检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2025年第4期57卷 78-84页

作者：钟祖昌李本强陶洁程靖华石迎刘佩红唐攀焦嘉杰刘惠莉上海海洋大学水产与生命学院上海201306 上海市农业科学院畜牧兽医研究所/上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 上海市种猪工程技术中心上海201106

为深入揭示猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)致病机制,以毒株SHCM2019为研究对象,原核表达VP_(4)蛋白并制备多克隆抗体。根据VP_(4)氨基酸序列进行PSV遗传进化分析,然后将VP_(4)基因与原核表达载体连接,经诱导表达得到可溶性VP_(4... 详细信息

为深入揭示猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)致病机制,以毒株SHCM2019为研究对象,原核表达VP_(4)蛋白并制备多克隆抗体。根据VP_(4)氨基酸序列进行PSV遗传进化分析,然后将VP_(4)基因与原核表达载体连接,经诱导表达得到可溶性VP_(4)蛋白。纯化后的VP_(4)蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证其反应性。ELISA结果显示,多克隆抗体效价达1∶128000;Western blot和IFA结果表明,其能特异性识别和结合PSV,说明重组VP_(4)蛋白具有较好的免疫原性和反应原性。本研究成功表达了VP_(4)蛋白并制备了多克隆抗体,为VP_(4)蛋白功能研究奠定基础。

关键词：猪萨佩罗病毒 VP4蛋白原核表达多克隆抗体

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茯苓多糖对上海白猪精液冷冻保存及精子DNA甲基化的影响

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上海农业学报 2025年第1期41卷 72-79页

作者：孙玲伟朱永军周金勇刘富琴张德福戴建军滑志民上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 农业农村部畜禽资源(猪)评价利用重点实验室上海201106 上海农林职业技术学院动物科学技术系上海201699

为研究茯苓多糖(Poria cocos mushroom polysaccharides,PCP)在上海白猪精液冷冻保存中的作用,采集8头上海白猪24份精液,在精液冷冻液中添加不同浓度的PCP,测定冷冻-解冻后精液质量和抗氧化活性,以及冷冻保存后精子DNA甲基化水平。结果... 详细信息

为研究茯苓多糖(Poria cocos mushroom polysaccharides,PCP)在上海白猪精液冷冻保存中的作用,采集8头上海白猪24份精液,在精液冷冻液中添加不同浓度的PCP,测定冷冻-解冻后精液质量和抗氧化活性,以及冷冻保存后精子DNA甲基化水平。结果表明:与未添加PCP组相比,600μg∕mL PCP添加组精子活力最高(P<0.05),600μg∕mL PCP添加组精子活率最高(P<0.05),而600μg∕mL和900μg∕mL PCP添加组的精子顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量较高。此外,600μg∕mL PCP添加组精液中的超氧化歧化酶(SOD)活性最高(P<0.05),300、600、900μg∕mL PCP添加组精液中的过氧化氢酶(CAT)活性较高(P<0.05),600μg∕mL PCP添加组精液中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性最高(P<0.05);所有添加组的精子DNA甲基化水平均显著低于对照组(P<0.05)。综上,添加适量的PCP可以改善上海白猪的精液冷冻保存效果,也能够降低冷冻后精子的DNA甲基化水平。

关键词：上海白猪精液冷冻保存茯苓多糖(PCP) 抗氧化 DNA甲基化

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牛传染性鼻气管炎可视化LAMP检测方法的建立和应用

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生物工程学报 2018年第10期34卷 1587-1595页

作者：董世娟冯蒙于瑞嵩谢春芳陈冰清李震上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因保守序列(GenBank Accession No. DQ006857.1),利用Primer ExplorerV4软件设计3对LAMP引物,通过反应体系的优化、敏感性试验和特异性试验,建立IBRV的LAMP检测方法,并对393份临床样本进行了检测应... 详细信息

