原理、最新研究方法,及其与复杂疾病的相关性研究等进展进行了综述;总结了拷贝数变异研究所存在的问题;对... 详细信息

人们很早就发现DNA拷贝数变异与特定染色体重组和基因组异常相关这一现象,但最近才知道它与疾病的相关联系。我们对拷贝数变异的原理、最新研究方法,及其与复杂疾病的相关性研究等进展进行了综述;总结了拷贝数变异研究所存在的问题;对拷贝数变异未来的研究重点和需要解决的问题进行了展望。

关键词：拷贝数变异微阵列比较基因组杂交复杂疾病

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中国荷斯坦牛线粒体DNA全序列多态性分析和分型

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生物技术通讯 2009年第5期20卷 654-657页

作者：谭琪曾凡一上海交通大学医学院附属儿童医院上海200040 上海医学遗传研究所上海200040 上海交通大学医学院医学科学院上海200040

目的:阐明中国荷斯坦牛线粒体DNA全序列多态性及其起源关系。方法:从上海松江科研基地的10头中国荷斯坦牛外周血中抽提DNA,设计引物扩增全长线粒体DNA,通过对其进行序列测定、分析,绘制系统进化发育树。结果:得到了中国荷斯坦牛线粒体... 详细信息

目的:阐明中国荷斯坦牛线粒体DNA全序列多态性及其起源关系。方法:从上海松江科研基地的10头中国荷斯坦牛外周血中抽提DNA,设计引物扩增全长线粒体DNA,通过对其进行序列测定、分析,绘制系统进化发育树。结果:得到了中国荷斯坦牛线粒体基因组的全序列和个体比对结果等相关统计数据,对多态性位点和突变位点等遗传信息进行了序列分析,并进一步分型。结论:研究结果对提高中国荷斯坦牛体细胞核移植和线粒体DNA多态性高通量分析效率有一定的指导意义,为线粒体DNA多态性检测芯片的研究奠定了基础。

关键词：线粒体DNA 中国荷斯坦牛体细胞核移植多态性位点分型

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应用接头PCR克隆慢病毒介导的转基因小鼠整合位点旁侧序列

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医学分子生物学杂志 2009年第4期6卷 292-296页

作者：孟坡任兆瑞曾凡一上海医学遗传研究所上海交通大学附属儿童医院上海市200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖重点实验室上海市200040 上海交通大学医学院医学科学院上海市200025

目的为鉴定慢病毒介导的转基因小鼠中外源基因的整合位点信息，应用接头PCR克隆整合位点旁侧序列。方法小鼠基因组总DNA酶解后与设计的接头片段连接，根据慢病毒的LTR序列设计巢式PCR引物，克隆转基因小鼠整合位点旁侧序列。结果成功克... 详细信息

目的为鉴定慢病毒介导的转基因小鼠中外源基因的整合位点信息，应用接头PCR克隆整合位点旁侧序列。方法小鼠基因组总DNA酶解后与设计的接头片段连接，根据慢病毒的LTR序列设计巢式PCR引物，克隆转基因小鼠整合位点旁侧序列。结果成功克隆到转基因小鼠整合位点的旁侧序列，经过测序定位于小鼠染色体上。结论作为反向PCR的改进，本方法可用于转基因小鼠整合位点旁侧序列的克隆，为分析整合位点与外源基因表达之间的关系等提供了科学依据。

关键词：接头PCR 慢病毒转基因小鼠整合位点旁侧序列克隆

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超声引导下宫内移植制备人／山羊干细胞嵌合体的方法建立

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实验动物与比较医学 2009年第4期29卷 211-214页

作者：许淼黄文英胡伟熊灿盛敏曾凡一黄淑帧上海交通大学医学遗传研究所、上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040 上海滔滔转基因工程股份有限公司上海201604 上海交通大学医学院医学科学研究院上海200025

目的建立超声引导下的干细胞山羊宫内移植的方法。方法首先获得胎羊腹部横断面的超声图像，然后在超声引导下将7号穿刺针快速刺入妊娠45～55d的胎羊腹腔内，将外源干细胞注射入胎羊腹腔中，并定期观察受体胎羊在移植后的生长发育和流产... 详细信息

