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遗传学进步与人口健康高峰论坛

作者：李伟谢书阳任兆瑞曾溢滔曾凡一黄淑帧上海交通大学医学院附属上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学院附属上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学院附属上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学院附属上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学院附属上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学院附属上海市儿童医院上海医学遗传研究所

慢病毒载体近年来已成功地应用到β地贫的基因治疗中,证实能够有效地改善β地贫的症状。但是其治疗作用的稳定性和长期效应仍有待观察。我们成功地构建了人类β珠蛋白基因的慢病毒表达载体,通过对654小鼠受精卵的卵周隙显微注射的方法,... 详细信息

慢病毒载体近年来已成功地应用到β地贫的基因治疗中,证实能够有效地改善β地贫的症状。但是其治疗作用的稳定性和长期效应仍有待观察。我们成功地构建了人类β珠蛋白基因的慢病毒表达载体,通过对654小鼠受精卵的卵周隙显微注射的方法,成功地制备了转人类β珠蛋白基因小鼠。通过 PCR 方法鉴定转基因小鼠基因型,共获得四种小鼠;1．正常小鼠 Hbb/Hbb;2、654小鼠 Hbb/Hbb;3、正常的转基因小鼠β-Hbb/Hbb;4、654转基因小鼠β- Hbb/Hbb。通过小鼠繁育获得转基因小鼠的 F1和 F2代,并且发现654转基因小鼠后代的存活率较654小鼠显著提

关键词： β地中海贫血珠蛋白基因基因治疗慢病毒载体

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ΦC31整合酶介导的外源基因在牛基因组中整合位点的分析

ΦC31整合酶介导的外源基因在牛基因组中整合位点的分析

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遗传学进步与人口健康高峰论坛

作者：欧海龙黄英曾溢滔上海交通大学医学院附属上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学院附属上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学院附属上海市儿童医院上海医学遗传研究所

来源于链霉菌(Streptomyces)噬菌体的ΦC31整合酶能介导携带 attB 序列的重组载体在人、鼠等动物基因组中实现高效定点整合,染色体上的整合位点称为假 attP 位点。据报道在人基因组中存在着约有100多个假 attB 位点,在小鼠基因组中发现... 详细信息

来源于链霉菌(Streptomyces)噬菌体的ΦC31整合酶能介导携带 attB 序列的重组载体在人、鼠等动物基因组中实现高效定点整合,染色体上的整合位点称为假 attP 位点。据报道在人基因组中存在着约有100多个假 attB 位点,在小鼠基因组中发现约有57个。先前我们在牛基因组中首次发现了2个假 attP 位点,分别位于19号、28号染色体上。为了进一步分析牛基因组中是否分布更多的假 attP 位点以及各假 attP 位点对外源基因表达水平的影响,我们用含有 attB 序列及表达绿色荧光蛋白(GFP)的质粒 pEGFP-N1-attB 以及表达ΦC31整合酶的质粒 pCMV-INT 共转染牛耳皮肤成纤维细

关键词：整合位点染色体外源基因基因组 C31 整合酶

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幔病毒载体对其内含子剪切保护功能的研究

幔病毒载体对其内含子剪切保护功能的研究

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遗传学进步与人口健康高峰论坛

作者：方彧聃张敬之上海交通大学医学院附属上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学院附属上海市儿童医院上海医学遗传研究所

建立了用慢病毒载体介导生产转基因小鼠的平台。与传统的受精卵原核注射外源 DNA 相比,利用假病毒感染受精卵,能够成倍地提高转基因效率。由于慢病毒是 RNA 病毒,理论上在其包装形成的假病毒颗粒中,假病毒 RNA 中的内含子理应被剪切。然... 详细信息

建立了用慢病毒载体介导生产转基因小鼠的平台。与传统的受精卵原核注射外源 DNA 相比,利用假病毒感染受精卵,能够成倍地提高转基因效率。由于慢病毒是 RNA 病毒,理论上在其包装形成的假病毒颗粒中,假病毒 RNA 中的内含子理应被剪切。然而,在用慢病毒载体介导制备转基因小鼠的过程中,通过对假病毒、被感染细胞及转基因小鼠个体进行了分析,我们发现其携带的内含子未被完全剪切掉,这提示慢病毒存在着保护内含子不被剪切的元件和蛋白。进一步研究后发现：假病毒中所包含的内含子要多于其整合到宿主 DNA 后所含的内含子,5′端内含子更容易受到保护而不

关键词：内含子病毒载体保护功能

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外源基因在转基因小鼠中整合状况的分析

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医学分子生物学杂志 2006年第6期3卷 407-413页

作者：颜景斌朱怡文肖艳萍王舒任兆瑞黄淑帧曾溢滔上海交通大学医学遗传研究所上海市儿童医院上海市200040

目的研究外源基因在转基因小鼠及其家系中的整合状况。方法采用PCR、定量PCR和荧光原位杂交(FISH)的方法对原代转基因小鼠中外源人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因的整合和嵌合情况进行分析。使用PCR、直接测序法鉴定整合的外源基因多拷贝的连接... 详细信息