根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因保守序列(GenBank Accession No. DQ006857.1),利用Primer ExplorerV4软件设计3对LAMP引物,通过反应体系的优化、敏感性试验和特异性试验,建立IBRV的LAMP检测方法,并对393份临床样本进行了检测应用。结果显示,建立的IBRV LAMP方法在65℃、50 min条件下可扩增出LAMP特征性梯状条带,并可通过颜色变化判定结果。该方法可以检测到10copies/μL的质粒DNA,与nested-PCR方法的敏感性相当,比PCR方法敏感1000倍,且与牛病毒性腹泻病毒、猪伪狂犬病毒、水泡口炎病毒等均无交叉反应。应用该方法检测301份鼻腔拭子和92份血清样本,阳性率分别为87.6%和58.8%,表明鼻腔棉拭子更适用于IBRV的临床检测。文中建立的IBRV LAMP方法具有可视化、快速、特异、灵敏性强的优势,适合基层和现场对临床样本进行快速检测,为IBR的防控提供了技术支撑。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒环介导等温扩增方法 gB基因

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猪流行性腹泻病毒反向遗传操作技术及其应用

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生物工程学报 2017年第2期33卷 205-216页

作者：于瑞嵩董世娟司伏生蒋凤英谢春芳陈冰清喻利李震上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

猪流行性腹泻病毒(PEDV)是引起猪(特别是新生仔猪)急性、高度传染性消化道疾病的主要病原之一;2010年底以来,猪流行性腹泻(PED)的再次暴发给我国乃至全球养猪业造成了巨大经济损失。最近,研究者已先后建立了基于靶向RNA重组技术、细菌... 详细信息

猪流行性腹泻病毒(PEDV)是引起猪(特别是新生仔猪)急性、高度传染性消化道疾病的主要病原之一;2010年底以来,猪流行性腹泻(PED)的再次暴发给我国乃至全球养猪业造成了巨大经济损失。最近,研究者已先后建立了基于靶向RNA重组技术、细菌人工染色体(BAC)载体系统和体外连接技术的PEDV反向遗传学操作技术,为PEDV编码的蛋白质的功能、致病机制以及新型疫苗的研发开辟了新的思路。本文对PEDV反向遗传操作技术的研究进展及其在PEDV胰酶依赖性、S蛋白和ORF3蛋白的功能以及新一代疫苗研制等方面的应用现状进行了综述与展望。

关键词：猪流行性腹泻病毒反向遗传学胰酶 S蛋白 ORF3蛋白细胞适应性疫苗

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降低诱导温度对改善猪α-干扰素发酵生产性能和ATP再生效率的作用

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化工学报 2011年第2期62卷 444-451页

作者：刘国强金虎高敏杰戴科科汪汇慧李震史仲平江南大学生物工程学院江苏无锡214122 上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

在10 L发酵罐、控制甲醇浓度的条件下,考察了诱导温度对毕赤酵母发酵生产猪α-干扰素(pIFN-α)性能的影响。结果表明,温度对pIFN-α表达的影响明显,20℃低温有利于pIFN-α的表达,该条件下pIFN-α最高活性可达1.5×106IU·ml-1,... 详细信息

在10 L发酵罐、控制甲醇浓度的条件下,考察了诱导温度对毕赤酵母发酵生产猪α-干扰素(pIFN-α)性能的影响。结果表明,温度对pIFN-α表达的影响明显,20℃低温有利于pIFN-α的表达,该条件下pIFN-α最高活性可达1.5×106IU·ml-1,是30℃传统诱导生产时最高活性(1.0×104 IU·ml-1)的150倍。发酵状态参数的在线测量和代谢分析结果表明,20℃低温诱导环境下,细胞代谢活性高、甲醇比消耗速度(0.036 h-1)比30℃时的(0.021 h-1)大;同时,低温诱导下的CO2释放速度(CER)和呼吸商(RQ)均较低,表明改变诱导温度可以改变胞内代谢流的分配。更重要的是,低温诱导既可以增加目标蛋白表达支路的碳代谢流,又可以提高甲醇能量代谢支路中产生的NADH利用效率、改善毕赤酵母生产pIFN-α系统的ATP再生效率和速度,实现了目标蛋白的高效表达。

关键词：毕赤酵母猪α-干扰素诱导代谢分析

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猪流行性腹泻病毒免疫及疫苗研制

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生物工程学报 2021年第8期37卷 2603-2613页

作者：董世娟谢春芳司伏生陈冰清于瑞嵩李震上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 上海市种猪育种工程中心上海201106