目的建立超声引导下的干细胞山羊宫内移植的方法。方法首先获得胎羊腹部横断面的超声图像，然后在超声引导下将7号穿刺针快速刺入妊娠45～55d的胎羊腹腔内，将外源干细胞注射入胎羊腹腔中，并定期观察受体胎羊在移植后的生长发育和流产情况以及出生后外源细胞的嵌合比例。结果通过超声引导能准确安全地进行外源干细胞的宫内移植，在移植的49头胎羊中，有36头胎羊顺利出生，其余13头流产（流产率26．5％，13／49），与非移植组流产率相当，明显低与剖腹手术移植组（流产率6％）。结论超声引导下的干细胞宫内移植是一种简便和安全的方法，能有效避免剖腹手术方法带来的高流产率，非常适用于宫内移植嵌合体模型的制备，从而为研究干细胞在体内生物学特征和干细胞宫内移植的临床应用提供了技术手段。

关键词：非手术宫内移植超声引导干细胞人/山羊嵌合体

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MLPA-微阵列技术在Y染色体异常检测中的初步应用

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遗传 2008年第12期30卷 1629-1634页

作者：周大文管翌华许淼颜景斌黄英张敬之任兆瑞上海交通大学医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040 上海交通大学附属儿童医院中心实验室上海200040

为了探讨MLPA-微阵列技术用于检测性染色体异常的可行性和精确性,针对Y染色体上的3个基因TSPY(p11.2)、PRY(q11)和RBMY(q11.2)设计MLPA探针,应用MLPA-微阵列技术对15例已知染色体核型的样品进行检测,将检测结果与各样品核型分析和PCR的... 详细信息

为了探讨MLPA-微阵列技术用于检测性染色体异常的可行性和精确性,针对Y染色体上的3个基因TSPY(p11.2)、PRY(q11)和RBMY(q11.2)设计MLPA探针,应用MLPA-微阵列技术对15例已知染色体核型的样品进行检测,将检测结果与各样品核型分析和PCR的检测结果进行对照和比较。结果表明,MLPA-微阵列技术对上述各基因位点的检测结果与样品染色体核型基本吻合,特别是对二例核型分析没有获得染色体结构异常信息的样品,MLPA-微阵列技术检测出Y染色体微小的缺失或指示某些未知染色体片段的信息,并与PCR检测结果完全相符。表明文章报道的MLPA-微阵列技术能够检测核型分析无法分辨的微小变化和异常,显示MLPA-微阵列技术在染色体异常分析中具有很高的检测效率和准确性,相对于染色体核型分析具有明显的优势,在临床染色体病诊断中具有较大的应用前景。

关键词： MLPA 微阵列染色体异常

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胚胎移植时机对牛体细胞克隆胚胎妊娠率的影响

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上海交通大学学报（农业科学版） 2008年第2期26卷 96-100页

作者：赵磊文伏静管鹏飞李华黄淑帧曾溢滔上海交通大学上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海200040

以活体取卵OUP来源的牛卵母细胞为受体胞质,以Holstein奶牛的牛耳成纤维细胞作为供核细胞进行体细胞克隆,并将发育7 d的克隆囊胚和体内胚分别及体外胚进行移植,观察移植时机对受孕率的影响。依据代孕牛排卵后天数的不同分为3个实验组,... 详细信息

以活体取卵OUP来源的牛卵母细胞为受体胞质,以Holstein奶牛的牛耳成纤维细胞作为供核细胞进行体细胞克隆,并将发育7 d的克隆囊胚和体内胚分别及体外胚进行移植,观察移植时机对受孕率的影响。依据代孕牛排卵后天数的不同分为3个实验组,组1:排卵后5～6 d(不含6 d);组2:排卵后6～7d;组3:排卵后7～8 d(不含7 d)。结果显示:对于体外胚胎而言,第2组的受孕率高于第1组(P>0.05),第3组的受孕率最低(P<0.05),且120 d的受孕率为0。与此相反,对于体内胚胎,第3组的受孕率高于其他2组。通过实验可以证明对于7 d的体外胚胎选择在代孕牛排卵后6—7 d移植可以得到较高的受孕率:而对于体内胚胎而言则应选择在受体牛排卵后7～8 d移植,可得到较高的妊娠率。

关键词：体细胞核移植受孕牛胚胎移植

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丙酸血症11例基因突变分析

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中华儿科杂志 2008年第6期46卷 416-420页

作者：胡宇慧韩连书叶军邱文娟张雅芬杨艳玲刘丽麻宏伟高晓岚顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所内分泌遗传代谢病研究室200092 北京大学第一医院儿科广州市儿童医院内分泌代谢科中国医科大学第二临床学院儿童保健科

目的研究丙酸血症患儿丙酰辅酶A羧化酶PCCA和PCCB基因突变情况.方法应用PCR扩增和直接测序对11例丙酸血症患儿PCCA和PCCB基因的各个外显子及其两侧侧翼序列进行突变检测,并对部分患儿父母进行相应突变基因检测.结果6例为PCCA突变,5例为P... 详细信息