目的研究外源基因在转基因小鼠及其家系中的整合状况。方法采用PCR、定量PCR和荧光原位杂交(FISH)的方法对原代转基因小鼠中外源人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因的整合和嵌合情况进行分析。使用PCR、直接测序法鉴定整合的外源基因多拷贝的连接方向和连接方式。结果7个家系中F0-8、F0-10和F0-11的后代中阳性个体比例明显低于50%,3个原代小鼠DNA中hFⅨ基因拷贝数分别只有子代中的66.2%、18.8%和28.3%。F0-11小鼠各脏器中嵌合比差异极大,且未见胚系特异性分布。不同个体间整合拷贝数差异极大,最少的F0-69为单拷贝,最多的F0-10有43个拷贝。而整合位点分析发现外源基因在随机分布中仍呈现一定的趋向性。PCR和测序结果证明所有小鼠中外源基因多拷贝均为头尾连接,连接的机制以粘性末端介导的连接为主,F0-13中还存在同源序列配对、断裂、修复介导的头尾连接。结论在整合有hFⅨ基因的转基因小鼠中多拷贝外源基因多以粘性末端介导的头尾连接方式整合在染色体的某些特定区域。

关键词：转基因小鼠外源基因整合拷贝数嵌合体

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克隆牛的心、肝、肺和肾组织的临床、病理特征及胰岛素样生长因子家族基因表达的分析

克隆牛的心、肝、肺和肾组织的临床、病理特征及胰岛素样生长因子...

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中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会

作者：巩芷娟庞芸黄淑帧上海交通大学医学遗传研究所上海市儿童医院上海交通大学医学遗传研究所上海市儿童医院上海交通大学医学遗传研究所上海市儿童医院

体细胞核移植是制备转基因动物／动物生物反应器的重要途径,但总体效率仍很低,且克隆动物常出现畸形和高死亡率。为探讨其发生的可能机理,我们分析了新生克隆牛的临床特征、其各组织脏器的发育及组织病理学情况,以及胰岛素样生长因子(In... 详细信息

体细胞核移植是制备转基因动物／动物生物反应器的重要途径,但总体效率仍很低,且克隆动物常出现畸形和高死亡率。为探讨其发生的可能机理,我们分析了新生克隆牛的临床特征、其各组织脏器的发育及组织病理学情况,以及胰岛素样生长因子(Insulin-likegrowthfactor,IGF-I)及IGFBP-2基因在克隆牛的肝、肺、肾、肌肉和胸腺中的表达情况,包括观察克隆小牛出生时的临床表现、检查是否有呼吸困难及先天畸形等情况。

关键词：克隆牛肌肉萎缩肾组织胰岛素样生长因子病理特征家族基因

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免疫组织化学方法在人/山羊嵌合体人源细胞鉴定中的应用

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中华检验医学杂志 2005年第1期28卷 74-78页

作者：巩芷娟黄淑帧上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学 200040

目的　在胎山羊宫内移植人造血干细胞 (hHSC)获得人 /山羊嵌合体基础上 ,应用免疫组织化学技术分析嵌合体实验山羊肝、肺和肾组织中人源细胞的生长及分化情况。方法　对 7头经荧光激活的细胞分选 (FACS)、荧光原位杂交 (FISH)和分子生... 详细信息

目的　在胎山羊宫内移植人造血干细胞 (hHSC)获得人 /山羊嵌合体基础上 ,应用免疫组织化学技术分析嵌合体实验山羊肝、肺和肾组织中人源细胞的生长及分化情况。方法　对 7头经荧光激活的细胞分选 (FACS)、荧光原位杂交 (FISH)和分子生物学方法鉴定为阳性的实验山羊 ,在出生后不同时间取其肝、肺和肾组织 ,制作石蜡切片 ,然后采用免疫组织化学的EnVision系统 ,用特异性人增殖期细胞核抗原 (PCNA)单抗、人肝细胞特异性抗原 (HSA)单抗及人 β 2微球蛋白 (β 2M )单抗鉴定这些组织中的人源细胞。结果　 7头实验山羊的肝组织中有一定比例的PCNA和HSA抗体阳性染色细胞 ,肺和肾组织内有PCNA及 β 2M抗体阳性染色细胞 ,正常人的肝、肺和肾细胞也呈阳性染色 ,而非hHSC移植的正常山羊的肝、肺和肾组织中未见有阳性染色细胞。结论　胎山羊宫内移植hHSC所形成的嵌合体的肝脏中有人源细胞存活 ,并检测到表达人肝细胞特异抗原的人肝样细胞。免疫组化鉴定的阳性结果与分子生物学等方法的鉴定结果相符。此外 ,在嵌合体山羊肺和肾组织中也发现有人源细胞。

关键词：肾组织嵌合体阳性细胞鉴定 PCNA HSC 免疫组织化学方法 HSA 增殖期细胞存活

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反向PCR精确鉴定人凝血因子IX基因在小鼠染色体中的整合位置

反向PCR精确鉴定人凝血因子IX基因在小鼠染色体中的整合位置

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中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会

作者：王强盛海清肖艳萍曾溢滔上海市儿童医院上海交通大学医学遗传研究所

转基因动物模型是生物学研究的一种有效工具,目前存在的主要问题是对其深层的机理认识不足。反向PCR(IPCR)是一种用于扩增已知基因侧翼序列的方法,可以应用该技术有目

关键词：染色体凝血因子 PCR 外源基因整合位点鉴定人

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