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是严重危害我国和世界养猪业的重要动物疫病,其致病原为猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),属冠状病毒科α冠状病毒属。文中综述分为5个部分。前两部分在介绍该病病... 详细信息

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是严重危害我国和世界养猪业的重要动物疫病,其致病原为猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),属冠状病毒科α冠状病毒属。文中综述分为5个部分。前两部分在介绍该病病原及其流行病学的基础上先概括了初生仔猪的被动免疫途径和初乳的重要功效。第三部分总结了母猪孕期免疫的特点,讨论了"肠道-乳腺-sIgA轴"理论及其可能的作用机理,提出了一系列PEDV免疫防控中应重点关注的理论技术问题。最后两部分分别总结了PEDV疫苗的研发现状并对PEDV免疫防控的未来发展作了展望。

关键词：猪流行性腹泻病毒冠状病毒疫苗免疫肠道-乳腺-sIgA轴

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不同形式饲粮对生长期白山羊生长性能、肉质性能和血液生理生化指标的影响

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动物营养学报 2021年第8期33卷 4748-4759页

作者：戴建军李丹阳孙玲伟吴彩凤吕玉华张树山林月霞张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106

为促进全价颗粒饲粮在山羊饲养中的推广应用,本研究以生长期长三角洲白山羊为研究对象,分别以全混合日粮(TMR,TMR组)、全价颗粒饲粮(颗粒组)和全价颗粒饲粮部分限制采食(限制采食组)进行饲喂,研究全价颗粒饲粮对其生长速度、肉质性能和... 详细信息

为促进全价颗粒饲粮在山羊饲养中的推广应用,本研究以生长期长三角洲白山羊为研究对象,分别以全混合日粮(TMR,TMR组)、全价颗粒饲粮(颗粒组)和全价颗粒饲粮部分限制采食(限制采食组)进行饲喂,研究全价颗粒饲粮对其生长速度、肉质性能和血液生理生化指标的影响。结果表明:1)颗粒组的增重效果显著高于TMR组(P<0.05),部分限制采食亦能取得良好的增重效果。2)与TMR组相比,颗粒组白山羊屠宰率提高了1.48%,但差异不显著(P>0.05);各组间pH、剪切力、滴水损失、蒸煮损失和肉色均没有显著变化(P>0.05)。3)各组间白山羊血清中生长激素(GH)、生长抑素(SS)、生长激素释放多肽(GHRP)、三碘甲状腺原氨酸(T 3)、甲状腺素(T 4)和胰岛素样生长因子(IGF)含量均无显著差异(P>0.05);限制采食组血清碱性磷酸酶(ALP)活性在第4周时出现一个异常波动,显著高于TMR组和颗粒组(P<0.05),到第8周时限制采食组血清ALP活性显著下降(P<0.05),但仍显著高于颗粒组(P<0.05);颗粒组的血清甘油三酯(TG)含量在第8周时显著高于TMR组和限制采食组(P<0.05),血清低密度脂蛋白(LDL)含量则显著低于TMR组(P<0.05),其余血清生化指标在各组之间均无显著差异(P>0.05)。在血常规指标方面,除个别指标在饲喂第2周出现一定波动外,其余时间点3组呈一致变化趋势;饲喂结束后,各组之间血清丙二醛(MDA)、活性氧簇(ROS)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均没有显著差异(P>0.05)。4)组织切片观察表明,颗粒饲喂可部分增加十二指肠的肠绒毛长度,对肝脏、睾丸和附睾等组织未产生影响。综上所述,全价颗粒饲粮饲喂对生长期白山羊增重效果明显,且整个试验过程未对其健康指标产生明显影响,可用于育肥过程中的标准化饲喂。

关键词：全价颗粒饲粮生长性能血液生理生化指标白山羊

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猪IFNα基因在毕赤酵母中的高效分泌表达

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遗传 2005年第2期27卷 215-220页

作者：黄海谢蓓于瑞嵩刘惠莉张德福曹祥荣李震南京师范大学生命科学学院上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106