目的研究丙酸血症患儿丙酰辅酶A羧化酶PCCA和PCCB基因突变情况.方法应用PCR扩增和直接测序对11例丙酸血症患儿PCCA和PCCB基因的各个外显子及其两侧侧翼序列进行突变检测,并对部分患儿父母进行相应突变基因检测.结果6例为PCCA突变,5例为PCCB突变.共发现13种突变,其中10种突变未见文献报道,突变类型包括错义突变、缺失突变、剪切位点突变和复杂型插入缺失突变,错义突变为最常见类型.167-179dell3insl复杂型插入缺失突变在2例中为纯合突变.结论在11例内酸血症患儿中检测到13种突变,其中10种为新突变类型,为今后有关丙酸血症的发病机制研究提供理论依据.

关键词：丙酸类甲基丙二酰CoA脱羟酶基因突变

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丙酸血症11例基因突变分析

丙酸血症11例基因突变分析

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中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会

作者：胡宇慧麻宏伟韩连书叶军邱文娟张雅芬高晓岚顾学范杨艳玲刘丽上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所小儿内分泌、遗传代谢病研究室 200092 中国医科大学第二临床学院儿童保健科北京大学第一医院儿科广州市儿童医院内分泌代谢科

目的：研究丙酸血症患儿丙酰辅酶A羧化酶PCCA和PCCB基因突变情况。方法：应用PCR扩增和直接测序对11例丙酸血症患儿PCCA和PCCB基因的各个外显子及其两侧侧翼序列进行突变检测，并对部分患儿父母进行相应突变基因检测。结果：6... 详细信息

目的：研究丙酸血症患儿丙酰辅酶A羧化酶PCCA和PCCB基因突变情况。方法：应用PCR扩增和直接测序对11例丙酸血症患儿PCCA和PCCB基因的各个外显子及其两侧侧翼序列进行突变检测，并对部分患儿父母进行相应突变基因检测。结果：6例患儿为PCCA突变，5例为PCCB突变。共发现13种突变，其中10种突变未见文献报道，突变类型包括错义突变、缺失突变、剪切位点突变和复杂型插入缺失突变，错义突变为最常见类型。167～179de113insl复杂型插入缺失突变在2例患儿中为纯合突变。结论：在11例丙酸血症患儿中检测到13种突变，其中10种为新突变类型，为今后有关丙酸血症的发病机制研究提供理论依据。

关键词：丙酸血症基因突变丙酰辅酶A羧化酶发病机制 PCCB基因 PCCA基因

来源：评论

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共培养体系中滋养层细胞对牛核移植胚胎早期发育的影响

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上海交通大学学报（农业科学版） 2007年第6期25卷 519-524页

作者：伏静赵磊文管鹏飞李华黄英黄淑帧曾溢滔上海交通大学上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海200040

利用活体取卵(OPU)所得的卵母细胞与牛耳成纤维细胞构建牛体细胞核移植重构胚,并将所得的重构胚进行ACM(培养液)与不同滋养层细胞的共培养,分析不同滋养层细胞类型、传代次数、冻融处理对核移植胚胎体外发育的影响,探讨胚胎体外共培养... 详细信息

利用活体取卵(OPU)所得的卵母细胞与牛耳成纤维细胞构建牛体细胞核移植重构胚,并将所得的重构胚进行ACM(培养液)与不同滋养层细胞的共培养,分析不同滋养层细胞类型、传代次数、冻融处理对核移植胚胎体外发育的影响,探讨胚胎体外共培养中滋养层细胞的合适条件。结果表明:胎鼠成纤维细胞(MEF)培养组的囊胚率和胚胎细胞数(38.2%和135±2.1)显著高于牛颗粒细胞(GC)组(9.1%和101±4.6,P<0.05)和牛耳成纤维细胞(BAF)组(25.9%和115±3.1,P<0.05)。2～4代MEF细胞与胚胎共培养的效果(38.2%和135±2.1)明显好于原代MEF细胞(24.7%和108±3.1,P<0.05)或5～8代MEF细胞(22.8%和102±2.8,P<0.05),新鲜的MEF细胞比冻融处理后的MEF细胞培养效果好(38.2%vs.27.7%,135±2.1vs.110±1.7,P<0.05)。因此,用新鲜的2～4代MEF细胞作为共培养体系中的滋养层细胞有利于牛核移植胚胎的早期发育。

关键词：胎鼠成纤维细胞共培养体系牛体细胞核移植

来源：评论

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