巴斯德毕赤酵母载体质粒 pPICZαA含有强启动子 PAOXⅠ和α MF信号肽序列,构建猪 IFNα基因的重组质粒pPICZαA IFNα,并转入E .coli JM109中,得到转猪IFNα基因工程菌,经酶切鉴定克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为猪 IFNα基因。通... 详细信息

巴斯德毕赤酵母载体质粒 pPICZαA含有强启动子 PAOXⅠ和α MF信号肽序列,构建猪 IFNα基因的重组质粒pPICZαA IFNα,并转入E .coli JM109中,得到转猪IFNα基因工程菌,经酶切鉴定克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为猪 IFNα基因。通过电击将经 SacⅠ酶切后线性化的 pPICZαA IFNα质粒转化到巴斯德毕赤酵母 KM71中。SDS PAGE和Western blot鉴定表达产物的结果表明,分泌于胞外的猪 IFNα蛋白分子量比猪IFNα理论值分子量稍大,估计是糖基化的原因。表达的蛋白可发生正确的抗原抗体反应,表达量为 0.45 mg/mL。将蛋白表达上清经细胞毒性实验检测表达产物的抗病毒活性为2.1×104 IU/mL。

关键词：猪 IFNα 巴斯德毕赤酵母基因重组分泌表达

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多重RT-PCR检测猪流感病毒及血清亚型

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中国兽医学报 2008年第11期28卷 1262-1265页

作者：刘惠莉周宗清邢继兰潘洁杨秋峰饶柏忠上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根... 详细信息

根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根据NP、H1N1、H3N2亚型引物扩增片段大小和反应条件的差异,将各引物配比组合,形成引物组合,建立多重RT-PCR体系。经对不同亚型模板的扩增、检验,建立的2个多重RT-PCR体系可用于猪流感病毒及H1/H3血凝素亚型、N1/N2神经氨酸酶亚型的快速鉴别、诊断。特异性试验检测多重RT-PCR不能扩增其他猪病毒核酸,核酸的最低检测量达0.2ng。采集临床具有呼吸道症状的猪肺、鼻腔棉试子等85份,与鸡胚分离及血凝/血凝抑制试验比较,阴性样品检测符合率达100%。

关键词：猪流感病毒血凝素亚型神经氨酸酶亚型多重RT—PCR

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猪流感病毒多表位融合蛋白对小鼠的免疫原性分析

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畜牧兽医学报 2011年第9期42卷 1284-1288页

作者：师小潇哈卓丁长根潘洁饶柏忠刘惠莉上海农业科学院畜牧兽医研究所/上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

作者拟利用表位多肽的抗原性及黏膜佐剂免疫增强作用,设计可通过黏膜途径免疫接种的猪流感病毒通用型疫苗。体外合成H1N1、H3N2亚型猪流感病毒表位抗原基因,C末端串联大肠杆菌热敏性肠毒素LTb基因,构建pET30(a)-ep-LTb表达载体,利用SDS-... 详细信息

作者拟利用表位多肽的抗原性及黏膜佐剂免疫增强作用,设计可通过黏膜途径免疫接种的猪流感病毒通用型疫苗。体外合成H1N1、H3N2亚型猪流感病毒表位抗原基因,C末端串联大肠杆菌热敏性肠毒素LTb基因,构建pET30(a)-ep-LTb表达载体,利用SDS-PAGE、Western blot分析重组融合蛋白表达及生物学特性,小鼠免疫试验分析融合蛋白免疫原性。SDS-PAGE检测表达蛋白相对分子质量约38ku,主要以包涵体形式存在。重组蛋白可与抗His-tag抗体和CTB抗体发生特异性反应。ELISA及HI试验检测,经黏膜途径免疫的小鼠产生了针对重组表位模拟抗原蛋白及H1N1、H3N2亚型猪流感病毒的血清抗体及局部黏膜分泌型IgA抗体。利用猪流感病毒表位抗原与LTb基因串连获得的融合蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,且在黏膜接种局部产生理想的分泌型IgA抗体,能有效阻断病原由黏膜局部感染,为研制猪流感病毒通用型疫苗奠定了基础。

关键词：猪流感病毒表位抗原大肠杆菌热敏性肠毒素B亚基(LTb) 免疫原性通用疫苗

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